用于治疗神经炎症性疾病的因子xii抑制剂的制作方法

用于治疗神经炎症性疾病的因子xii抑制剂的制作方法
【专利摘要】本申请涉及神经炎症性疾病例如多发性硬化以及施用因子XII抑制剂以预防、治疗或另外地改善神经炎症性疾病例如多发性硬化的方法。还提供了抑制FXII的活性试剂和包含所述试剂的药物组合物。
【专利说明】用于治疗神经炎症性疾病的因子Xl I抑制剂
[0001]本申请涉及神经炎症性疾病例如多发性硬化，以及施用因子XII抑制剂以预防、治疗或另外地改善神经炎症性疾病例如多发性硬化的效应的方法。还提供了抑制FXII活性的试剂和包含所述试剂的药物组合物。
[0002]多发性硬化(MS)是一系列神经炎症性疾病的部分，所述神经炎症性疾病包括免疫细胞的浸润、脱髓鞘作用和轴突/神经元损伤作为它们的病理学的部分。世界卫生组织(ICD-9-CM诊断代码340)将MS描述为慢性疾病，其特征在于中枢神经系统中存在许多脱髓鞘区域，具有症状例如虚弱、动作失调、感觉错乱(paresthesis)和言语错乱。MS和其它与其相似的疾病由其中炎症细胞侵入神经系统，从而导致脱髓鞘和组织破坏的自身免疫攻击引起。(Morales 等人，Adv Neurol 2006 ;98:27-45 ;Frohman 等人，N Engl J Med 2006 ；354:942-55)。组织病理学结论是具有细胞浸润(T细胞、B细胞、巨噬细胞)的MS斑，其最终据信引起少突神经胶质细胞和轴突损伤。随着破坏性过程进展，脱髓鞘导致认知功能受损。(Ragonese 等人，Eur J Neurol 2008 ; 15:123-7 ;Bergamaschi 等人，Neuroepidem1logy2005 ；25:15-18)。
[0003]脱髓鞘是形成围绕神经轴突的绝缘层的髓鞘的丢失。取决于解剖学位置，髓磷脂由不同的细胞类型产生。少突神经胶质细胞形成中枢神经系统(CNS)的轴突的髓鞘，而施旺细胞形成周围轴突的髓鞘。髓磷脂由数种蛋白质和脂质组成，包括髓磷脂碱蛋白(MBP)、髓磷脂少突神经胶质细胞糖蛋白(MOG)、蛋白脂质蛋白(PLP)、半乳糖脑苷脂(GalC)和鞘磷脂。
[0004]脱髓鞘疾病的体征和症状取决于脱髓鞘的位置而变化。一些常见体征和症状包括视觉问题(复视、眼球震颤或视力丧失)、麻刺感或麻痹(感觉异常)、说话障碍、记忆丧失、热敏感性、肌肉痉挛、肌无力和协调或平衡的丧失。
[0005]名称“多发性硬化”是指在脑中和脊髓中在其中髓磷脂丧失的区域中形成的多个疤痕(“硬化”)或损伤。MS的疾病模式可变化。根据美国全国多发性硬化症学会，存在4个标准化亚型:(I)复发缓解型(relapsing remitting), (2)继发进行型(secondaryprogressive), (3)原发性进行型(primary progressive)和(4)进展复发型(progressiverelapsing)。复发缓解型是最常见的最初病程，特征在于间隔以可持续数月至数年的缓解期的发作，在所述缓解期不存在疾病的新体征。继发进行型疾病，如名称所暗示的，开始作为复发缓解型MS，但明确的缓解期最终消失。原发性进行性亚型描述了其中在初始发作后从未存在有意义的缓解的疾病。在进展复发型疾病中，从发作开始存在稳定的神经衰落，但此外还存在迭合发作。
[0006]多发性硬化可使用McDonald标准2010修正版来诊断,所述诊断依赖于结合临床表现的磁共振成像(MRI)。(Polman等人，Ann Neurol 2011;69:292-302.)。通常地，呈现2或更多次发作或具有两个或更多个客观临床病变的患者被认为患有MS而无需另外的临床证据。在具有更少的发作或更少的可证据的病变的患者中，诊断基于临床或临床和诊断(MRI)发现显示的病变在空间和/或时间上的扩散的客观证据。
[0007] MS的病因学还不清楚，但通常接受其为其中身体的免疫系统破坏CNS中的髓磷脂的自身免疫疾病° (Internat1nal Multiple Sclerosis Genetics Consortium ；ffellcomeTrust Case Control Consortium 2, Nature 2011;476:214-9.)。免疫细胞浸润入 CNS 的先决条件是通常保护CNS免受浸润的血脑屏障的破坏。该过程导致CNS炎症，其为MS的第二病理学标志。与许多自身免疫疾病一样，MS在妇女中比在男性中更常见，影响大致每100，000人中的3个人。(Alonso, 2008.) 0除了 MS以外，还存在其它脱髓鞘炎症性疾病。例如，其中枢神经系统的其它脱髓鞘炎症性疾病包括特发性炎症性脱髓鞘疾病、横贯性脊髓炎和视神经脊髓炎(Devic’s病)。炎症性脱髓鞘还可在周围神经系统中发生:实例包括格-巴二氏综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、米勒.费希尔综合征和抗-MAG周围神经病。
[0008]用于MS的目前治疗基于疾病的自身免疫性质并且至少部分地基于使用实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)动物模型的实验来进行开发。(StUve等人，Arch Neurol.2010 ；67:1307-15.)。由FDA于2010批准用于治疗MS的复发型的芬戈莫德是通过隔离淋巴细胞、据认为参与介导髓磷脂的破坏的免疫细胞起作用的磷脂。(GILENYA (芬戈莫德)，处方信息，07/2011版)。芬戈莫德于2010年在欧洲也接受用于治疗慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病的孤儿药候选药物认证(orphan drug designat1n) (EU/3/09/718)。用于MS的老年人治疗包括干扰素β-1a和干扰素β-1b以及格拉默醋酸盐，其为免疫调节剂。(Herrmann等人，Am.J.Pathol.2010 ; 177:3051-60 ； Stuve 等人,Arch Neurol.2010 ;67:1307-15.)。那他珠单抗(抗整联蛋白α 4的人源化单克隆抗体)于2004年被批准用于治疗具有MS的复发型的患者。(TYSABRI (那他珠单抗)处方信息，08/2011版)。其通常用作二线治疗，因为其使用与增加的发生威胁生命的病毒感染的风险相关(PML，进行性多病灶脑白质病)。那他珠单抗阻断白细胞对某些参与细胞从血液至组织内的通过的细胞粘附分子的结合。因此，那他珠单抗被认为通过阻止免疫细胞至CNS内的通过，从而阻止髓磷脂的进一步破坏起作用。米托蒽醌是阻断DNA合成的试剂，因此可减弱淋巴细胞增殖的能力。
