血浆前激肽释放酶结合蛋白的制作方法

血浆前激肽释放酶结合蛋白的制作方法
【专利摘要】本发明描述了血浆前激肽释放酶结合蛋白和使用此类蛋白的方法。
【专利说明】血浆前激肽释放酶结合蛋白
[0001]本申请要求2011年1月6日提交的美国专利申请序列号61/430，442的优先权。在先申请的公开内容被视为本申请公开内容的一部分(并以引用方式并入)。
[0002]发明背景
[0003]血浆前激肽释放酶一种丝氨酸蛋白酶。前激肽释放酶是血浆前激肽释放酶的前体。
发明概要
[0004]血浆前激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分并为不同炎性、心血管、感染性(败血病)和肿瘤疾病的潜在药物靶标(Sainz 1.M.等，Thromb Haemost98, 77-83,2007)。接触系统通过因子Xlla在暴露于外来物或带负电表面时或在内皮细胞表面上通过脯氨酰羧肽酶而激活(图1) (Sainz 1.M.等，Thromb Haemost98，77-83，2007)。血浆前激肽释放酶的激活通过其因子XII的反馈激活而增强内源性凝血并通过产生促炎性九肽缓激肽而加重炎症。作为循环中的主要激肽原酶，血浆前激肽释放酶主要负责在脉管中生成缓激肽。C1-抑制剂蛋白(C1-1NH)(血浆前激肽释放酶的主要天然抑制剂)中的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。患有疼痛性水肿急性发作的HAE患者通常因未知的触发因素而促成(Zuraw B.L.等，N Engl J Med359,1027-1036, 2008)。通过在动物模型中使用药理学药剂或遗传研究，已发现血浆前激肽释放酶-激肽系统(血浆KKS)涉及多种疾病。
[0005]血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如抗体，例如抑制性抗体)是许多疾病和病状(例如涉及血浆前激肽释放酶活性的疾病和病状)的有用治疗剂，因为它们具有高效能、特异性和长期的血清停留。高效能可转化成疗效和低药物剂量，而高特异性则可因为抑制相关的脱靶丝氨酸蛋白酶而减少副作用。一般来讲，小分子丝氨酸蛋白酶的特异性不如抗体抑制剂。长期的血清停留可允许降低给药频率。
[0006]在一些方面，本公开的特征在于结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式并且例如不结合前血浆前激肽释放酶(例如人类前血浆前激肽释放酶和/或小鼠前血浆前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)。
[0007]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的蛋白(例如ep1-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合并且不结合前血浆前激肽释放酶。
[0008]在一些实施方案中，本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01 (在本文也称为 DX-2922)、X81-B01、X67-D03、X67-G04、父115-807、父115-005、父115409、父115-!106、父115-六03、父115-001、父115-卩02、父124-601(在本文也称为 DX-2930)、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0009]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。[0010]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0011]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X101-A01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0012]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。 [0013]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与XI15-F02竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0014]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X124-G01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0015]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X63-G06竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0016]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0017]在某些实施方案中，该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近，或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0018]在一些实施方案中，该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578 (编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0019]在一些实施方案中，该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0020]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个、四个或五个(即所有)氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
[0021]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526 (编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个或四个(即所有)氨基酸:S478、N481、S525和K526 (编号基于人类激肽释放酶序列)。
[0022]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约 5%、约 10%、约 15%、约 20%、约 25%、约 30%、约 35%、约 40%、约 45%、约 50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。
[0023]在一些实施方案中，血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、1、
0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki，app)。
[0024]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。[0025]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0026]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。 [0027]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部分。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白经修饰以包含例如PEG化、与血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、与人血清白蛋白的偶联、HES化(利用羟乙基淀粉(“HES”)的HES化)、连接到药物以便改变药物特性的衍生物或与非结构化重组聚合物(URP)的融合。
[0028]在其他实施方案中，该血衆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体(minibody)、scFv::Fc 融合体、Fab::HSA 融合体、HSA::Fab 融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为 IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1 或其他合适的构建体而提供。
[0029]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0030]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
[0031 ] 在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0032]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人Homo sapiens))、黑猩猩类(chimpanzees)(黑猩猩(Pan troglodytes)和倭黑猩猩(Panpaniscus)(巴诺布猿(bonobos)))、大猩猩类(gorillas)(大猩猩(Gorilla gorilla))、长臂猿(gibons)、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿(Daubentonia madagascariensis))和眼镜猴。
[0033]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0034]在某些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0035]在某些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
[0036]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0037]在一些方面，本公开的特征在于结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合的分离蛋白(例如抗体，例如人类抗体)。
[0038]在一些实施方案中，该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。
[0039]在一些实施方案中，该分离的蛋白包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列，其中:
[0040]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或 [0041]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0042]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0043]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区。
[0044]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区(分别地)。
[0045]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)。
[0046]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X81-B01。
[0047]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X67-D03。
[0048]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X63-G06和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X63-G06。
[0049]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自MJ162-A04。
[0050]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X115-F02和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02o
[0051]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X124-G01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X124-G01。[0052]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0053]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09和M35-G04的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的轻链可变结构域(分别地)。
[0054]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
[0055]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
[0056]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0057]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04的重链，
