专利名称：：结合cd22的人抗体及其用途的制作方法结合CD22的人抗体及其用途本申请为2007年11月30日提交的、发明名称为“结合⑶22的人抗体及其用途”的PCT申请PCT/US2007/086152的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2009年7月27日，申请号为200780050465.6。
背景技术：
：CD22是唾液酸黏附素家族的细胞表面I型的糖蛋白。除其他名称外，CD22在本领域内又称为BL-CAM、B3、Leu-14、以及Lyb_8。CD22最初由抗体抗-S-HCL-l(Schwarting,R等人(1985)Blood65:974-983)、HD39(Dorken，B.等人(1986)J.1mmunol.136:4470-4479)、以及RFB4(Campana，D.等人(1985)J.1mmunol.134:1524-1530)进行表征。已确定CD22是结合含a2，6-连接的唾液酸的配体的类凝集素黏附分子，以及B细胞抗原受体(BCR)信号的调节物。从结构上来说，CD22具有多个剪切变体，但是在人中最主要的形式是包含七个免疫球蛋白样结构域的细胞外区。已经表明⑶22由B淋巴细胞特异地表达，并作为B淋巴细胞活化的负性调节物在功能上是重要的(由Nitschke,L.(2005)Curr.0pin.Tmmuno1.17:290-297以及Tedder,T.F.等人(2005)Adv.1mmunol.88:1-50综述)。在使用表达不与a2，6_连接的唾液酸配体相互作用的突变的CD22分子的基因靶向性小鼠的研究中，已确定某些功能(诸如细胞表面⑶22的表达、IgM及MHCII类在成熟B细胞上的表达、边缘区B细胞群体的维持、最佳的B细胞抗原受体诱导的增殖、以及B细胞更新速率(turnoverrate))受⑶22配体结合调控，然而其他功能(诸如⑶22磷酸化、BCR连接后⑶22对钙动员的负性调节、SHP-1向⑶22的募集、以及B细胞的迁移)不需要配体的参与(Poe，J.C.等人(2004)Nat.1mmunol.5:1078-1087)。⑶22被认为是抑制性共受体，通过设定阻止B细胞的过度刺激的信号阈值而下调BCR信号。通过细胞质的ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序)磷酸化，随后通过酪氨酸磷酸酶SHP-1或者脂质磷酸酶SHIIP的募集，使这种抑制性共受体发生活化(由Nitschke,L.(2005)Curr.0pin.1mmunol.17:290-297综述)。此外，已发现CD22在控制CD19/CD21-Src-家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)扩增途径的调节襻中起核心作用，该扩增途径调节基本的信号阈值，并在BCR连接后强化Src-家族激酶的活化(由Tedder，T.F.等人(2005)Adv.1mmunol.88:1-50综述)。大约60%至80%的B细胞恶性肿瘤表达⑶22，由此使其成为被动免疫疗法的潜在靶标(参见例如，Cesano，A.和Gayko,U.(2003)Semin.0ncol.30:253-257)。而且，已建议将经CD22靶向的B细胞活性的选择性调谐作为治疗自身免疫病的一种手段(参见例如，请参考Steinfeld,S.D.和Youinou,P.(2006)Expert.0pin.Biol.Ther.6:943-949)已对一种人源化抗-⑶22单克隆抗体,依帕珠单抗(epratuzumab)进行说明(Coleman,M.等人(2003)Clin.CancerRes.9:3991S_3994S)。然而，仍需要额外的抗-CD22反应物。概沭本公开提供了分离的单克隆抗体，特别是人单克隆抗体，这些抗体与人CD22相结合并且表现出多种所希望的特性。这些特性包括结合至⑶22的高亲和力、内化进入⑶22+细胞的能力、介导抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)的能力、促进由B细胞受体(BCR)刺激诱导的Ramos细胞的细胞死亡、和/或当与细胞毒素缀合时抑制表达CD22的细胞在体内的生长。本发明的抗体可被用于，例如，治疗CD22+的B细胞恶性肿瘤和/或治疗不同的炎症或自身免疫病症。在一方面，本公开涉及分离的人单克隆抗体、或该抗体的抗原结合部分，其中该抗体与人CD22相结合并表现出以下特性中至少一种特性:(a)内化进入CD22+细胞；(b)表现出针对⑶22+细胞的抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)；(c)促进由B细胞受体(BCR)刺激而诱导的Ramos细胞的细胞死亡；以及(d)当缀合至细胞毒素时抑制⑶22-表达细胞在体内的生长。在另一个优选实施方案中，该抗体表现出特性(a)、(b)、(c)、以及(d)中至少两种特性。在又一个优选实施方案中，该抗体表现出具有特性(a)、(b)、(C)、以及(d)中三种特性。在另一个实施方案中，该抗体表现出具有特性(a)、(b)、(c)、以及(d)全部四种特性。在某些实施方案中，该抗体对Ramos细胞没有直接的抗增殖作用。在某些实施方案中，该抗体不诱导Ramos细胞中的钙运转。在某些实施方案中，该抗体在Ramos细胞上不介导依赖于补体的细胞毒性(CDC)。优选地，该抗体以高亲和力结合人⑶22，如以！父川^或更小的^或者以丄父川为或更小的KD、或者以！父川^或更小的^或者以IXKTkiM或更小的KD、或者以7X10_nM或更小的Kd。在另一方面，本公开涉及分离的人单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体与参考抗体(referenceantibody)交叉竞争而结合到⑶22上,其中该参考抗体包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:31的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:35的氨基酸序列；或(b)重链可变区，其包括SEQIDNO:32或61的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:36的氨基酸序列；或(c)重链可变区，其包括SEQIDNO:33的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:37或38的氨基酸序列；或(d)重链可变区，其包括SEQIDNO:34的氨基酸序列，以及轻链可变区,其包括SEQIDNO:39或40的氨基酸序列；或(e)重链可变区，其包括SEQIDNO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区,其包括SEQIDNO:84或85的氨基酸序列；或(f)重链可变区，其包括SEQIDNO:82或83的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:86的氨基酸序列；其中该抗体特异地结合人⑶22。在又一方面，本发明涉及分离的单克隆抗体、或该抗体的抗原结合部分，其包括重链可变区，该重链可变区是人Vh7-4.1基因、人Vh4-34基因、人Vh5-51基因、或人Vh1_69基因的产物或衍生于所述基因，其中该抗体特异地结合人CD22。在又一方面，本发明涉及分离的单克隆抗体、或该抗体的抗原结合部分，其包括轻链可变区，该轻链可变区是人VA2b2基因、人VkL6基因、人VkA27基因、人VkAlO基因，或人L18基因的产物或衍生于所述基因，其中该抗体特异地结合人CD22。在又另一方面，本发明涉及分离的抗体，或其抗原结合部分，其包括:(a)重链可变区，该重链可变区是人Vh7_4.1基因的产物或衍生于所述基因，以及轻链可变区，该轻链可变区是人VA2b2基因的产物或衍生于所述基因；或者(b)重链可变区，该重链可变区是人VH4_34基因的产物或衍生于所述基因，以及轻链可变区，该轻链可变区是人VkL6基因的产物或衍生于所述基因；或者(c)重链可变区，该重链可变区是人VH5_51基因的产物或衍生于所述基因，以及轻链可变区，该轻链可变区是人VkA27或AlO基因的产物或衍生于所述基因；(d)重链可变区，该重链可变区是人VH1_69基因的产物或衍生于所述基因，以及轻链可变区，该轻链可变区是人VkL6基因的产物或衍生于所述基因；或者(e)重链可变区，该重链可变区是人VH1_69基因的产物或衍生于所述基因，以及轻链可变区，该轻链可变区是人VkL18或A27基因的产物或衍生于所述基因；其中该抗体特异地结合人⑶22。在另一方面，本公开提供了分离的单克隆抗体、或其抗原结合部分，其包括:重链可变区，该重链可变区包括⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列；以及轻链可变区，该轻链可变区包括⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列，其中:(a)该重链可变区⑶R3序列包括氨基酸序列，该氨基酸序列选自:SEQIDNO:9-12以及69-71的氨基酸序列，以及它们的保守性修饰；(b)该轻链可变区CDR3序列包括氨基酸序列，该氨基酸序列选自:氨基酸序列SEQIDNO:25-30,78-80,以及它们的保守性修饰；以及(C)该抗体结合至人⑶22上。在优选的实施方案中，这一抗体也具有以下特征中的一个或多个特征:内化进入CD22+细胞，介导ADCC活力和/或促进由BCR刺激而诱导的Ramos细胞的细胞死亡，和/或当缀合至细胞毒素时抑制表达CD22细胞在体内的生长。优选地，重链可变区CDR2序列包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:5_8、60、66-68的氨基酸序列，以及它们的保守性修饰；并且轻链可变区CDR2序列包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:19-24,75-77的氨基酸序列，以及它们的保守性修饰；优选地，重链可变区CDRl序列包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:1_4、63_65的氨基酸序列，以及它们的保守性修饰；轻链可变区CDRl序列包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDN0:13-18、72-74的氨基酸序列，以及它们的保守性修饰。优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:1；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:5；(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:9；(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:13；(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:19;以及(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:25。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:2；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:6或60;(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:10；(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:14；(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:20;以及(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:26。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:3；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:7；(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:11；(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:15或16;(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:21或22;(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:27或28。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:4；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:8；(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:12；(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:17或18;(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:23或24;(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:29或30。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:63；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:66；(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:69；(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:72或73;(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:75或76;以及(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:78或79。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:64或65；(b)重链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:67或68；(c)重链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:70或71;(d)轻链可变区CDRl，其包括SEQIDNO:74；(e)轻链可变区CDR2，其包括SEQIDNO:77;以及；(f)轻链可变区CDR3，其包括SEQIDNO:80。