一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，将枇杷叶粉碎过筛后与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀超声波提取，提取液通过微滤和超滤，浓缩干燥得粗品熊果酸；粗品熊果酸粉碎，洗脱，脱色，过滤，浓缩沉淀，抽滤得类白色沉淀；再加入乙醇加热至沸腾，放冷至结晶完全；母液继续浓缩，同法操作得二次结晶，合并两次结晶真空干燥，得精制熊果酸。可以达到最大限度的分离、纯化作用，有效除杂，熊果酸的纯度提高，提取率提高25％以上；其生产工序简化，生产成本降低，技术合理、操作安全、环境友好，利于产业化应用。
【专利说明】一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及天然植物提取物制备领域，尤其是从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法。
【背景技术】
[0002]熊果酸(ursolic acid,简称UA)又名乌索酸、乌苏酸，分子式为C3tlH48O3,为乌苏烷型三萜，属α-香树脂醇型五环三萜类化合物，在植物界分布较广，以枇杷叶、山楂叶为主。熊果酸为白色针状结晶，熔点227-228°C，易溶于二氧六环、吡啶，溶于甲醇、乙醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水和石油醚。
[0003]熊果酸具有广泛的生物学活性，现代药学研究表明，熊果酸具有消炎、增强免疫、抑制血小板凝集、降血糖、抗肿瘤、降血脂、抗病毒、保肝等临床药理作用，是治疗急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎的理想药物，且毒性低，副作用少。
[0004]目前国内外已经开展了对枇杷叶中熊果酸进行分离纯化的初步研究，但是现有方法步骤相对比较繁琐，提取率低，成本过高，不仅延长了生产时间，增加了生产设备，而且大大增加了生产成本，不利于产业化应用。
【发明内容】
[0005]为克服上述弊端 ，本发明所要解决的技术问题是，提供一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，能从枇杷叶中制备高纯度熊果酸，具有技术合理、操作安全、工艺简便、经济可行、环境友好等特点。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤:
[0006](I)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶粉碎，过10~12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀，司盘-65或司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇总重量的0.1~0.8%，然后进行超声波提取，用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取温度为70~80°C ;滤去药渣后，合并滤液，过0.1~1.0 μ m孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为1000Da~5000Da的膜超滤，得超滤液；
[0007](2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1~1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≤0.08Mpa,温度50°C~60°C，得纯度为70%~85%的粗品熊果酸；
[0008](3)将粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅胶混匀，装入硅胶柱的顶端，硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍，用无水乙醇洗脱，自检识浓缩液有沉淀起开始收集，至沉淀极少时停止收集，合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中，在不断搅拌下加入溶液量0.5%的活性碳脱色，搅拌IOmin后，板框过滤，得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味，控制真空度> 0.07Mpa,温度50°C~60°C;静置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽滤，得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80%~85%乙醇，加热至沸腾，在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶，母液继续浓缩，同法操作得二次结晶，合并第1次与第2次结晶，送真空干燥，控制真空度≤0.08Mpa,温度50°C~60°C，得纯度为95%~99%的精制熊果酸。
[0009]采用本发明的技术方案，在特定步骤加入了特定量的司盘-65或司盘-85，能降低枇杷叶药材与乙醇溶剂之间的表面张力，使润湿角变小,促进药材表面的润湿性,增加药材细胞的渗透性，使溶剂最大限度地溶解或增溶药材中有效成分，进而显著增大枇杷叶中熊果酸提取的收率。同时，在溶液中加入司盘-65或司盘-85后，能有效提高溶液的澄清度，便于过滤，在微孔滤膜中不会堵塞膜孔，便于后续工作的进行。
[0010]本发明中采用了微孔滤膜和超滤膜的分子筛过滤组合，有效去除大分子物质，提高了有效成分熊果酸的提取率。在传统的从枇杷叶中提取熊果酸的生产方法，大多采用了脱色、上柱吸附、解析等过程，生产过程繁琐，使用微孔滤膜和超滤膜后，减少了这些繁琐的生产过程，极大的缩短了生产周期。