[0058]和/ 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、父115402、父124-601、父115-604、]?29-009、]\1145-011、]\106-009和]\05-604 的轻链(分别地)。
[0059]在一些实施方案中，该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
[0060]在一些实施方案中，该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
[0061]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
[0062]在一些实施方案中，该蛋白包含X115-F02的重链和/或X115-F02的轻链。
[0063]在一些实施方案中，该蛋白包含X124-G01的重链和/或X124-G01的轻链。
[0064]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0065]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。
[0066]在一些实施方案中，该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区；(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)CDR ;(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的⑶R至少85、88、89、
90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)CDR ; (d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、
95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或⑶R中)；(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中)；(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合；(g)灵长类CDR或灵长类骨架区；(h)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2或3个氨基酸的⑶Rl ； (i)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的⑶R2相差至少一个氨基酸但不超过2 、3、4、5、6、7或8个氨基酸的CDR2 ; (j)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的⑶R3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5或6个氨基酸的CDR3 ； (k)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR1 ; (1) LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR2相差至少一个氨基酸但不超过2、3或4个氨基酸的CDR2 ； (m)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR3 ； (n)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中)；以及(o)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中)。
[0067]在一些实施方案中，该蛋白具有小于1000、500、100、10、1、0.5或0.2nM的表观抑
制常数(U。
[0068]在一些实施方案中，该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0069]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0070]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0071]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0072]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0073]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0074]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0075]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0076]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0077]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)重链 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 ；
[0078]以及选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
[0079]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0080]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0081]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0082]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0083]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。[0084]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0085]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0086]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0087]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。 [0088]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0089]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0090]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0091]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0092]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0093]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0094]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0095]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0096]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0097]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0098]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X124G01或X115R)2的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0099]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0100]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X124-G01或X115-F02的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0101]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0102]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0103]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体)。
[0104]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0105]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X124-G01或X115-F02轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0106]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。 [0107]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0108]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部分。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白经修饰以包含例如PEG化、与血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、与人血清白蛋白的偶联、HES化(利用羟乙基淀粉(“HES”)的HES化)、连接到药物以便改变药物特性的衍生物或与非结构化重组聚合物(URP)的融合。
[0109]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该蛋白为IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0110]在其他实施方案中，该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
[0111]在一个实施方案中，该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0112]在一个实施方案中，该蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
[0113]在一个实施方案中，该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0114]在一个实施方案中，该蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、
96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
[0115]在一个实施方案中，该蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0116]在某些实施方案中，该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0117]在某些实施方案中，该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。[0118]在一个实施方案中，该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0119]在一些方面，本公开的特征在于包含本文所述的激肽释放酶结合蛋白(例如包括药学上可接受的载体)的药物组合物。在一些实施方案中，该组合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含其他蛋白种类。在一个实施方案中，该药物组合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含以下结合蛋白的片段，该结合蛋白不结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)或以5000nM或更高的Ki，app结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)。
[0120]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中血浆前激肽释放酶相关病症的方法，该方法包括: [0121]向受试者施用结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)并且例如不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)。
[0122]在一些实施方案中，该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。
[0123]在一些实施方案中，该蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。
[0124]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架上的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统相关的异常凝结减少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100% (即，无可检测的异常凝结)。
