专利名称：糖链捕获物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及使用指定糖链捕获物制备样品的方法以及通过所述方法获得的分析样品。本发明涉及糖链捕获物的制备方法、所述方法中使用的化合物、以及通过聚合所述化合物获得的聚合物。此外，本发明还涉及所述糖链捕获物的应用，例如，所述糖链捕获物的应用方法、糖链微阵列(sugar chain microarray)、所述糖链微阵列的应用、糖链亲和珠以及所述糖链亲和珠的应用。
背景技术：
生物聚合物是指一般概念上的糖链、糖蛋白、糖肽、肽、寡肽、蛋白质、核酸或脂质等。
此外，这些生物聚合物在例如医学、细胞工程和器官和医学工程等的生物技术领域中起重要作用。阐明使用这些物质的生物反应的控制机理涉及到生物技术领域的发展。
在这些生物聚合物中，糖链的多样性极为丰富，并且是参与天然存在生物体的多种功能的物质。在很多情况下，糖链在体内作为与蛋白质或脂质等相结合的糖偶联物存在，且是体内重要组分之一。现已确定体内的糖链与细胞间信息的传递和蛋白质功能或相互作用的调控等密切相关。
此外，术语“糖链”是通过糖苷键与单糖(例如，葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、木糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺或唾液酸等)及其衍生物偶联的分子链的通称。
具有糖链的生物聚合物的实例包括植物细胞的细胞壁中对细胞稳定性起作用的蛋白聚糖，影响细胞分化、群增长、粘附或迁移等的糖脂和参与细胞内相互作用或细胞识别的糖蛋白等。包含在这些生物聚合物中的糖链在控制高精度生物反应中的机理，及其与生物聚合物间功能上的相互辅助、放大、调节或妨碍的机理已逐渐明确。此外，在这些糖链与细胞分化、群增长、细胞粘附、免疫性和细胞中的恶性变化(癌化)的关系逐渐明确的情况下，预期新的研发计划能够通过这些糖链工程与医学科学、细胞工程或组织和医学工程间的密切关系得到部署。
在专利文件I中， 公开了能够与此类糖链发生特异性反应的物质，以及使用所述物质分离糖链的方法。专利文件1:国际公布小册第2004/058687号
发明内容
此外，在专利文件I中描述了采用三氟乙酸或酸性树脂等通过酸处理从糖链捕获物中释放(切割)利用糖链捕
获物捕获的糖链的方法。将糖链暴露在如此苛刻的条件下会导致糖链的降解，例如导致生物样品中糖链末端结合的唾液酸残基的分离，其易于在酸性条件下发生分离。因此，要求在更温和的条件下切割糖链。此外，在很多情况下，待与糖链结合的唾液酸的存在以及结合位点与疾病相关，因此要求在唾液酸的理想状态下分析糖链。即使在分析前的预处理步骤中仅部分唾液酸发生分离，也不能获得糖链的正确信息。
因而，本发明提供了制备样品的方法以及通过此方法获得的分析样品，所述方法能够通过简单的操作从包含糖链和/或糖衍生物的生物样品中分离和纯化糖链和/或糖衍生物以获得分析样品。此外，本发明还提供上述样品制备方法中所用的糖链捕获物的制备方法、可用于所述制备方法的单体、以及通过聚合此单体获得的聚合物。此外，本发明提供了上述样品制备方法的应用。
本发明提供了:
(O样品的制备方法，其中通过在物质A的酰肼基团(hydrazide group)与糖链和/或糖衍生物的还原末端之间形成腙，使包含酰肼基团的物质A与糖链和/或糖衍生物相结合；
(2)如(I)所述的样品的制备方法，其中物质A包括含有发色团或荧光团的部分；
(3)如(I)所述的样品的制备方法，其中物质A选自以下物质或其盐:
(物质A):5_ 二甲基氨基萘-1-磺酰肼(丹磺酰肼，Dansylhydrazine) ；2~肼基批唆(2-hydrazinopyridine) ;9_ 荷甲氧羰基月井(Fmoc-月井，Fmoc-hydrazine)；节肼(benzylhydrazine) ；4, 4_ 二氟 _5，7_ 二甲基 _4_ 硼 _3a, 4a- 二氮杂-s_ 却 _3_ 丙酉先餅(4,4-difluoro-5, 7-dimethy1-4-bora-3a, 4a-diaza-s-1ndacene-3-propionicacid, hydrazide) ;2_(6, 8_ 二氣 ~7~ 轻基 ~4~ 甲基香 素)乙酸月井(2~ (6, 8-dif luoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin) acetohydrazide) ;7_二乙氨基香豆素 _3_ 甲酸餅(7-diethylaminocoumarin-3-carboxylic acid, hydrazide, DCCH);苯月井(phenylhydrazine) ;1-蔡乙酸餅(1-naphthaleneacethydrazide) ;2_ 餅基苯甲酸(2_hydrazinobenzoic acid);生物素酸餅(biotin hydrazide);和苯乙酸月井(phenylacetic hydrazide)；
(4 )如(I)所述的样品的制备方法，其中物质A包含由精氨酸残基、色氨酸残基、苯丙氨酸残基、酪氨酸残基、半胱氨酸残基及其衍生物中的至少之一组成的部分；
(5 )如(4 )所述的样品的制备方法，其中物质A是具有下式(I)结构的化合物，
[化学式I]
(式I)
权利要求
1.样品的制备方法，其中通过物质A的酰肼基团与糖链和/或糖衍生物的还原末端之间形成腙使包含酰肼基团的物质A与糖链和/或糖衍生物相结合。
2.如权利要求1所述的制备方法，其中所述物质A包含带有发色团或荧光团的部分。
3.如权利要求1所述的制备方法，其中所述物质A选自以下物质或其盐: (物质A):5_ 二甲基氨基萘-1-磺酰肼(丹磺酰肼)；2_肼基吡啶；9_芴甲氧羰基肼(Fmoc-肼)；苄肼；4，4- 二氟-5，7- 二甲基-4-硼_3a，4a_ 二氮杂-s_茚-3-丙酰肼；2-(6, 8- 二氟-7-羟基-4-甲基香豆素)乙酰肼；7_ 二乙氨基香豆素-3-甲酰肼(DCCH)；苯肼；1_萘乙酰肼；2_肼基苯甲酸；生物素酰肼；和苯乙酰肼。
4.如权利要求1所述的制备方法，其中所述物质A包含由精氨酸残基、色氨酸残基、苯丙氨酸残基、酪氨酸残基、半胱氨酸残基及其衍生物中的至少之一组成的部分。
5.如权利要求4所述的制备方法，其中所述物质A是具有式(I)结构的化合物， [化学式I] (式I)
6.如权利要求1所述的制备方法，其中所述物质A具有式(2)所示的结构， [化学式2] (式2)
7.如权利要求1所述的制备方法，其中所述物质A由式(3)表示， [化学式3] (式3) (载体)-R-NHNH2 其中，在上式中，所述载体表示聚合物基体#表示具有I 20个碳原子的烃链，在所述烃链中可插入-O-、-S-、-NH-, -CO-或-CONH-。
8.如权利要求7所述的制备方法，其中物质A具有式(4)所示的交联聚合物结构， [化学式4] (式4)
9.如权利要求7所述的制备方法，其中物质A具有式(5)所示的交联聚合物结构， [化学式5] (式5)
10.如权利要求7 9中任一项所述的制备方法，其中所述物质A是平均粒径等于或大于0.1 μ m且等于或 小于500 μ m的聚合物颗粒。
全文摘要
本发明提供了样品的制备方法，其特征是通过在物质A的酰肼基团与糖链和/或糖衍生物的还原末端之间形成腙，使包含酰肼基团的物质A与糖链和/或糖衍生物相结合，从而通过简单的操作从包含糖链和/或糖衍生物的生物样品中分离和纯化糖链和/或糖衍生物以获得分析样品。
文档编号C07C281/02GK103217523SQ20131012740
公开日2013年7月24日 申请日期2007年8月6日 优先权日2006年8月9日
发明者岛冈秀行, 西村绅一郎, 篠原康郎, 三浦嘉晃, 古川润一 申请人:住友电木株式会社, 国立大学法人北海道大学