具有超长cdr3s的人源化抗体的制作方法

具有超长cdr3s的人源化抗体的制作方法
【专利摘要】本文公开的内容提供了人源化抗体，包括包含超长CDR3的抗体(例如牛)，以及其用途。
【专利说明】具有超长CDR3S的人源化抗体
[0001] 本申请要求2012年1月9日提交的美国临时申请第61/584,680号的权益，将其 全文以引用方式结合于本文中作为参考。

【技术领域】
[0002] 本文公开的内容涉及人源化抗体，包括包含超长⑶R3的抗体。
[0003] 发明背景
[0004] 抗体是脊椎动物免疫系统响应于外来物质（抗原）而形成的天然蛋白质，主要用 于抵御感染。一个多世纪以来，已经在人工条件下在动物中诱导抗体，并收获抗体用于疾病 状况的治疗或诊断，或用于生物学研究。每个单独的抗体生产细胞产生具有化学上确定的 组成的单一类型的抗体，然而，响应于抗原接种直接从动物血清获得的抗体实际上包含产 自单个抗体生产细胞的集群的不相同的分子的集群（例如，多克隆抗体）。
[0005] 与其他脊椎动物相比，某些牛抗体具有超长的VH⑶R3序列。例如，约10%的IgM 含有"超长" CDR3序列，其可以长达61个氨基酸长度。这些不同寻常的CDR3经常具有多 个半胱氨酸。功能性VH基因通过称为V (D) J重组的过程形成，其中D-区编码绝大部分的 ⑶R3。已经在牛中鉴定出编码超长序列的独特的D-区。超长⑶R3在牛基因组中被部分地 编码，与人类相比，提供了牛的抗体全集的独特特征。Kaushik等人（美国专利第6, 740, 747 号和第7, 196, 185号）公开了几种声称作为探针有用的牛特有的牛种系D-基因序列，以及 声称作为疫苗载体有用的牛VDJ盒。
[0006] 发明概述
[0007] 本文公开的内容提供了人源化抗体，包括包含超长CDR3的抗体，生产所述抗体的 方法，以及其用途。
[0008] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段。
[0009] 在一些实施方式中，所述人源化抗体或其结合片段包含一个或多个人类可变区框 架序列。
[0010] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3的长 度是35个氨基酸或更长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55 个氨基酸或更长，或60个氨基酸或更长。
[0011] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3的长 度是35个氨基酸或更长。
[0012] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含3 个或更多个半胱氨酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或 更多个半胱氨酸残基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多 个半胱氨酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更 多个半胱氨酸残基。
[0013] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含3 个或更多个半胱氨酸残基。
[0014] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，抗体或其结合片 段包含半胱氨酸基序。
[0015] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，半胱氨酸基 序选自由以下序列组成的组：CX1QCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、CXiqCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO : 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6Cx5CXCX13C(SEQ ID NO:45)、CXiciCX5CXCX4CX8C(SEQ ID NO:46)、CXiciCX6CX6CXCX7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48)、CXiciCX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49)、 CX13CX8CX8C (SEQ ID NO : 50) , CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 51) , CX10CX5CX5C (SEQ ID NO:52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0016] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，半胱氨酸基序选 自由以下序列组成的组：
[0017] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0018] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含2 至6个二硫键。
[0019] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 SEQ ID NO:40或其衍生物。
[0020] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 SEQ ID NO: 1-4的任一个的氨基酸残基3-6。
[0021] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 非人类DH或其衍生物。
[0022] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述非人类DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0023] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0024] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述JH序列是 SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
[0025] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含： 非人类或人类VH序列（例如，种系VH)或其衍生物；非人类DH序列或其衍生物；和/或JH 序列或其衍生物。
[0026] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 另外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨 基酸残基或更多个氨基酸残基。
[0027] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述另外的氨基 酸序列选自由以下序列组成的组：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0028] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 衍生自或基于 SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO : 26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO : 28 的序列。
[0029] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 牛序列、非牛序列、抗体序列或非抗体序列。
[0030] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是合 成的序列。
[0031] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是细 胞因子序列、淋巴因子序列、趋化因子序列、生长因子序列、激素序列或毒素序列。
[0032] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生长抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齐考诺肽（ziconotide)序列。
[0033] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是 SEQ ID NO :475-481 的任一个。
[0034] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列取代 至少一部分的超长⑶R3。
[0035] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)，其 中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸 (H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨 酰胺（Q)。
[0036] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是 TTVHQ (SEQ ID NO: 153)、TSVHQ (SEQ ID NO: 154)、SSVTQ (SEQ ID NO: 155)、STVHQ (SEQ ID NO: 156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163)、STVYQ(SEQ ID NO: 164)、TIVHQ(SEQ ID NO: 165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0037] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0038] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO: 189)、CTTVYQ(SEQ ID NO: 190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ (SEQ ID NO:195)、CSTVYQ (SEQ ID NO:196)、CTIVHQ (SEQ ID NO:197)、CAIVYQ (SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0039] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0040] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVffTHNF(SEQ ID NO:230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF (SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259),PYEff(SEQ ID NO:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0041] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0042] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)， 其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨 酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0043] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0044] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V) ，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0045] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（X aXb)z基序是YXYXYX。
[0046] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸 (V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4 是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q);选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)，以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸残基，Xb 是 选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0047] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨 酸（V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨酸（D)， 其中X4是组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)， 以及其中X 5是谷氨酰胺（Q);选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中所述半 胱氨酸基序选自由以下序列组成的组：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC (SEQ ID NO: 96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4Cx10C(seq id no： 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq id no： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO: 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C (SEQ ID NO: 104)、 CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID NO: 108), CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX 3CX4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX 4CX8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID NO: 120) , Cx3CX5CX3CCCX4CX9C (SEQ ID NO: 121), CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO: 122), Cx9CX2CX3CX4CCX4CX 5C (SEQ ID NO: 123) , CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID N0:124), Cx9CX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 Cx8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CxiiCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135) , CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO: 136) , CX9CX6CX4CCXC (SEQ ID NO: 137), CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138)、CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO: 140) , CX10CX3CX4Cx7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C(SEQ ID NO: 142), CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143)、CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144)、CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0048] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 另外的序列，所述另外的序列是接头。
[0049] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述接头连接到 非抗体序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端两者。
[0050] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3是反 刍动物CDR3。
[0051] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述反刍动物是 牛。
[0052] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链可变区框架序列。
[0053] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链种系序列，或衍生自人类重链种系序列。
[0054] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链种系序列，所述人类重链种系序列是VH4家族成员种系序列。
[0055] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含VH4-34种系序列。
[0056] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链种系序列，所述人类重链种系序列衍生自VH4-34种系序列。
[0057] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat编号的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0058] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基于Kabat编号的Glu50Ser取代。
[0059] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基于Kabat编号的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 编号的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0060] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含在SEQ ID勵：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列。
[0061] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0062] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0063] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID NO: 461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 与 SEQ ID N0:470 之间。
[0064] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗体序列或非抗体序列。
[0065] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类轻链可变区框架序列。
[0066] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含轻链可变区序列，所述轻链可变区序列是λ轻链可变区序列。
[0067] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述λ轻链可 变区序列是牛λ轻链可变区序列，或衍生自牛λ轻链可变区序列。
[0068] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述λ轻链可 变区序列是人类λ轻链可变区序列，或衍生自人类λ轻链可变区序列。
[0069] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述人类λ轻 链可变区序列是VL1-51种系序列。
[0070] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述人类λ轻 链可变区序列衍生自VL1-51种系序列。
[0071] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat编号的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0072] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0073] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的 取代。
[0074] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含基于Kabat编号的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0075] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含基于Kabat编号的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到⑶T的取代。
[0076] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
[0077] 本文公开的内容还提供了编码本文公开的人源化抗体或其结合片段的多核苷酸。
[0078] 本文公开的内容还提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的多核 苷酸。
[0079] 本文公开的内容还提供了编码包含超长CDR3的人源化可变区的多核苷酸。
[0080] 本文公开的内容还提供了包含本文公开的多核苷酸的载体。
[0081] 本文公开的内容还提供了包含本文公开的载体的宿主细胞。
[0082] 本文公开的内容还提供了包含多种多核苷酸的核酸文库，所述多核苷酸包含编码 人源化抗体或其结合片段的序列，其中所述抗体或其结合片段包含超长CDR3。
[0083] 本文公开的内容还提供了人源化抗体或其结合片段的文库，其中所述抗体或其结 合片段包含超长⑶R3。
[0084] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3的长 度是35个氨基酸或更长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55 个氨基酸或更长，或60个氨基酸或更长。