[0125]在一些实施方案中，将该血浆前激肽释放酶结合蛋白联合病症的另一种治疗一起施用。
[0126]在一些实施方案中，本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0127]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位。
[0128]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位。
[0129]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04或X115-F02竞争或结合到与其相同的表位。[0130]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0131]在某些实施方案中，该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近，或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位。
[0132]在一些实施方案中，该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578 (编号基于人类序列)。
[0133]在一些实施方案中，该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585 (编号基于人类序列)。 [0134]在其他实施方案中，该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (编号基于人类序列)。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526 (编号基于人类激肽释放酶序列)。
[0135]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约 5%、约 10%、约 15%、约 20%、约 25%、约 30%、约 35%、约 40%、约 45%、约 50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。
[0136]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、
1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(&,_)。
[0137]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
[0138]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0139]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部分。
[0140]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0141]在其他具体实施中，该血衆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2 '、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1 或其他合适的构建体而提供。
[0142]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0143]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
[0144]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0145]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
[0146]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0147]在某些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0148]在某些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
[0149]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0150]一种治疗或预防受试者的血浆前激肽释放酶相关病症的方法，该方法包括:
[0151]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0152]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0153]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0154]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)。
[0155]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100% (即，无可检测的异常凝结))。
[0156]在一些实施方案中，将该蛋白联合病症的另一种治疗一起施用。
[0157]在一些实施方案中,将该蛋白联合选自艾卡拉肽(ecallantide)、C1酯酶抑制剂、抑肽酶、缓激肽B2受体抑制剂(例如艾替班特(icatibant))的第二药剂一起施用。
[0158]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0159]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区(分别地)。
[0160]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶。
[0161]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01。 [0162]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03。
[0163]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04。
[0164]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X115-F02和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02o
[0165]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0166]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的轻链可变结构域(分别地)。
[0167]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
[0168]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
[0169]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0170]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 的重链和 / 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、XI15-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的轻链(分别地)。
[0171]在一些实施方案中，该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
[0172]在一些实施方案中，该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
[0173]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
[0174]在一些实施方案中，该蛋白包含X115-F02或X124-G01的重链和/或X115-F02或X124-G01的轻链。
[0175]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0176]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。
[0177]在一些实施方案中，该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区；(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的⑶R至少85、
88、89、90、91、92、93、 94、95、96、97、98、99或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)⑶R ； (c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的⑶R至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)CDR ;(d) LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中)；(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合；和(g)灵长类CDR或灵长类骨架区。
[0178]在一些实施方案中，该蛋白具有小于1000、500、100、10、5、1、0.5或0.2nM的表观
抑制常数况,_)。
[0179]在一些实施方案中，该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0180]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0181]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0182]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、XI24-GO 1, XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0183]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0184]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。 [0185]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0186]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0187]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0188]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)重链 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04以及选自以下抗体的轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链⑶R:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
[0189]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0190]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0191]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0192]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0193]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0194]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0195]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0196]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。 [0197]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0198]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0199]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0200]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0201]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0202]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0203]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0204]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0205]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0206]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0207]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0208]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0209]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0210]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X115-F02或X124-G01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。[0211]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0212]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0213]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体)。
