人血白蛋白和球蛋白的制备方法
【专利摘要】本发明提供了人血白蛋白和球蛋白的制备方法，其中，在制备FI+II+III沉淀或FI+II+III上清的压滤过程中，使用PALL50P滤板，滤板的用量为10～13m2/1000L血浆；采用硅藻土为助滤剂，硅藻土的用量为4.5～5.5g血浆蛋白/1g硅藻土；所述硅藻土中，SiO2含量为96.0～98.7％，Al2O3含量为0.6～1.2％、Fe2O3含量为0.3～0.4％，酸溶物质含量为0.05～0.12％，水溶物质含量为0.15～0.20％。本发明研究表明，采用本发明方法制备FI+II+III沉淀或上清过程中，所得产品中球蛋白和白蛋白的含量大幅提高，并且，过滤过程中流量、压力以及滤液浊度均优于使用C503型硅藻土助滤的现有制备方法。
【专利说明】人血白蛋白和球蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及人血白蛋白和球蛋白的制备方法。
【背景技术】
[0002] 人血白蛋白是目前产量最大、用量最大的蛋白质药物。其具有维持人体内血液渗 透压和携带血液中多种配基（包括脂肪酸、氨基酸、类固醇、金属离子及药物）与组织交换 等生理功能，临床用于手术输血、危重病人补液、创伤休克、低蛋白血症、红细胞过多症、发 烧和水肿等，并且可增强人体抵抗力，是重要的临床药物。目前，国内人血白蛋白的规模化 生产主要使用低温乙醇法从健康人血浆中分离纯化白蛋白，例如《医学生物制品学》（第 二版，人民卫生出版社）、《血液制品学》（第二版，人民卫生出版社）、CN201110030778. 3、 CN201110223760· 5、CN201210013227. 0、CN201110030776. 4 等，通常使用的分离流程见图 1，其中，组分I (又称FI)主要含有纤维蛋白原，组分I+III (又称FII+III)主要含有丙球、 凝血酶原和纤溶酶原，组分II (又称FII)主要含有球蛋白，组分V(又称FV)主要含有白蛋 白，低温乙醇法过程相对简单，产量较高，可以进行大规模的生产，在世界范围内得到了广 泛的应用。
[0003] 使用压滤技术进行固液相分离是目前多数国内外血液制品厂家用于低温乙醇分 离工艺组分分离的方法。压滤通常会使用助滤剂，其粒间隙也构成复杂的迷宫结构，当制品 溶液冲击滤板时，主要通过静电吸附和机械阻挡的方式来捕捉固体成分，由助滤剂形成的 滤饼层和深层滤板成为捕捉固体沉淀颗粒的重要场所。滤板应有适当的孔径，以便能在截 留助滤剂颗粒以形成结实的滤饼层的同时给制品溶液的流动带来最小的阻力。
[0004] 压滤工艺的主要控制参数包括滤板（过滤介质）类型、助滤剂类型和用量的选择、 过滤温度、过滤前洗缓冲液和过滤回洗缓冲液的成分和理化条件等。
[0005] 其中，助滤剂种类繁多，其主要功能是吸附沉淀颗粒、帮助过滤，还可提升最终产 品的安全性和质量。助滤剂的选择通常可以考虑滤过液的浊度要求、生产能力、产品的回收 率、产品的稳定性和纯度等方面的要求，以及去除产品溶液中特别成份的需要。目前血液制 品生产常用的助滤剂有硅藻土和珍珠岩等。硅藻土是古代单细胞硅藻遗骸沉积物，具有质 轻、多孔、高强、耐磨、绝缘、绝热、吸附及填充等一列优良性能，具有良好的化学稳定性。硅 藻土助滤剂的主要优点是：具有良好的微孔结构、吸附性能和抗压缩性能，不仅能使被滤液 体获得较好的流速比，并且能滤除微细的悬浮物，保证了澄清度。
[0006] 血液制品中添加助滤剂的主要目的是提高过滤性能、提高滤液澄清度、降低滤液 浊度、吸附热原质、脂类、蛋白酶和变性蛋白，从而保证制品质量。助滤剂通过以下方式达到 助滤和吸附的作用：