[0085] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3的长 度是35个氨基酸或更长。
[0086] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含3 个或更多个半胱氨酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或 更多个半胱氨酸残基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多 个半胱氨酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更 多个半胱氨酸残基。
[0087] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含3 个或更多个半胱氨酸残基。
[0088] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，抗体或其结合片 段包含半胱氨酸基序。
[0089] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所 述半胱氨酸基序选自由以下序列组成的组=CXiqCX5CX5CXCX 7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0090] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述半胱氨酸基 序选自由以下序列组成的组：
[0091] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID no:99)、cx5cx3cxcx4cx4ccx 1(icx2cc(seq id no:loo)、Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4CxiqC(seq ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0092] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含2 到6个二硫键。
[0093] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0094] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 SEQ ID NO : 1-4中任一个的氨基酸残基3-6。
[0095] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 非人类DH或其衍生物。
[0096] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述非人类DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0097] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0098] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0099] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含： 非人类VH序列或其衍生物；非人类DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0100] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 另外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨 基酸残基或更多氨基酸残基。
[0101] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述另外的氨基 酸序列选自由以下序列组成的组：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20或 SEQ ID NO:21〇
[0102] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 衍生自或基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID N0:27 或 SEQ ID N0:28 的序列。
[0103] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 非牛序列或非抗体序列。
[0104] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是合 成的序列。
[0105] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是细 胞因子序列、淋巴因子序列、趋化因子序列、生长因子序列、激素序列或毒素序列。
[0106] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生长抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齐考诺肽（ziconotide)序列。
[0107] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，非抗体序列是 SEQ ID NO :475-481 中的任一个。
[0108] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)，其 中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸 (H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨 酰胺（Q)。
[0109] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，X1X2X 3X4X5基序 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175) , TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0110] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0111] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0112] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0113] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff (SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff (SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO: 229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO :231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268), TYEF(SEQ ID NO:269), TYEff(SEQ ID NO:270), TYQff(SEQ ID NO:271), TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0114] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0115] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)， 其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨 酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0116] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0117] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V) ，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0118] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（XaXb) z基序是YXYXYX。
[0119] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)， 其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或 天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（Τ)、精氨酸（R)、酪氨酸（Υ)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q)，选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8Cx2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8Cx 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸残基，Xb 是 选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0120] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)， 其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨 酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨酰胺（Q);选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以下序 列组成的组：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0121] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长⑶R3包含 额外的序列，所述额外的序列是接头。
[0122] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述接头连接到 非抗体序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端两者。
[0123] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，超长CDR3是反 刍动物CDR3。
[0124] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述反刍动物是 牛。
[0125] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链可变区框架序列。
[0126] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链种系序列，或衍生自人类重链种系序列。
[0127] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含人类重链种系序列，所述人类重链种系序列是VH4家族成员种系序列。
[0128] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含VH4-34种系序列。
[0129] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含衍生自VH4-34的人类重链种系序列。
[0130] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat编号的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0131] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基于Kabat编号的Glu50Ser取代。
[0132] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VH4-34种 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基于Kabat编号的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 编号的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0133] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0134] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0135] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或 其结合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸 序列；SEQ ID N0:470中列出的氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 与 SEQ ID N0:470 之间。
[0136] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗体序列或非抗体序列。
[0137] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含λ轻链可变区序列。
[0138] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含轻链可变区序列，所述轻链可变区序列是λ轻链可变区序列。
[0139] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述λ轻链可 变区序列是牛λ轻链可变区序列。
[0140] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述λ轻链可 变区序列是人类λ轻链可变区序列。
[0141] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述人类λ轻 链可变区序列是VL1-51。
[0142] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述人类λ轻 链可变区序列衍生自VL1-51。
[0143] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat编号的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0144] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0145] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取 代。
[0146] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含基于Kabat编号的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0147] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述VL1-51种 系序列包含基于Kabat编号的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到GDT的取代。
[0148] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
[0149] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，人源化抗体或其 结合片段以空间定址的形式（spatially addressed format)存在。
[0150] 本文公开的内容还提供了人源化抗体可变区的方法，包括遗传地组合编码非人类 超长CDR3的核酸序列与编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列的步骤。
[0151] 本文公开的内容还提供了产生包含超长⑶R3的人源化抗体的文库的方法，所述 方法包括：组合编码超长CDR3的核酸序列与编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列，以 产生编码包含超长CDR3的人源化抗体的核酸；以及表达编码包含超长CDR3的人源化抗体 的所述核酸，以产生包含超长CDR3的人源化抗体的文库。
[0152] 本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3人源化抗体或其结合片段的文库的 方法，所述超长CDR3包含非抗体序列，所述方法包括：组合编码超长CDR3的编码、编码人类 可变区框架（FR)序列的核酸序列以及编码非抗体序列的核酸序列，以产生编码包含超长 CDR3和非抗体序列的人源化抗体或其结合片段的核酸，表达编码包含超长CDR3和非抗体 序列的人源化抗体或其结合片段的所述核酸，以产生包含超长CDR3和非抗体序列的人源 化抗体或其结合片段的文库。在一些实施方式中，超长CDR3包含牛、非牛、抗体或非抗体序 列。本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库的方 法，所述超长CDR3包含非牛或非抗体序列。
[0153] 本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库 的方法，所述超长CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括：组合人类可变区框架（FR)序列 以及编码超长CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向该核酸序列中引入一个或多个核苷酸 变化，该核酸序列编码位于编码不同氨基酸残基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一个或多个 半胱氨酸残基之间的一个或多个氨基酸残基，以产生编码包含超长CDR3和半胱氨酸基序 的人源化抗体或其结合片段的核酸，该半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多 个半胱氨酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化；以及表达所述编码人源化抗体或其结 合片段的核酸，所述人源化抗体或其结合片段包含超长CDR3和半胱氨酸基序，该所述半胱 氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨酸残基之间引入的一个或多个核 苷酸变化，以产生人源化抗体或其结合片段的文库，所述人源化抗体或其结合片段包含超 长CDR3和半胱氨酸基序，其中该半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半 胱氨酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化。
[0154] 本文公开的内容还提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库，所 述超长CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗体或结合片段包含位于半胱氨酸基序中的半 胱氨酸残基之间的氨基酸残基的一个或多个取代。
[0155] 本文公开的内容还提供了产生包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文 库的方法，所述方法包括：组合编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列和编码牛超长 CDR3的核酸，表达编码人类可变区框架（FR)序列的核酸和编码牛超长CDR3的核酸，以产生 包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库。
[0156] 本文公开的内容提供了人源化抗体，包括包含⑶R3支架的抗体，生产所述抗体的 方法，以及其用途。
[0157] 本文公开的内容提供了包含CDR3支架的人源化抗体或其结合片段。
[0158] 在一些实施方式中，所述⑶R3支架包含一个或多个人类可变区框架序列。
[0159] 本文公开的内容还提供了包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库。
[0160] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)，其 中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸 (H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨 酰胺（Q)。
[0161] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，CDR3支架的长度 是35个氨基酸或更长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个 氨基酸或更长，或60个氨基酸或更长。
[0162] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，CDR3支架的长度 是35个氨基酸或更长。
[0163] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含3 个或更多个半胱氨酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或 更多个半胱氨酸残基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多 个半胱氨酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更 多个半胱氨酸残基。
[0164] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含3 个或更多个半胱氨酸残基。
[0165] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含半 胱氨酸基序。
[0166] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所 述半胱氨酸基序选自由以下序列组成的组=CX iqCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0167] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，半胱氨酸基序选 自由以下序列组成的组：
[0168] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0169] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含2 至6个二硫键。