本公开的其他优选抗体，或这些抗体的抗原结合部分包括:(a)重链可变区，其包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:31_34、61以及81-83;以及(b)轻链可变区，其包括选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:35-40以及84_86；其中该抗体特异地结合人⑶22。一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:31的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:35的氨基酸序列。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:32或61的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:36的氨基酸序列。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:33的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:37或38的氨基酸序列。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:34的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:39或40的氨基酸序列。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:81的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:84或85的氨基酸序列。另一种优选的组合包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:82或83的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，其包括SEQIDNO:86的氨基酸序列。在本公开的另一方面，提供了多种抗体、或它们的抗原结合部分，它们与上述抗体中的任何抗体竞争而结合在⑶22上。例如，本公开的抗体可以是全长抗体，例如IgGl或IgG4同种型。可选地，这些抗体可以是抗体片段，例如Fab、Fab’或Fab’2片段，或单链抗体。本公开还提供了免疫缀合物(immunoconjugate),其包括连接至治疗剂(例如细胞毒素或放射性同位素)的本公开的抗体、或其抗原结合部分。在特别优选的实施方案中，本发明提供了免疫缀合物，其包含连接至化合物“细胞毒素A”(例如，经硫醇键合)的本公开的抗体，或其抗原结合部分。本公开还提供了双特异性分子，其包含本公开的抗体，或其抗原结合部分，它们连接至第二功能部分，该部分具有不同于所述抗体，或其抗原结合部分的结合特异性。还提供了包含本公开的抗体、或其抗原结合部分、或免疫缀合物、或双特异性分子以及可药用的载体的组合物。本公开还包括编码本公开的抗体、或这些抗体的抗原结合部分的核酸分子，以及包括此类核酸的表达载体以及包括此类表达载体的宿主细胞。还提供了使用包括此类表达载体的宿主细胞制备抗-CD22抗体的多种方法，并且可包括的步骤有(i)在宿主细胞中表达抗体以及Qi)从宿主细胞中分离该抗体。本公开的另一方面涉及抑制表达⑶22的肿瘤细胞的生长的方法。方法包括用本发明的抗体，或其抗原结合部分与表达CD22的肿瘤细胞相接触，这样使表达CD22的肿瘤细胞的生长受到抑制。该肿瘤细胞可以是，例如，B细胞淋巴瘤，诸如非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，抗体，或其抗原结合部分被缀合至治疗剂上，诸如细胞毒素。本公开的另一方面涉及治疗受试者的炎症或自身免疫病症的方法。方法包括向受试者施用本发明的抗体，或其抗原结合部分，这样使受试者的炎症或者自体免疫病症得到治疗。自身免疫病症可以是，例如，系统性红斑狼疮或类风湿性关节炎。本公开还提供了以高亲和性力特异地结合⑶22的分离的抗-⑶22抗体-配偶体分子缀合物，尤其是包含人单克隆抗体的那些缀合物。此类抗体-配偶体分子缀合物中的某些缀合物能被内化进入表达CD22的细胞中并且能介导抗体依赖性细胞毒作用。本公开也提供利用在此披露的抗-CD22抗体-配偶体分子缀合物治疗癌症，例如B细胞淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤的方法。在另一方面，本发明提供了治疗受试者的炎症或自身免疫病症的方法。方法包括向受试者施用本发明的抗体，或其抗原结合部分，这样使受试者的炎症或自身免疫病症得到治疗。优选的自身免疫病症的非限制性实例包括系统性红斑狼疮以及类风湿性关节炎。自身免疫病症的其他实例包括炎症性肠病(包括溃疡性结肠炎以及克隆病)、I型糖尿病、多发性硬化、干燥综合征、自身免疫性甲状腺炎(包括格雷夫斯病以及桥本甲状腺炎)、银屑病以及肾小球肾炎。还提供了包含本公开的与配偶体分子相缀合的抗体、或其抗原结合部分的组合物。可以有利地与如在此披露的抗体配偶体分子缀合物中的抗体相缀合的配偶体分子包括但不限于:作为药物的分子、毒素、标记分子(例如放射性同位素)、蛋白质、以及治疗剂。还在此披露了包含抗体-配偶体分子缀合物以及可药用的载体的组合物。在一方面，此类抗体-配偶体分子缀合物通过化学接头被缀合。在某些实施例中，该接头是肽基接头，且在此被描述为(L4)p-F-(Ll)m。其它接头包括肼和二硫化物接头，在此分别被描述为(L4)P-H-(Ll)m或(L4)p-J-(Ll)m。除了被附着在配偶体上的接头之外，本发明还提供了可剪切的连接臂，这些连接臂适于附着至基本上任何分子种类。另一方面，本发明涉及抑制表达⑶22的肿瘤细胞的生长的方法。该方法包括将表达CD22的肿瘤细胞与本公开的抗体-配偶体分子缀合物相接触,这样使CD22-肿瘤细胞的生长受到抑制。在优选的实施方案中，该配偶体分子是治疗剂，例如细胞毒素。尤其优选的表达CD22的肿瘤细胞是B细胞淋巴瘤，例如非霍奇金淋巴瘤。其他类型的表达CD22的肿瘤细胞包括伯基特淋巴瘤以及B细胞慢性淋巴细胞白血病。在又其他实施方案中，表达⑶22的肿瘤细胞来自选自以下的癌症:伯基特淋巴瘤以及B细胞慢性淋巴细胞白血病。在另一方面，本发明涉及治疗受试者癌症的方法。该方法包括向受试者施用本公开的抗体-配偶体分子缀合物，这样使受试者的癌症得到治疗。在优选的实施方案中，该配偶体分子是治疗剂，例如细胞毒素。尤其优选的用于治疗的癌症是B细胞淋巴瘤，例如非霍奇金淋巴瘤。其他类型的癌症包括伯基特淋巴瘤以及B细胞慢性淋巴细胞白血病。参照下文的非限制性的详细说明与实施例，本公开的其他特征与优点将变得很清楚。在本申请全文中引用的所有参考文献的内容、Genbank登录号、专利、以及已公开的专利申请的内容都明确地通过引用并入本文。附图简要说明图1A示出了12C5人单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:41)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:31)o描绘了CDR1(SEQIDNO:1)、CDR2(SEQIDN0:5)、以及CDR3(SEQIDNO:9)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图1B示出了12C5人单克隆抗体的入轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:45)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:35)描绘了CDRl(SEQIDNO:13)、CDR2(SEQIDNO:19)、以及CDR3(SEQIDNO:25)区，并指明了V与J的种系来源。图2A示出了19A3人单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:42)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:32)，以及⑶22.1重组抗体的重链可变区的核苷酸序列以及氨基酸序列。19A3的重链可变区的序列与CD22.1的重链可变区的序列相同。描绘了CDRl(SEQIDNO:2)、CDR2(SEQIDNO:6)、以及CDR3(SEQIDNO:10)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图2B示出了19A3人单克隆抗体的k轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:46)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:36)，以及CD22.1重组人单克隆抗体的k轻链可变区的核苷酸序列以及氨基酸序列。⑶22.1和⑶22.2的K轻链可变区的序列与19A3的k轻链可变区的序列相同。描绘了CDRl(SEQIDNO:14)、CDR2(SEQIDNO:20)、以及CDR3(SEQIDNO:26)区，并指明了V与J的种系来源。图2C示出了⑶22.2重组人单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:62)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:61)。描绘了CDRl(SEQIDNO:2)、CDR2(SEQIDNO:60)、以及CDR3(SEQIDNO:10)区，并指明了V与J的种系来源。图3A示出了16F7人单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:43)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:33)描绘了CDRl(SEQIDNO:3)、CDR2(SEQIDN0:7)、以及CDR3(SEQIDNO:11)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图3B示出了16F7人单克隆抗体的VK.1k轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:47)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:37)描绘了CDRl(SEQIDNO:15)、CDR2(SEQIDNO:21)、以及CDR3(SEQIDNO:27)区，并指明了V、以及J的种系来源。图3C示出了16F7人单克隆抗体的VK.2K轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:48)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:38)描绘了CDRl(SEQIDNO:16)、CDR2(SEQIDNO:22)、以及CDR3(SEQIDNO:28)区，并指明了V与J的种系来源。图4A示出了23C6人单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:44)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:34)描绘了CDRl(SEQIDNO:4)、CDR2(SEQIDNO:8)、以及CDR3(SEQIDNO:12)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图4B示出了23C6人单克隆抗体的VK.1k轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:49)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:39)描绘了CDRl(SEQIDNO:17)、CDR2(SEQIDNO:23)、以及CDR3(SEQIDNO:29)区，并指明了V与J的种系来源。图4C示出了23C6人单克隆抗体的VK.2K轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:50)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:40)描绘了CDRl(SEQIDNO:18)、CDR2(SEQIDNO:24)、以及CDR3(SEQIDNO:30)区，并指明了V与J的种系来源。图5A示出了12C5的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:31)与人种系VH7_4.1氨基酸序列(SEQIDNO:51)的比对。图5B示出了12C5的轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:35)与人种系￥入2匕2氨基酸序列(SEQIDNO:55)的比对。图6A示出了19A3/CD22.1的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:32)与人种系VH4_34氨基酸序列(SEQIDNO:52)的比对。图6B示出了19A3/CD22.1/CD22.2的轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:36)与人种系VkL6氨基酸序列(SEQIDNO:56)的比对。图6C示出了CD22.2的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:61)与人种系乂^^斗氨基酸序列(SEQIDNO:52)的比对。图7A示出了16F7的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:33)与人种系VH5_51氨基酸序列(SEQIDNO:53)的比对。图7B示出了16F7的Vk.1轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:37)与人种系VK27氨基酸序列(SEQIDNO:57)的比对。图7C示出了16F7的VK.2轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:38)与人种系VkAlO氨基酸序列(SEQIDNO:57)的比对。图8A示出了23C6的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:34)与人种系VH1_69氨基酸序列(SEQIDNO:54)的比对。