[0009]虽然目前批准的疗法的每一种疗法在至少减少MS的复发型的发作的次数上显示一定的效果，但它们的效果有限，并且在许多情况下与显著的副作用相关，从而使得长期治疗不现实。因此，存在对另外疗法的远未满足的生物医学需要。
[0010]因子XII (FXII)是参与内源性凝血级联的活化的丝氨酸蛋白酶。其在1955年被鉴定为通过与多聚阴离子接触而被激活(接触激活)的凝血因子。在体内这些表面包括由活化血小板分泌的无机多磷酸(PolyP) (Muller等人，2010)、内皮细胞表面(qClqR)、细胞角蛋白1、尿激酶-纤溶酶原激活物(u-PAR，CD87)、关节软骨、皮肤、脂肪酸、内毒素、蛋白聚糖(硫酸肝素、硫酸软骨素E、肥大细胞肝素)和淀粉样蛋白。(Schmaier，2008.)。在FXII已被激活以形成FXIIa后，存在其中FXIIa激活循环FXII的正反馈反应。多种FXII抑制(从小分子变化至蛋白质)是可获得的。虽然FXII是内源性途径中起始因子，但因子XII缺乏不促成出血，因为外源性(组织因子)途径是血块形成的主要途径。
[0011]尽管其在内源性途径中作用得以公认，但因子XII的生理作用仍然不清楚。(Schmaier, J.Clin.1nvest.2008 ；118:3006-9 ；Stavrou &Schmaier, Thromb.Res.2010.)。FXII通过缓激肽的形成(通过激肽-激肽释放酶系统)参与炎症过程。缓激肽造成发红、热、肿胀和疼痛的典型炎症参数，这通过内皮细胞的活化(以增加血管通透性)、一氧化氮的产生)和花生四烯酸的动员，以及通过刺激感觉神经末稍引起。其还参与缺血的病理性血栓形成。(Kleinschnitz 等人，J.Exp.Med.2006 ;203:513-8.)。FXII 的另一个作用在于中性粒细胞的趋化作用、聚集和脱粒。(Wachtfogel等人，1986.)。其还可增强促炎细胞因子IL-1的单核细胞产生，以及参与补体系统。
[0012]某些实施方案的概述
[0013]因此，FXII参与多个复杂途径，但仍然不清楚FXII在体内对于这些途径中的任何途径是否是必需的。例如，缺乏FXII的人即使在大手术过程中也不遭受异常出血素质。(Schmaier, J.Clin.1nvest.2008 ; 118:3006-9.)。此外，虽然 FXII 可参与纤维蛋白沉积，已报道其在MS中被激活(Marik等人Brain 2007 ; 130:2800-15)，和参与也可促成MS的缓激肽的激活(Gliibel等人J.Autoimmunity 2011 ;36:106-14),但不清楚其是引起这些效应的FXII依赖性途径还是共有相同的最终结果(例如通过外源性凝血途径产生的血纤蛋白沉积)的另一个途径。因此，目前缺乏FXII在MS的任何病理特性中的作用的直接证据。
[0014]虽然因子XII (FXII)在炎症性脱髓鞘中的作用目前未被承认，但本申请的实施方案提供FXII的抑制剂以预防、治疗或改善多发性硬化和炎症性脱髓鞘的其它形式。本申请提供了施用因子XII抑制剂以预防、治疗或另外地改善神经炎症性疾病包括多发性硬化的效应的方法。“FXII抑制剂”是指因子XII和活化因子XII (FXIIa)的任一种或两种的抑制剂。
[0015]因此，在一个方面，本发明提供了预防、治疗或改善神经炎症性疾病的方法，包括给有些需要的受试者施用治疗有效量的因子XII (FXII)抑制剂，从而预防、治疗或改善神经炎症性疾病。
[0016]在另一个方面，本发明提供了因子XII的抑制剂以用于预防、治疗或改善神经炎症性疾病，包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的因子XII (FXII)抑制剂。
[0017]在另一个方面，本发明提供了因子XII抑制剂用于预防、治疗或改善神经炎症性疾病的用途，包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的因子XII (FXII)抑制剂。
[0018]在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包括野生型infestin-4多肽序列(SEQ ID NO:2)或其变体，其中所述变体包含:(a) SEQ ID N0:2的N末端氨基酸2-13 ;和N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型infestin-4序列的差异；和/或(b)6个保守半胱氨酸残基；和与野生型infestin-4序列至少70%的同源性。
[0019]在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包括SPINK-1 (SEQ IDNO: 3)，其被突变来包括SEQ ID NO: 2的N末端氨基酸2-13，或突变的SPINK-1的变体，其中变体包含(a) SEQ ID NO: 2的N末端氨基酸2_13 ;和N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生SPINK-1序列的差异和增加变体与野生型infestin-4序列的同源性；和/或(b) 6个保守半胱氨酸残基；和与野生型SPINK-1序列至少70%的同源性。
[0020]在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包括SPINK-1或SPINK-1突变体 K1、K2 或 K3(分别地 SEQ ID N0S: 3、4、5 或 6)。
[0021] 在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包括H-D-Pro-Phe-Arg-氯甲基酮(PCK)、AT II1、血管紧张素转化酶抑制剂、Cl抑制剂、抑肽酶、α-1蛋白酶抑制剂、抗蛋白酶素([(S)-1-羧基-2-苯乙基]-氨甲酰基-L-Arg-L-Val-Arginal)、Z-Pro_Pro-乙醛-二甲基醋酸酯、DX88、亮抑酶肽、脯氨酰寡肽酶的抑制剂例如Fmoc-Ala-Pyr-CN、玉米-胰蛋白酶抑制剂、牛胰蛋白酶抑制剂的突变体、ecotin、YAP(yellowfin sole anticoagulant protein,黄盖蝶抗凝蛋白)、笑瓜(Cucurbitamaxima)胰蛋白酶抑制剂-V或笑瓜同效抑制剂。