[0170] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5基序是TTVHQ(SEQ ID NO: 153)、TSVHQ(SEQ ID NO: 154)、SSVTQ(SEQ ID NO: 155)、 STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ(SEQ ID NO :159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ (SEQ ID NO: 161), TNVHQ (SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID NO: 164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、 ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID NO: 171), ATVFQ(SEQ ID NO: 172), AAAHQ(SEQ ID NO :173), VVVYQ (SEQ ID NO: 174), GTVFQ (SEQ ID NO: 175), TAVHQ (SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ(SEQ ID NO:179) ；AAVHQ(SEQ ID N0:180)、GTVYQ(SEQ ID N0:181)、TTVLQ(SEQ ID N0:182)、TTTHQ(SEQ ID N0:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0171] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0172] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ (SEQ ID NO :185)、CTSVHQ (SEQ ID NO :186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0173] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0174] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO :229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0175] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0176] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)， 其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨 酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0177] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0178] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷 氨酰胺（Q)，Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组 氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0179] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5 基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153)或 TSVHQ(SEQ ID NO: 154)，以及其中（XaXb)z 基序 是 YXYXYX。
[0180] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨 酸（V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸 (V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中 X4是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其 中X 5是谷氨酰胺（Q)，选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX 5CXCX7C (SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸残基，Xb 是 选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0181] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或缬氨酸（V)， 其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨 酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨酰胺（Q)，选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以下序 列组成的组：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO :99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiciC (SEQ ID NO :101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO ： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO： 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO :106), Cx4Cx4CCX4CX4CXCX1 !CX2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb) z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组 氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0182] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0183] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO : 1-4的任一个的氨基酸残基3-6。
[0184] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含非 人类DH或其衍生物。
[0185] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述非人类DH 是 SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、 SEQ ID NO :11 或 SEQ ID NO :12。
[0186] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含 JH序列或其衍生物。
[0187] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0188] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含： 非人类VH序列或其衍生物；非人类DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0189] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含另 外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨基 酸残基或更多个氨基酸残基。
[0190] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述另外的氨基 酸序列选自由以下序列组成的组：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0191] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，⑶R3支架包含衍 生自或基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
[0192] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，CDR3支架是反刍 动物⑶R3支架。
[0193] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述反刍动物是 牛。
[0194] 本文公开的内容还提供了包含本文公开的⑶R3支架的文库。
[0195] 本文公开的内容还提供了编码本文公开的CDR3支架的多核苷酸。
[0196] 本文公开的内容还提供了包含本文公开的任何多核苷酸的载体。
[0197] 本文公开的内容还提供了包含本文公开的任何载体的宿主细胞。
[0198] 本文公开的内容还提供了
[0199] 在每个或任一个上文或下文提及的实施方式的一些实施方式中，所述细胞是细 菌、病毒或噬菌体。

【专利附图】

【附图说明】
[0200] 当与附图一同阅读时，前文的概述以及下文的发明的详细说明将被更好地理解。 为了举例说明公开内容的目的，附图中显示的是当前优选的实施方式。然而要理解的是，公 开内容不限于所显示的确切的装置、实施例和工具。
[0201] 附图 1 显示了何含轺长 CDR3 序列的、称为 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、 BF4E9、BFlHl或F18的示例性牛衍生的抗体可变区序列的序列比对。
[0202] 附图2A-C描绘了超长⑶R3序列。（上方）从种系VhBUU DH2和Jh的翻译。文献 中报道的5个全长的超长CDR H3含有四到八个半胱氨酸，彼此不是高度同源的；然而，在比 对之前"固定"这些⑶R H3的第一个半胱氨酸是，可以发现半胱氨酸残基与DH2的某些保守 性。七个序列中的四个（BLV1H12、BLV?3、BLV8C11和BF4E9)含有与D H2相同位置的四个半 胱氨酸，但还具有其他的半胱氨酸。BLV5B8具有与种系DH2-样的两个半胱氨酸。具有一 定半胱氨酸保守性的这种有限的同源性表明，D H2的突变可以产生这些序列。B-Ll和B-L2 是来自源于牛脾脏的初始序列，其余的是来自深度测序数据的选定的超长CDR H3序列。第 一组含有所鉴定的最长的⑶R H3,显现为同源相关的（clonally related)。*表明序列出 现167次，表明它是对于功能强烈选定的。八个半胱氨酸序列的某一些表现为功能选择的， 因为它们出现多次，在括号中标明。各种长度的其他代表性序列在最后一组中标明。限定了 ⑶R H3范围的框架半胱氨酸和色氨酸残基是双下划线的。表2A-C中呈现的序列BLV1H12 到UL-77 (最左侧一列）分成四段来显示，来区别衍生自某些种系序列和V/D/J连接序列的 氨基酸残基的节段。从左到右，第一段衍生自VH种系，在公开内容中以X 1X2X3X4X5基序表示。 第二段代表来自V-D连接的序列，在公开内容中以X n表示。第三段代表衍生自DH2种系的 氨基酸残基的串列，第四段是衍生自JhI种系区域的氨基酸残基的串列。
[0203] 附图 3 描绘了称为 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、BF4E9、BFlHl 或 F18 的示 例性牛衍生的超长CDR3序列的序列比对。
[0204] 附图4显示了称为VH-UL的示例性牛种系重链可变区（Vh)序列，其适合于修饰或 与超长⑶R3序列一起使用。
[0205] 附图5A-B显示了称为4-39、4-59*03、4-34*09和4-34*02的示例性人类种系重链 可变区序列，它们适合于修饰或与超长CDR3序列一起使用（A)，以及这些序列的比对（B)。
[0206] 附图6显示了称为BLV1H12的示例性牛轻链可变区序列，其适合于修饰或与超长 CDR3序列一起使用（例如，包含超长CDR3序列的重链可变区序列）。
[0207] 附图 7A-B 显示了称为 V11-47、V11-40*1、V11-51*01 和 V12-18*02 的示例性轻链 可变区序列，它们适合于修饰或与超长CDR3序列一起使用（A)，以及这些序列的比对（B)。
[0208] 发明详述
[0209] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体，以及生产所述抗体的 材料（例如，蛋白质序列、遗传序列、细胞、文库）和方法（例如，人源化方法、文库方法）。 这种人源化抗体对于多种疾病状态或失调的治疗或预防是有用的。
[0210] 本文公开的内容还提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体，其中所述CDR3序列 长度是35个氨基酸或更长（例如，40个或更长、45个或更长、50个或更长、55个或更长、60 个或更长）和/或其中所述CDR3序列具有至少3个半胱氨酸残基或更多（例如，3个或更多 个半胱氨酸残基、4个或更多个半胱氨酸残基、5个或更多个半胱氨酸残基、6个或更多个半 胱氨酸残基、7个或更多个半胱氨酸残基、8个或更多个半胱氨酸残基、9个或更多个半胱氨 酸残基、10个或更多个半胱氨酸残基、11个或更多个半胱氨酸残基、或12个或更多个半胱 氨酸残基）。这样的抗体，如本文描述的，结合（例如，特异性或选择性结合）多种靶点，包 括，例如，蛋白质靶点，例如跨膜蛋白质（例如，GPCR、离子通道、转运蛋白、细胞表面受体）。
[0211] 本文公开的内容还提供了用于制备或制造包含超长CDR3序列的人源化抗体的方 法和材料。这样的材料包括蛋白质、遗传序列、细胞和文库。这样的方法包括人源化的方法 以及产生和筛选文库的方法。
[0212] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段。在一些实 施方式中，超长CDR3长度可以是35个氨基酸或更长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或 更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更长，或60个氨基酸或更长。在一些实施方式 中，超长CDR3可以包含3个或更多个半胱氨酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或 更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨酸残基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更 多个半胱氨酸残基，9个或更多个半胱氨酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更 多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱氨酸残基。超长CDR3可以包含半胱氨酸基序， 包括，例如，其中所述半胱氨酸基序选自由以下序列组成的组：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。可替代地，所述超长 CDR3 可以包含 半胱氨酸基序，包括，例如，其中所述半胱氨酸基序选自由以下序列组成的组： CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC (SEQ ID NO ：96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO： 97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX1(ICX 2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO :101)、 CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO :102)、Ccx8Cx5Cx4CX3CX 4CCXCX1C (SEQ ID NO :103)、 CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C (SEQ ID NO ： 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C (SEQ ID NO： 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC (SEQ ID NO ： 106) , CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C (SEQ ID NO: 150)、CX10C (SEQ ID NO :151)和 CX9C (SEQ ID NO: 152)。
[0213] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段，其中所述超 长CDR3包含X 1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸⑶或 缬氨酸（V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其 中X4是组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及 其中X 5是谷氨酰胺（Q)。在一些实施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以是TTVHQ(SEQ ID NO: 153),TSVHQ(SEQ ID NO ： 154),SSVTQ(SEQ ID NO ： 155),STVHQ(SEQ ID NO ： 156),ATVRQ(SEQ ID NO: 157)、TTVYQ (SEQ ID NO: 158)、SPVHQ (SEQ ID NO: 159)、ATVYQ (SEQ ID NO: 160)、 TAVYQ (SEQ ID NO :161)、TNVHQ (SEQ ID NO :162)、ATVHQ (SEQ ID NO :163)、STVYQ (SEQ ID NO: 164)、TIVHQ (SEQ ID NO: 165)、AIVYQ (SEQ ID NO: 166)、TTVFQ (SEQ ID NO: 167)、 AAVFQ (SEQ ID NO: 168)、GTVHQ (SEQ ID NO: 169)、ASVHQ (SEQ ID NO: 170)、TAVFQ (SEQ ID NO ：171), ATVFQ (SEQ ID NO ： 172), AAAHQ (SEQ ID NO ： 173), VVVYQ (SEQ ID N0：174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175)、TAVHQ(SEQ ID NO: 176)、ITVHQ(SEQ ID NO: 177)、ITAHQ(SEQ ID NO ：178), VTVHQ(SEQ ID N0：179) ；AAVHQ(SEQ ID NO ： 180), GTVYQ(SEQ ID N0：181), TTVLQ (SEQ ID NO: 182)、TTTHQ (SEQ ID NO :183)或 TTDYQ (SEQ ID NO: 184)。
[0214] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段，其中所述超 长CDR3包含（XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸 (F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。在一些实施 方式中，所述（XaX b)z 基序可以是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、 HYTYTYEff (SEQ ID NO ：219), KHRYTYEff (SEQ ID NO ：220), NYIYKYSF(SEQ ID N0：221), PYIYTYQF(SEQ ID NO ：222), SFTYTYEff (SEQ ID NO ：223), SYIYIYQff (SEQ ID NO ：224), SYNYTYSff(SEQ ID NO ：225), SYSYSYEY(SEQ ID NO ：226), SYTYNYDF (SEQ ID NO ：227), SYTYNYEff(SEQ ID NO ：228), SYTYNYQF(SEQ ID NO ：229), SYVffTHNF(SEQ ID N0：230), TYKYVYEff (SEQ ID NO ：231), TYTYTYEF(SEQ ID NO ：232), TYTYTYEff (SEQ ID N0：233), VFTYTYEF(SEQ ID NO ：234),AYTYEff(SEQ ID NO ：235),DYIYTY(SEQ ID NO ：236),IHSYEF(SEQ ID NO ：237),SFTYEF(SEQ ID NO ：238),SHSYEF(SEQ ID NO ：239),THTYEF(SEQ ID NO ：240), TWTYEF(SEQ ID NO :241)、TYNYEW(SEQ ID NO :242)、TYSYEF(SEQ ID NO :243)、TYSYEH(SEQ ID NO :244)、TYTYDF(SEQ ID NO :245)、TYTYEF(SEQ ID NO :246)、TYTYEW(SEQ ID NO :247)、 AYEF(SEQ ID NO :248)、AYSF(SEQ ID NO :249)、AYSY(SEQ ID NO :250)、CYSF(SEQ ID NO : 251),DYTY(SEQ ID NO ：252),KYEH(SEQ ID NO ：253),KYEff(SEQ ID NO ：254), MYEF(SEQ ID NO :255)、NWIY(SEQ ID NO :256)、NYDY(SEQ ID NO :257)、NYQW(SEQ ID NO :258)、NYSF(SEQ ID NO :259)、PYEW (SEQ ID NO :260)、RYNW (SEQ ID NO :261)、RYTY (SEQ ID NO :262)、 SYEF (SEQ ID NO :263)、SYEH (SEQ ID NO :264)、SYEW (SEQ ID NO :265)、SYKW (SEQ ID NO : 266)、SYTY (SEQ ID NO: 267)、TYDF (SEQ ID NO: 268)、TYEF (SEQ ID NO: 269)、TYEW (SEQ ID NO: 270)、TYQW (SEQ ID NO: 271)、TYTY (SEQ ID NO :272)或 VYEW (SEQ ID NO: 273)。
[0215] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段，其中所述超 长CDR3包含X 1X2X3X4X5Xn(X aXb)z基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨 酸（S)或缬氨酸（V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸 (A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸⑴或天冬氨 酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸 (L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙 氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z 是 1_4〇