图8B示出了23C6的Vk.1轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:39)和23C6的Vk.2轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:40)与人种系VKL6氨基酸序列(SEQIDNO:56)的比对。图9是条形图，示出了抗-CD22人抗体12C5、19A3、16F7、以及23C6的内化进入Raji细胞。图1OA是示出了抗-CD22人抗体12C5、19A3、16F7、以及23C6针对Daudi细胞的ADCC活性(由裂解百分数所测量)的图。图1OB是示出了抗-CD22人抗体12C5、19A3、16F7、以及23C6针对Raji细胞的ADCC活性(由裂解百分数所测量)的图。图11是示出了固定的抗-0)22人抗体1205、1943、167、以及2306对80刺激的Ramos细胞的作用的条形图，由细胞死亡百分数所测量。图12是曲线图，该图显示与19A3亲本人抗体相比，由抗-⑶22重组人抗体⑶22.1及CD22.2与CD22ECD的结合。图13是曲线图，该图显示了由抗-⑶22重组人抗体⑶22.1及⑶22.2与在CHO细胞表面上所表达的⑶22的结合。图14是曲线图，该图显示了由抗-⑶22重组人抗体⑶22.1及⑶22.2与在Raji细胞表面上所表达的⑶22的结合。图15是条形图，该图显示由抗-CD22抗体12C5、19A3、16F7、以及23C6，以及由重组人抗体⑶22.1及⑶22.2与⑶22E⑶氨基末端结构域I及2的结合。图16显示在SCID小鼠中，抗体-药物缀合物⑶22.1-细胞毒素A及⑶22.2_细胞毒素A对Raji细胞肿瘤大小的体内作用。图17A显示4G6人抗体的核苷酸序列(SEQIDNO:87)与氨基酸序列(SEQIDNO:81)。描绘了CDRl(SEQIDNO:63)、CDR2(SEQIDNO:66)、以及CDR3(SEQIDNO:69)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图17B示出了4G6人单克隆抗体的VkIk轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:90)与氨基酸序列(SEQIDNO:84)描绘了CDRl(SEQIDNO:72)、CDR2(SEQIDNO:75)、以及CDR3(SEQIDNO:78)区，并指明了V与J的种系来源。图17C示出了4G6人单克隆抗体的VK2k轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:91)、以及氨基酸序列(SEQIDNO:85)描绘了CDRl(SEQIDNO:73)、CDR2(SEQIDNO:76)、以及CDR3(SEQIDNO:79)区，并指明了V与J的种系来源。图18A示出了21F6人单克隆抗体的乂!^重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:88)与氨基酸序列(SEQIDNO:82)描绘了CDRl(SEQIDNO:64)、CDR2(SEQIDNO:67)、以及CDR3(SEQIDNO:70)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图18B示出了21F6人单克隆抗体的乂#重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:89)与氨基酸序歹Ij(SEQIDNO:83)描绘了CDRl(SEQIDNO:65)、CDR2(SEQIDNO:68)、以及⑶R3(SEQIDNO:71)区，并指明了V、D、以及J的种系来源。图18C示出了21F6人单克隆抗体的k轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:92)与氨基酸序列(SEQIDNO:86)描绘了CDRl(SEQIDNO:74)、CDR2(SEQIDNO:77)、以及CDR3(SEQIDNO:80)区，并指明了V与J的种系来源。图19A示出了4G6的重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:81)与人种系VH1_69氨基酸序列(SEQIDNO:54)的比对。图19B示出了4G6的VkIk轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:84)与人种系VkL18氨基酸序列(SEQIDNO:93)的比对。图19C示出了4G6的Vk2k轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:85)与人种系VkA27氨基酸序列(SEQIDNO:57)的比对。图20A示出了21F6的VhI重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:82)与人种系VH4_34氨基酸序列(SEQIDNO:52)的比对。图20B示出了21F6的VH2重链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:83)与人种系VH4_34氨基酸序列(SEQIDNO:52)的比对。图20C示出了21F6的k轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:86)与人种系VkL6氨基酸序列(SEQIDNO:56)的比对。图21是曲线图，该图显示了由抗-⑶22人抗体4G6与在CHO细胞表面表达的⑶22的结合。图22是曲线图，该图显示了由抗-⑶22人抗体21F6与在CHO细胞表面表达的⑶22的结合。图23是曲线图，该图显示了由抗-⑶22人抗体21F6与在Raii细胞表面表达的CD22的结合。本公开的详细说明本公开涉及分离的单克隆抗体，尤其是以高亲和力与人CD22特异性结合的人单克隆抗体。在某些实施方案中，本公开的抗体衍生于特定的重链及轻链种系序列和/或包含特定的结构特征，诸如包括特定氨基酸序列的CDR区。本公开提供分离的抗体、免疫配偶体分子缀合物、双特异性分子、亲和体(affibody)、结构域抗体、纳米抗体、以及unibody,制备所述分子的方法，以及包括所述分子及药物载体的药物组合物。本发明还涉及使用这些分子的方法，诸如检测CD22，以及在与CD22表达有关的或者涉及B细胞调控的疾病或病症中调节B细胞活性，所述疾病或病症诸如CD22+肿瘤以及炎症或者自身免疫病症。本公开还提供了使用本发明的抗-CD22抗体抑制CD22+肿瘤细胞的生长(例如，治疗B细胞淋巴瘤)的方法。另外，本公开提供了使用本公开的抗-CD22抗体治疗炎症或自身免疫病症的方法。为了使本发明可以更容易地得到理解，首先对一些术语进行了定义。其他定义在整个详细说明中给出。术语“CD22”、“BL-CAM”、“B3”、“Leu-14”、以及“Lyb_8”可以互换地使用，并包括⑶22的变体、同工型(isoform)、以及物种同源物。因此，本公开的人抗体在某些情况下可以与来自除人之外的其他物种的CD22进行交叉反应。在某些实施方案中，这些抗体可以对人CD22具有完全特异性，并可能不显示物种或其他类型的非人交叉反应性。示例性的人CD22的完全氨基酸序列具有Genbank登录号NP_001762(SEQIDNO:59)。人⑶22序列可与SEQIDNO:59的人⑶22不同，其不同之处在于具有，例如，保守性突变或者在非保守区的突变，并且该⑶22具有与SEQIDNO:59的人⑶22基本上相同的生物学功能。例如，人CD22的生物功能是在CD22的细胞外结构域具有表位，所述表位与本公开的抗体特异地结合，或者人CD22的生物功能是调节BCR信号。特定的人⑶22序列与SEQIDNO:59的人⑶22在氨基酸序列上通常会有至少90%的同一性，并且含有这样的氨基酸残基，当与其他物种(例如鼠类)的CD22氨基酸序列进行比较时，这些氨基酸残基鉴定该氨基酸序列是人的。在某些情况下，人CD22可与SEQIDNO:59的⑶22在氨基酸序列上具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%、或99%的同一性。在某些实施方案中，与SEQIDNO:59的⑶22相比，人⑶22序列将展示出将不超过10个氨基酸差异。在某些实施方案中，与SEQIDNO:59的⑶22相比，人⑶22可展示出不超过5个、或甚至不超过4个、3个、2个、或I个氨基酸差异。按照在此的说明可以确定同一性百分数。术语“免疫应答”是指例如，淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞、以及由以上细胞或肝脏产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子、以及补体)的作用，这些作用导致对侵入性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌性细胞、或者，在自身免疫或病理性炎症情况下的正常人细胞或组织的选择性损害、破坏或从人体中清除。“信号转导途径”是指在多种信号转导分子之间的生物化学关系，这些信号转导分子在信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分中发挥作用。在此使用的术语“细胞表面受体”包括，例如，能够接受信号并将这种信号传递穿过细胞的质膜的分子及分子的复合物。本公开的“细胞表面受体”的实例是CD22蛋白质。在此使用的术语“抗体”包括完整的抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或其单链。“抗体”是指至少包括通过二硫键相连接的两条重链(H链)以及两条轻链(L链)或其抗原结合部分的糖蛋白。每一条重链都包括重链可变区(在此缩写为Vh)以及重链恒定区组成。该重链恒定区包含三个结构域Ch1、Ch2以及Ch3。每一条轻链都包括轻链可变区(在此缩写为VJ与轻链恒定区。该轻链恒定区包括一个结构域，Q。VH与VL区域还可再细分出被称为互补决定区(CDR)的高变区，其间散布更为保守的被称为构架区(FR)的区域。每个VH以及VL均由三个CDR以及四个FR构成，按照以下顺序从氨基端至羧基端排布:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链以及轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主的组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)及经典补体系统的第一组分(Clq)。在此使用的术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)是指保留了与抗原(例如CD22)特异性结合的能力的、抗体的一个或多个片段。已经证实抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来实现。术语抗体的“抗原结合部分”所涵盖的结合性片段的实例包括:(i)Fab片段，即由VL、VH、Cl与ChI结构域构成的单价片段；(ii)F(ab,)2片段，即包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fab’片段:它实质上是带有一部分绞链区的Fab片段(参见FundamentalImmunology(Paul编著，3.sup.rded.1993)；(iv)由Vh与ChI结构域构成的Fd片段；(V)由抗体的单臂的\与Vh结构域构成的Fv片段；(vi)由Vh结构域构成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341:544-546)；(vii)分离的互补决定区(CDR);以及(viii)纳米抗体，即包含单个可变结构域和两个恒定结构域的重链可变区。此外，虽然Fv片段的两个结构域\与乂11是由分离的基因编码的，但是可以使用重组方法通过合成接头将它们连接起来，使它们能够形成单蛋白链，其中\与Vh区域配对形成单价分子(已知为单链Fv(scFv);参见如Bird等人(1988)Science242:423~426以及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879_5883)。术语抗体的“抗原结合部分”也旨在涵盖这类单链抗体。这些抗体片段可通过本领域技术人员已知的常规方法获得，并且可以筛选这些片段以获得能够以与完整抗体相同的方式应用的片段。在此使用的简写“VK”是指K轻链的可变结构域，而在此使用的“VA”是指λ轻链的可变结构域。在此使用的缩写是指免疫球蛋白轻链的可变结构域并因此包含Vk与^轻链二者。在此使用的“分离的抗体”意指这样的抗体，它基本上不含有其他的具有不同抗原特异性的抗体(例如，特异性结合CD22的分离的抗体是基本上不含有特异性结合除CD22之外的抗原的抗体)。然而，特异性结合CD22的分离的抗体对于其他抗原，例如来自其他物种的CD22分子可具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含有其他细胞材料和/或化学物。在此使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子的制品。单克隆抗体组合物展示出单一的针对特定表位的结合特异性和亲和性。在此使用的术语“人抗体”旨在包括这样一类抗体:它的可变区中的构架区与CDR区均来自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果该抗体包含恒定区，则该恒定区也来自人种系免疫球蛋白序列。本公开的人抗体可以包含不是由人种系免疫球蛋白序列所编码的氨基酸残基(例如，由体外随机诱变或位点-特异性诱变引入的突变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，此处使用的术语“人抗体”并不旨在包括这样的抗体:在该抗体中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列被移植到人构架区序列上。术语“人单克隆抗体”是指显示出单一结合特异性的抗体，该抗体所具有的可变区中构架区与CDR区均来自人种系免疫球蛋白序列。在一个实施方案中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，该杂交瘤包括来自转基因非人动物的B细胞，所述转基因动物例如小鼠，具有包含与永生化细胞融合的人重链转基因与轻链转基因的基因组。在此使用的术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如:(a)从对于人免疫球蛋白基因来说是转基因或转染色体的动物(如小鼠)中分离的抗体或从制备自上述转基因动物的杂交瘤中分离的抗体(下文将进一步说明)；(b)从被转化而能表达人抗体的宿主细胞(如转染瘤)分离的抗体；(C)从重组的组合人抗体文库分离的抗体；以及(d)通过任何涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人抗体具有如下可变区，在该可变区中构架区与⑶R区来源于人种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方案中，这类重组人抗体可以经历体外诱变(或者当使用含有人Ig序列的转基因动物时，体内体细胞诱变)，这样一来，该重组抗体的Vh与\区域的氨基酸序列是这样的序列，其尽管来源于人种系Vh与\序列并与人种系Vh与\序列相关，但是并不天然存在于体内人抗体种系库之中。