[0022]在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包含抗-FXII抗体或其抗原结合片段，其中抗体结合FXII并抑制其活性和/或激活。
[0023]在其中FXII抑制剂是抗体或其抗原结合片段的那些实施方案中，抗-FXII抗体或其抗原结合片段可包含(a)包含SEQ ID N0:9中所示的重链CDR1、SEQ ID N0:11中所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 13中所示的重链CDR3的VH区；和/或(b)包含SEQ ID NO: 14中所示的轻链⑶Rl、SEQ ID NO: 15中所示的轻链⑶R2和SEQ ID NO: 17中所示的轻链⑶R3的VL区。在这些实施方案中的一些实施方案中，抗-FXII抗体或其抗体或其抗原结合片段包含(a)包含SEQ ID NO:9中所示的重链CDRl、SEQ ID NO: 10中所示的重链CDR2和SEQID NO: 12中所示的重链CDR3的VH区；和/或(b)包含SEQ ID NO: 14中所示的轻链CDR1、SEQ ID NO: 15中所示的轻链CDR2和SEQ ID NO: 16中所示的轻链CDR3的VL区。在某些实施方案中，抗-FXII抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:7的VH区和包含SEQ IDNO:8的VL区。在牵涉抗体的任何实施方案中，抗-FXII抗体可以是IgG。在任何实施方案中，当以1:0.2的FXIIa-α对抗体的摩尔比使用时，抗-因子XII/XIIa单克隆抗体或其抗原结合片段可抑制人因子XIIa-α超过50%。
[0024]在本发明的任何方面的各种实施方案中，可将FXII抑制剂连接于半衰期增强多肽，所述多肽为白蛋白、维生素E结合蛋白(afamin)、α _甲胎蛋白、维生素D结合蛋白、人白蛋白或其变体、免疫球蛋白或其变体、PEG或其变体或IgG的Fe。在这些实施方案的一些实施方案中，半衰期增强肽通过接头连接于FXII抑制剂。在牵涉接头的实施方案的一些实施方案中，接头可以是(a )可切割的；(b)可被内源性、外源性或共同凝血途径的凝血蛋白酶切割；和/或(C)可被因子XIIa切割。
[0025]在本发明的任何方面的各种实施方案中，FXII抑制剂可包括人白蛋白-接头-FXII融合蛋白。
[0026]在本发明的任何方面的各种实施方案中，神经炎症性疾病可以是多发性硬化(MS)。在那些牵涉MS的实施方案的一些实施方案中，MS可以是复发缓解型多发性硬化。在其它牵涉MS的其他方案中，MS可以是原发性进行型多发性硬化。
[0027]在本发明的任何方面的各种实施方案中，神经炎症性疾病可以是横贯性脊髓炎。
[0028]在本发明的任何方面的各种实施方案中，神经炎症性疾病可以是视神经脊髓炎(Devic，s 病)。
[0029]本申请中的实施方案的其它目的和有利方面部分地出现于下列说明中并且根据说明书将部分地很明了，或它们可在实践中习得。实施方案的目的和有利方面本身将通过在所附权利要求中特别指出的元素和组合来表现出来。
[0030]附图概述
[0031]图1显示infestin的氨基酸序列(SEQ ID NO:1) ?
[0032]图 2 比较 infestin-4 (SEQ ID NO: 2), SPINK-1 (SEQ ID NO:3)和 3 个 SPINK-1 变体(Kl (SEQ ID N0:4)、K2(SEQ ID NO:5)和 K3 (SEQ ID NO:6))的氨基酸序列。*表示相同的氨酸酸，I表示相对于Infestin-4序列相似的氨基酸。infestin-4的加以下划线的序列用于替代SPINK-1的15个氨基酸以产生K1。变体K2和K3通过Kl序列上的另外的点突变(加以下划线的氨基酸)产生。
[0033]图3显示了人白蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO: 19)。
[0034]图4A-D描述了作为时间的函数的小鼠的EAE分数。图4A显示与对照小鼠(Con)相比较的FXI I+小鼠。图4B显示与对照小鼠(Con)相比较的FXI+小鼠。图4C和4D显示相较于始于免疫当天(图4C)或始于第12天(图4D)的对照利用FXII抑制剂PCK处理的小鼠的分数。
[0035]图5A-5E概述了组织学和体外功能数据。图5A描述了炎性病灶的数目，图5B脱髓鞘区域/切片，和图5C对照小鼠(左条块)、PCK处理小鼠(中间条块)和FXII+小鼠(右边条块)的轴突计数。对于每一个条线图显示了对照(Con)与PCK处理小鼠之间的组织学比较的实例。图5D显示脾细胞响应CD3/CD28或MOG刺激的增殖。图5E概述了来自对照小鼠(左条块)、PCK处理小鼠(中间条块)和FXII+小鼠(右条块)的脾细胞的细胞因子分泌。
[0036]图6A显示利用FXII抑制剂、rHA-1nfestin-4处理的小鼠的作为时间的函数的EAE分数。图6B比较对照(左条块)小鼠与rHA-1nfestin-4-处理(右图)小鼠的细胞因子IL-17的水平。
[0037]图7显示利用抗-因子XII抗体(实心菱形)或利用同种型对照抗体(空心方块)处理的小鼠的作为时间的函数的瘫痪分数。
[0038]图8显示抗-FXII处理小鼠和对照小鼠的血液中的细胞因子GM_CSF、IFN Y、TNF α和IL-1 β的细胞因子水平。
[0039]详述
[0040]本申请的实施方案涉及包括给患者施用至少一种因子XII (FXII)抑制剂来预防、治疗或另外地改善神经炎症性疾病的影响的方法。
[0041]本申请的实施方案的一个有利方面是FXII抑制剂相较于其它药物具有改善的安全特征，因为它们预期被良好地耐受。此外，由于FXII参与若干生理学级联，因此，其的一种或多种可牵涉炎症性脱髓鞘疾病例如MS，FXII抑制剂相较于单靶疗法可具有更好的功效特征。
[0042]1.炎症性脱髓鞘疾病