[0216] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段，其中所述超长 CDR3包含：CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬 氨酸（V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸 (V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4 是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5 是谷氨酰胺（Q)，选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO : 41)、CX10CX6Cx5CXCX15C (SEQ ID NO :42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO :43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：44) , CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO :45)、CXiciCX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO :46)、 CX10CX6CX6CXCx7C (SEQ ID NO ：47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO ：48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO ：49) ,CX13CX8CX8C (SEQ ID NO ： 50) ,CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO ： 51) ,CX10CX5CX5C (SEQ ID NO : 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO : 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO : 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：55), CX10CX6CX5CXCX9C (SEQ ID NO ： 56), CX10CXCx4CX5CX11C (SEQ ID NO :57)、CX7CX3CX6CX5CXCX 5CX1(iC(SEQ ID NO :58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO :59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO :60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO :61)、 CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO ：62), CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO ：63), CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO :64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO :65)、CXiqCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO :66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO :67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO :68)、CX4CX6CX9CX2CX 11C (SEQ ID NO :69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO :70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、CX10CX6CX5C(SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO :73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID NO :74)、CX10CXCX6C (SEQ ID NO : 75)、CX10CX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、CX10CX4CX5CX12CX 2C (SEQ ID NO :77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO :78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO ： 79) ,CX10CX6CX5CXCXnC (SEQ ID NO ：80) ,CX16CX5CXCXCX14C (SEQ ID NO :81)、CX10CX5CXCX8Cx6C (SEQ ID NO : 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO :84)、CX1(ICX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO :85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：86) XX10CX6CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：87) ,CX10CX6CX5CXCX8C (SEQ ID NO :88)、CX1(ICX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO :89)、CXiciCX6CX5CX3CX 8C(SEQ ID NO : 90)、CX10CX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID NO :91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C (SEQ ID NO :92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO :93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95)，以及（XaXb) z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸残基，Xb 是 选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0217] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段，其中所述超 长CDR3包含：CX 1X2X3X4X5基序，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或 缬氨酸（V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中 X4是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q)，选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以 下序列组成的组：
[0218] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中X a是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0219] 本文公开的内容还提供了产生包含超长⑶R3的人源化抗体的文库的方法，包括： 组合编码超长CDR3的核酸序列与编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列，以产生编码 包含超长CDR3的人源化抗体的核酸；以及表达编码包含超长CDR3的人源化抗体的所述核 酸，以产生包含超长CDR3的人源化抗体的文库。
[0220] 本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库 的方法，所述超长CDR3包含非抗体序列，包括：组合编码超长CDR3的编码、编码人类可变区 框架（FR)序列的核酸序列以及编码非抗体序列的核酸序列，以产生编码包含超长CDR3和 非抗体序列的人源化抗体或其结合片段的核酸，表达编码包含超长CDR3和非抗体序列的 人源化抗体或其结合片段的所述核酸，以产生包含超长CDR3和非抗体序列的人源化抗体 或其结合片段的文库。
[0221] 本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库 的方法，所述超长CDR3包含非抗体序列。
[0222] 本文公开的内容还提供了产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库 的方法，所述超长CDR3包含半胱氨酸基序，包括：组合人类可变区框架（FR)序列以及编码 超长CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向该核酸序列中引入一个或多个核苷酸变化，该核 酸序列编码位于编码不同氨基酸残基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一个或多个半胱氨酸 残基之间的一个或多个氨基酸残基，以产生编码包含超长CDR3和半胱氨酸基序的人源化 抗体或其结合片段的核酸，该半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨 酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化；以及表达所述编码人源化抗体或其结合片段的 核酸，所述人源化抗体或其结合片段包含超长CDR3和半胱氨酸基序，该所述半胱氨酸基序 具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化， 以产生人源化抗体或其结合片段的文库，所述人源化抗体或其结合片段包含超长CDR3和 半胱氨酸基序，其中该所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨酸 残基之间引入的一个或多个核苷酸变化。
[0223] 本文公开的内容还提供了包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库，所 述超长CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗体或结合片段包含位于半胱氨酸基序中的半 胱氨酸残基之间的氨基酸残基的一个或多个取代。
[0224] 本文公开的内容还提供了产生包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文 库的方法，所述方法包括：组合编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列和编码牛超长 CDR3的核酸，表达编码人类可变区框架（FR)序列的核酸和编码牛超长CDR3的核酸，以产生 包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库。
[0225] 本文公开的内容还提供了包含X1X2X3X 4X5基序的⑶R3支架，其中X1是苏氨酸（T)、 甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨 酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨 酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)。
[0226] 蛋白质
[0227] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体。
[0228] 在一实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中所述 CDR3长度是35个氨基酸或更多（例如，40个或更多、50个或更多、55个或更多、60个或更 多）。这种人源化抗体可以包含超长CDR3内的至少3个半胱氨酸残基或更多（例如，4个 或更多，6个或更多、8个或更多）。
[0229] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3是长度35个氨基酸或更多，并且衍生自或基于非人类序列。超长CDR3序列可以 衍生自天然地产生超长⑶R3抗体的任何物种，包括反刍动物，例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0230] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3是长度35个氨基酸或更多，并且衍生自非抗体序列。所述非抗体序列可以衍生 自任何蛋白质家族，包括但不限于，趋化因子、生长因子、肽、细胞因子、细胞表面蛋白、血清 蛋白、毒素、细胞外基质蛋白、凝血因子、分泌的蛋白，等等。所述非抗体序列可以是人类或 非人类来源的，可以包含非抗体蛋白质的一部分，例如肽或结构域。超长CDR3的非抗体序 列可以含有来自其天然序列的突变，包括氨基酸改变（例如，取代）、插入或删除。可以在处 于非抗体序列之间的接点处工程化额外的氨基酸，以促进或增强人源化抗体内非抗体序列 的适当折叠。
[0231] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，包括，例 如，4个或更多，6个或更多，以及8个或更多。
[0232] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3长度是35个或更多个氨基酸，并且包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，其中所 述超长CDR3是多特异性抗体的组分。所述多特异性抗体可以是双特异性的，或包含更多的 效价。
[0233] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个半胱氨酸残基或更多，其中部分人 类超长CDR3是免疫缀合物的组分。
[0234] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化抗体，其中 所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个半胱氨酸残基或更多，其中包含超 长CDR3的人源化抗体结合跨膜蛋白质靶点。这样的跨膜靶点可以包括，但不限于，GPCR、离 子通道、转运蛋白和细胞表面受体。
[0235] 基因序列
[0236] 本文公开的内容提供了编码包含超长CDR序列的人源化抗体的基因序列（例如， 基因、核酸、多核苷酸）。
[0237] 本文公开的内容还提供了编码超长CDR3的基因序列（例如，基因、核酸、多核苷 酸）。
[0238] 在一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体的 基因序列，其中所述CDR3长度是35个或更多个氨基酸（例如，40个或更多、50个或更多、 55个或更多、60个或更多）。这种人源化抗体可以包含超长CDR3内的至少3个或更多个半 胱氨酸残基（例如，4个或更多，6个或更多、8个或更多）。
[0239] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3是长度35个氨基酸或更多，并且衍生自或基于非人类序列。编 码超长CDR3的遗传序列可以衍生自天然地产生超长CDR3抗体的任何物种，包括反刍动物， 例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0240] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3是长度35个氨基酸或更多，并且衍生自非抗体蛋白质序列。所 述编码非抗体蛋白质序列的基因序列可以衍生自任何蛋白质家族，包括但不限于，趋化因 子、生长因子、肽、细胞因子、细胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、细胞外基质蛋白、凝血因子、分 泌的蛋白，等等。所述非抗体蛋白质序列可以是人类或非人类来源的，可以包含非抗体蛋白 质的一部分，例如肽或结构域。超长CDR3的非抗体蛋白质序列可以含有来自其天然序列的 突变，包括氨基酸改变（例如，取代）、插入或删除。可以在处于非抗体序列之间的接点处工 程化另外的氨基酸，以促进或增强人源化抗体内非抗体序列的适当折叠。
[0241] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个或更多个半胱氨 酸残基，包括，例如，4个或更多，6个或更多，以及8个或更多。
[0242] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3长度是35个或更多个氨基酸，并且包含至少3个或更多个半胱 氨酸残基，其中所述超长CDR3是多特异性抗体的组分。所述多特异性抗体可以是双特异性 的，或包含更多的效价。
[0243] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个半胱氨酸残基或 更多，其中所述超长CDR3是免疫缀合物的组分。
[0244] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了编码包含超长CDR3的人源化抗体 的基因序列，其中所述CDR3长度是35个氨基酸或更多，并且包含至少3个半胱氨酸残基或 更多，其中包含超长CDR3的人源化抗体结合跨膜蛋白质靶点。这样的跨膜靶点可以包括， 但不限于，GPCR、离子通道、转运蛋白和细胞表面受体。
[0245] 文库和阵列
[0246] 本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体的集合、文库和阵列。
[0247] 在一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体的 文库或阵列，其中所述文库或阵列的至少两个成员在所述超长CDR3序列中的至少一个半 胱氨酸的位置上是不同的。通过所述超长CDR3序列中不同数量的半胱氨酸（例如，至少3 个或更多个半胱氨酸残基，例如4个或更多个，6个或更多个以及8个或更多个）和/或通 过不同的二硫键形成，以及因此不同的环结构，可以增强结构多样性。
[0248] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体 的文库或阵列，其中所述文库或阵列的至少两个成员在位于所述超长CDR3中的半胱氨酸 之间的至少一个氨基酸处是不同的。就此来说，所述文库或阵列的成员可以含有CDR3的相 同位置处的半胱氨酸，产生相似的总体结构折叠，但通过不同的氨基酸侧链带来细微的差 异。这样的文库或阵列对于亲合力成熟可能是有用的。
[0249] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体 的文库或阵列，其中至少两个超长CDR3序列在长度上是不同的（例如，氨基酸长度为35个 或更多个氨基酸，例如40个或更多、50个或更多、55个或更多、以及60个或更多）。在文库 或阵列的成员之间，氨基酸和半胱氨酸含量可以或可以不变化。不同长度的超长CDR3序列 可以提供独特的结合位点，包括，例如，由于作为长度改变的结果的空间差异。
[0250] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体 的文库或阵列，其中所述文库的至少两个成员在用于构建包含超长CDR3的人源化抗体的 人类框架方面是不同的。
[0251] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3序列的人源化抗体 的文库或阵列，其中所述文库或阵列的至少两个成员不同在于具有包含一部分超长CDR3 的非抗体蛋白质序列。这样的文库或阵列可以含有多个非抗体蛋白质序列，包括趋化因子、 生长因子、肽、细胞因子、细胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、细胞外基质蛋白质、凝血因子、分 泌的蛋白质、病毒或细菌蛋白质，等等。所述非抗体蛋白质序列可以是人类或非人类来源 的，可以包含非抗体蛋白质的一部分，例如肽或结构域。超长CDR3的非抗体蛋白质序列可 以含有来自其天然序列的突变，包括氨基酸改变（例如，取代）、插入或删除。可以在处于超 长CDR3内的非抗体序列之间的接点处工程化另外的氨基酸，以促进或增强人源化抗体内 非抗体序列的适当折叠。
[0252] 本文公开的内容的文库或阵列可以是本领域公知的几种形式。所述文库或阵列可 以是可定址的文库或可定址的阵列。所述文库或阵列可以处于展示形式，例如，抗体序列可 以在噬菌体、核糖体、mRNA、酵母或哺乳动物细胞上表达。
[0253] 细胞
[0254] 本文公开的内容提供了包含基因序列的细胞，所述基因序列编码包含超长CDR3 序列的人源化抗体。
[0255] 在一种实施方式中，本文公开的内容提供了表达包含超长CDR3的人源化抗体的 细胞。所述细胞可以是原核或真核的，包含超长CDR3的人源化抗体可以在细胞表面表达， 或分泌到培养基中。当在细胞表面展示时，人源化抗体优选地含有用于向质粒膜中插入的 基序，例如，处于C-末端的跨膜结构域，或脂质附着位点。对于细菌细胞，包含超长CDR3的 人源化抗体可以分泌到周质中。当细胞是真核的时，它们可以用编码包含超长CDR3的人源 化抗体的遗传序列瞬时转染。可替代地，可以通过本领域技术人员公知的方法，转染或转导 编码包含超长CDR3的人源化抗体的遗传序列来创建稳定的细胞系或稳定的库。可以通过 荧光活化的细胞分选（FACS)或通过选择编码药物抗性的基因来挑选细胞。对于生产包含 超长CDR3序列的人源化抗体有用的细胞包括原核细胞如大肠杆菌，真核细胞如酵母，酿酒 酵母（Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤氏酵母（Pichia pastoris)，中国仓鼠卵 巢（CHO)细胞，猴细胞如C0S-1，或人类细胞如HEK-293、HeLa、SP-l。
[0256] 人源化方法
[0257] 本文公开的内容提供了制造包含超长CDR3序列的人源化抗体的方法，包括将衍 生自非人类CDR3的超长CDR3序列工程化到人类框架之中的步骤。所述人类框架可以是种 系来源的，或可以衍生自非种系（例如，突变的或亲和力成熟的）序列。本领域技术人员 公知的的遗传工程技术，包括在本文中公开的，可以用于产生含有人类框架和非人类超长 CDR3的杂合DNA序列。不同于可以由衍生自七个家族之一的V区基因编码的人类抗体，产生 超长CDR3序列的牛抗体看起来利用了单个V区家族，其可以被认为与人类VH4家族最为同 源。在优选的实施方式，衍生自牛的超长CDR3序列被人源化，以产生包含超长CDR3的抗体， 衍生自VH4家族的人类V区序列可以遗传地融合到牛衍生的超长CDR3序列。人类抗体基因 座中的示例性VH4种系基因序列在附图5A中显示（例如，SEQ ID NO :31-34和368-371)。
[0258] 本文公开的内容还提供了人源化抗体可变区的方法，包括遗传地组合编码非 人类超长CDR3(ULCDR3)的核酸序列与编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列的步 骤。还提供的是制造人源化抗体可变区的方法，包括选择包含FR1、FR2和FR3的人类 框架序列；选择CDRl序列；选择CDR2序列；选择超长CDR3序列；以及组合所述序列为 FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3-UIXDR3。还提供的是制造人源化抗体可变区序列的方法，包括选 择包含编码FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3的序列的人类抗体可变区序列；选择编码非人类超长 CDR3(ULCDR3)的序列；以及将步骤（a)的人类序列与步骤（b)的非人类序列按阅读框融 合，以产生编码 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-ULCDR3 的序列。