此处使用的“同种型”是指由重链恒定区基因所编码的抗体类型(例如IgM或IgGl)。短语“识别抗原的抗体”与“对抗原具有特异性的抗体”在本文中可以与术语“特异性结合抗原的抗体”互换使用。术语“人抗体衍生物”是指人抗体的任何经修饰的形式，例如，该抗体与另一种物质或抗体的缀合物。术语“人源化抗体”旨在指以下抗体，其中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列被移植到人构架区序列上。可以在人构架区序列中进行额外的构架区修饰。术语“嵌合抗体”是意指以下抗体，其中可变区序列来自一物种而恒定区序列来自另一物种，例如其中可变区序列来自小鼠抗体而恒定区序列来自人抗体的抗体。术语“抗体模拟物”意指能模仿抗体结合到抗原上的能力的分子，但其不局限于天然抗体结构。此类抗体模拟物的实例包括但不限于亲和体、DARPin、Anticalin、Avimer、以及Versabody，所有这些抗体模拟物在模拟传统抗体结合时均采用结合结构，它们都产生自不同的作用机理并通过这些不同的机理发挥作用。在此使用的术语“配偶体分子”是指在抗体-配偶体分子缀合物中与抗体缀合的实体。配偶体分子的实例包括药物、毒素、标记分子(包括但不限于肽及小分子标记物，例如荧光染料标记物，以及单原子标记物，例如放射性同位素)、蛋白质以及治疗剂。在此使用的“特异地结合人⑶22”的抗体意指这样的抗体，它结合人⑶22(并且可能是来自一种或多种非人物种的CD22)，但基本上不结合非CD22蛋白。在某些实施方案中，本公开的抗体特异地结合SEQIDNO:59的人⑶22或其变体。优选地，该抗体以IXICT7M或更小的Kd结合人⑶22，更优选为IXICT8M或更小，更优选为5XICT9M或更小，更优选为IXIO^9M或更小，甚至优选为5XΙΟ,Μ或更少，甚至更优选为7Χ10_ηΜ或更小。在此使用的术语“基本上不结合”蛋白质或细胞是指不结合或不以高亲和力结合蛋白或细胞，即，以IX10_6Μ或更大，更优选为1Χ10_5Μ或更大，更优选为IX10_4M或更大，更优选为1Χ10_3Μ或更大，甚至更优选为IX10_2Μ或更大的Kd结合蛋白质或细胞。在此使用的术语“Kass。。”或“Ka”意指特定的抗体-抗原相互作用的结合速率，其中在此使用的术语“Kdis”或“Kd”意指特定的抗体-抗原相互作用的解离速率。此处使用的术语“KD”意指解离常数，它是由1与1之比(即Kd/Ka)得到，并被表示为摩尔浓度(M)。抗体的Kd值可以用本领域确立的方法测定。确定抗体Kd值的优选的方法是通过使用表面等离振子共振，优选使用诸如;Biaeore系统的生物传感器系统。在此使用的术语针对IgG抗体的“高亲和力”是指对于靶抗原而言，抗体具有的Kd值为1父101或更小，更优选为5父101或更小，甚至更优选为ixio_8m或更小，甚至更优选为5xio_9m或更小并且甚至更优选为Ixio_9m或更小。然而，对于其他抗体同种型而言，“高亲和力”结合可以发生变化。例如，“高亲和力”结合IgM同种型是指抗体具有的KD值为10_6M或更小，更优选为10_7M或更小，甚至更优选为10_8M或更小。在此使用的术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物及非哺乳动物，例如非人灵长类动物、绵羊、犬、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等等。符号无论是用作为键或以垂直于键的方式显示，都说明显示部分所在点与分子、固相载体等的其余部分进行连接。除非另有说明，术语“烷基”其本身或者作为另一个取代基的部分，是指直链、或支链、或环烃基，或其组合，其具有指定数目的碳原子数(即C1-Cltl是指I至10个碳)，可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的，并可以包括二价和多价基。饱和烃基基团的实例包括但不限于以下基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、以及(例如)正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同源物或异构体、等等。不饱和烷基基团是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烷基基团的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、2-(丁间二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-丙炔基和3-丙炔基、3-丁炔基，以及更高级同源物及异构体。除非另有说明，术语“烷基”也指包括以下更详细定义的那些烷基的衍生物，例如“杂烷基”。烷基基团(它们限于是烃基团)被称为“同系烷基(homoalkyl)”。术语“亚烷基”其本身或作为了另一个取代基的部分是指衍生于烷的二价基团，例如但不局限于-CH2CH2CH2CH2-,并且还包括以下描述为“杂亚烷基”的那些基团。通常，烷基(或亚烷基)基团应含有I至24个碳原子，本发明中优选的那些基团应含有10个或更少的碳原子。“低级烷基”或者“低级亚烷基”为短链烷基或者亚烷基基团，一般具有8个或更少的碳原子。除非另有说明，术语“杂烷基”其本身或者与另一个术语连用是指稳定的直链或支链、或环烃基，或其组合，由所说明数目的碳原予和至少一个杂原子组成，所述杂原子选自O、N、S1、及S，其中氮、碳及硫原子可任选地被氧化，并且该氮杂原子可任选地被季铵化。一个或多个杂原子O、N、S、及Si可位于杂烷基基团的任何内部位置，或可位于烷基基团与该分子的其余部分相连接的位置。实例包括但不限于:-CH2-CH2-0-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3>-CH2-CH2-N(CH3)-CH3>-CH2-S-CH2-CH3'-CH2-CH2-S(O)-CH3>-CH2-CH2-S(0)2-CH3>-CH=CH-O-CH3、-Si(CH3)3>-CH2-CH=N-OCH3、及-CH=CH-N(CH3)-CH3。高达两个杂原子可是连续的，例如，-CH2-NH-OCH3以及-CH2-O-Si(CH3)3。类似地，术语“杂亚烷基”其本身或者作为另一个取代基的部分，是指衍生于杂烷基的二价基，例如但不局限于，-CH2-CH2-S-CH2-CH2-以及-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于杂亚烷基基团，杂原子也可占据链末端的任一端或两端(例如，亚烷氧基、亚烷二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。术语“杂烷基”以及“杂亚烧基”包括聚(乙二醇)及其衍生物(参见例如，ShearwaterPolymersCatalog,2001)。此外，对于亚烷基以及杂亚烷基连接基团而言，连接基团的化学式的书写方向不表明连接基团的方向。例如，式-C(O)2R’-同时代表-C(O)2R’-以及-R’C(O)2-.与术语“烷基”或“杂烷基”连用的术语“低级的”是指具有I至6个碳原子的部分。术语“烷氧基”、“烷基氨基”、“烷基磺酰基”、及“烷硫基”(或硫代烷氧基)以它们的常规意义使用，并且是指那些通过氧原子、氨基、SO2基团或硫原子分别附着至该分子剩余部分的那些烷基基团。术语“芳基磺酰基”是指通过SO2基团附着至分子剩余部分的芳基分子，且术语“硫氢基”是指SH基团。一般而言，“酰基取代基”也选自以上给出的组。在此用到的术语“酰基取代基”指附着至羰基碳并使其化合价饱和的基团，该羰基碳直接或间接地附着至本发明的合物的多环核上。除非另有说明，术语“环烷基”以及“杂环烷基”其本身或者与其他术语连用，分别指环式的取代的或者未取代的“烷基”以及取代的或未取代的“杂烷基”。另外，对于杂环烷基，杂原子可占据杂环与分子残余部分相连接的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的实例包括但不限于1_(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1_哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。环结构的杂原子和碳原子可以任选地被氧化。除非另有说明，术语“齒”或“齒素”其本身或另一个取代基的部分，是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，术语如“齒烷基”是指包括单齒烷基及聚齒烷基。例如，术语“齒(C1-C4)烷基”是指包括但不局限于，三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。除非另有说明，术语“芳基”是指取代的或未取代的多未饱和的、芳香的、烃取代基，这些取代基可以是单环或稠合在一起或者共价连接的多环(优选I至3个环)。术语“杂芳基”是指芳基基团(或环)，其包含I至4个选自N、O、及S的杂原子，其中氮、碳及硫原子任选地被氧化，且一个或多个氮原子任选地被季铵化。杂芳基基团可通过杂原子附着至该分子的残余部分。芳基和杂芳基基团的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、批嗪基、2-唑基、4-唑基、2-苯基-4-5恶唑基、5-唑基、3-异％唑基、4-异唑基、5-异g唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基、以及6-喹啉基。以上提到的芳基和杂芳基环体系中每个体系的取代基均选自以下描述的可接受的取代基。“芳基”及“杂芳基”也包括这样的环状体系，其中一个或多个非芳香性的环状体系被稠合或者另外结合至芳基或杂芳基系上。简言之,术语“芳基”,当与其他术语(如芳氧基、芳基硫氧基(arylthioxy)、芳烧基)组合使用时，同时包括以上已定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意指包括那些基团，其中芳基基团被附着至烷基基团(例如，苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括那些烷基基团，其中碳原子(例如，亚甲基基团)已被，例如氧原子(如苯氧基甲基、2-吡啶基氧基甲基、3-(1_萘氧基)丙基等)置换。以上术语(例如“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)中每个术语均包括所示基团的取代和未取代形式。以下提供每一类型基团的优选取代基。烧基、以及杂烧基基团(包括经常提到的那些基团，例如亚烧基、链稀基、杂亚烧基、杂链稀基、块基、环烧基、杂环烧基、环链稀基、以及杂环链稀基)的取代基通常分别被称为“烷基取代基”和“杂烷基取代基”，且它们可以是多个基团中一个或多个基团，这些基团选自但不限于，:_0R，、=O、=NR'=N-OR'-NR，R”、_SR’、_卤素、-SiR’R”R”，、_0C(O)R，、-C(0)R，、-CO2RJ、-CONRjR”、-OC(0)NR，R”、-NR”C(0)R，、-NR，-C(0)NR”R”，、-NR”C(0)2R，、-NR-C(NR，η”，)=NR””、-NR-C(NR，R”)=NR”，、_S(0)R，、_S(0)2R，、_S(0)2NR，R，，、_NRS02R’、-CN以及-NO2，其数量从0至(2m’+1)，其中111’是此类基团中的碳原子总数。R’、R”、R”’以及R””每一个均优选地独立地指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基(例如取代有I至3个齒素的芳基)、取代或未取代的烧基、烧氧基或硫烧氧基基团、或芳烷基基团。当本发明的化合物包括多于一个R基团时，例如，当多于一个的这些基团存在时，每个R基团独立地选择，如对每个R’、R”、R”’以及R””基团选择一样。当R’和R”与同一个氮原子相连时，它们可以与氮原子相结合以形成5、6或7元环。例如，-NR’R”是指包括但不局限于，1-吡咯烷基以及4-吗啉基。从以上取代基的讨论中，本领域的技术人员会明白术语“烷基”意思是包括含有结合至除氢基团以外的基团(例如卤烷基(如-CF3及-CH2CF3)、以及酰基(如-C(O)CH3>-C(O)CF3>-C(O)CH2OCH3等))的碳原子的基团。与描述烷基基团的取代基类似，芳基取代基和杂芳基取代基通常分别被称为“芳基取代基”和“杂芳基取代基”，且这些基团是变化的，并选自例如:卤素、-0R’、=O、=NR’、=N-0R，、-NR，R，，、-SR，、-卤素、-SiR，R，，R，，，、-OC(O)R，、-C(O)R，、-C02R，、-CONR，R”、-OC(O)NR，R，，、-NR，，C(0)R，、-NR，_C(0)NR”R，”、_NR”C(0)2R，、-NR_C(NR，R”)=NRj^-S(0)R\-S(0)2R’、-S(0)2NR’R，，、-NRSO2R，、-CN以及-N02、-R，、-N3'-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基、以及氟(C1-C4)烷基，其数量从O到芳环体系上开放化合价(openvalence)的总数；且其中R’、R”、R”’以及R””优选地独立地选自:氢、(C1-C8)烷基和杂烷基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)_(C1-C4)烷基、以及(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烷基。当本发明的化合物包括多于一个R基团时，例如，当多于一个的这些基团存在时，每个R基团均独立地进行选择，如同对每个R’、R”、R”’、以及R””进行选择一样。在芳基或杂芳基环相邻原子上的芳基取代基中的两个可任选地被具有式为-T-C(O)_(CRR’)q-u-的取代基代替，其中，T和U独立地为-NR-、_0_、-CRR’-或单键，并且q为从O到3的整数。可选地，在芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个取代基可任选地被式-A-(CH2)r_B-的取代基所替换，其中A和B独立地为-CRR’-、-0-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)2_、-S(O)2NR’_、或单键，并且r是从I至4的整数。如此形成的该新环的单键中的一个可能可任选地被双键取代。可选地，在芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可任选地被式-(CRR’)S-X-(CR”R”’)d-的取代基所替换，其中s和d独立地为从O至3的整数，并且X是-O-、-NR’-、-S-、-S(O)、-S(O)2-、或-S(O)2NR,_。