[0043]一个方面本发明涉及预防、治疗或另外地改善炎症性脱髓鞘疾病的影响的方法，包括给有此需要的受试者施用至少一种因子XII (FXII)抑制剂，从而预防、治疗或改善神经炎症性疾病的影响。因此，本发明还提供了用于预防、治疗或改善炎症性脱髓鞘疾病的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0044] 如本文中所用，术语“治疗”和“医治”不需要症状的完全消除，这些术语不等同于“治愈”或“愈合”。相反地，“治疗”和“医治”意指疾病的至少一个体征或症状已被减轻、抑制、减弱或延迟。在一些实施方案中，体征或症状是下文中描述的主要或次要终点的一个或多个。在某些实施方案中，“治疗”或“医治”还可包括改善疾病的影响。然而，一般而言，“改善影响”意指反映患者功能的病损的疾病的一些方面得到改善。可使用疾病的确立标准，包括使用多发性硬化(MS)的Kurtzke扩展残疾状态评分(EDSS) (KurtzkeJF, Neuroepidem1l.2008 ；31:1-9)来进行功能性评估,如下文中描述的。如此处所用，“预防”意指给已知处于发生炎症性脱髓鞘疾病的风险中或处于缓解和随后复发的那些疾病中的受试者施用疗法，“预防”可意指抑制处于缓解中的患者的复发。如下文中针对MS指出的，“预防”还意指满足一些但非全部MS诊断标准但不进展至完全满足诊断标准的明显的疾病的患者。
[0045]术语“神经炎症性疾病”和“炎症性脱髓鞘疾病”基本上可互换地用于指人患者或动物的在脑或脊髓的一个或多个区域存在炎症的病况。然而，术语不完全等同，本领域技术人员应理解，神经炎症性疾病不一定需要脱髓鞘，尽管脱髓鞘通常发展下列炎症。多发性硬化是人的炎症性脱髓鞘疾病的一个实例。在多种动物包括小鼠、大鼠和猴中，炎症性脱髓鞘可通过几个不同的免疫策略来实验地诱发，所述免疫策略是公知的并且被接受为人疾病的模型。(Reviewed in Krishnamoorthy & ffekerle, Eur.J.Tmmunol 2009;39:2031-35.)。两个不同的免疫策略示于实施例中。所得的诱发的疾病实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是炎症性脱髓鞘疾病的另一个实例，虽然是实验性疾病和相应地被限制于非人受试者。
[0046]在一些实施方案中，炎症性脱髓鞘疾病是中枢神经系统(CNS)的疾病。示例性疾病包括但不限于多发性硬化、特发性炎症性脱髓鞘疾病、横贯性脊髓炎和视神经脊髓炎(Devic，s 病)。
[0047]在一些实施方案中，炎症性脱髓鞘疾病是周围神经系统的疾病。示例性疾病包括但不限于格-巴二氏综合征，慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、米勒.费希尔综合征和抗-MAG周围神经病。
[0048]在某些实施方案中，本发明提供了预防、治疗或改善多发性硬化的影响的方法，包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的至少一种因子XII抑制剂，从而预防或治疗多发性硬化或改善多发性硬化的影响。因此，本发明还提供了用于预防或治疗多发性硬化，或用于改善多发性硬化的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0049]在那些牵涉多发性硬化的实施方案中，具有MS的受试者可使用“McDonald标准”来诊断，这依赖于与临床表面结合的磁共振成像(MRI)。(Polman等人，Ann Neurol 2011 ；69:292-302.)。一般而言，呈现两次或更多次发作或具有两个或更多个客观临床病变的患者被认为患有MS而无需另外的临床证据。在具有更少发作或更少可表明的病变的患者中，诊断基于通过临床或临床和诊断(MRI)发现显示的病变在空间和/或时间上的扩散的客观证据。病变在空间上的扩散的临床证据通过中枢神经系统的下列区域的4个中的至少2个中的一个或多个T2病变来证明:脑室旁、近皮质、幕下或脊髓。病变在时间上的扩散通过根据跟进MRI的新的T2和/或钆增强病变或无症状钆增强和非增强病变随时的同时存在来证明。原发性进行型MS在具有一年的疾病进展(包括可追溯的)加上两个或多个如下方面的受试者中得到诊断:A)基于脑中的至少一个MS的特征区域(脑室旁，近皮质或幕下)中的一个或多个T2病变的空间上的扩散的症状，或B)基于超过2个T2病变的脊髓中的空间上的扩散的证据，和C)寡克隆带(oligoclonal band)和/或升高的IgG指数在脑脊髓液中的存在。(Polman 等人，Ann Neurol 2011;69:292-302.)。
[0050]在一些实施方案中，患者具有或已具有至少一个临床发作或至少一个客观临床病变，但从未呈现足够数目的临床发作和客观临床病变来使用McDonald标准确立多发性硬化的诊断。这样的患者是“处于发生多发性硬化的风险”中的患者，并且给“处于发生MS的风险中”的患者施用FXII抑制剂可用于在受试者不进展至可在McDonald标准下作出MS的诊断的点的意义上预防MS。因此，在一个实施方案中，提供了预防多发性硬化的方法，包括给处于发生多发性硬化的风险中的受试者施用至少一种FXII抑制剂，从而预防多发性硬化。同样地，本发明还提供了用于预防处于发生多发性硬化的风险中的受试者的多发性硬化的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0051]在那些牵涉已被诊断患有多发性硬化的受试者的实施方案中，可基于疾病过程将受试者分类成具有(I)复发缓解型、(2)继发进行型，(3)原发性进行型和(4)进展复发型MS的患者。
[0052]因此，本发明在某些实施方案中提供了预防、治疗或改善多发性硬化的影响的方法，包括给诊断为患有复发缓解型MS的患者施用治疗有效量的至少一种因子XII抑制剂，从而预防或治疗复发缓解型MS或改善复发缓解型MS的影响。此外，本发明还提供了用于t预防、治疗或改善复发缓解型多发性硬化的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0053]在另外的实施方案中，本发明提供了用于预防、治疗或改善多发性硬化的影响的方法，包括给被诊断为患有继发进行型MS的患者施用治疗有效量的至少一种因子XII抑制剂，从而预防或治疗继发进行型MS或改善继发进行型MS的影响。此外，本发明提供了用于预防、治疗或改善继发进行型多发性硬化的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0054]在其它实施方案中，本发明提供了预防、治疗或改善多发性硬化的影响的方法，包括给经诊断患有原发性进行型MS的患者施用治疗有效量的至少一种因子XII抑制剂，从而预防或治疗原发性进行型MS或改善原发性进行型MS的影响。此外，本发明还提供了用于预防、治疗或改善原发性进行型多发性硬化的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0055] 在其它实施方案中，本发明提供了预防、治疗或改善多发性硬化的影响的方法，包括给经诊断患有进展复发型MS的患者施用治疗有效量的至少一种因子XII抑制剂，从而预防或治疗进展复发型MS或改善进展复发型MS的影响。此外，本发明还提供了用于预防、治疗或改善进展复发型多发性硬化的影响的包含因子XII抑制剂和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