[0259] 在一种实施方式中，本文公开的内容提供了人类VH4框架序列与牛衍生的超长 CDR3的融合物，例如，可以通过以下步骤实现的。首先，鉴定V区遗传序列的第二个半胱氨 酸，以及编码所述第二个半胱氨酸的核苷酸序列。一般地，所述第二个半胱氨酸标记了 CDR3 的上游（N-末端）两个残基处的框架与⑶R3的边界。第二，鉴定牛衍生的V区序列中的第 二个半胱氨酸，其类似地标记了⑶R3的上游（N-末端）2个残基。第三，编码人类V区的遗 传材料与编码超长CDR3的遗传序列组合。因而，可以制造遗传融合物，其中超长CDR3序列 位于人类V区序列的框架中。优选地，包含超长CDR3的人源化抗体在氨基酸组成方面尽可 能地接近人类。任选地，J区序列可以从牛衍生的序列突变为人类序列。还任选的是，人源 化的重链可以与人类轻链配对。
[0260] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了人类超长CDR3重链与非人类轻链 的配对。
[0261] 在另一种实施方式中，本文公开的内容提供了包含超长CDR3的人源化重链与人 类轻链的配对。优选地，所述轻链与已知与牛超长CDR3重链配对的牛轻链是同源的。示例 性牛轻链在附图7A中示出（例如，SEQ ID NO:36-39和373-376)。
[0262] 文库方法
[0263] 本文公开的内容提供了制造包含人源化抗体的文库的方法，所述人源化抗体包含 超长⑶R3序列。在WO 2010/054007中描述了制造空间定址文库的文库的方法。在酵母、 噬菌体、大肠杆菌或哺乳动物细胞中制造文库的方法是本领域公知的。
[0264] 本文公开的内容还提供了筛选包含超长CDR3序列的人源化抗体的文库的方法。
[0265] 定义
[0266] "超长⑶R3"或"超长⑶R3序列"在本文中可互换地使用，包括不是衍生自人类抗 体序列的CDR3或CDR3序列。超长CDR3长度可以是35个氨基酸或更长，例如，40个氨基 酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更长，或60个氨基酸或 更长。超长CDR3的长度可以包括非抗体序列。超长CDR3可以包含非抗体序列，包括，例 如，白细胞介素序列、激素序列、细胞因子序列、毒素序列、淋巴因子序列、生长因子序列、趋 化因子序列、毒素序列、或其组合。优选地，超长⑶R3是重链⑶R3 (⑶R-H3或⑶RH3)。优 选地，超长CDR3是衍生自或基于反刍动物（例如，牛）序列的序列。超长CDR3可以包含 至少3个或更多个半胱氨酸残基，例如，4个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨 酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱 氨酸残基（例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个或更多个）。超长^1?3可以包含以下基序 中的一种或多种：半胱氨酸基序，X 1X2X3X4X5基序，CX 1X2X3X4X5基序，或（X aXb)z基序。"半胱 氨酸基于"是超长CDR3中氨基酸残基的节段，其包含3个或更多个半胱氨酸残基，包括4 个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨酸残基，7个 或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多个半胱氨酸残基，10个或 更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱氨酸残基。半 胱氨酸基序可以包含选自由以下序列组成的组的氨基酸序列：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO: 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95)。可替代地，半胱氨酸基序可以包含选自由以下序列 组成的组的氨基酸序列：
[0267] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。半胱氨 酸基序优选地位于超长CDR3内X1X2X3X 4X5基序和（XaXb) z基序之间。I1X2X3X4X 5基序"是超 长CDR3中一系列的五个连续氨基酸残基，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、 丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X 2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙 氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天 冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或 亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)。在一些实施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ (SEQ ID NO :167)、AAVFQ (SEQ ID NO :168)、GTVHQ (SEQ ID NO :169)、ASVHQ (SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO: 184)。WCX1X2X3X4X5基序"是超长⑶R3中的一系列六个连续氨基酸残基，其中第一个氨 基酸残基是半胱氨酸，其中X 1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)。在一些实施方式中，所述CX1X2X3X4X 5基序是CTTVHQ(SEQ ID NO: 185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO:189)、CTTVYQ(SEQ ID NO:190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193)、CTNVHQ(SEQ ID NO: 194)、CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、 CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、CITVHQ(SEQ ID NO:209)、CITAHQ(SEQ ID NO:210),CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212),CGTVYQ(SEQ ID N0:213), CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。"（XaXb)z" 基序是超长CDR3中两个氨基酸残基的重复系列，其中X a是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪 氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是 1-4。在一些实施方式中，（X aXb)z 基序可以包含 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID NO:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO:219), KHRYTYEff (SEQ ID NO:220), NYIYKYSF(SEQ ID N0:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227) , SYTYNYEff (SEQ ID NO: 228) , SYTYNYQF (SEQ ID NO: 229) , SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO:233)、VFTYTYEF(SEQ ID NO:234)、AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、 IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、 TYSYEH(SEQ ID NO:244),TYTYDF(SEQ ID NO:245),TYTYEF(SEQ ID NO:246),TYTYEff(SEQ ID NO:247),AYEF(SEQ ID NO:248),AYSF(SEQ ID NO:249),AYSY(SEQ ID NO:250)XYSF(SEQ ID NO:251),DYTY(SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO :260)、RYNff(SEQ ID NO :261)、RYTY(SEQ ID NO :262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO :264)、SYEW(SEQ ID NO :265)、SYKW(SEQ ID NO :266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO :268)、TYEF(SEQ ID NO :269)、TYEW(SEQ ID NO :270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。在一些实施方式中，所述 (XaXb) z基序是YXYXYX。超长⑶R3可以包含一氨基酸序列，所述氨基酸序列衍生自或基于 SEQ ID NO :40(参见，例如，SEQ ID NO: 1-4的氨基酸残基3-6;还参见，例如，附图2A-C中的 VH种系序列）。包含超长CDR3的可变区可以包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID N0:1(CTTVHQ)、SEQ ID N0:2(CTSVHQ)、SEQ ID N0:3(CSSVTQ)或SEQ ID N0:4(CTTVHP)。这样 的序列可以衍生自或基于牛种系VH基因序列（例如，SEQ ID NO: 1)。超长CDR3可以包含衍 生自或基于非人类DH基因序列的序列，例如，SEQ ID N0:5(还参见，例如Koti,等人（2010) Mol. Immunol. 47:2119-2128)，或可选择的序列，例如，SEQ ID N0:6、7、8、9、10、ll 或 12(还 参见，例如，附图2A-C中的DH2种系序列）。超长CDR3可以包含衍生自或基于JH序列的序 列，例如，SEQ ID NO: 13(还参见，例如 Hosseini,等人（2004) Int. Immunol. 16:843-852)， 或可选择的序列，例如，SEQIDN0:14、15、16或17(还参见，例如，附图2A-C中的JH1种系 序列）。在一实施方式中，超长CDR3可以包含衍生自或基于非人类VH序列的序列（例如， SEQ ID N0:l、2、3或4;可替代地，附图2A-C中的VH序列）和/或衍生自或基于非人类DH 序列的序列（例如，SEQ ID N0:5、6、7、8、9、10、ll或12 ;可替代地，附图2A-C中的DH序列） 和/或衍生自或基于JH序列的序列（例如，SEQ ID NO: 13、14、15、16或17 ;可替代地，附图 2A-C中的JH序列），和任选的额外的序列，所述额外的序列包含二至六个或更多个氨基酸 (例如，IR、IF、SEQ ID N0:18、19、20或21)，例如，位于VH衍生的序列和DH衍生的序列之 间。在另一个实施方式中，超长CDR3可以包含衍生自或基于SEQ ID N0:22、23、24、25、26、 27或28的序列（还参见，例如，附图2A-C中的SEQ ID NO: 276-359)。
[0268] 本文公开的"分离的"生物分子，例如各种多肽、多核苷酸和抗体，是指已经被鉴定 和分离，和/或从其天然环境的至少一种成分中回收的生物分子。
[0269] "拮抗剂"是指部分地或完全地阻断、抑制或中和多肽的活性（例如，生物学活性） 的任何分子。"拮抗剂"还涵盖的是完全地或部分地抑制编码多肽的mRNA的转录或翻译的 分子。适合的拮抗剂分子包括，例如，拮抗剂抗体或抗体片段；天然多肽的片段或氨基酸序 列变体；肽；反义寡核苷酸；小的有机分子；以及编码多肽拮抗剂或拮抗剂抗体的核酸。提 及"一种"拮抗剂涵盖了单一的拮抗剂或两个或更多个不同拮抗剂的组合。
[0270] "激动剂"是指部分地或完全地模拟多肽的生物学活性的任何分子。"激动剂"还 涵盖的是刺激编码多肽的mRNA的转录或翻译的分子。适合的激动剂分子包括，例如，激动 剂抗体或抗体片段；天然多肽；天然多肽的片段或氨基酸序列变体；肽；反义寡核苷酸；小 的有机分子；以及编码多肽激动剂或抗体的核酸。提及"一种"激动剂涵盖了单一的激动剂 或两个或更多个不同激动剂的组合。
[0271] "分离的"抗体是指一种抗体，其已经被鉴定和分离，和/或从其天然环境的成分 中回收。其天然环境的污染成分是干扰所述抗体的诊断或治疗用途的材料，可包括酶、激 素和其它蛋白的或非蛋白的溶质。在优选的实施方式中，分离的抗体将被纯化至（1)按 抗体的重量计算大于95% (例如，通过Lowry法测定的），优选的按重量计算超过99%， (2)达到足以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度（例如，通过使用旋 转杯测序仪），或（3)达到在还原或非还原条件下SDS-PAGE的同质性（例如，使用考马斯 (Coomassie?)蓝或优选的银黄染色）。分离的抗体包括重组细胞内原位的抗体，因为不存 在抗体的天然环境的至少一种成分。类似地，分离的抗体包括处于重组细胞周围的培养基 中的抗体。分离的抗体可以通过至少一种纯化步骤来制备。
[0272] "分离的"核酸分子是指从抗体核酸的天然来源中通常与之相关的至少一种杂 质核酸分子中鉴定和分离的核酸分子。分离的核酸分子不同于其天然存在的形式或环境 (setting)。因此分离的核酸分子不同于在天然细胞中存在的核酸分子。然而，分离的核酸 分子包括被包含在表达抗体的细胞中的核酸分子，其中，例如，核酸分子位于与天然细胞的 不同的染色体位置中。
[0273] Kabat 中的可变域残基编号，或 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991)中的氨基酸位置编号，以及其变体，是指在Kabat等人中用于 抗体编码的重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用这种编号系统，实际上线性的氨基 酸序列可以含有更少或额外的氨基酸，相应于可变域的FR或CDR的缩短，或插入。例如， 重链可变域可以包括处于H2的残基52之后的单个氨基酸插入（例如，根据Kabat的残基 52a)，以及处于重链FR残基82之后的插入的残基（例如，根据kabat的残基82a、82b和 82c，等）。对于给定抗体，残基的Kabat编号可以通过在抗体序列的同源性区域上与"标准 的" Kabat编号的序列比对来确定。
[0274] "基本上相似的"或"基本上相同的"是指在两个数值（一般地，一个数值与本文公 开的抗体相关，另一个数值与参比/比较抗体相关）之间足够高的相似性，从而本领域技术 人员将认为在所述值所衡量的生物学特征的情境内两个值之间的差异很小或没有生物学 和/或统计学上的显著性。作为参考/比较抗体的值的函数，所述两个值之间的差异优选 地小于约50 %，优选地小于约40 %，优选地小于约30 %，优选地小于约20 %，优选地小于约 10%。
[0275] "结合亲和性" 一般是指分子（例如，抗体）的单个结合位点与它的结合配体（例 如，抗原）之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外标明，"结合亲和性"是指固有的 结合亲和性，其反映了结合配对（例如，抗体和抗原）的成员之间1:1的相互作用。分子X 与它的配体Y的亲和力一般可以通过解离常数来表示。亲和力可以通过本领域已知的常见 方法来测量，包括本文描述的那些。低亲和力抗体一般缓慢地结合抗原并倾向于容易解离， 而高亲和力抗体一般更快地结合抗原并倾向于保持结合更久。测量结合亲和性的多种方法 是本领域已知的，它们的任何一种可以用于本文公开的内容。
[0276] "加载速率（on-rate) "或"缔合的速率"或"缔合速率"或"km"可以使用表面胞 质团共振技术根据供应商的指导来测定，例如，Biacore (例如，1^3(3〇^4100，1^3〇〇^?-2000, Biacore?-3000, Biacore, Inc.，Piscataway, N. J.)羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片 (CM5, Biacore Inc.)〇
[0277] "载体"是指能够转运与之连接的另一个核酸的核酸分子。一种类型的载体是"质 粒"，是指在其中可以连接其他DNA片段的环状双链DNA环。另一种类型的载体是噬菌体载 体。另一种类型的载体是病毒载体，其中其他的DNA片段可以连接到病毒基因组中。某些 载体能够在导入它们的宿主细胞中自主复制（例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离 哺乳动物载体）。其他载体（例如，非游离哺乳动物载体）可以在导入宿主细胞中时被整合 到宿主细胞的基因组中，从而随宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与它们可操 作连接的基因的表达。这样的载体在此被称为"重组表达载体"（或简称"重组载体"）。一 般地，在重组DNA技术中有实用性的表达载体常常是质粒的形式。因而，"质粒"和"载体" 有时可互换地使用，因为质粒是常用的载体形式。
[0278] "基因"是指核酸（例如，DNA)序列，其包含多肽、前体或RNA(例如，rRNA、tRNA) 的生产所必需的编码序列。多肽可以由全长编码序列或由编码序列的任何部分来编码，只 要保持了全长或片段的期望的活性或功能性质（例如，酶活性、配体结合、信号转导、免疫 原性，等等）。该术语还涵盖结构基因的编码区域以及距每一端约Ikb或更远距离邻近于 编码区域的5'和3'末端的序列，从而所述基因相应于全长mRNA的长度。位于编码区域的 5'并在mRNA上存在的序列被称为5'非翻译序列。位于编码区域的3'或下游并在mRNA 上存在的序列被称为3'非翻译序列。术语"基因"涵盖了基因的cDNA和基因组形式。基 因的基因组形式或克隆含有被非编码序列中断的编码区域，所述非编码序列被称为"内含 子"或"间插区"或"间插序列"。内含子是转录成核RNA (hnRNA)的基因的片段；内含子可 以含有调节元件例如增强子。内含子从核的或初级转录产物中被除去或"剪出"，因而在信 使RNA(mRNA)转录产物中没有内含子。mRNA在翻译期间起作用，来指定新生多肽中氨基酸 的序列或顺序。除了含有内含子之外，基因的基因组形式还可以包括存在于RNA转录产物 上、位于序列的5'和3'末端的序列。这些序列被称为"侧翼"序列或区域（这些侧翼序列 位于mRNA转录产物上存在的非翻译序列的5'或3'）。5'侧翼区域可能含有调节序列，例 如，启动子和增强子，它们控制或影响基因的转录。3'侧翼区域可能含有指导转录终止、转 录后裂解和多聚腺苷酸化的序列。
[0279] "多核苷酸"或"核酸"在本文中可互换地使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物， 包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基，和/ 或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶、或通过合成反应掺入到聚合物中的任何底 物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸和它们的类似物。如果存在， 在聚合物的组装之前或之后，可以进行对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷 酸部分打断。多核苷酸可以在合成之后被进一步修饰，例如，通过与标记物结合。其他类型 的修饰包括，例如，"加帽（caps) "，用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，核苷间修 饰，例如，具有不带电的连键（膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺、氨基甲酸酯，等）和具有带电的 连键（例如，硫代磷酯、二硫代磷酸酯，等）的那些，含有悬垂部分的那些，例如，蛋白质（例 如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L 一赖氨酸，等），具有嵌入剂（例如，吖啶、补骨脂素， 等）的那些，含有螯合剂（例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属，等）的那些，含有烷化剂 的那些，具有修饰的连键（例如，α -异头核酸，等）的那些，以及多核苷酸的未修饰的形式。 进一步的，例如，通常存在于糖中的任何羟基基团可以被膦酸酯基团、磷酸基团置换，被标 准保护基团保护，或被活化来制备与其他核苷酸的连键，或可以被缀合到固体或半固体支 持物上。5'和3'末端OH可以被磷酸化，或用胺或1到20个碳原子的有机加帽基团部分来 取代。其他羟基也可以被衍生化为标准保护基团。多核苷酸还可以含有本领域公知的核糖 或脱氧核糖的类似形式，包括，例如，2' -0-甲基-，2' -0-烯丙基，2' -氟-或2' -叠氮-核 糖，碳环的糖类似物，α -异头糖，差向异构的糖，例如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋 喃糖、景天庚酮糖、无环类似物，以及基础核苷类似物，例如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯 键可以被可选择的连接基团替代。这些可选择的连接基团包括，但不限于，其中磷酸盐被 ?(〇)3("硫代"）、？(5)5("二硫代"）、〃(0)殿2("酰胺化"）、？(0)1^(0)(?'、0)或01 2("甲 缩醛"）替换的实施方式，其中每个R或R'独立地是H或取代的或未取代的烷基（1-20 C)， 任选地含有醚（O)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基（araldyl)。多核苷酸中的所有 连键不必是相同的。上文的描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
[0280] "寡核苷酸"是指短的，一般为单链的，一般为合成的多核苷酸，其长度一般地而不 是必然地小于约200个核苷酸。术语"寡核苷酸"和"多核苷酸"不是互斥的。上文对多核 苷酸的描述同样地和完全地适合于寡核苷酸。
[0281] "严格杂交条件"是指一些条件，在所述条件下，一般在复杂的核酸混合物中，探针 将与其目标子序列杂交，而不与其他的序列杂交。严格条件是序列依赖性的，在不同环境中 是不同的。更长的序列在更高的温度下特异性杂交。对于核酸杂交的广泛的指导可以在 Tijssen,Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Probes, ''Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)中找到。一般地，选择严格条件为比定义的离子强度pH下 特定序列的热熔点（Tm)低约5-10°C。Tm可以是温度（在定义的离子强度、pH和核酸浓度 下），在该温度下50%与目标互补的探针与目标序列杂交处于平衡状态（目标序列过量存 在，在Tm时，50 %的探针被占据处于平衡状态）。严格调节还可以添加去稳定剂例如甲酰 胺来实现。对于选择性或特异性杂交，阳性信号可以是至少两倍的背景杂交，优选的10倍 背景杂交。示例性严格杂交条件可以是如下的：50%甲酰胺、5XSSC和1% SDS，在42°C孵 育，或 5XSSC、1% SDS、在 65°C孵育，在 0· 2XSSC 和 0· 1% SDS 中 65°C下洗涤。