[0214]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0215]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0216]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
[0217]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0218]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部 分。
[0219]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该蛋白为IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0220]在其他具体实施中，该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
[0221]在一个实施方案中，该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0222]在一个实施方案中，该蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、
97、98或99%相同的Fc结构域。
[0223]在一个实施方案中，该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0224]在一个实施方案中，该蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、
96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
[0225]在一个实施方案中，该蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0226]在某些实施方案中，该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0227]在某些实施方案中，该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。[0228]在一个实施方案中，该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0229]在一些方面，本公开的特征在于促进受试者的伤口愈合的方法，该方法包括:
[0230]向受试者施用结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)并且例如不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)。
[0231 ] 在一些实施方案中，该蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。在一些实施方案中，该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。 [0232]在一些实施方案中，将该血浆前激肽释放酶结合蛋白联合伤口愈合的另一种治疗一起施用。
[0233]在一些实施方案中，本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-R07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0234]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位。
[0235]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位。
[0236]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04竞争或结合与其相同的表位。
[0237]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X115-F02或X124-G01竞争或结合到与其相同的表位。
[0238]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0239]在某些实施方案中，该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近，或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位。
[0240]在一些实施方案中，该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)。在其他实施方案中，该蛋白结合到形成底物识别区的一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526 (编号基于人类激肽释放酶序列)。
[0241]在一些实施方案中，该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585 (编号基于人类序列)。
[0242]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约 5%、约 10%、约 15%、约 20%、约 25%、约 30%、约 35%、约 40%、约 45%、约 50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。[0243]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、
1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(&,_)。
[0244]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
[0245]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0246]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部分。
[0247]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0248]在其他具体实施中，该血衆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2/、scFv、PEGKFab、 PEGK scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
[0249]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0250]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
[0251 ] 在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0252]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
[0253]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0254]在某些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0255]在某些实施方案中，该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
[0256]在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0257]在一些方面，本公开的特征在于促进受试者的伤口愈合的方法，该方法包括:
[0258]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:[0259]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0260]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0261 ] 其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0262]在一些实施方案中，将该蛋白联合伤口愈合的另一种治疗一起施用。
[0263]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，
[0264]和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区(分别地)。
[0265]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶。
[0266]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01。
[0267]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03。
[0268]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04。
[0269]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自M199-A08和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M199-A08。
[0270]在一些实施方案中，来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区来自X115-F02或X124-G01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR 区来自 X115-F02 或 X124-G01。
[0271 ] 在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0272]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09和M35-G04的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、XI24-GO 1, X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的轻链可变结构域(分别地)。
[0273]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
[0274]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
[0275]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0276]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 的重链和 / 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、XI15-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的轻链(分别地)。
[0277]在一些实施方案中，该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
[0278]在一些实施方案中，该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
[0279]在一些实施方案中，该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
[0280]在一些实施方案中，该蛋白包含X115-F02或X124-G01的重链和/或XI15-F02或X124-G01的轻链。
[0281]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0282]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子Xlla和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子Xlla和/或缓激肽的产生)相比减少超过约 5%、约 10%、约 15%、约 20%、约 25%、约 30%、约 35%、约 40%、约 45%、约 50%、约 55%、约 60%、约 65%、约 70%、约 75%、约 80%、约 85%、约 90%或约 95%。
