专利名称：一类儿茶酚-o-甲基转移酶的特异性探针底物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物及其应用。
背景技术：
儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)是哺乳动物体内广泛分布的一种甲基化转移酶，其主要生理功能是负责代谢内源性的神经递质(如肾上腺素，去甲肾上腺素以及多巴胺等)和外源性的儿茶酚内化合物。在人体中，COMT酶有两种存在形式，一种是溶解性的COMT (S-COMT)，另一种是膜结合型的COMT (MB-COMT)。COMT在人体的多种组织中都有分布，如肾脏，肝脏，肺等，在人体的大脑中，主要存在于突触后神经元。在人体的大多数组织中，而S-COMT的量是MB-COMT的3_4倍左右。在人脑中，COMT酶主要以MB-COMT的形式存在，占总量的70%，S-COMT占30%。COMT酶的活性在人体中呈基因多态性，分别表现为低活性(COMTLL)，中等活性(COMTLH)和高活性(COMTHH)。有研究表明，人体中的低COMT活性和酒精中毒、抑郁症和乳腺癌都有相关性，因此，定量测定人体组织及细胞中的COMT活性对于多种疾病的临床诊断和治疗具有重要指导意义。另外，由于COMT还是帕金森病治疗的一个重要靶点，利用探针反应并借助体外代谢孵育体系可高通量的筛选和评价COMT抑制剂，对于帕金森病治疗药物的发现意义重大。目前，最常用的COMT酶的探针底物有四个，包括原儿茶酸，左旋多巴，多巴胺以及肾上腺素。后三者由于是人体中的内源性物质，因此无法作为体内探针使用。此外，以上COMT酶的探针底 物包括原儿茶酸在哺乳动物COMT酶的催化下分别生成两个单甲基化产物，而两个产物由于结构和理化性质相近，在液相色谱上通常难以分离，给其定量检测带来了不便。因此，急需寻找代谢产物单一，检测灵敏的COMT酶探针底物，同时安全性高，体内代谢路径明确的COMT酶探针底物一直未见报道，也亟待开发。目前，COMT的体外评价体系主要包括哺乳动物的红细胞，以及亚细胞组分及等，其中亚细胞组分主要包括肝脏组织的S9、胞浆以及脑组织匀浆等成分。采用这些标准化的评价体系，结合相应的辅因子(SAM)和孵育条件，可通过检测探针底物的代谢清除或产物生成速率,对上述各种体系中表达的COMT酶活性进行表征。
发明内容
本发明的目的是提供一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物及其应用，该特异性探针底物是B环7，8位具有羟基的香豆素儿茶酚类化合物，与目前已报道的探针底物原儿茶酸相比，这类7，8- 二羟基香豆素儿茶酚类化合物对COMT具有更高的选择性，在人肝等生物样品中也可用于COMT酶活性的评估与测定，对评估个体样本的酶活差异具有重
要意义。本发明提供了一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物，该特异性探针底物为7，8-二羟基香豆素类化合物，其结构式见式(I )，其中R1为-CH3、-Ph中的一种，R2为-H、-OCH3中的一种。
权利要求
1.一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物，其特征在于:该特异性探针底物为7，8-二羟基香豆素类化合物，其结构式见式(I )，其中R1为-CH3、-Ph中的一种，R2为-H、-OCH3中的一种。
2.一种利用权利要求1所述特异性探针底物定量测定生物体系中COMT酶活的方法，其特征在于:采用上述式(I)化合物作为底物，该类底物在COMT酶的催化下仅选择性生成7-0-甲基化产物，通过定量检测单位时间内甲基化产物的生成量来测定各生物样品及细胞中COMT酶的活性。
3.按照权利要求2所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述方法条件为:底物浓度介于1/1(Γ10ΚΠ之间；催化反应时孵育体系pH介于5.5 10.5之间；反应温度介于2(T60°C之间。
4.按照权利要求3所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述催化反应时孵育体系PH介于7.(Γ7.5之间。
5.按照权利要求3所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述反应温度介于35 4(TC之间。
6.按照权利要求3所述利用特异性探针底物定量测定生物体系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述产物生成率或底物转化率低于10%。
7.权利要求1所述特异性探针底物的应用，其特征在于:该特异性探针底物用于人及哺乳动物组织制备液及各类组织细胞中COMT酶活的定量测定。
全文摘要
本发明提供了一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物及其应用，该特异性探针底物为7,8-二羟基香豆素类化合物，其可用于不同来源哺乳动物组织及细胞中COMT酶活的测定，具体操作流程如下选择具有7,8位羟基的香豆素类化合物作为高特异性探针底物，并借助COMT体外孵育体系开展特异性底物的COMT催化反应，通过定量检测单位时间内产物生成量来测定各生物样品及细胞中COMT酶的活性。本发明可用于不同种属、不同个体来源生物样本中COMT酶活的定量评估，以及不同来源的动物组织细胞培养液及细胞制备物中COMT酶活的定量测定，以期实现对重要药物代谢酶COMT处置药物能力的评估。
文档编号C07D311/16GK103193746SQ201310044369
公开日2013年7月10日 申请日期2013年2月4日 优先权日2013年2月4日
发明者杨凌, 夏杨柳, 葛广波, 孙晓宇, 宁静, 何桂元 申请人:中国科学院大连化学物理研究所