取代基R、1’、1”以及1”’优选地独立地选自氢或取代的或未取代的(C1-C6)烷基。在此使用的术语“二磷酸酯”包括但不局限于包含两个磷酸基团的磷酸的酯。术语“三磷酸酯”包括但不局限于包含三个磷酸基团的磷酸的酯。例如，具有二磷酸酯或三磷酸酯的具体药物包括:三磷酸酯在此使用的术语“杂原子”包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、以及硅(Si)。符号“R”是一个通用缩写，它表示一个取代基基团，该基团是选自:取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环基基团。在以下各分部中进一步详细地说明了本公开的不同方面。杭-CD22杭体本公开的抗体的特征为抗体的特定的功能特征或特性。例如，抗体特异地结合人⑶22。优选地，本发明的抗体以高亲和力结合人⑶22，例如其中Kd为1X10_7M或更低。本公开的抗-⑶22抗体优选地显示以下特征中的一种或多种特征:(a)内化进入CD22+细胞；(b)针对⑶22+细胞表现出抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)；(c)促进由B细胞受体(BCR)刺激诱导的Ramos细胞的细胞死亡；以及(d)当缀合至细胞毒素时抑制表达⑶22的细胞在体内的生长。在优选的实施方案中，该抗体表现出特性(a)、(b)、(C)以及(d)中至少两种特性。在又另一个优选实施方案中，该抗体表现出具有特性(a)、(b)、(c)以及(d)中三种特性。在另一个优选实施方案中，该抗体表现出具有特性(a)、(b)、(C)以及(d)全部四种特性。当本发明的抗-CD22抗体表现出某些功能特性时，在某些实施方案中，抗体的另一个特征是它们不表现出其他特殊的功能特性。例如，在某些实施方案中，该抗体对Ramos细胞没有直接的抗增殖作用。在其他实施方案中，该抗体不诱导Ramos细胞中的钙运转。在又某些实施方案中，该抗体在Ramos细胞上不介导依赖于补体的细胞毒性(CDC)。值得注意的是，已报道一种人源抗-⑶22抗体，epratuzumab,缺乏直接的抗增殖作用以及针对非霍奇金淋巴细胞系的CDC活性，但该抗体的确通过其他手段介导对该细胞系的细胞毒性作用(参见Carnahan,J.等人(2006)Mol.1mmunol.44:1331-1341)。优选地，本发明的抗体以IX10_7M或更少的Kd与人⑶22相结合，以IX10_8M或更少的Kd与人⑶22相结合，以5X10_9M或更少的Kd与人⑶22相结合，以3X10_9M或更少的Kd与人⑶22相结合，以IX10_9M或更少的Kd与人⑶22相结合，以5XΙΟ,Μ或更少的Kd与人⑶22相结合，或以IXIO^10M的Kd与人⑶22相结合，或以7X10_ηΜ或更少的Kd与人⑶22相结合。本领域已知评价该抗体与人⑶22相结合的亲和力的标准测定，包括例如，用重组CD22进行ELISA和BIAcore分析(参见实施例3)。实例也提供了评价抗体内化(实施例4)、ADCC活性(实施例5)、促进由BCR刺激诱导的细胞死亡(实施例7)、抗体直接的抗增殖作用(实施例8)、诱导钙运转(实施例6)、以及CDC活性(实施例9)，以及抗体-药物免疫缀合物在体内对实体瘤细胞增殖的抗增殖作用(实施例10)的适宜测定的详细说明。单克降杭体12C5、9A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6、以及21F6本发明优选的抗体是人单克隆抗体12C5、19A3、16F7、23C6、4G6、W&21F6，以及重组人单克隆抗体⑶22.1、⑶22.2，这些抗体中所有抗体均如实施例1和2中所述被分离并且在结构上进行表征。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的Vh氨基酸序列分别在SEQIDNO:31、32、61、33、34、81、82和83中显示，其中19A3以及CD22.1的重链相同且与SEQIDNO:32相对应，并且21F6的Vh重链与SEQIDNO:82或83相对应。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6、以及21F6的'氨基酸序列分别在SEQIDNO:35、36、37、38、39、40、84、85、以86中显示，其中19A3、CD22.1及CD22.2的κ轻链相同且与SEQIDNO:36相对应，16F7的κ轻链与SEQIDNO:37或38相对应，23C6的κ轻链与SEQIDNO:39或40相对应，且4G6的κ轻链与SEQIDNO:84或85相对应。如果这些抗体中每一种抗体均能结合⑶22，则可将Vh和\序列进行“混合并匹配”，以产生本公开的其他抗-CD22结合分子。可以使用上述以及实施例中所述的结合测定(例如ELISA或流式细胞术)对此类“混合并匹配”的抗体的⑶22结合进行检测。优选地，当Vh和\链被混合并且匹配时，来自特定VH/VL对的Vh序列被结构上相似的Vh序列代替。类似地，优选地来自特定VH/VL对的\序列被结构上相似的\序列代替。因此，在一个方面，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，包括:(a)重链可变区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:31_34、61、以及81-83;以及(b)轻链可变区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:35-40以及84_86；其中该抗体特异地结合⑶22，优选人⑶22。优选的重链及轻链组合，包括:(a)重链可变区，其包括SEQIDNO:31的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:35的氨基酸序列；或(b)重链可变区，其包括SEQIDNO:32或61的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:36的氨基酸序列；或(c)重链可变区，其包括SEQIDNO:33的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:37或38的氨基酸序列；或(d)重链可变区，其包括SEQIDNO:34的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:39或40的氨基酸序列；或(e)重链可变区，其包括SEQIDNO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:84或85的氨基酸序列；或(f)重链可变区，其包括SEQIDNO:82或83的氨基酸序列，以及轻链可变区，其包括SEQIDNO:86的氨基酸序列。在另一方面，本公开提供了包括12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6、21F6的重链及轻链⑶R1、⑶R2、以及⑶R3，或其组合的抗体。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的VhCDRl的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:1-4以及63-65中(其中19A3、CD22.1以及CD22.2的Vh序列的CDRl相同并示于SEQIDNO:2中，并且21F6的VhI和VH2序列的⑶Rl相同并分别示于SEQIDNO:64及65中。12C5、19A3、CD22.1、16F7、23C6、CD22.2、4G6和21F6的VhCDR2的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:5-8、60、以及66-68中(其中19A3以及CD22.1的Vh序列的CDR2相同并示于SEQIDNO:6中，CD22.2的Vh序列的CDR2示于SEQIDNO:60中，并且21F6的VhI和Vh2序列的CDR2示于SEQIDNO:67及68中)。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的VhCDR3的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:9-12以及69-71中(其中19A3、CD22.1以及CD22.2的Vh序列的CDR3相同并示于SEQIDNO:10中，并且21F6的VhI和VH2序列的CDR3示于SEQIDNO:70及71中)。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的VlCDRl的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:13-18以及72-74中(其中19A3、CD22.1以及CD22.2的Vk序列的CDRl相同，并示于SEQIDNO:14中，16F7的Vk.1和Vk.2序列的CDRl示于SEQIDNO:15和16中，23C6的Vk.1和Vk.2序列的CDRl示于SEQIDNO:17及18中，并且4G6的Vk.1和Vk.2序列的CDRl示于SEQIDNO:72及73中)。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的VLCDR2的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:19-24以及75-77中(其中19A3、CD22.1以及CD22.2的Vk序列的CDR2相同，并示于SEQIDNO:20中，16F7的Vk.1和Vk.2序列的CDR2示于SEQIDNO:21及22中，23C6的Vk.1和Vk.2序列的CDR2示于SEQIDNO:23及24中，并且4G6的Vk.1和Vk.2序列的CDR2示于SEQIDNO:75及76中)。12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6和21F6的VLCDR3的氨基酸序列分别示于SEQIDNO:25-30以及78-80中(其中19A3、CD22.1以及CD22.2的Vk序列的CDR3相同，并示于SEQIDNO:26中，16F7的Vk.1和Vk.2序列的CDR3示于SEQIDNOs:27及28中，23C6的Vk.1和Vk.2序列的CDR3在SEQIDNO:29及30中显示，，并且4G6的Vk.1和Vk.2序列的CDR3示于SEQIDNOs:78及79中)。CDR区用Kabat系统进行说明(Kabat,E.A.,等人(1991).SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationN0.91-3242)。考虑到在这些抗体中每一种抗体均能够结合⑶22、并且抗原结合特异性主要由CDRl、CDR2、及CDR3区提供，因此VhCDRl、CDR2、及CDR3序列以及VlCDRl、CDR2、及CDR3序列可以被“混合并匹配”(即，来自不同抗体的CDR可以被混合并匹配，尽管每种抗体均必须含有Vh⑶R1XDR2、及⑶R3，以及Vl⑶R1XDR2、以及⑶R3)，以产生本公开的其他抗-⑶22结合分子。可以使用以上及实施例中说明的结合测定(例如，ELISA、Biae()ire分析)检测CD22与此类“混合并匹配”的抗体的结合。优选地，当VhCDR序列被混合并匹配时，来自特定Vh序列的⑶R1XDR2和/或⑶R3序列被结构上相似的一个或多个⑶R序列代替。类似地，当\⑶R序列被混合并匹配时，来自特定\序列的⑶RlXDR2和/或⑶R3序列可优选地被结构上相似的一个或多个CDR序列代替。对于本领域普通技术人员显而易见的是，对于12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6的单克隆抗体CDRl而言，可以通过将一个或多个Vh和/或\⑶R区序列替换为结构上相似的来源于本公开的⑶R序列的序列，来产生新的Vh和\序列。因此，在另一方面，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，包括:(a)重链可变区CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDN0:l_4以及63-65；(b)重链可变区CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:5_8、60以及66-68;以及(C)重链可变区⑶R3，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:9_12以及69-71。⑷轻链可变区CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDN0:13_18以及72-74；(e)轻链可变区CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDN0:19_24以及75-77;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:25-30以及78-80；其中该抗体特异地结合⑶22，优选人⑶22。在优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:1；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:5；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:9；(d)轻链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:13；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:19;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:25。在另一优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:2；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:6或60;(c)重链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:10；(d)轻链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:14；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:20;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:26。