[0283]在一些实施方案中，该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区；(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的⑶R至少85、
88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)⑶R ； (c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的⑶R至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)CDR ;
(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中)；(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合；和(g)灵长类CDR或灵长类骨架区。[0284]在一些实施方案中，该蛋白具有小于1000、500、100、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制
常数(U。
[0285]在一些实施方案中，该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。 [0286]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X-124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0287]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0288]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0289]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0290]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0291 ] 在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0292]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0293]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链⑶R的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。[0294]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如 1、2 或 3 个)重链 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和M35-G04以及选自以下抗体的轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链⑶R:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
[0295]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。 [0296]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0297]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0298]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0299]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0300]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0301]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0302]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0303]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X81-B01轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0304]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0305]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0306]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0307]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0308]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0309]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。[0310]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0311]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0312]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R和来自X67-D03轻链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0313]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
[0314]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链的抗体(例如人类抗体)。
[0315]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
[0316]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有选自X115-F02或X124-G01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0317]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0318]在一个优选 的实施方案中，该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
[0319]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01重链的相应⑶R的一个或多个(例如1、2或3个)重链⑶R的抗体(例如人类抗体)。
[0320]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0321]在一个优选的实施方案中，该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
[0322]在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
[0323]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0324]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关，例如本文所述的部分。
[0325]在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如，该蛋白为IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab (sFab)。
[0326]在其他具体实施中，该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
[0327]在一个实施方案中，该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区，例如所有人类骨架区。
[0328]在一个实施方案中，该蛋白包含人类Fc结构域，或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
[0329]在一个实施方案中，该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如，该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区，例如所有灵长类骨架区。
[0330]在一个实施方案中，该蛋白包含灵长类Fc结构域，或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
[0331]在一个实施方案中 ，该蛋白包含人类骨架区，或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
[0332]在某些实施方案中，该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0333]在某些实施方案中，该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
[0334]在一个实施方案中，该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
[0335]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中类风湿性关节炎的方法，该方法包括:
[0336]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0337]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0338]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0339]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0340]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0341]在一些实施方案中，将该蛋白联合类风湿性关节炎的另一种治疗一起施用。
[0342]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0343]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0344]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0345]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中痛风的方法，该方法包括:
[0346]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0347]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0348]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0349]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0350]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0351]在一些实施方案中，将该蛋白联合痛风的另一种治疗一起施用。
[0352]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0353]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0354]在一些实施方案中 ，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0355]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中肠道疾病的方法，该方法包括:
[0356]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0357]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0358]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0359]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0360]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0361]在一些实施方案中，将该蛋白联合肠道疾病的另一种治疗一起施用。