[0011]故而，本发明的有益效果在于:(1)通过该方法，可以达到最大限度的分离、纯化作用，有效除杂，枇杷叶提取物中熊果酸的纯度提高，提取率提高25 %以上，使有效成分得到富集，药效得以提高；(2)采用本发明方法，提高除杂效率，减少多次吸附、解析的过程，简化生产工序，大大降低了生产成本，其技术合理、操作安全、环境友好，利于产业化应用。
[0012]下面将结合【具体实施方式】对本发明做进一步说明。
【具体实施方式】
[0013]实施例1:本发明所述从枇杷叶中提取熊果酸的方法，包括以下步骤:
[0014](1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶2Kg，粉碎，过10~12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-85混合均匀进行超声波提取，司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇的总重量的0.1 %。提取时用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取温度为70~80°C ；滤去药渣后，合并滤液，过0.7μπι孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为4000Da的超滤膜进行超滤，得超滤液；
[0015](2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1~1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50。。~60°C，得粗品熊果酸24.4g，纯度为76.8% ；
[0016](3)将粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅胶混匀，装入硅胶柱的顶端，硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍，用无水乙醇洗脱，自检识浓缩液有沉淀起开始收集，至沉淀极少时停止收集，合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中，在不断搅拌下加入溶液量0.5%的活性碳脱色，搅拌IOmin后，板框过滤，得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味，控制真空度> 0.07Mpa,温度50°C~60°C;静置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽滤，得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80%~85%乙醇，加热至沸腾，在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶，母液继续浓缩，同法操作得二次结晶，合并第1次与第2次结晶，送真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50°C~60°C，得纯度为98.1%的精制熊果酸17.231g。
[0017]实施例2~7:与实施例1的不同之处在于司盘_85或司盘-65用量不同,微孔滤膜孔径和超滤膜粒径的设置不同，产物纯度和提取率有差异，详见下表。其余均相同，不再赘述。
[0018]各实施例的含量检测结果表
[0019]
【权利要求】
1.一种从枇杷叶中提取精制熊果酸的方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤: (1)取鲜的或晒干处理过的枇杷叶粉碎，过10~12目筛；再将粉碎后的枇杷叶与乙醇、司盘-65或司盘-85中的任意一种混合均匀，司盘-65或司盘-85的加入量为粉碎后的枇杷叶与乙醇总重量的0.1~0.8 %，然后进行超声波提取，用8~10倍95%乙醇溶液提取2次，提取温度为70~80°C ;滤去药渣后，合并滤液，过0.1~1.0 μ m孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为1000Da~5000Da的膜超滤，得超滤液； (2)将超滤液浓缩至溶液相对密度为1.1~1.2g/ml，进行真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50°C~60°C，得纯度为70%~85%的粗品熊果酸； (3)将粗品熊果酸粉碎，加入2倍重量的硅胶混匀，装入硅胶柱的顶端，硅胶柱中的硅胶装填重量为粗品熊果酸的6倍，用无水乙醇洗脱，自检识浓缩液有沉淀起开始收集，至沉淀极少时停止收集，合并此段乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液转入搅拌罐中，在不断搅拌下加入溶液量0.5%的活性碳脱色，搅拌IOmin后，板框过滤，得滤液；将滤液真空减压浓缩至无醇味，控制真空度> 0.07Mpa,温度50°C~60°C ;静置沉淀4h ;沉淀完全以后，抽滤，得类白色沉淀；再加入沉淀重量15倍浓度80%~85%乙醇，加热至沸腾，在结晶罐中逐渐放冷至结晶完全；分取结晶，母液继续浓缩，同法操作得二次结晶，合并第1次与第2次结晶，送真空干燥，控制真空度≥0.08Mpa,温度50°C~60°C，得纯度为95%~99%的精制熊果酸。
【文档编号】C07J63/00GK103923159SQ201410167857
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月24日 优先权日:2014年4月24日
【发明者】谢君 申请人:长沙麓园生物科技有限公司