[0056]改善任何类型的MS的影响或治疗所述MS的一个实例是受试者的残疾状态的减少或至残疾进展的时间的增加。残疾状态可使用Kurtzke扩展残疾状态评分(EDSS).(Kurtzke JF, Neuroepidem1l 2008 ；31:1-9.)来评价(或打分)。例如，如果抑制剂减少至“残疾的持续增加”(被定义为持续12周的从基线EDSS ^ 1.0开始的EDSS的至少I点的增加，或持续12周的从基线EDSS = O开始的EDSS的至少1.5点的增加)的发作的时间，则其减少残疾评分。改善任何类型的MS的影响或治疗所述MS的其它实例可通过MRI测量:例如，在确定的时期例如12、24、36或48月中新的或新近扩大的T2高强度病变的中位数的减少；或在确定的时期例如12、24、36或48月中Tl钆增强病变数目的减少。
[0057]一般地，可用于显示根据本发明的FXII抑制剂正在治疗MS或改善MS的影响的标准包括下列结果(单独地或以任何亚组合地):对比增强MRI病变的数目的程度的减小；残疾持续累积风险(Sustained Accumulat1n of Disability) (SAD)等级的降低；复发发生的减少；至复发的时间的增加；在初始治疗后例如1、2、3或更多年无复发的患者的比例的升高；根据脑扫描的脑萎缩速率的减小；MRI T2病变体积的减小；脑脊髓液(“CSF”)骨桥蛋白水平的改变；扩展残疾状态评分(EDSS)的改善；定时25英尺走(T25FW)测试的改善；多发性硬化损害评分(MSIS)的改善；多发性硬化功能复合短表36健康调查(Funct1nalComposite Short Form 36Health Survey) (SF36)的改善；脑脊髓液中神经丝重链的水平的改善；脑脊髓液中髓磷脂碱蛋白水平的改善；标准化脑体积(NBV)、灰质体积(GMV)和/或白质体积(WMV)的改善；全脑、病变、表现正常的灰质(NAGM)或表现正常的白质(NAWM)的磁化传递率(MTR)的改善；病变中的FA和ADC、GM和NAWM中的扩散转移成像(DTI)的改善；CSF细胞计数的改善；IgG-指数的改善；CSF氧化氮代谢物的改善；CSF血清白蛋白浓度商的改善；CSF CXCL13水平的改善；基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的改善；新的钆增强病变(GdEL)的减少；根据T2加权MRI像的病变体积的减小，根据T2加权MRI像的新的病变或扩大病变的数目的减少；这些标准的任意组合；或这些标准的任意亚组合。对于所述标准中的任何标准，可相对于治疗开始时的时间判断标准。
[0058]在那些牵涉复发型MS的实施方案中，根据本发明的FXII抑制剂也治疗或改善MS,如果其减小年复发率或增加保持无复发一段确定的时期(例如6个月、12个月、18个月、24个月、36个月、48个月或60个月(或其间的任何时间))的患者的百分数的话。
[0059]EAE模型可用于确定特定FXII抑制剂是否预防、治疗或改善多发性硬化。EAE模型是被接受的MS动物模型，并且已用于开发由FDA批准用于治疗多发性硬化的药物。(E.g., Stiive 等人,Arch.Neurol.2010 ；67:1307-15 ；Yednock 等人,Nature 1992.)。因此，如果特定FXII抑制剂在一个或多个EAE模型例如实施例中描述的那些模型中显示活性，则本领域技术人员可预期FXII抑制剂也在多发性硬化的影响的预防、治疗或改善中显示活性。然而，值得指出的是，EAE模型中的失活不排除在多发性硬化中的活性。例如，一个早期的MS治疗干扰素β在 EAE模型中不是非常有效。(StUve等人，Arch.Neurol.2010 ；67:1307-15.)。
[0060]I1.FXII 抑制剂
[0061]术语“因子XII”和“FXII”各自指因子XII和活化的因子XII (FXIIa)的任一个或两者。因此，“FXII抑制剂”包括FXII和FXIIa的任一个或两者的抑制剂。此外，抗-FXII抗体包括结合FXII和FXIIa的任一个或两者并抑制其的抗体。术语“FXII抑制剂”还意指包括连接于半衰期延长多肽的FXII的抑制剂，其在一些实施方案中包括接头。
[0062]在一些实施方案中，FXII抑制剂是FXII的直接抑制剂。术语“直接”抑制剂意指通过与FXII (或FXIIa)接触(例如，结合)起作用的抑制剂。相反地，间接抑制剂可在无需接触FXII (或FXIIa)蛋白的情况下起作用；例如，反义RNA可用于减少FXII基因的表达，但其不直接与FXII蛋白相互作用。因此，间接抑制剂，与直接抑制剂相反，在FXII蛋白的上游或下游起作用。直接抑制剂的一些实例示于下文中。FXII抑制剂通常是非内源性抑制剂；即，它们不是在具有炎症性脱髓鞘疾病的受试者的体内天然存在的抑制剂。
[0063]A.1nfestin-4
[0064]在一个实施方案中，本申请提供了包含infestin结构域4( “infestin-4”)的FXII抑制剂。最近，infestin-4据报道为活化FXII (FXIIa)的新型抑制剂。Infestin是一类来源于吸血昆虫骚扰锥蝽(已知引发Chagas病的寄生虫克氏锥虫的主要载体)的中肠的丝氨酸蛋白酶抑制剂。(Campos ITN 等人 32Insect B1chem.Mol.B1.991-997, 2002 ；Campos ITN等人577FEBS Lett.512-516，2004.)。该昆虫使用这些抑制剂阻止摄入的血液凝固。Infestin的全长前体多肽序列提供于图1 (SEQ ID NO:1)中。Infestin基因编码导致可抑制凝血途径中的不同因子的蛋白质的4个结构域。具体地，结构域4编码为FXIIa的强抑制剂的蛋白(infestin-4)。Infestin-4已在小鼠中进行了施用，但无出血并发症。(W0 2008/098720 ;Hagedorn 等人，Circulat1n 2010 ； 121:1510-17.) ?