[0362]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0363]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0364]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0365]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中口腔粘膜炎的方法，该方法包括:[0366]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0367]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0368]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0369]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0370]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0371]在一些实施方案中，将该蛋白联合口腔粘膜炎的另一种治疗一起施用。 [0372]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0373]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0374]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0375]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中神经性疼痛的方法，该方法包括:
[0376]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0377]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0378]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0379]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0380]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0381]在一些实施方案中，将该蛋白联合神经性疼痛的另一种治疗一起施用。
[0382]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0383]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0384]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0385]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中炎性疼痛的方法，该方法包括:
[0386]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0387]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0388]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0389]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0390]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0391]在一些实施方案中，将该蛋白联合炎性疼痛的另一种治疗一起施用。
[0392]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0393]在一些 实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0394]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0395]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中椎管狭窄-退行性脊柱疾病的方法，该方法包括:
[0396]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0397]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，和/或
[0398]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0399]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0400]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0401 ] 在一些实施方案中，将该蛋白联合椎管狭窄-退行性脊柱疾病的另一种治疗一起施用。
[0402]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0403]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0404]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0405]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中动脉或静脉血栓形成的方法，该方法包括:
[0406]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0407]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0408]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0409]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0410]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。 [0411]在一些实施方案中，将该蛋白联合动脉或静脉血栓形成的另一种治疗一起施用。
[0412]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0413]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0414]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0415]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中术后肠梗阻的方法，该方法包括:
[0416]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0417]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0418]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0419]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0420]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0421]在一些实施方案中，将该蛋白联合术后肠梗阻的另一种治疗一起施用。
[0422]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0423]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。[0424]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0425]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中主动脉瘤的方法，该方法包括:
[0426]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0427]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0428]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0429]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0430]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。 [0431 ] 在一些实施方案中，将该蛋白联合主动脉瘤的另一种治疗一起施用。
[0432]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0433]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0434]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0435]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中骨关节炎的方法，该方法包括:
[0436]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0437]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0438]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0439]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0440]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0441]在一些实施方案中，将该蛋白联合骨关节炎的另一种治疗一起施用。
[0442]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0443]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0444]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0445]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中脉管炎的方法，该方法包括:
[0446]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0447]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0448]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0449]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0450]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0451]在一些实施方案中，将该蛋白联合脉管炎的另一种治疗一起施用。
[0452]在一些实施方案中 ，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0453]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0454]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0455]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中头部外伤或瘤周脑水肿的方法，该方法包括:
[0456]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0457]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0458]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0459]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0460]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0461]在一些实施方案中，将该蛋白联合头部外伤或瘤周脑水肿的另一种治疗一起施用。
[0462]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。[0463]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0464]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0465]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中败血病的方法，该方法包括:
[0466]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0467]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0468]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区， [0469]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0470]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0471]在一些实施方案中，将该蛋白联合败血病的另一种治疗一起施用。
[0472]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0473]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0474]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0475]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的方法，该方法包括:
[0476]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0477]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0478]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0479]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0480]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0481]在一些实施方案中，将该蛋白联合急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的另一种治疗一起施用。[0482]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0483]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0484]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0485]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中再狭窄(例如血管成形术后)的方法，该方法包括:
[0486]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0487]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或 [0488]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0489]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0490]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0491]在一些实施方案中，将该蛋白联合再狭窄(例如血管成形术后)的另一种治疗一起施用。
[0492]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0493]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0494]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0495]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中系统性红斑狼疮性肾炎的方法，该方法包括:
[0496]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0497]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0498]该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0499]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0500]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0501]在一些实施方案中，将该蛋白联合系统性红斑狼疮性肾炎的另一种治疗一起施用。
[0502]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0503]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0504]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0505]在一些方面，本公开的特征在于治疗或预防受试者中烧伤的方法，该方法包括:
[0506]向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)，其中:
[0507]该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区，和/或
[0508]该轻链免疫球 蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)⑶R区，
[0509]其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
[0510]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0511]在一些实施方案中，将该蛋白联合烧伤的另一种治疗一起施用。
[0512]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0513]在一些实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域，和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
[0514]在一些实施方案中，该蛋白包含本文所述蛋白的重链，和/或本文所述蛋白的轻链。
[0515]在一些方面，本公开的特征在于检测样本中血浆前激肽释放酶的方法，该方法包括:将样本与血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)接触；以及检测该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
[0516]在一些实施方案中，该蛋白包含可检测的标记。
[0517]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0518]在一些方面，本公开的特征在于检测受试者中血浆前激肽释放酶的方法，该方法包括:向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)；以及检测受试者中该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。例如，检测包括对受试者成像。
[0519]在一些实施方案中，该蛋白还包含可检测的标记。
[0520]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0521]在一些方面，本公开的特征在于调节血浆前激肽释放酶活性的方法，例如在治疗或预防血浆前激肽释放酶相关病症的方法中。该方法包括:将血浆前激肽释放酶与血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)接触(例如在人类受试者中)，从而调节血浆前激肽释放酶活性。
[0522]在一些实施方案 中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0523]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎/脉管炎和烧伤。
[0524]在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统相关的异常凝结减少至少20%、至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、至少99%或甚至100% (即，无可检测的异常凝结)。
[0525]在一些方面，本公开的特征在于治疗血浆前激肽释放酶相关病症的方法，该方法包括:以足以治疗受试者中血浆前激肽释放酶相关病症的量向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)。该方法还可以包括向受试者提供作为血浆前激肽释放酶相关病症疗法的第二疗法，例如如本文所述。
[0526]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎/脉管炎和烧伤。
[0527]在一些方面，本公开的特征在于对受试者成像的方法。该方法包括:向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)以及例如检测受试中该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
[0528]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0529]在一些实施方案中，该蛋白不抑制血浆前激肽释放酶活性。
[0530]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶活性(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0531]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白可包含可检测的标记(例如放射性核素或MRI可检测的标记)。 [0532]在一些实施方案中，受试者患有或疑似患有血浆前激肽释放酶相关病症。该方法可用于例如诊断血浆前激肽释放酶相关病症。
[0533]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。
[0534]在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，无可检测的异常凝结))。
[0535]在一些方面，本公开的特征在于对例如受试者或样本(例如活检样本)中的血浆前激肽释放酶成像的方法。该方法包括:例如向受试者或样本施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)，以及检测该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
[0536]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0537]在一些实施方案中，该蛋白不抑制血浆前激肽释放酶活性。
[0538]在一些实施方案中，该蛋白抑制血浆前激肽释放酶活性(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
[0539]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白可包含可检测的标记(例如放射性核素或MRI可检测的标记)。
[0540]在一些实施方案中，受试者患有或疑似患有血浆前激肽释放酶相关病症。该方法可用于例如诊断血浆前激肽释放酶相关病症。
[0541]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。
[0542]在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，无可检测的异常凝结))。
[0543]在一个方面，本公开的特征在于将本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白用于治疗本文所述的病症，例如类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎或烧伤；或促进伤口愈合。
[0544]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合 前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0545]在一个方面，本公开的特征在于将本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白用于制造治疗本文所述的病症的药物，例如类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎或烧伤；或用于制造用于伤口愈合的药物。
[0546]在一些实施方案中，如通过例如APTT凝结测定法测量，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，无可检测的异常凝结))。
[0547]在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
[0548]本发明一个或多个实施方案的细节在附图和下文的【具体实施方式】中示出。本发明的其他特征、目标和优点通过【具体实施方式】和附图以及通过权利要求书将显而易见。
[0549]所有引用的参考(包括在本申请全文中引用的参考文献、授权专利、已公布或未公布的专利申请)以及下文列出的那些的内容据此明确地整体以引用方式并入。如发生矛盾，则以本申请(包括本文的任何定义)为准。
[0550]附图简述
[0551]图1是血浆前激肽释放酶(pKal)在内源性凝血途径和炎症中的作用的示意图。
[0552]图2示出了 M162-A04对角叉菜胶诱导的大鼠足跖水肿的作用。足跖肿胀通过水置换进行测量。
[0553]图3示出了 M162-A04对角叉菜胶诱导的热痛敏的作用。疼痛潜伏期在注射角叉菜胶后通过Hargreaves法测量。
[0554]图4示出了使用R0LIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的轻链DNA序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的，而空白区则对应于X81-B01中因密码子优化或种系发生而变化的碱基。 [0555]图5示出了使用R0LIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的轻链氨基酸序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的，而空白区则对应于X81-B01中因种系化(germlining)而变化的氨基酸。在非种系化(X63-G06)与种系化、密码子优化的抗体(X81-B01)之间存在总共11个氨基酸。