[0282] 当提及细胞、核酸、蛋白质或载体使用时，"重组"表明该细胞、核酸、蛋白质或载体 已经通过导入异源核酸或蛋白质或天然核酸或蛋白质的改变被修饰，或者所述细胞来自这 样修饰的细胞。例如，重组细胞表达在细胞的天然（非重组）形式下不不存在的基因，或表 达天然基因，所述天然基因被过量表达或被异常表达，例如，表达为非天然存在的片段或剪 接变体。所述"重组核酸"在本文中是指最初在试管中形成的核酸，一般通过核酸的操作， 例如使用聚合酶和内切酶，处于自然中通常不存在的形式下。照这样，实现了不同序列的可 操作的连接。因而，处于线性形式的分离的核酸、或通过将通常不接合的DNA分子连接而在 体外形成的表达载体，对于本发明来说都被认为是重组的。要理解的是，一旦重组核酸被制 造和导入宿主细胞或生物体，它将非重组性地复制，例如，利用宿主细胞的体内细胞机制而 不是体外操作；然而，这样的核酸一旦被重组地生产，虽然随后的复制是非重组性的，对于 在此公开的目的而言仍被认为是重组的。类似地，"重组蛋白质"是使用重组技术制造的蛋 白质，例如，通过如上文描述的表达重组核酸。
[0283] 对于肽或多肽序列"氨基酸序列同一性百分比"是指在比对序列并在必要时 引入空位来实现最大百分比的序列同一性时，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸 残基相同的氨基酸残基的百分比，任何保守性取代不认为是序列同一性的部分。为了确定 氨基酸序列同一性百分比的比对可以用本领域技术人员知道的各种方式来实现，例如，使 用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)软件。本 领域技术人员可以确定用于衡量比对的合适的参数，包括在被比较的序列全长上实现最大 对准所需的任何算法。
[0284] 术语"多肽"、"肽"和"蛋白"可互换地使用来指代氨基酸残基的聚合物。该术语 还适用于这样的氨基酸聚合物，在其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸 的人工化学模拟物，还适合于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
[0285] "氨基酸"是指天然存在的和合成的氨基酸，以及功能上类似于天然存在的氨基酸 的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些，以及在后 期被修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、gamma-羧基谷氨酸和0-磷酸丝氨酸。氨基酸类 似物是指一类化合物，其具有与天然存在的氨基酸相同的基础化学结构，例如，结合到氢的 α碳、羧基基团、氨基基团和R基团，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲 基锍。这种类似物可以具有修饰的R基团（例如，正亮氨酸）或修饰的肽主干，但是保持了 与天然存在的氨基酸相同的基础化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结 构不同的结构、但是以与天然存在的氨基酸类似地方式起作用的化合物。
[0286] "保守性修饰的变体"适用于氨基酸和核酸序列。"氨基酸变体"是指氨基酸序列。 对于特定的核酸序列，保守性修饰的变体是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那 些核酸，或在所述核酸不编码氨基酸序列时，是指基本上相同的或相关的（例如，天然连续 的）序列。由于遗传密码的简并性，许多功能上相同的核酸编码了大多数蛋白质。例如， 密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因而，在由密码子指代的丙氨酸的每 个位置，该密码子可以被改变为所描述的相应密码子的另一个而不改变编码的多肽。这种 核酸变体是"沉默变体"，其是一种保守性修饰的变体。在本文中编码多肽的每种核酸序列 也描述了所述核酸的沉默变体。本领域技术人员将认识到，在某些情境下，核酸中的每个 密码子（除了 AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密码子，以及TGG，其通常是色氨酸的唯一密 码子）可以被修改以产生功能上相同的分子。因而，编码多肽的核酸的沉默变体就表达的 产物而言在描述的序列中是隐含的，但对于实际的探针序列不是。对于氨基酸序列，熟练 技术人员将认识到，改变、添加或删除编码序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸的、对 核酸、肽、多肽或蛋白质序列的单独的取代、添加或删除是"保守性修饰的变体"，包括其中 改变引起了氨基酸与化学上相似的氨基酸的取代。提供了功能上相似的氨基酸的保守性 取代表是本领域公知的。这种保守性修饰的变体是本文公开的多态性变体、种间同源物和 等位基因之外的，并且不排除它们。典型的保守性取代包括：1)丙氨酸（A)、甘氨酸（G); 2)天冬氨酸（D)、谷氨酸（E) ;3)天冬酰胺（N)、谷氨酰胺（Q) ;4)精氨酸（R)、赖氨酸（K); 5)异亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、缬氨酸（V) ;6)苯丙氨酸（F)、酪氨酸（Y)、 色氨酸（W) ;7)丝氨酸（S)、苏氨酸（T);和8)半胱氨酸（C)、甲硫氨酸（M)(也参见，例如 Creighton, Proteins(1984)) 〇
[0287] "抗体"（Ab)和"免疫球蛋白"（Ig)是具有相似的结构特征的糖蛋白。抗体可以 展现对特定抗原的结合特异性，免疫球蛋白可以包括抗体和一般缺乏抗原特异性的其他抗 体样分子。例如，后一种类的多肽是由淋巴系统以低水平、以及由骨髓瘤以提高的水平产生 的。
[0288] "抗体"和"免疫球蛋白"在广义上可互换地使用，包括单克隆抗体（例如，全长或 完整的单克隆抗体）、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体（例如，双特异性抗体，只要它 们展现了期望的生物学活性），还可以包括某些抗体片段（如本文中更详细地描述的）。抗 体可以是人类的、人源化的和/或亲和力成熟的。抗体可以指免疫球蛋白和免疫球蛋白部 分，无论是天然的、部分的还是完全合成的，例如，重组生产的，包括含有免疫球蛋白分子的 可变区的至少一部分、足以形成抗原结合位点的抗体的任何部分。因此，抗体或其部分包括 具有结合结构域的任何蛋白质，所述结合结构域同源于或基本上同源于免疫球蛋白抗原结 合位点。例如，抗体可以指含有两条重链（其可以表示为H和H'）和两条轻链（其可以表 示为L和L'）的抗体，其中每条重链可以是全长免疫球蛋白重链或其足以形成抗原结合位 点的部分（例如，重链包括但不限于VH链、VH-CHl链和VH-CH1-CH2-CH3链），每条轻链可 以是全长轻链或其足以形成抗原结合位点的部分（例如，轻链包括但不限于VL链和VL-CL 链）。每条重链（H和H'）与一条轻链（分别为L和L'）配对。一般地，抗体最少包括可变重 (VH)链和/或可变轻（VL)链的全部或至少一部分。抗体还可以包括恒定区的全部或一部 分。例如，全长抗体是具有两条全长重链（例如，VH-CH1-CH3-CH3或VH-CH1-CH2-CH3-CH4) 和两条全长轻链（VL-CL)和铰链区的抗体，例如，由抗体分泌性B细胞产生的抗体，以及具 有相同结构域的合成生产的抗体。另外，"抗体"是指免疫球蛋白家族的蛋白质，或包含免 疫球蛋白的片段、能够非共价地、可逆地以及以特异性方式结合相应抗原的多肽。示例性抗 体结构单元包括四聚体。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每个对具有一条"轻"链 (约25 kD)和一条"重"链（约50-70kD)，通过二硫键连接。公认的免疫球蛋白基因包括 Κ、λ、α、Υ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链被分类 为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，其随后定义了免疫球蛋白类型，IgG、IgM、 IgA、IgD和IgE。每条链的N-末端划定了主要对抗原识别负责的约100到110个或更多个 氨基酸的可变区。术语可变轻链（VL)和可变重链（VH)分别是指轻链和重链的这些区域。
[0289] "可变"是指这样的事实，在抗体之间在序列上可变域（也称为可变区）的某些 部分广泛地不同，被用于每种特定抗体的结合和特异性方面。然而，可变性在抗体的整个 可变域上不是均匀分布的。它一般集中于处在轻链可变域和重链可变域中称为互补决定 区（⑶R)或高变区（HVR)的三个片段中。⑶R包括Kabat、Chothia和MGT中指明的那些， 如本文中可变区序列内显示的。可变域的更高保守性的部分被称为框架（FR)。天然重链 和轻链的可变域各自包含四个FR区，很大程度上采用β -片层结构，由三个⑶R连接，其 形成环形连接，在某些情况下形成β_片层结构的一部分。每条链中的CDR通过FR紧密 邻近地结合在一起，与来自另一个链的⑶R-同形成抗体的抗原结合位点（参见Kabat等 K . Sequences of Proteins of Tmmunol ogical Interest,第五版，National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991))。恒定域没有直接涉及抗体与抗原的结合，但是展现出各 种效应物功能，例如在抗体依赖性细胞毒性中抗体的参与。
[0290] 抗体对木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为"Fab"片段，各自具有 单个抗原结合位点，以及残余的"Fc"片段，它的名称反映了其容易结晶的能力。胃蛋白酶 处理产生F(ab'） 2片段，其具有两个抗原结合部位并且仍然能够交联抗原。
[0291] "Fv"是指一种含有抗原识别和抗原结合位点的抗体片段。在双链Fv种类中，该区 域由非共价缔合的一条重链和一条轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一 条重链和一条轻链可变域可以通过柔性肽接头共价连接，从而轻链和重链可以以类似于双 链Fv(scFv)种类中的"二聚"结构缔合。在这种结构中，每个可变域的三个⑶R相互作用 来在VH-VL二聚体的表面上限定抗原结合位点。合在一起，六个CDR为抗体赋予了抗原结 合特异性。然而，尽管比完整结合位点有更低的亲合性，既便单个可变区（或仅包含三个特 异于抗原的CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力。
[0292] Fab片段还含有轻链的恒定域以及重链的第一恒定域（CHl)。Fab'片段不同于 Fab片段，在重链CHl结构域的羧基末端具有几个额外的残基，包括一个或多个来自抗体绞 链区的半胱氨酸。Fab' -SH在此是指在恒定区的半胱氨酸残基携带有游离硫醇基的Fab'。 F(ab'）2抗体片段最初作为Fab'片段的配对而产生，其具有Fab'片段之间的铰链半胱氨 酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
[0293] 来自任何脊椎动物物种的抗体（免疫球蛋白）的"轻链"可以根据它们的恒定域 的氨基酸序列被分成称为κ和λ的两种明显不同的类型之一。
[0294] 取决于它们的重链恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分为不同的种类。由 五种主要的免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中的一些可以进一步分为子类 (同种型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。符合免疫球蛋白的不同类别的重 链恒定域分别被称为a、S、ε、 Y和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构象 是公知的。
[0295] "抗体片段"仅包含完整抗体的一部分，其中所述部分优选地保留了至少一种、优 选的大多数或全部的功能，所述功能通常与存在于完整抗体中时的所述部分相关。抗体片 段的实例包括 Fab、Fab'、F(ab'）2、单链 Fv (scFv)、Fv、dsFv、双价抗体（diabody)、Fd 和 FcT 片段、Fab片段、Fd片段、scFv片段、线性抗体、单链抗体分子，以及由抗体片段形成的多特 异性抗体（参见，例如Methods in Molecular Biology, Vol 207 :Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003);第 I 章 ；p 3-25, Kipriyanov)。其他 已知的片段包括，但不限于，scFab片段（Hust等人，BMC Biotechnology (2007) ,7:14)。在 一种实施方式中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，因而保留了结合抗原的能力。在 另一种实施方式中，抗体片段，例如，包含Fc区的抗体片段，保留了在完整抗体中存在时通 常与Fc区相关的生物学功能，例如，FcRn结合、抗体半衰期调节、ADCC功能和补体结合。在 一种实施方式中，抗体片段是单价的抗体，其具有基本上类似于完整抗体的体内半衰期。例 如，这样的抗体片段可以包括在一个抗原结合臂上与能够为片段赋予体内稳定性的Fc序 列连接。对于其他实例，抗体片段或抗体部分是指全长抗体的任何部分，其小于全长但是含 有足以形成抗原结合位点的抗体可变区的至少一部分（例如，一个或多个CDR)，因而保留 了全长抗体的结合特异性和/或活性；抗体片段包括通过对全长抗体酶处理产生的抗体衍 生物，以及合成地，例如重组地产生的衍生物。
[0296] "dsFv"是指具有工程化的分子间二硫键的Fv，所述二硫键稳定VH-VL配对。
[0297] "Fd片段"是指含有抗体重链的可变域（VH)和一个恒定区结构域（CHl)的抗体。
[0298] "Fab片段"是指含有全长抗体的部分的抗体片段，其产自全长免疫球蛋白的木瓜 蛋白酶消化，或合成地，例如重组地生产的具有相同结构的片段。Fab片段含有轻链（含有 VL和CL部分）以及另一条链，所述另一条链含有重链的可变域（VH)和重量的一个恒定区 结构域部分（CHl);它可以重组地产生。
[0299] "F(ab'）2片段"是指在pH 4. 0-4. 5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白产生的，或具有 相同结构合成地例如重组地产生的抗体片段。F (ab'）2片段含有两个Fab片段，但是其中每 个重链部分含有额外几个氨基酸，包括连接两个片段形成二硫键的半胱氨酸残基；它可以 重组地产生。
[0300] "Fab'片段"是指含有半个（一条重链和一条轻链）F (ab'）2片段的片段。
[0301] "Fd'片段是指含有F(ab'）2片段的一个重链部分的抗体片段。
[0302] "Fv'片段"是指仅含有抗体分子的VH和VL结构域的片段。
[0303] "scFv片段"是指一种抗体片段，其含有可变轻链（VL)和可变重链（VH)，由多肽接 头以任何顺序共价连接。所述接头的长度使得两个可变域被桥接而没有实质的干扰。示例 性接头有（Gly-Ser) η残基，带有整体上分散的Glu或Lys残基来提高溶解度。
[0304] 双抗体是二聚的scFv ;双抗体一般具有比scFv更短的肽接头，它们优先地二聚 化。
[0305] "HsFv"是指一些抗体片段，其中通常存在于Fab片段中的恒定域被二聚化的卷曲 螺旋结构域代替（参见，例如Arndt等人（2001) J Mol Biol. 7:312:221-228)。
[0306] "高变区"、"HVR"或"HV"以及"互补决定区"或"⑶R"可以指抗体可变域的区 域，它们在序列上是高变的，和/或形成结构上限定的环体。一般地，抗体包含六个高变 区或〇)1? ;三个在￥!1中011、！12、!13)，三个在￥1^中仏1、1^2、1^3)。多种高变区或〇)1?轮廓 在用，并被涵盖在本文中。Kabat互补决定区（Kabat CDRs)基于序列变异性，是最常用 的（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Tmmunological Interest,第 5 版· Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia refers instead to the location of the structural loops (Chothia 和 Lesk, J. Moh Biol. 196:901-917(1987))。AbM 高变区代表了 Kabat CDR 和 Chothia 结构环体 (Chothia"CDRs"）之间的折中，被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。"contact" 高变区是基于可用的复合物晶体结构的分析。来自这些高变区的每一个的残基在下文中标 注。
[0307]

【权利要求】
1. 一种包含超长⑶R3的人源化抗体或其结合片段。
2. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3的长度为35个氨 基酸或更长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更 长，或60个氨基酸或更长。
3. 权利要求2所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3的长度为35个氨 基酸或更长。
4. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含3个或更多 个半胱氨酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半 胱氨酸残基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多个半胱氨 酸残基，10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱 氨酸残基。
5. 权利要求4所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含3个或更多 个半胱氨酸残基。
6. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述抗体或其结合片段包含半 胱氨酸基序。
7. 权利要求6所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述半胱氨酸基序选自由以 下序列组成的组：CX1(ICX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 41)、CX1(ICX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO: 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
8. 权利要求6所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述半胱氨酸基 序选自由以下序列组成的组：CCX3CXCX3CX2CCXCX 5CX9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101) , cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), CCX8CX5CX4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID NO: 103) , CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID NO: 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID N0:105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC(SEQ ID N0:106)、 CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、 CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、 CX9CX2CX3CX4CCX4CX 5C(SEQ ID N0:123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID N0:124)、 CXgCX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 CX8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO:135)、CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、 CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO:140)、CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID NO:142)、 CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143), CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID NO:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID NO:151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152) 〇
9. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含2至6个二 硫键。
10. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含SEQ ID NO: 40或其衍生物。
11. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含SEQ ID NO: 1_4中任一个的氨基酸残基3-6。
12. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含非人类DH 或其衍生物。
13. 权利要求12所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非人类DH是SEQ ID NO: 5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11 或 SEQ ID NO :12。
14. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含JH序列或 其衍生物。
15. 权利要求14所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述JH序列是SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :16 或 SEQ ID NO: 17。
16. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含： _非人类VH序列或其衍生物； -非人类DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
17. 权利要求16所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含另外的氨 基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨基酸残基 或更多个氨基酸残基。
18. 权利要求17所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述另外的氨基酸序列选自 由 IR、IF、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20 或 SEQ ID NO :21 组成的组。
19. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含衍生自或 基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
20. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含非牛序列或 非抗体序列。
21. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非抗体序列是合成的序 列。
22. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非抗体序列是细胞因子 序列、淋巴因子序列、趋化因子序列、生长因子序列、激素序列或毒素序列。
23. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非抗体序列是IL-8序列、 IL-21序列、SDF-1 ( a )序列、生长抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齐考诺肽序列。
24. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非抗体序列是SEQ ID NO :475-481中的任一个。
25. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述非抗体序列替换至少一 部分的超长⑶R3。
26. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
27. 权利要求26所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID NO:171)、ATVFQ(SEQ ID NO:172)、AAAHQ(SEQ ID NO:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
28. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含CXiX2X3X4X 5基序。
29. 权利要求28所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述CXTXYX5基序是 CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID N0:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID N0:195)、CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
30. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含》11%基 序， 其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
31. 权利要求30所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述（XaXb)z基序是 CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID N0:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID N0:238),SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、 AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254)、MYEF(SEQ ID N0:255)、NWIY(SEQ ID N0:256)、NYDY(SEQ ID N0:257)、NYQW(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNff(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
32. 权利要求30所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
33. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
34. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
35. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含 xTxWxjxf、基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， 其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H) 组成的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
36. 权利要求35所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是
37. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95), _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
38.权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以下序列 组成的组：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
39. 权利要求20所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3包含另外的序 列，所述另外的序列是接头。
40. 权利要求39所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述接头连接至所述非抗体 序列C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端两者。
41. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述超长CDR3是反刍动物 CDR3。
42. 权利要求41所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述反刍动物是牛。
43. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含人类重链种系序列，所述人类重链种系序列是VH4家族成员种系序列。
44. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含VH4-34种系序列。
45. 权利要求44所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片 段包含人类重链种系序列，所述人类重链种系序列衍生自VH4-34种系序列。
46. 权利要求45所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VH4-34种系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基于Kabat编号的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
47. 权利要求45所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VH4-34种系序列包含 CDR2,所述CDR2包含基于Kabat编号的Glu50Ser取代。
48. 权利要求45所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VH4-34种系序列包含 CDR1 和 CDR2,所述 CDR1 包含基于 Kabat 编号的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、 Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基 于基于 Kabat 编号的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
49. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列。
50. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
51. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含SEQ ID勵：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序列；以及5￡0 ID NO :470中列出的氨基酸序列。
52. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列，SEQ ID NO :470中所列的氨基酸序列；以及肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID NO :461、462、463、 464、465、466、467、468 或 469，与5￡〇10勵：470 之间。
53. 权利要求52所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序 列、抗体序列或非抗体序列。
54. 权利要求1所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段 包含轻链可变区序列，所述轻链可变区序列是A轻链可变区序列。
55. 权利要求54所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述A轻链可变区序列是牛 入轻链可变区序列。
56. 权利要求54所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述A轻链可变区序列是人 入轻链可变区序列。
57. 权利要求56所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人A轻链可变区序列是 VL1-51种系序列。
58. 权利要求56所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人A轻链可变区序列衍 生自VL1-51种系序列。
59. 权利要求58所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VL1-51种系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基于Kabat编号的Ile29Val和Asn32Gly取代。
60. 权利要求58所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VL1-51种系序列包含 ⑶R2，所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
61. 权利要求58所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VL1-51种系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:47l)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
62. 权利要求58所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VL1-51种系序列包含基 于 Kabat 编号的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
63. 权利要求58所述的人源化抗体或其结合片段，其中，所述VL1-51种系序列包含 基于Kabat编号的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的 CDR2。
64. 权利要求1的人源化抗体或其结合片段，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含 SEQ ID N0:440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
65. 编码权利要求1-64中任一项所述的人源化抗体或其结合片段的多核苷酸。
66. 编码包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的多核苷酸。
67. 编码包含超长CDR3的人源化可变区的多核苷酸。
68. 包含权利要求65-67中任一项所述的多核苷酸的载体。
69. 包含权利要求68的载体的宿主细胞。
70. -种包含多种多核苷酸的核酸文库，所述多核苷酸包含编码人源化抗体或其结合 片段的序列，其中所述抗体或其结合片段包含超长CDR3。
71. -种人源化抗体或其结合片段的文库，其中，所述抗体或其结合片段包含超长 CDR3。
72. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3的长度为35个氨基酸或更长，40个 氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更长，或60个氨基酸 或更长。
73. 权利要求72所述的文库，其中，所述超长CDR3的长度是35个氨基酸或更长。
74. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3包含3个或更多个半胱氨酸残基，4 个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨酸残基，7个或 更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多个半胱氨酸残基，10个或更 多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱氨酸残基。
75. 权利要求74所述的文库，其中，所述超长CDR3包含3个或更多个半胱氨酸残基。
76. 权利要求71所述的文库，其中，所述抗体或其结合片段包含半胱氨酸基序。
77. 权利要求76所述的文库，其中，所述半胱氨酸基序选自由以下序列组 成的组：CX1(iCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:41)、CX1(iCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO:42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
78. 权利要求76所述的文库，其中，所述半胱氨酸基序选自由以下序列组成的组：C CX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO: 102) , CCXgCXgCX^CX^CXCXiC (SEQ ID NO: 103), CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID N0:105)、 CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、 CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO: 110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C(SEQ ID NO: 111), CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、 CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、 CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO: 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO: 119), CX4CX2CCX3CXCX4CCX2CX 3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、 CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO: 122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO: 123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
79. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含2至6个二硫键。
80. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含SEQ ID NO:40或其衍生物。
81. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含SEQ ID NO: 1-4中任一个的氨 基酸残基3-6。
82. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3包含非人类DH或其衍生物。
83. 权利要求82所述的文库，其中，所述非人类DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
84. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3包含JH序列或其衍生物。
85. 权利要求84所述的文库，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
86. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含： _非人类VH序列或其衍生物； -非人类DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
87. 权利要求86所述的文库，其中，所述超长CDR3包含另外的氨基酸序列，所述另外的 氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨基酸残基或更多个氨基酸残基。
88. 权利要求87所述的文库，其中，所述另外的氨基酸序列选自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 组成的组。
89. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含衍生自或基于SEQ ID NO:22、 SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27或SEQ ID N0:28 的序列。
90. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3包含非牛序列或非抗体序列。
91. 权利要求90所述的文库，其中，所述非抗体序列是合成的序列。
92. 权利要求90所述的文库，其中，所述非抗体序列是细胞因子序列、淋巴因子序列、 趋化因子序列、生长因子序列、激素序列或毒素序列。
93. 权利要求90所述的文库，其中，所述非抗体序列是IL-8序列、IL-21序列、 SDF-1 ( a )序列、生长抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齐考诺肽序列。
94. 权利要求90所述的文库，其中，所述非抗体序列是SEQ ID NO :475-481中的任一 个。
95. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
96. 权利要求95所述的文库，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)、 TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID N0:157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID N0:164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ (SEQ ID NO: 166), TTVFQ (SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、VWYQ(SEQ ID N0:174)、 GTVFQ(SEQ ID NO:175), TAVHQ(SEQ ID NO:176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID N0:178), VTVHQ(SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ (SEQ ID NO: 181), ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID N0:184)。
97. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含CXTXYX5基序。
98. 权利要求97所述的文库，其中，所述CXTXYX5基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO: 188), CATVRQ(SEQ ID N0:189)、CTTVYQ(SEQ ID N0:190)、CSPVHQ(SEQ ID N0:191)、CATVYQ(SEQ ID N0:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO: 195), CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、CTTVFQ(SEQ ID N0:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID NO:202), CTAVFQ(SEQ ID N0:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205),CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ;CAAVHQ(SEQ ID N0:212)、CGTVYQ(SEQ ID N0:213)、 CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。
99. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含（XaXb)z基序， 其中，Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
100. 权利要求99所述的文库，其中，所述（XaXb)z基序是CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、 HYTYTYDF(SEQ ID N0:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO: 219), KHRYTYEff (SEQ ID N0:220), NYIYKYSF(SEQ ID NO:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID N0:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO: 224), SYNYTYSff (SEQ ID NO: 225), SYSYSYEY (SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID N0:232), TYTYTYEff(SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID ND: 234), AYTYEff (SEQ ID NO :235), DYIYTY(SEQ ID NO :236), IHSYEF(SEQ ID NO :237), SFTYEF(SEQ ID NO :238), SHSYEF(SEQ ID N0:239) ,THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241),TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID N0:243)、TYSYEH(SEQ ID N0:244)、TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