在另一优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:3；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:7；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:11；(d)轻链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:15或16;(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:21或22;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:27或28。在另一优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:4；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:8；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:12；(d)轻链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:17或18;(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:23或24;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:29或30。在另一优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:63；(b)重链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:66；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:69；(d)轻链可变区CDRl，其包含SEQIDNO:72或73;(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQIDNO:75或76;以及(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQIDNO:78或79。在另一优选的实施方案中，该抗体包括:(a)重链可变区⑶Rl，其包含SEQIDNO:64或65(b)重链可变区⑶R2，其包含SEQIDNO:67或68(C)重链可变区⑶R3，其包含SEQIDNO:70或71(d)轻链可变区⑶Rl，其包含SEQIDNO:74；(e)轻链可变区⑶R2，其包含SEQIDNO:77;以及(f)轻链可变区⑶R3，其包含SEQIDNO:80ο在本领域中熟知的是，独立于一个或多个⑶Rl和/或⑶R2结构域的⑶R3结构域单独地能够确定抗体对关联抗原的结合特异性，并且能够可预测地而产生多种抗体，这些抗体具有基于共同的⑶R3序列的相同的结合特异性。参见例如，Klimka等人，BritishJ.0fCancer83(2):252-260(2000)(描述了仅使用鼠类抗CD30抗体Ki_4的重链可变结构域CDR3来产生人源化抗CD30抗体)；Beiboer等人，J.Mol.Biol.296:833-849(2000)(描述了仅使用亲本鼠类M0C-31抗EGP-2抗体的重链CDR3序列重组上皮糖蛋白-2(EGP-2)抗体)；Rader等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.95:8910-8915(1998)(描述了使用鼠类抗整联蛋白ανβ3抗体LM609的重链和轻链可变CDR3结构域产生一系列人源化抗整联蛋白ανβ3抗体，其中每一个抗体成员在CDR3结构域之外的序列均不相同并均能与亲本鼠类抗体结合至相同的表位，并且其亲和力与亲本鼠类抗体一样高或比亲本鼠类抗体更高)；Barbas等人，J.Am.Chem.Soc.116:2161-2162(1994)(披露了CDR3结构域对抗原结合的贡献最大)；Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.92:2529-2533(1995)(描述了将三个针对人胎盘DNA的Fab(S1-1、S1-40及S1-32)的重链CDR3序列移植至抗破伤风类毒素Fab的重链上，由此替换存在的重链CDR3，并证实CDR3结构域单独就能够赋予结合特异性);Ditzel等人，J.1mmunol.157:739-749(1996)(描述了移植研究，其中仅将亲本多特异性FabLNA3的重链⑶R3转移到结合单特异性IgG破伤风类毒素的Fabp313抗体的重链上，就足以保留亲本Fab的结合特异性);Berezov等人，BIAjournal8ScientificRevieW8(2001)(描述了基于抗HER2单克隆抗体的CDR3的肽模拟物)；Igarashi等人，J.Biochem(Tokyo)117:452_7(1995)(描述了对应于抗磷脂酰丝氨酸抗体的CDR3结构域的一种12个氨基酸的合成多肽)！Bourgeois`等人,J.Virol72:807-10(1998)(显示来源于抗呼吸道合胞病毒(RSV)抗体的重链CDR3结构域的单个肽能够在体外中和所述病毒)；Levi等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90:4374-8(1993)(描述了基于鼠类抗HIV抗体的重链CDR3结构域的肽);Polymenis和Stoller，J.1mmunol.152:5218-5329(1994)(描述了通过移植结合Z-DNA的抗体的重链Q)R3区使之能够结合scFv)；以及Xu和Davis,Immunity13:37-45(2000)(描述了重链CDR3的多样性足以使在其他部分上相同的IgM分子在多种半抗原和蛋白抗原之间得到区分)。还参见美国专利号6，951，646;6，914，128;6，090，382；6，818，216;6，156，313;6，827，925;5，833，943;5，762，905以及5，760，185，描述了由单一CDR结构域定义的已获得专利的抗体。这些参考文献中每一篇的全文均通过引用并入本文。因此，本公开提供包括来自人或非人动物的抗体的一或多个重链和/或轻链CDR3结构域的单克隆抗体，其中该单克隆抗体能特异地结合CD22。在某些方面，本公开提供单克隆抗体，其包含来自于非人抗体(例如小鼠或大鼠抗体)的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域，其中该单克隆抗体能够特异地结合CD22。在一些实施方案中，包括来自非人抗体的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的此类创新的抗体对相应的亲本非人抗体而言:(a)能够与其竞争而进行结合；(b)保留功能特性；(C)与其结合至相同的表位；和/或(d)与其具有相似的结合亲和力。在其他方面中，本公开提供了单克隆抗体，其包含来自人抗体(例如，从非人的动物获得的人抗体)的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域，其中该人抗体能特异地结合CD22。在其他方面中，本公开提供了单克隆抗体，其包含来自第一人抗体(例如，从非人的动物获得的人抗体)的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域，其中该第一人抗体能特异地结合CD22，并且其中来自该第一人抗体的CDR3结构域替换了人抗体中的CDR3结构域(该人抗体缺乏对CD22的结合特异性)，以产生能特异地结合至CD22的第二人抗体。在一些实施方案中，包含来自第一人抗体的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的此类创新的抗体对相应的亲本第一人抗体而言:(a)能够与其竞争而结合；(b)保留其功能特性；(c)与其结合至相同的表位；和/或(d)与其具有相似的结合亲和力。具有特定种系序列的抗体在某些实施方案中，本公开的抗体包括来自特定的种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来自特定的种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。例如，在一个优选的实施方案中，本公开提供分离的单克隆抗体、或该抗体的抗原结合部分，包括重链可变区，该重链可变区是人Vh7-4.1基因、人Vh4-34基因、人Vh5-51基因、或人VHl-69基因的产物或衍生于所述基因，其中该抗体特异地结合人CD22。在另一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体、或该抗体的抗原结合部分，包括轻链可变区，该轻链可变区是人VA2b2基因、人VkL6基因、人VkA27基因、人\AlO基因、或人VkL18基因的产物或衍生于所述基因，其中该抗体特异地结合人CD22。在又一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体包括重链可变区(其是人％7-4.1基因的产物或衍生于所述基因)，并包括轻链可变区(它是人Va2b2基因的产物或衍生于所述基因)，其中该抗体特异地结合CD22，优选人CD22。在又一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体包括重链可变区(它是人％4-34基因的产物或衍生于所述基因)，并包括轻链可变区(它是人\L6基因的产物或衍生于所述基因)，其中该抗体特异地结合CD22，优选人CD22。在又一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体包括重链可变区(它是人Vh5-51基因的产物或衍生于所述基因)，并包括轻链可变区(它是人\A27或AlO基因的产物或衍生于所述基因)，其中该抗体特异地结合CD22，优选人CD22。在又一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体包括重链可变区(它是人Vh1-69基因的产物或衍生于所述基因)，并包括轻链可变区(它是人\L6基因的产物或衍生于所述基因)，其中该抗体特异地结合CD22，优选人CD22。在又一个优选的实施方案中，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其中该抗体包括重链可变区(它是人Vh1-69基因的产物或衍生于所述基因)，并包括轻链可变区(它是人\A27或L18基因的产物或衍生于所述基因)，其中该抗体特异地结合CD22，优选人CD22。此类抗体也可具有以上详细说明的一种或多种功能特征，例如内化进入CD22+细胞，针对CD22+细胞的ADCC活性和/或促进由BCR刺激细胞毒素诱导的Ramos细胞的细胞死亡。分别具有乂^-丄l&VA2b2的Vh及八的抗体的实例是12C5抗体。分别具有乂^^斗及VkL6的Vh及\的抗体的实例是19A3抗体。分别具有VH4_34及VkL6的Vh及\的抗体的另一个实例是⑶22.1抗体。分别具有Vh4-34及VkL6的Vh及\的抗体的另一个实例是CD22.2抗体，其中Vh链包括N57Q突变。分别具有Vh4_34及VkL6种系的Vh及Vl的抗体的另一个实例是21F6抗体。分别具有Vh5-51及VkA27或AlO的Vh及\的抗体的实例是16F7抗体。分别具有Vh1-69及VkL6的Vh及\的抗体的实例是23C6抗体。分别具有Vh1-69及VkA27或L18的Vh及Vl的抗体的实例是4G6抗体。如在此所用，如果抗体的可变区由使用人种系免疫球蛋白基因的系统获得，则该人抗体包含重链或轻链可变区，它是特定种系序列的“产物“或者“衍生于”该特定种系序列。此类系统包括用所感兴趣的抗原对携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠进行免疫，或者用所感兴趣的抗原对在噬菌体上进行展示的人免疫球蛋白基因文库进行筛选。人抗体是人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“衍生于”该序列，其鉴定是通过对人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较，并选择在序列上最接近(即最大百分数同一性)人抗体的序列的人种系免疫球蛋白序列来进行的。作为特定的人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“衍生于”该序列的人抗体，与该种系序列相比，可能含有氨基酸差异，这是由于例如，天然发生的体细胞突变或故意引入的定点突变。但是，经选择的人抗体通常与由人种系免疫球蛋白基因进行编码的氨基酸序列在氨基酸序列上具有至少90%的同一性，并且当与其他物种(例如，鼠类种系序列)的种系免疫球蛋白氨基酸序列进行比较时，含有将该人抗体鉴定为人的氨基酸残基。在某些情况中，人抗体与由该种系免疫球蛋白基因进行编码的氨基酸序列在氨基酸序列上可具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%，或99%的同一性。通常，与由人种系免疫球蛋白基因所编码的氨基酸序列相比，衍生于特定的人种系序列的人抗体将展示不超过10个氨基酸差异。在某些情况中，与由种系免疫球蛋白基因进行编码的氨基酸序列相比，该人抗体可展示不超过5个，或甚至不超过4个、3个、2个，或I个的氨基酸差异。同源杭体在又一个实施方案中，本公开的抗体包括重链及轻链可变区，所述可变区包括与在此说明的优选抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列，并且其中该抗体保留了本公开的抗-CD22抗体的所希望的功能特性。例如，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，包括重链可变区及轻链可变区，其中:(a)该重链可变区包括氨基酸序列，该氨基酸序列与选自以下氨基酸序列具有至少80%的同源性:SEQIDNO:31-34、61、以及81-83;(b)该轻链可变区包括氨基酸序列，该氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列具有至少80%的同源性:SEQIDNO:35-40，以及84-86；(C)该抗体特异地结合至人⑶22上。额外地或可选地，该抗体可具有以下功能特性中的一种或多种特性:(a)以IX10_7M或更少的Kd与人⑶22相结合；(b)内化进入⑶22+细胞；(c)在⑶22+细胞上表现ADCC活性；(d)促进由(例如)BCR刺激诱导的Ramos细胞的细胞死亡；和/或(e)当与细胞毒素缀合时抑制体内表达CD22的细胞的生长。在不同的实施方案中，该抗体可以是，例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在其他实施方案中，V1^P/或'氨基酸序列可以与以上给出的序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同源性。