[0556]图6示出了使用R0LIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的重链DNA序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的，而空白区则对应于X81-B01中因密码子优化而变化的DNA碱基。
[0557]图7示出了使用R0LIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的重链氨基酸序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的。两个抗体在重链中具有相同的氨基酸序列。
[0558]图8A 示出了 EP1-KAL2 与 X81-B01 竞争结合 pKal。X81-B01 (IgG)被捕获在CM5 BIACORF?芯片的抗人类Fc片段特异性表面上。pKal(lOOnM)在存在(图中的下传感图)或不存在1 μ M EP1-KAL2 (图中的上传感图)的情况下在表面上流过。
[0559]图8B 示出了 EP1-KAL2 与 X67-D03 竞争结合 pKal。X67-D03 (IgG)被捕获在CM5Biacore芯片的抗人类Fc片段特异性表面上。pKal (ΙΟΟηΜ)在存在(图中的下传感图)或不存在ΙμΜ EP1-KAL2(图中的上传感图)的情况下在表面上流过。
[0560]图9示出了表12所列抗体的CLIPS表位作图结果。
[0561]图10A-10C示出了不同物种的pKal序列的ClustalW比对。指示的位置是在物种之间的保守位置，而“:”指示的位置则表示物种之间的保守取代。指示的位置在一些物种中具有非保守取代。符号指示的氨基酸段通过溶剂可及表面积计算表明为高度溶剂暴露的。“ + ”指示的氨基酸段被鉴定为表12中所列抗体的潜在表位。与Kunitz结构域活性位点抑制剂相比时，通过溶剂可及表面积计算，据发现灰色突出显示的氨基酸为隐蔽的。带下划线的位置为形成催化三元组的氨基酸(His434、Asp483和Ser578，基于人类序列编号)。
[0562]图 11A 和 11B 示出了 印i_kal2 对(i)DX_2922 和(ii)M6_D09 抗体的 Biacore 竞争分析，如本文实施例12中所述。
[0563]图12示出了 AEBSF对(i)DX_2911和(ii)M6_D09抗体的Biacore竞争分析，如本文实施例12中所述。[0564]图13示出了 Biocore分析，显示了 DX-2922结合到键合到高分子量激肽原(HMWK)的血浆前激肽释放酶。
[0565]图14示出了曲线图，显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿(CPE)中X101-A01对水肿的剂量依赖性抑制。
[0566]图15示出了曲线图，显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿中腹膜内施用DX-2930对水肿的剂量依赖性抑制。
[0567]图16示出了曲线图，显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿中皮下施用DX-2930对水肿的剂量依赖性抑制。
[0568]图17示出了曲线图，显示了对于药代动力学评估在向SD大鼠IV和SC施用后的平均DX-2930血清浓度。
[0569]图18示出了曲线图，显示了对于药代动力学评估在向食蟹猴IV和SC施用后的平均DX-2930血清浓度。
【具体实施方式】[0570]定义
[0571]为了方便起见，在进一步描述本发明前，在此定义用于说明书、实施例和所附权利要求书中的某些术语 。其他术语在它们出现在说明书中时定义。
[0572]除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一个/种”、“该/所述”也包括复数指代。
[0573]如本文所用的术语“激动剂”旨在表示模拟或上调(例如增强或补充)蛋白生物活性的药剂。激动剂可以是野生型蛋白或其具有野生型蛋白至少一种生物活性的衍生物。激动剂还可以是增强蛋白的至少一种生物活性的化合物。激动剂也可以是增强多肽与另一种分子例如靶标肽或核酸间相互作用的化合物。
[0574]如本文所用的“拈抗剂”旨在表示下调(例如压抑或抑制)蛋白的至少一种生物活性的药剂。拈抗剂可以是抑制或降低蛋白与另一种分子例如靶标肽或酶底物之间相互作用的化合物。拈抗剂也可以是降低所存在的表达蛋白的量的化合物。
[0575]术语“抗体”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域(可变区)或免疫球蛋白可变结构域(可变区)序列的蛋白。例如，抗体可包含重(H)链可变区(本文缩写为VH或HV)和轻(L)链可变区(本文缩写为VL或LV)。在另一个实例中，抗体包含两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如单链抗体、Fab和sFab片段、F(ab’)2、Fd片段、Fv片段、scFv和结构域抗体(dAb)片段(de Wildt等,Eur JImmunOl.1996 ；26(3):629-39))以及完整的抗体。抗体可具有 IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亚型)的结构特征。抗体可以来自任何来源，但灵长类(人类和非人类灵长类)和灵长源为优选的。
[0576]VH区和VL区可进一步细分为与称为“骨架区”(“FR”)的更保守区域交替的具有高变性的区域(称为“互补决定区”(“CDR”))。骨架区和CDR的范围已有定义(参见Kabat，Ε.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services, NIH 公开第 91-3242 号，以及 Chothia,C.等(1987) J.Mol.Biol.196:901-917)。Kabat定义用于本文。每个VH和VL通常由按以下顺序从氨基末端排列到羧基末端的三个⑶R和四个FR组成:FR1、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、CDR3、FR4。
[0577]如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列，使得一个或多个CDR区处于适合抗原结合位点的构象。例如，该序列可包含天然存在的可变结构域的氨基酸序列的全部或一部分。例如，该序列可省去一个、两个或更多个N-或C-端氨基酸、内部氨基酸，可包含一个或多个插入或附加末端氨基酸，或可包含其他改变。在一个实施方案中，包含免疫球蛋白可变结构域序列的多肽可与另一免疫球蛋白可变结构域序列相关以形成抗原结合位点，例如优先地与血浆前激肽释放酶相互作用的结构。
[0578]抗体的VH或VL链还可包含重链或轻链恒定区的全部或一部分，从而分别形成免疫球蛋白重链或轻链。在一个实施方案中，抗体为两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的四聚体，其中免疫球蛋白重链和轻链通过例如二硫键互连。在IgG中，重链恒定区包含三个免疫球蛋白结构域:CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包含CL结构域。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq))的结合。免疫球蛋白的轻链可具有κ或λ型。在一个实施方案中，抗体为糖基化的。抗体可以为抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导细胞毒性功能性的。 [0579]抗体的一个或多个区可以为人类的或有效地为人类的。例如，可变区的一个或多个可以为人类的或有效地为人类的。例如，⑶R的一个或多个可以为人类的，例如HC⑶R1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2 和 / 或 LC CDR3。轻链(LC)和 / 或重链(HC)CDR 的每一个可以为人类的。HC CDR3可以为人类的。骨架区的一个或多个可以为人类的，例如HC和/或LC的FR1、FR2、FR3和/或FR4。例如，Fc区可以为人类的。在一个实施方案中，所有骨架区均为人类的，例如衍生自人类体细胞，例如产生免疫球蛋白的造血细胞或非造血细胞。在一个实施方案中，人类序列为种系序列，例如由种系核酸编码的。在一个实施方案中，所选Fab的骨架区(FR)残基可在许多相似的灵长类种系基因中特别是人类种系基因中转化成相应残基的氨基酸型。恒定区的一个或多个可以为人类的或有效地为人类的。例如，免疫球蛋白可变结构域的至少70、75、80、85、90、92、95、98或100%，恒定区，恒定结构域(CH1、CH2、CH3和/或CL1)或整个抗体可以为人类的或有效地为人类的。
[0580]抗体的全部或一部分可由免疫球蛋白基因或其片段编码。示例性人类免疫球蛋白基因包括 κ、λ、a (IgAl 和 IgA2)、y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε 和 μ 恒定区基因以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(约25KDa或约214个氨基酸)由NH2-末端的可变区基因(约110个氨基酸)和C00H-末端的κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50KDa或约446个氨基酸)类似地由可变区基因(约116个氨基酸)和其他前述恒定区基因之一例如Y (编码约330个氨基酸)编码。人类HC的长度差异巨大，因为HC⑶R3在约3个氨基酸残基至超过约35个氨基酸残基之间变化。
[0581]术语全长抗体的“抗原结合片段”是指保持特异性结合到所关注靶标的能力的全长抗体的一个或多个片段。由术语全长抗体的“抗原结合片段”涵盖并保持功能性的结合片段的实例包括(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，其为包含由铰链区的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature341:544-546),其由VH结构域组成；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是它们可通过合成接头使用重组方法而接合，所述合成接头使得它们能够成为单条蛋白链，其中VL和VH区配对形成称为单链Fv(scFv)的单价分子。参见例如美国专利N0.5，260, 203,4, 946，778和4，881，175 ；Bird 等(1988) Science242:423-426 ；以及 Huston 等(1988) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883o
[0582]可使用任何合适的技术获得抗体片段，包括本领域技术人员已知的常规技术。术语“单特异性抗体”是指显示出对特定靶标例如表位的单一结合特异性和亲和力的抗体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，如在本文所用其是指单分子组合物的抗体或其片段的制备物，而不论抗体如何生成。
[0583]抗体通过将骨架区中的一个或多个非种系氨基酸回到抗体的相应种系氨基酸而为“种系化的”，只要结合性质基本上得以保持即可。
[0584]抑制常数(Ki)提供抑制剂效力的度量；它是将酶活性降低一半所需的抑制剂浓度并且不依赖于酶或底物浓度。表观Ki(Ki，app)在不同的底物浓度下通过测量不同浓度抑制剂(例如抑制性结合蛋白)对反应程度(例如酶活性)的抑制作用而获得；将随着抑制剂浓度变化的拟一阶速率常数的变化拟合到Morrison公式(公式1)得出表观Ki估计值。Ki通过从Ki，app与底物浓度的图线的线性回归分析提取的y_截距获得。
【权利要求】
1.一种结合人类血浆前激肽释放酶的活性形式的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自X115-F02的重链可变结构域的三个⑶R区和/或来自X115-F02的轻链可变结构域的三个CDR区，或者其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自X124-G01的重链可变结构域的三个⑶R区和/或来自X124-G01的轻链可变结构域的三个⑶R区。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含X115-F02的所述重链可变结构域，和/或所述轻链可变区包含X115-F02的所述轻链可变结构域。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含X124-G01的所述重链可变结构域，和/或所述轻链可变区包含X124-G01的所述轻链可变结构域。
4.根据权利要求1所述的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段结合并抑制血浆前激肽释放酶。
5.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
6.一种治疗或预防受试者的血浆前激肽释放酶相关病症的方法，所述方法包括:向所述受试者施用权利要求1的抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求6所述的方法， 其中所述血浆前激肽释放酶相关病症选自:水肿、类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架上的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。
8.—种检测受试者中血浆前激肽释放酶的方法，所述方法包括:向受试者施用权利要求1的抗体或其抗原结合片段；以及检测所述受试者中所述蛋白与所述血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
【文档编号】C07K16/36GK103635489SQ201280011286
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年1月6日 优先权日:2011年1月6日
【发明者】D·J·塞克斯顿 申请人:戴埃克斯有限公司