[0065]因此，在一个实施方案中，提供了包含infestin-4的变体的FXII抑制剂。在另一个实施方案中，FXII抑制剂包含infestin结构域4和任选地infestin结构域1、2和/或3。已知这些蛋白质为FXII的强效抑制剂。(参见WO 2008/098720 ;也参见Campos ITN等人577FEBS Lett.512-516，2004.)。在一个实施方案中，FXII抑制剂为(His)6-标记的infestin-4构建体。在另一个实施方案中，FXII抑制剂是由白蛋白-接头-1nfestin-4组成的融合蛋白。在一个实施方案中，白蛋白-接头-1nfestin-4是Hagedorn等人Circulat1n 2010 ;117:1153-60 中描述的 rHA-1nfestin-4 蛋白。FXII 的 infestin 抑制剂的实例描述于 W02008/098720 和 Hagedorn 等人 Circulat1n 2010 ；117:1153-60 中。
[0066]如此处所用，术语infestin的“变体”是指具有氨基酸突变的多肽，其中“突变”被定义为对野生型infestin-4序列的置换、缺失或添加，其中这样的变化不改变多肽抑制FXII的功能性能力。术语“变体”包括野生型或突变的infestin-4序列的片段。下文中提供了这样的变体的其它实例。
[0067]在一个实施方案中，infestin-4变体包含来自野生型infestin-4序列的氨基末端的氨基酸序列VRNPCACFRNYV(SEQ ID NO:2的残基2_13)(参见图2中加以下划线的序列)和N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型infestin-4序列的差异 ，和/或6个保守半胱氨酸残基，和/或至少70%的与野生型infestin-4序列的同源性。因此,在一些实施方案中，infestin-4的变体包含野生型infestin-4序列的氨基酸2_13的保守N末端区域，和在这些保守的N末端氨基酸之外的至少I个或多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型infestin-4序列的差异。如此处所用，术语infestin变体的“N末端氨基酸外部”是指沿着所述变体的多肽链除包含序列VRNPCACFRNYV即来自SEQ ID NO:2的氨基酸2_13的连续氨基酸区段外的任何氨基酸。在另一个实施方案中，infestin-4变体包含6个保守半胱氨酸残基并且与野生型infestin-4序列具有至少70%的同源性。在一个实施方案中，6个保守半胱氨酸残基是野生型infestin-4序列SEQ ID NO:2的位置6、8、16、27、31和48上的氨基酸(参见图2)。在一个实施方案中，变体在位置48上包含最后一个保守半胱氨酸。在其它实施方案中，半胱氨酸残基的确切位置和彼此的相对位置可因infestin-4变体中的插入或缺失而从野生型infestin_4序列的位置6、8、16、27、31和48变化。然而,在这些实施方案中，infestin-4变体包含所有6个半胱氨酸并且可与野生型infestin-4序列具有70%、75%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或这些百分比之间的任何百分比的同源性。
[0068]在一个实施方案中，FXII抑制剂包含野生型infestin-4多肽序列的变体(SEQ IDNO:2)，其中变体包含SEQ ID N0:2的N末端氨基酸2-13 ;在所述N末端氨基酸外的至少一个或多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型infestin-4序列的差异；6个保守半胱氨酸残基；和与野生型infestin-4序列至少70%的同源性。
[0069]在infestin-4变体实施方案中，infestin-4的变体的特征在于其抑制FXII。抑制FXII的功能性活性可以例如通过体外和/或体内表征来评估，所述表征包括测试FXII酶活性的抑制、延长的凝血时间即活化部分凝血活酶时间(aPTT ;阐明凝血的内源性途径的临床凝血测试)的直接测定或评价凝血的体内法。
[0070]infestin-4变体的其它实例为SPINK-1突变体，其描述于下文中。
[0071]B.SPINK-1 突变体
[0072]一个实施方案涉及用于人的治疗性用途的FXII抑制剂。可使用与infestin-4具有高度相似性的人蛋白。例如，与Infestin-4具有最高相似性的人蛋白为SPINK-1，在胰腺中表达的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(也称为胰腺分泌胰蛋白酶抑制剂，PSTI)。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族是众多丝氨酸蛋白酶抑制剂家族之一。已描述了来自不同物种的许多蛋白质。(Laskowski M 和 Kato I, 49Ann.Rev.B1chem.593-626, 1980.)