101. 权利要求99所述的文库，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
102. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
103. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
104. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3包含XiXfxfXjXfh基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成 的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
105. 权利要求104所述的文库，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)或
106. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO: 41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
107. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以下序列 组成的组：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
108. 权利要求90所述的文库，其中，所述超长CDR3包含另外的序列，所述另外的序列 是接头。
109. 权利要求108所述的文库，其中，所述接头连接至非抗体序列的C-末端、N-末端、 或C-末端和N-末端两者。
110. 权利要求71所述的文库，其中，所述超长CDR3是反刍动物CDR3。
111. 权利要求110所述的文库，其中，所述反刍动物是牛。
112. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含人类重链种系 序列，所述人类重链种系序列是VH4家族成员种系序列。
113. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含VH4-34种系序 列。
114. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含衍生自VH4-34 的人类重链种系序列。
115. 权利要求114所述的文库，其中，所述VH4-34种系序列包含⑶R1，所述⑶R1包含 基于Kabat编号的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
116. 权利要求114所述的文库，其中，所述VH4-34种系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 基于Kabat编号的Glu50Ser取代。
117. 权利要求114所述的文库，其中，所述VH4-34种系序列包含⑶R1和⑶R2，所 述 CDR1 包含基于 Kabat 编号的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、Phe29Leu、 Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 编号的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
118. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含SEQ ID NO: 470中列出的氨基酸序列。
119. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列；以及 SEQ ID N0:470 中列出的氨基酸序列。
120. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含SEQ ID 勵:461、462、463、464、465、466、467、468或4697 中所列的氨基酸，5￡0 1〇勵:470 中列出的 氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、 467、468 或 4697,与 SEQ ID N0:470 之间。
121. 权利要求120所述的文库，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序列、抗体序列或非 抗体序列。
122. 权利要求71所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段包含轻链可变区序 列，所述轻链可变区序列是A轻链可变区序列。
123. 权利要求122所述的文库，其中，所述A轻链可变区序列是牛A轻链可变区序 列。
124. 权利要求122所述的文库，其中，所述A轻链可变区序列是人类A轻链可变区序 列。
125. 权利要求124所述的文库，其中，所述人类A轻链可变区序列是VL1-51。
126. 权利要求124所述的文库，其中，所述人类A轻链可变区序列衍生自VL1-51。
127. 权利要求126所述的文库，其中，所述VL1-51种系序列包含CDR1，所述CDR1包含 基于Kabat编号的Ile29Val和Asn32Gly取代。
128. 权利要求126所述的文库，其中，所述VL1-51种系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNN到⑶T的取代。
129. 权利要求126所述的文库，其中，所述VL1-51种系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
130. 权利要求126所述的文库，其中，所述VL1-51种系序列包含基于Kabat编号的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
131. 权利要求126所述的文库，其中，所述VL1-51种系序列包含基于Kabat编号的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的CDR2。
132. 权利要求71所述的文库，其中，所述文库包含SEQ ID勵：440、441、442、443或444 中列出的氨基酸序列。
133. 权利要求71-132中任一项所述的文库，其中，所述人源化抗体或其结合片段以空 间定址的形式存在。
134. -种人源化抗体可变区的方法，包括将编码非人类超长CDR3的核酸序列和编码 人类可变区框架（FR)序列的核酸序列基因组合的步骤。
135. -种产生包含超长CDR3的人源化抗体的文库的方法，所述方法包括： a. )组合编码超长CDR3的核酸序列与编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列，以产 生编码包含超长CDR3的人源化抗体的核酸；和 b. )表达所述编码包含超长CDR3的人源化抗体的核酸，以产生包含超长CDR3的人源化 抗体的文库。
136. -种产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库的方法，所述超长 ⑶R3包含非抗体序列，所述方法包括： a. )组合编码超长CDR3的核酸序列、编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列、以及 编码非抗体序列的核酸序列，以产生编码包含超长CDR3和非抗体序列的人源化抗体或其 结合片段的核酸，和 b. )表达所述编码包含超长CDR3和非抗体序列的人源化抗体或其结合片段的所述核 酸，以产生包含超长CDR3和非抗体序列的人源化抗体或其结合片段的文库。
137. -种包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库，所述超长CDR3包含非抗 体序列。
138. -种产生包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库的方法，所述超长 CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括： a. )组合人类可变区框架（FR)序列以及编码超长CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列； b. )向所述核酸序列中引入一个或多个核苷酸变化，所述核酸序列编码位于编码不同 氨基酸残基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一个或多个半胱氨酸残基之间的一个或多个氨 基酸残基，以产生编码包含超长CDR3和半胱氨酸基序的人源化抗体或其结合片段的核酸， 所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨酸残基之间引入的一个 或多个核苷酸变化；和 c. )表达所述编码人源化抗体或其结合片段的核酸，所述人源化抗体或其结合片段包 含超长CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸结构域中的一个或多个 半胱氨酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化，以产生人源化抗体或其结合片段的文 库，所述人源化抗体或其结合片段包含超长CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有 在半胱氨酸结构域中的一个或多个半胱氨酸残基之间引入的一个或多个核苷酸变化。
139. -种包含超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库，所述超长CDR3包含半胱 氨酸基序，其中所述抗体或结合片段包含位于所述半胱氨酸基序中的半胱氨酸残基之间的 一个或多个氨基酸残基取代。
140. -种产生包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库的方法，所述方法 包括： a. )组合编码人类可变区框架（FR)序列的核酸序列和编码牛超长CDR3的核酸，和 b. )表达编码人类可变区框架（FR)序列的核酸和编码牛超长CDR3的核酸，以产生包含 牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库。
141. 一种包含牛超长CDR3的人源化抗体或其结合片段的文库。
142. -种包含XfxYX5基序的CDR3支架， 其中，X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
143. 权利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的长度为35个氨基酸或更 长，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更长，或60 个氨基酸或更长。
144. 权利要求143所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的长度为35个氨基酸或更 长。
145. 权利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3个或更多个半胱氨 酸残基，4个或更多个半胱氨酸残基，5个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨酸残 基，7个或更多个半胱氨酸残基，8个或更多个半胱氨酸残基，9个或更多个半胱氨酸残基， 10个或更多个半胱氨酸残基，11个或更多个半胱氨酸残基，或12个或更多个半胱氨酸残 基。
146. 权利要求145所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3个或更多个半胱氨酸 残基。
147. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含半胱氨酸基序。
148. 权利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序选自由以下序 列组成的组{父1(^5〇父5〇父〇父7(：(5￡〇10勵:41)、〇父 1(^6〇父5〇父〇父15(：(5￡〇10勵:42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO: 43), CXnCX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6CX5CXCX13C (SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
149. 权利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序选自由以下序列组 成的组：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID NO:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID NO:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139),CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140),CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
150. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含2至6个二硫键。
151. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的XTXYX5基序为 TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID N0:167)、AAVFQ(SEQ ID N0:168)、GTVHQ(SEQ ID N0:169)、ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID N0:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
152. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含CXTXYX5基序。
153. 权利要求152所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的CXiX2X3X4X 5基序为 CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO:195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
154. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含（XaXb)z基序， 其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
155. 权利要求154所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架中的（XaXb) z基序为 CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID NO:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID NO:238) ,SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID NO:251)、DYTY(SEQ ID NO:252)、KYEH(SEQ ID NO:253)、KYEW(SEQ ID NO:254)、MYEF(SEQ ID NO:255)、NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259).PYEff(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID NO :272), or VYEff(SEQ ID N0:273)〇
156. 权利要求154所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的（XaXb)z基序为YXYXYX。
157. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
158. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨 酸01)组成的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
159. 权利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含XiX2X3X4X 5Xn(XaXb)z基 序， 其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸（V)，其中X2是丝 氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是组氨酸（H)、苏氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， Xa是任意氨基酸残基，Xb是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和组氨酸（H)组成 的组的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
160. 权利要求159所述的CDR3支架，其中，CDR3支架中的XfxYX5基序为TTVHQ (SEQ 10勵：153)或15￥即(5￡〇10勵：154)，并且其中（父1\基序为￥父￥父丫父。
161. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO:67)、CX15CX5CXC(SEQ ID N0:68)、CX4CX6CX9CX2CX nC(SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID NO:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID NO:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID NO:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID NO:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
162.权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是苏氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、丝氨酸（S)或缬氨酸 (V)，其中X2是丝氨酸（S)、苏氨酸（T)、脯氨酸（P)、异亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、缬氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是缬氨酸（V)、丙氨酸（A)、苏氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 组氨酸⑶、苏氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -选自由以下序列组成的组的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序选自由以下序列 组成的组：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、cx8cx2cx4ccx4cx 3cx3c(seq ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸残基，X b是选自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和组氨酸（H)组成的组的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
163. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含SEQ ID N0:40或其衍 生物。
164. 权利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含SEQ ID NO: 1-4中任一 个的氨基酸残基3-6。
165. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含非人类DH或其衍生物。
166. 权利要求165所述的CDR3支架，其中，所述非人类DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11*SEQID NO:12。
167. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含JH序列或其衍生物。
168. 权利要求167所述的CDR3支架，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
169. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： _非人类VH序列或其衍生物； -非人类DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
170. 权利要求169所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含另外的氨基酸序列，所 述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之间的二至六个氨基酸残基或更多个氨基 酸残基。
171. 权利要求170所述的⑶R3支架，其中，所述另外的氨基酸序列选自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 组成的组。
172. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含衍生自或基于SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 或 SEQ ID NO :28的序列。
173. 权利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架是反刍动物⑶R3支架。
174. 权利要求173所述的CDR3支架，其中，所述反刍动物是牛。
175. -种包含权利要求142-174中任一项所述的⑶R3支架的文库。
176. 编码权利要求142-174中任一项所述的⑶R3支架的多核苷酸。
177. 包含权利要求176的多核苷酸的载体。
178. 包含权利要求177的载体的宿主细胞。
179. 权利要求178所述的宿主细胞，其中，所述细胞是细菌、病毒或噬菌体。
【文档编号】C07K16/10GK104411717SQ201380013173
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2013年1月9日 优先权日:2012年1月9日
【发明者】沃恩·斯密德, 奥马尔·A·巴兹甘, 茅洪源 申请人:斯克利普斯研究所