具有与以上给出的序列的Vh与Vl区具有高同源性(即，80%或更大)的乂11与'区的抗体，可以通过以下方式获得:对编码SEQIDNO:41-44、62、或87-89、或SEQIDNO:45-50或90-92的核酸分子进行诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)，接着使用在此说明的功能测定针对保留的功能(即，以上所给出的功能)检测编码出的被改变的抗体。如在此所用，在两个氨基酸序列之间的百分比同源性等同于在这两个序列之间的百分比同一性。在这两个序列之间的百分比同一性是这些序列共有的相同位置的数目的函数(即，％同源性=相同位置的#/位置的总#X100)，考虑空位(gap)的数目以及每个空位的长度，它们需要被引入以用于这两条序列的优化比对。如在以下非限制性的实例中所述，使用数学算法能完成序列的比较及在两个序列之间的百分比同一性的确定。使用E.Meyers及W.Miller(Comput.Appl.Biosc1.,4:11-17(1988))的算法可以确定两条氨基酸序列之间的百分比同一性，该算法已经被并入至ALIGN程序(版本2.0)中，该算法使用了PAM120权重残基表(weightresiduetable)、空位长度罚分(gaplengthpenalty)12以及空位罚分4。此外，使用Needleman及Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453(1970))算法能确定两条氨基酸序列之间的百分比同一性，该算法已被并入至GCG软件包的GAP程序中(可在WWW.gcg.com获得),该算法使用了Blossum62矩阵或PAM250矩阵，以及空位权重16、14、12、10、8、6、或4以及长度权重1、2、3、4、5或6。额外地或可选地，本公开的蛋白序列能进一步作为“查询序列”来使用，对公开数据库进行检索，从而例如鉴定相关的序列。使用Altschul，等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的XBLAST程序(版本2.0)能进行此类检索。通过XBLAST程序，记分=50，字长=3可进行BLAST蛋白检索，以获得与本公开的抗体分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较目的的空位比对，如Altschul等人((1997)NucleicAcidsRes.25(17):3389-3402所述可利用GappedBLAST。当利用BLAST及GappedBLAST程序时，各个程序(如XBLAST及NBLAST)的默认参数是有用的。参见WWW.ncb1.nlm.nih.gov。具有保守性修饰的抗体在某些实施方案中，本公开的抗体包含重链可变区(其包含⑶R1XDR2及⑶R3序列)，以及轻链可变区(其包含⑶R1XDR2及⑶R3序列)，其中这些⑶R序列中一个或多个序列包括基于在此说明的优选抗体(例如，12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6)的特定的氨基酸序列，或它们的保守性修饰，并且其中这些抗体保留了本公开的抗-CD22抗体的所希望的功能特性。在本领域中所理解的是，可以进行某些保守性序列修饰，这些保守性序列修饰不会去除抗原结合。参见例如，Brummell等人(1993)Biochem32:1180-8((描述了对沙门氏菌属(Salmonella)特异的抗体的⑶R3重链结构域的突变分析；deWildt等人(1997)Prot.Eng.10:835-41(描述了对抗-UAl抗体的突变研究)；Komissarov等人(1997)J.Biol.Chem.272:26864-26870(表明在HCDR3中间的突变导致亲和力的消失或减退)；Hall等人(1992)J.1mmunol.149:1605-12(描述在⑶R3区的单个氨基酸的改变使结合活性消失)；Kelley和O，Connell(1993)Biochem.32:6862-35(描述了Tyr残基在抗原结合中的贡献)；Adib-Conquy等人(1998)Int.1mmunol.10:341-6(描述了疏水性对结合的影响)、以及Beers等人(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43(描述了HCDR3氨基酸突变体)。因此，本公开提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其包含含有⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列的重链可变区以及含有⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列的轻链可变区，其中:(a)重链可变区⑶R3序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNO:9-12,69-71,以及它们的保守性修饰；(b)轻链可变区⑶R3序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNO:25-30,79-80,以及它们的保守性修饰；以及(c)该抗体特异地结合至人⑶22上。另外地或可选地，该抗体可具有以下功能特性中的一种或多种特性:(a)以1X10_7M或更少的Kd与人⑶22相结合；(b)内化进入⑶22+细胞；(c)在⑶22+细胞上表现ADCC活性；和/或(d)促进由BCR刺激诱导的Ramos细胞的细胞死亡；和/或(e)当与细胞毒素缀合时抑制体内表达CD22的细胞的生长。在优选的实施方案中，重链可变区CDR2序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNo:5-8、60、66-68，以及它们的保守性修饰；并且轻链可变区CDR2序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNos:19-24,75-77,以及它们的保守性修饰。在另一个优选的实施方案中，重链可变区CDRl序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNo=1-4,63-65,以及它们的保守性修饰；并且轻链可变区⑶Rl序列包括选自以下的氨基酸序列:氨基酸序列SEQIDNo:13-18,72-74,以及它们的保守性修饰。在不同的实施方案中，该抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。如在此所使用的术语“保守性序列修饰”意指不会显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。此类保守性修饰包括氨基酸的置换、添加、以及缺失。通过本领域已知的标准技术(例如定点诱变及PCR介导的诱变)可将修饰引入本公开的抗体中。保守性氨基酸置换是如下的置换，其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换。已经在本领域中定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，具有支链侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)，以及具有芳香侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，在本公开的抗体的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替代，并且使用在此说明的功能测定可以针对保留功能(即，以上给出的功能)检测被改变的抗体。结合至与抗-CD22抗体相同的表位的抗体在另一个实施方案中，本公开提供了下述抗体，所述抗体如本公开的抗-CD22单克隆抗体中的任何抗体所识别的一样结合至人⑶22的相同表位(即，这些抗体有能力与本公开的单克隆抗体中的任何抗体进行交叉竞争而与CD22相结合)。在优选的实施方案中，用于交叉竞争研究的参照抗体可以是单克隆抗体12C5(具有的Vh与'序列分别示于SEQIDNO:31及35)，或单克隆抗体19A3或单克隆抗体⑶22.1或单克隆抗体⑶22.2(具有的Vh与\序列分别示于SEQIDNO:32/61及36)或单克隆抗体16F7(具有的Vh与\序列分别示于SEQIDNO:33及37/38)或单克隆抗体23C6(具有的Vh与\序列分别示于SEQIDNO:34及39/40)，或单克隆抗体4G6(具有的Vh与Vl序列分别示于SEQIDN0:81及84/85)或单克隆抗体21F6(具有的Vh与\序列分别示于SEQIDNO:82/83及86)。根据此类交叉竞争的抗体与12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6及21F6在标准CD22结合测定中进行交叉竞争的能力，能够鉴定此类交叉竞争的抗体。例如，可采用标准ELISA测定，其中将重组的⑶22固定在板上，这些抗体之一被进行荧光标记，并评价未标记抗体与标记抗体竞争结合的能力。额外地或可选地，可以使用BIAcore分析来评价抗体的交叉竞争的能力，如实例3所述(与12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6及21F6的表位定组(epitopegrouping)有关)。例如，测试抗体对12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6与人CD22结合的抑制能力说明测试抗体可以与12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6竞争而结合人CD22,并因此与如12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6所识别的一样结合至人CD22的相同表位。如实例3的详细说明，抗体12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6，每一个结合至⑶22上的不同表位并因此属于不同的表位群(epitopegroup)。在一个优选的实施方案中，结合至12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6上相同表位的抗体是人单克隆抗体。如实施例所述，可以对此类人单克隆抗体进行制备并分离。工程化并修饰的抗体还可以通过下述方式制备本公开的抗体:使用具有一个或多个在此披露的Vh和/或\序列的抗体作为起始材料，工程化修饰的抗体，这种修饰的抗体可以具有与起始抗体不同的特性。可以通过改变一个或两个可变区(即V1^P/或')中的一个或多个残基来对抗体进行工程化改造，例如可以改变一个或多个CDR区和/或一个或多个构架区中的残基。额外地或可选地，可以通过改变恒定区中的残基来对抗体进行工程化改造，例如以改变该抗体的一种或多种效应子功能。在某些实施方式中，可以使用CDR移植以对抗体的可变区进行工程化。抗体和靶抗原主要通过位于六个重链及轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基进行相互作用。因为这一原因，CDR中的氨基酸序列在各个抗体之间比在CDR之外的序列更具有多样性。因为CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，故可以通过构建包含被移植到构架序列(来自具有不同性质的不同抗体)上的来自特定天然存在抗体的CDR序列的表达载体，来表达模拟该特定天然存在抗体的性质的重组抗体(参见例如,Riechmann,L.等人(1998)Nature332:323-327Jones,P.等人(1986)Nature321:522-525；Queen,C.等人(1989)Proc.Natl.Acad.See.U.S.A.86:10029-10033；ffinter的美国专利号5，225，539，以及Queen等人的美国专利号5，530，101;5，585，089;5，693，762及6，180，370)。因此，本公开的另-个实施方案涉及分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，包括包含⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列的重链可变区，该⑶R1、⑶R2、以及⑶R3序列分别包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:1-4及63-65，SEQIDNO:5-8、60、及66-68，以及SEQIDNO:9-12及69-71;并且包括包含CDR1、CDR2、以及CDR3序列的轻链可变区，该CDR1、CDR2、以及⑶R3序列、该⑶R1XDR2、以及⑶R3序列分别包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:13-18及72-74，SEQIDNO:19-24及75-77，以及SEQIDNO:25-30以及78-80。因此，此类抗体含有单克隆抗体12C5、19A3、CD22.1、CD22.2、16F7、23C6、4G6以及21F6的Vh及Vl⑶R序列，但仍有可能含有不同于这些抗体的构架序列。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或已公开的文献获得。例如，人重链及轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库中找到(可在互联网WWW.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase获得)，并且在以下文献中找至丨J:Kabat,E.A.,等人(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationN0.91-3242；Tomlinson,1.M.,等人(1992)"TheRepertoireofHumanGermlineVhSequencesRevealsaboutFiftyGroupsofVhSegmentswithDifferentHypervariableLoops"J.Mol.Biol.227:776-798;以及Cox，J.P.L.等人(1994)"ADirectoryofHumanGerm-lineVhSegmentsRevealsaStrongBiasintheirUsage"Eur.J.1mmunol.24:827-836;这些文献的每一篇内容均明确地通过引用并入本文。作为另一个实例，针对人重链及轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Genbank数据库中找到。