[0073]基于野生型SPINK-1序列(SEQ ID NO: 3)，可产生不同的变体以增加SPINK-1序列与Infestin-4的同源性。在一个实施方案中，将SPINK-1突变以包含SEQ ID N0:2的N末端氨基酸2-13，所述序列被认为对于FXII抑制性功能是非常重要的。称为Kl的多肽序列示于SEQ ID N0:4和图2中。
[0074]在一个实施方案中，突变的SPINK-1的变体也包含野生型infestin-4序列的N末端氨基酸2-13(SEQ ID NO: 2)，和在所述N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型SPINK-1序列的差异以及增加变体与野生型infestin-4序列的同源性。在另一个实施方案中，突变的SPINK-1的变体包含6个保守半胱氨酸残基并且与野生型SPINK-1序列具有至少70%的同源性。突变可以是置换、缺失或添加。如上所定义的，术语“在N末端氨基酸外部”是指沿着所述变体的多肽链除由序列VRNPCACFRNYV即SEQ ID NO:2的氨基酸2-13组成的连续氨基酸区段外的任何氨基酸。术语“变体”包括所述突变的SPINK-1序列的片段。在一个实施方案中，6个保守半胱氨酸残基可以是位于野生型SPINK-1序列的位置9、16、24、35、38和56上的氨基酸(SEQ ID N0:3，参见图2)。在一个实施方案中，变体包含最终的保守半胱氨酸。在另一个实施方案中，半胱氨酸的确切位置和彼此的相对位置可因SPINK-1变体中的插入或缺失而导致的从野生型SPINK-1序列的位置9、16、24、35、38和56改变。然而，在这些实施方案中，SPINK-1变体包含所有6个半胱氨酸。在实施方案中，SPINK-1变体的特征还在于其抑制FXII。
[0075]在一个实施方案中，FXII抑制剂包含SPINK-1 (SEQ ID NO:3)的变体，其中SPINK-1变体包含SEQ ID NO: 2的N末端氨基酸2_13 ;在所述N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型SPINK-1序列的差异以及增加变体与野生型infestin-4序列的同源性；6个保守半胱氨酸残基；和与野生型SPINK-1序列至少70%的同源性。
[0076] 给出SPINK-1变体的实例，其被命名为K1、K2和K3(分别地SEQ ID N0S:4,5和6)。在SPINK-1变体Κ2和Κ3中，相对于Kl在N末端外产生其它氨基酸置换，以增加与infestin-4的同源性，其中变体的特征还在于它们抑制FXII活性。参见WO 2008/098720。图2显示这些变体的氨基酸序列和对SPINK-1野生型序列的改变的程度。在SPINK-1变体K3的情况下，5个氨基酸置换增加与infestin-4的同源性。因此在实施方案中，SPINK-1变体可与野生型 SPINK-1 序列具有 70%、75%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96 %、97 %、98 %或99 %或这些百分比之间的任何百分比的同源性。
[0077]C.其它FXII抑制剂
[0078]FXII的其它抑制剂，包括FXII和FXIIa的抑制剂，描述于W02006/066878中。因此，在一些实施方案中，FXII抑制剂是抗凝血酶111(AT 111)、血管紧张素转化酶抑制剂、Cl抑制剂、抑肽酶、α-1蛋白酶抑制剂、抗蛋白酶素([(S)-1-羧基-2-苯乙基]-氨甲酸基-L-Arg-L-Val-Arginal)、Z-Pro-Pro-乙醒-二甲基醋酸酯、DX88 (DyaxInc.,300Technology Square, Cambridge, MA 02139，USA ;Wi11iams A 和 BairdLG, 29Transfus Apheresis Sc1.255-258，2003中引用的)、亮抑酶肽、脯氨酰寡肽酶的抑制剂例如Fmoc-Ala-Pyr-CN、玉米-胰蛋白酶抑制剂、牛胰蛋白酶抑制剂的突变体、ecotin、黄盖鲽抗凝蛋白、笑瓜胰蛋白酶抑制剂-V,包括笑瓜同效抑制剂或Hamadarin(如由Isawa H等人，277J.B1l.Chem.27651-27658，2002 公开的)。
[0079]在其它实施方案中，FXII抑制剂为H-D-Pro-Phe-Arg-氯甲基酮(PCK)。(Tans 等人,Eur.J.B1chem.1987 ； 164:637-42 ；Kleinschnitz 等人，J Exp Med.2006 ；203:513-8.)。
[0080]在其它实施方案中，FXII抑制剂为美国专利N0.6，613，890中第4至8栏中公开的淀粉样蛋白前体蛋白的Kunitz蛋白酶抑制剂结构域的类似物。
[0081]D.FXII 抗体
[0082]在其它实施方案中，FXII抑制剂为结合FXII并抑制FXII激活和/或活性的抗-FXII抗体。抗-FXII抗体已描述于例如WO 2006/066878和Ravon等人，IBlood4134-43，1995中。针对人因子XII的其它单克隆抗体(mAb)包括由Pixley等人描述的 B7C9mAb(J B1l Chem 1987 ;262，10140-45)，由 Small 等人描述的 mAb (Blood 1985 ；65:202-10);由 Nuijens 等人描述的 mAb Fl 和 F3 (J.B1l.Chem.1989 ;264:12941-49)；W089/11865中描述的抗FXII的轻链的B6F5、C6B7和D2E10mAb ；W090/08835中描述的相对于FXII选择性结合FXIIa-β的mAb ;和冊91/17258中描述的抗-FXII抗体0T-2。
[0083]另外的抗-因子XII/FXIIa单克隆抗体及其抗原结合片段描述于2011年7月22日提交的美国临时申请n0.61/510，801 (将其通过引用并入本文)中。那些抗体具有为对于人因子XII的结合亲和力2倍以上的对于人因子XIIa-β的结合亲和力，并且能够抑制人因子XIIa的胺裂解酶活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有下列特征的一个或多个:(a)结合鼠FXII/FXIIa;(b)包含与SEQ ID NO: 7的序列具有超过85%的同一性的重链可变(VH)区；(c)包含与SEQ ID NO:8的序列具有超过85%的同一性的轻链可变(VL)区；(d)包含与SEQ ID NO:9的序列具有至少80%的同一性的重链⑶R1，和/或与SEQ ID NO: 10的序列具有至少60%的同一性的重链CDR2，和/或与SEQ ID NO: 12的序列具有至少80%的同一性的重链⑶R3 ； (e)包含与SEQ ID NO: 14具有至少50%的同一性的轻链 CDRUP / 或 SEQ ID NO: 15 的轻链 CDR2，和 / 或具有序列 A-X1-W-X2-X3-X4-X5-R-X6-X7的轻链⑶R3，其中X1可为A或S，X5可为L或V，其它Xn可为任意氨基酸(SEQ ID NO: 17)；(f)以好于KT8M的Kd结合人因子XIIa-β ; (g)与infestin-4竞争对于人因子XIIa-β的结合；或(h)为人IgG或其变体，优选人IgG4或其变体。
[0084]在其它实施方案中，抗-FXII抗体为结合人FXII的IgG抗体，并且包含(a)含有SEQ ID NO:9中所示的重链CDR1、SEQ ID NO: 11中所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 13中所示的重链CDR3的VH区；和/或(b)含有SEQ ID NO: 14中所示的轻链CDR1、SEQ ID NO: 15中所示的轻链⑶R2和SEQ ID NO: 17所示的轻链⑶R3的VL区。包含SEQ ID NO: 11的重链 CDR2 包含序列 Gix1X2X3X4X5X6TvyadsvkG,其中 X1 为 R、N 或 d，X2 为 P、V、I 或 μ ；χ3 为 S、P或A ;Χ4为G、L、V或T ;Χ5可以为任意氨基酸，优选地X5为G、Y、Q、K、R、N或M ;并且X6为T、G 或 S。包含 SEQ ID NO: 13 的重链 CDR3 包含序列 ALPRSGYLXAXJJYYYALDV，其中 X1 为1、M或￥32为3或1(而为？、1(、1'或!1;并且乂4为!1、队6或0。包含SEQ ID NO: 17的轻链CDR3 包含序列 AX1WX2X3X4X5RX6X7，其中 X1 为 A 或 S ;X2 为 D、Y、E、T、W、E 或 S ；X3 为 A、N、1、L、V、P、Q 或 E ;X4 为 S、D、P、E、Q 或 R 仏为 L 或 V ;X6 为 G、L 或 K ;并且父7为 V、A、D、T、M 或G0
[0085]在其它实施方案中，抗-FXII抗体的抗原结合片段是结合人FXII的IgG抗体的片段，其包含(a)包含SEQ ID N0:9中所示的重链CDR1、SEQ ID NO: 10所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 12所示的重链CDR3的VH区；和/或(b)包含SEQ ID NO: 14所示的轻链CDRl、SEQ ID NO: 15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO: 16所示的轻链CDR3的VL区。
[0086]在一个实施方案中，抗-FXII抗体或其抗原结合片段是实施例3中使用的抗体“3F7”。3F7的可变区和⑶R的序列示于表1中。
[0087] 表1.
[0088]
【权利要求】
1.一种用于预防和/或治疗和/或改善神经炎症性疾病的因子XII抑制剂。
2.用于权利要求1的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂包含野生型infestin-4多肽序列(SEQ ID NO:2)或其变体，其中所述变体包含: (a)SEQ ID N0:2的N末端氨基酸2-13 ;和所述N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生型infestin-4序列的差异； 和/或 (b)6个保守半胱氨酸残基；和与野生型infestin-4序列至少70%的同源性。
3.用于权利要求1的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂包含SPINK-1(SEQID NO: 3)，其被突变来包括SEQ ID NO: 2的N末端氨基酸2_13，或所述突变的SPINK-1的变体，其中变体包含 (a)SEQ ID NO:2的N末端氨基酸2-13 ;和所述N末端氨基酸外部的至少I个和多至5个氨基酸突变，所述突变导致与野生SPINK-1序列的差异和增加变体与野生型infestin-4序列的同源性； 和/或 (b)6个保守半胱氨酸残基；和与野生型SPINK-1序列至少70%的同源性。
4.用于权利要求3的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂包括SPINK-1或SPINK-1 突变体 K1、K2 或 K3(分别地 SEQ ID NOS: 3、4、5 或 6)。
5.用于权利要求1的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂包括以下一种或多种:H-D-Pro-Phe-Arg-氯甲基酮(PCK)、AT II1、抑肽酶、α -1蛋白酶抑制剂、抗蛋白酶素([(S) -1-竣基-2-苯乙基]-氛甲酸基-L-Arg-L-Val-Arginal)、Z-Pro-Pro-乙醒-二甲基醋酸酯、DX88、脯氨酰寡肽酶的抑制剂，特别是Fmoc-Ala-Pyr-CN、玉米-胰蛋白酶抑制剂、牛胰蛋白酶抑制剂的突变体、ecotin、YAP(黄盖鲽抗凝蛋白)、笋瓜胰蛋白酶抑制剂-V或笋瓜同效抑制剂。
6.用于权利要求1的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂包含抗-FXII抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合FXII并抑制其活性和/或激活。
7.用于权利要求6的用途的因子XII抑制剂，其中所述抗-FXII抗体或其抗原结合片段包含:(a) VH区，所述VH区包含SEQ ID N0:9中所示的重链CDR1、SEQ ID N0:11中所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 13中所示的重链CDR3 ;和/或(b) VL区，所述VL区包含SEQ IDNO: 14中所示的轻链CDR1、SEQ ID NO: 15中所示的轻链CDR2和SEQ ID NO: 17中所示的轻链 CDR3。
8.用于权利要求6或7的用途的因子XII抑制剂，其中所述抗-FXII抗体或其抗原结合片段包含:(a) VH区，所述VH区包含SEQ ID N0:9中所示的重链CDR1、SEQ ID N0:10中所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 12中所示的重链CDR3 ;和/或(b)VL区，所述VL区包含SEQID NO: 14中所示的轻链CDRl、SEQ ID NO: 15中所示的轻链CDR2和SEQ ID NO: 16中所示的轻链CDR3。
9.用于权利要求6至8的任一项的用途的因子XII抑制剂，其中所述抗-FXII抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO: 7，所述VL区包含SEQ IDN0:8。
10.用于权利要求6至9的任一项的用途的因子XII抑制剂，其中所述抗-FXII抗体是IgG0
11.用于权利要求1至10的任一项的用途的因子XII抑制剂，其中将FXII抑制剂连接于半衰期增强多肽，所述多肽为白蛋白、维生素E结合蛋白、α -甲胎蛋白、维生素D结合蛋白、人白蛋白或其变体、免疫球蛋白或其变体、PEG或其变体、或IgG的Fe。
12.用于权利要11的用途的因子XII抑制剂，其中所述半衰期增强多肽通过接头连接于FXII抑制剂。
13.用于权利要12的用途的因子XII抑制剂，其中所述接头是 (a)可切割的； (b)可被内源性、外源性或共同凝血途径的凝血蛋白酶切割；和/或 (C)可被因子XIIa切割。
14.用于权利要求11至13的任一项的用途的因子XII抑制剂，其中所述FXII抑制剂是人白蛋白-接头-FXII融合蛋白。
15.用于权利要求1至14的任一项的用途的因子XII抑制剂，其中所述神经炎症性疾病是多发性硬化、横贯性脊髓炎或视神经脊髓炎(Devic’ s病)。
16.用于权 利要求15的用途的因子XII抑制剂，其中所述多发性硬化是复发缓解型多发性硬化或原发性进行型多发性硬化。
【文档编号】C07K14/00GK104080470SQ201380007416
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2013年1月31日 优先权日:2012年1月31日
【发明者】S·莫伊特, K·格比尔, C·克莱茵施尼茨, B·迈肯齐, M·诺尔蒂 申请人:德国杰特贝林生物制品有限公司, Csl有限公司, 朱利叶斯-马克西米利维尔茨堡大学, 威斯特法伦威廉明斯特大学