例如，在HCo7HuMAb小鼠中发现的以下重链种系序列及其Genbank登录号是可获得的:1-69(NG_0010109、NT_024637及BC070333)，3-33(NG_0010109及NT_024637)、以及3-7(NG_0010109及NT_024637)。作为另一个实例，在HCol2HuMAb小鼠中发现的以下重链种系序列及其Genbank登录号是可获得的:1_69(NG_0010109、NT_024637及BC070333)，5-51(NG_0010109以及NT_024637)，4-34(NG_0010109及NT_024637)，3-30.3(CAJ556644)、以及3-23(AJ406678)。可以使用本领域中众所周知的一种被称为GappedBLAST的序列相似性检索方法(Altschul等人(1997)NucleicAcidsResearch翌:3389-3402),将抗体蛋白质序列与汇编的蛋白质序列数据库进行比较。BLAST是启发式算法，其中抗体序列与数据库序列之间的具有统计学显著的比对有可能包括比对字符的高得分区段对(HSP)。其得分不能通过延伸或修剪加以提高的区段对被称为命中物(hit)。简言之，可翻译VBASE源的核苷酸序列(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbasel/list2.php),并且保留FRl至FR3构架区之间的区域(包括FRl和FR3区)。这些数据库序列具有平均长度98个残基。蛋白全长上完全匹配的重复序列被剔除。蛋白质BLAST检索采用程序blastp、以及缺省标准参数，但关闭低复杂度过滤器并使用BL0SUM62的替代矩阵和用于最高5个命中物的过滤器，从而产生序列匹配。核苷酸序列按全部六种读框翻译，在数据库序列的匹配区段中不具有终止密码子的读框被视为潜在的命中物。这反过来采用BLAST程序tblastx进行确认，该程序按全部六种读框翻译抗体序列，并且将这些翻译物与按全部六种读框动态翻译的VBASE核苷酸序列进行比较。同一性是在抗体序列与蛋白质数据库之间在序列全长上的确切的氨基酸匹配。阳性(positives)(同一性+替代匹配)是不相同的，而是由BL0SUM62替代矩阵所引导的氨基酸替代。如果抗体序列以一样的同一性匹配数据库序列中的两条序列，则具有最大阳性的命中物将被确定为匹配序列命中物。在本公开的抗体中使用的优选构架序列是结构上与由本公开的已选择的抗体所使用的构架序列相似的构架序列，例如与由本公开优选的单克隆抗体所使用的Vh7-4.1(SEQIDNO:51)、VH4-34(SEQIDNO:52)、VH5_51(SEQIDNO:53)、或VH1_69(SEQIDNO:54)构架序列和/或Va2b2(SEQIDNO:55)、VkL6(SEQIDNO:56)、VkA27(SEQIDNO:57)、VkAlO(SEQIDNO:58)、或VkL18(SEQIDNO:93)构架序列。这些VhCDRl、⑶R2、及⑶R3序列，以及Vk⑶RlXDR2、及⑶R3序列可以被移植至多个构架区上，这些构架区具有与从中衍生出该构架序列的种系免疫球蛋白基因中所发现的序列相同的序列，或者这些CDR序列可以被移植至构架区上，这些构架区与这些种系序列相比含有一个或多个突变。例如，已发现在某些情况下对构架区内的残基进行突变有益处，以保持或增强该抗体的抗原结合能力(例如参见，Queen等人的美国专利号5，530，101;5，585，089;5，693，762及6，180，370)。另一种类型的可变区修饰是在V1^P/或'⑶R1XDR2和/或⑶R3区中对氨基酸残基进行突变，由此改善所感兴趣的抗体的一种或多种结合特性(例如亲和力)。可以进行定向诱变或PCR介导的诱变来引入一种或多种突变，并且对抗体结合、或其他所感兴趣的功能特性的作用可以在体内或体外测定中进行评估，正如在此所说明并在实施例中所提供。优选引入保守性修饰(如以上所讨论)。这些突变可能是氨基酸置换、添加或缺失，但优选是置换。此外，通常在CDR区中对不超过一个、两个、三个、四个或五个残基进行改变。因此，在另一实施方案中，本公开提供了分离的抗-CD22单克隆抗体，或它们的抗原结合部分，包括重链可变区，该重链可变区包括:(a)VHCDRl区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:1-4或63-65，或与SEQIDNO:1-4或63-65相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列；(b)VH⑶R2区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:5-8、60或66-68，或SEQIDNO:5_8、60或66-68相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列；(C)VHCDR3区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:9-12或69-71，或与SEQIDNO:9_12或69-71相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列；(d)VfDRl区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:13-18或72-74，或与SEQIDNO:13-18或72-74相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列；(e)\CDR2区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:19-24或75-77，或与SEQIDNO:19-24或75-77相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列；以及(f)\CDR3区，其包含选自以下的氨基酸序列:SEQIDNO:25-30或78-80，或与SEQIDNO:25-30或78-80相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失、或添加的氨基酸序列。本公开的工程化抗体包括以下抗体:其中在Vh和/或'内已经对构架残基进行了修饰，从而例如改进抗体的特性。通常对此类构架进行修饰，以降低抗体的免疫原性。例如，一个方法是将一个或多个构架残基“突变回(backmutate)”相应的种系序列。更具体，已经经历了体细胞突变的抗体可能包含与从中衍生出抗体的种系序列不同的构架残基。此类残基可以通过将该抗体构架序列与从中衍生出该抗体的种系序列进行比较而被鉴定。例如,对于12C5VX区而言,构架区氨基酸第40及68位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下L40Q及R68K置换中的一个或两个置换，这些位置中的一个或两个位置可以被突变回种系序列。此外，对于19A3及CD22.1Vh区而言，构架区氨基酸第27位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下R27G置换，这一位置可以被突变回种系序列。此外，对于⑶22.2VH区而言，构架区氨基酸第27及57位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下R27G及Q57N置换，这一位置可以被突变回种系序列。此外,对于16F7VH区而言,构架区氨基酸第28位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下N28S置换，这一位置可以被突变回种系序列。此外,对于16F7VK.2区而言,构架区氨基酸第85位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下A85T置换，这一位置可以被突变回种系序列。此外，对于23C6VH区而言，构架区氨基酸第14、79及88位(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下T14P、V79A及A88S置换中的一个、两个或全部三个置换,这些位置中的一个、两个或全部三个位置可以被突变回种系序列。此外，对于4G6Vh区而言，构架区氨基酸位置P、D、F、D、T、Y及F(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下PA；DG；NS；FY；DE；TS；YR；FS中的一个、两个、三个、四个、五个、六个或全部七个置换，这一位置可以被突变回种系序列。需输入RE:KABAT编号。此外,对于4G6VK1区而言,构架区氨基酸位置T及D(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下TK及DE置换中的一个或两个置换，这些位置可以被突变回种系序列。此外,对于21F6Vh1区而言,构架区氨基酸位置S及I(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下SP及IV置换，这些位置可以被突变回种系序列。此外，对于21F6VH2区而言，构架区氨基酸位置S及M(使用Kabat编号系统)与种系不同。通过进行以下SP及MV置换，这些位置可以被突变回种系序列。另一种类型的构架修饰涉及在构架区内，或甚至在一个或多个CDR区内，对一个或多个残基进行突变，以去除T细胞表位，由此降低该抗体的潜在的免疫原性。这一方法也被称为“去免疫(deimmunization)”,并且在Carr等人的美国专利公开号2003/0153043中有更详细的说明。除了在构架区或⑶R区内进行的修饰之外，或可选地，还可以对本公开的抗体进行工程化，以在Fe区内包含修饰，通常以改变该抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fe受体结合、和/或抗原依赖的细胞的细胞毒性作用。此外，本公开的抗体可以被化学修饰(例如，可以将一个或多个化学物部分附着至该抗体)或被修饰以改变其糖基化作用，以便再次改变该抗体的一种或多种功能特性。以下对这些实施方案中的每一个均进行另外详细的说明。Fe区中的残基的编号是Kabat的EU索引号。在一个实施方案中，对CHl的铰链区进行修饰，这样使铰链区中的半胱氨酸残基的数目发生变化(例如，增加或减少)。在Bodmer等人的US专利号5，677，425中更说明了这一方法。CHl的铰链区中的半胱氨酸残基的数目发生变化，例如，便于组装轻链及重链或者增大或减小该抗体的稳定性。在另一个实施方案中，对抗体的Fe铰链区进行突变以减小该抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fe铰链片段的CH2-CH3结构域的界面区，这样使相对于天然Fe铰链结构域的葡萄球菌A蛋白(StaphylococcylproteinA,SpA)结合而言，该抗体削弱了SpA的结合。Ward等人的US专利号6，165，745更详细地说明了这一方法。在另一个实施方案中，对该抗体进行修饰以增大其生物半衰期。不同的方法是可能的。例如，如Ward的美国专利号6，277，375所述，引入以下T252L、T254S、T256F突变中的一种或多种突变。可选地，为增大生物半衰期，该抗体可以在CHl或CL区中发生变化以包含从IgG的Fe区的CH2结构域的两个环获得的补救受体(salvagereceptor)结合表位,如Presta等人的美国专利号5，869，046及6，121，022所述。在又其他的实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基来改变Fe区，而改变该抗体的一种或多种效应子功能。例如，选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320及322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基所替换，这样使该抗体对于效应物配体具有已改变的亲和力，但保留该亲本抗体的抗原结合能力。例如，亲和力被改变的效应物配体可以是Fe受体或补体的Cl成分。Winter等人的美国专利号5，624，821和5，648，260更详细说明了这一方法。在另一个实例中，选自氨基酸残基329、331及322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基所替换，这样使该抗体具有已改变的Clq结合和/或降低或已消除的依赖于补体的细胞毒性(OTC)。Idusogie等人的美国专利号6，194，551更详细说明了这一方法。在另一个实例中，改变氨基酸位置231及239中的一个或多个氨基酸，由此改变抗体的固定补体的能力。Bodmer等人的PCT公开文件W094/29351中进一步说明了这一方法。在又一个实例中，为了提高该抗体介导抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)的能力和/或提高该抗体对FeY受体的亲和性，通过在下列位置修饰一个或多个氨基酸，对Fe区进行了修饰:238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。Presta的PCT公开文件W000/42072中进一步详细地说明了这一方法。此外，在人IgGl上已做出针对FeYR1、FcyRII,FcyRIII及FcRn的结合位点的图谱，并描述了具有改善的结合的变体(参见Shields,R.L.等人(2001)J.Biol.Chem.276:6591-6604)。在位置256、290、298、333、334及339处的特定突变显示出改善对FeYRIII的结合。另外，下列组合突变显示出改善FeYRIII的结合:T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A及S298A/E333A/K334A。.在再另一个实施方案中，对抗体的糖基化作用进行了修饰。例如，可以制备去糖基化(aglycoslated)的抗体(即，该抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化作用，以(例如)增加该抗体对抗原的亲和性。例如，通过在该抗体序列中改变一个或多个糖基化的位点可以实现此类糖类修饰。例如，可以进行一个或多个氨基酸的置换，这导致去除一个或多个可变区构架糖基化位点，由此在那个位点处消除糖基化作用。这种去糖基化作用可能提高该抗体对抗原的亲和力。Co等人的美国专利号5，714，350及6，350，861进一步详细地说明了这一方法。下述文献还详细描述了另外多种改变糖基化的方法=Hanai等人的美国专利7，214，775、Presta的美国专利号6，737，056、Presta的美国公开号20070020260、Dickey等人的PCT发明者D·J·金,A·维特,H·N·勒布朗,R·西奥利斯,A·马苏德,M·亚马那卡,K·D·岑斯,S·R·德威金斯,T·斯普劳尔,C·拉奥-纳伊克,D·帕斯莫尔,K·托伊,D·M·塔那马奇申请人:梅达雷克斯公司