[0007] 1)机械截留作用：助滤剂形成的滤饼产生众多的孔隙以及形成孔隙与孔隙之间 的间隔层，液体流经滤饼时能够截留其中的悬浮粒子，包括：
[0008] A.表面过滤作用：固液相分离发生在过滤介质的表面，当液体中悬浮固体颗粒的 粒径大于硅藻土/珍珠岩的孔径时被截留在助滤剂表面。
[0009] B.深层过滤效应：固液相分离发生在过滤介质的内部：当液体中悬浮固体颗粒的 粒径小于硅藻土 /珍珠岩的孔径时，比较小的固体颗粒穿过滤饼表面进入介质内部，介质 内部曲折的微孔沟道和更细小的孔隙能够截留这些颗粒。2)吸附作用：产生吸附作用的主 要原因包括范德华力、Zeta电位和离子交换作用，包括：
[0010] A.液体中的悬浮粒子形成的链团粘附于硅藻土 /珍珠岩而被截留；
[0011] B.比硅藻土 /珍珠岩内部孔径小的悬浮粒子进入到硅藻土 /珍珠岩内部表面因相 反电荷吸附而被截留。
[0012] 虽然硅藻土是血液制品中常用的助滤剂之一，然而，硅藻土品种繁多，由于不同硅 藻土的原料、加工方式等差异，使得不同硅藻土产品在成分含量和性能上产生了较大区别。
【发明内容】
[0013] 本发明的目的在于提供一种人血白蛋白和球蛋白的制备方法。本发明的另一目的 在于提供血液制品中FI+II+III沉淀或FI+II+III上清的制备方法。
[0014] 具体地，本发明提供了人血白蛋白和球蛋白的制备方法，它是以血浆为原料，经低 温乙醇法分别依次制备得到FI+II+III上清和FI+II+III沉淀、FIV上清和FI+III上清、 FV沉淀和FII沉淀，取FV沉淀和FII沉淀，精制，分别得到白蛋白和球蛋白；与现有技术不 同的是，在制备FI+II+III沉淀或FI+II+III上清的压滤过程中，使用PALL50P滤板，滤板 的用量为10?13m 2/1000L血浆；采用硅藻土 A为助滤剂与待滤液混勻，硅藻土 A的用量为 4. 5?5. 5g血浆蛋白/lg硅藻土；所述硅藻土 A中，Si02含量为96. 0?98. 7 %，A1203含量 为0. 6?1. 2 %、Fe203含量为0. 3?0. 4%，酸溶物质含量为0. 05?0. 12 %，水溶物质含量 为 0· 15 ?0· 20%。
[0015] 在目前的血浆制品领域中，FI+II+III沉淀主要用于免疫球蛋白的生产， FI+II+III上清主要用于生产蛋白酶抑制剂和白蛋白等。因此，FI+II+III上清和沉淀的制 备式生产白蛋白、球蛋白等血浆制品的重要中间步骤。
[0016] 进一步地，所述硅藻土 A中，Si02含量为96. 0?96. 2%，A1203含量为1.0? 1. 2 %、Fe203含量为0. 3?0. 4%，酸溶物质含量为0. 05?0. 12 %，水溶物质含量为0. 15? 0· 20%。
[0017] 其中，所述硅藻土 A的比表面积为2. 2?2. 3m2/g，优选地，所述硅藻土 A的比表面 积为 2. 228m2/g。
[0018] 其中，所述硅藻土 A的离心湿密度为0· 23?0· 24g/cm2,优选为0· 237g/cm2。
[0019] 优选地，所述硅藻土 A的型号为CELPURE1000。
[0020] 进一步地，制备白蛋白过程中，FIV上清和FV沉淀的制备方法如下：
[0021] FIV上清的制备：以FI+II+III上清为原料，经过低温乙醇法分离FIV，压滤，取上 清即得；所述压滤过程中，使用PALL50P滤板，滤板的用量为10?13m 2/1000L血浆；采用硅 藻土 A和珍珠岩为助滤剂与待滤液混匀，硅藻土 A的用量为3. 0?3. 5g FI+II+III上清液 蛋白/lg硅藻土 A ;珍珠岩的用量为2. 0?3. OgFI+II+III上清蛋白/lg珍珠岩；
[0022] FV沉淀的制备：取FIV上清经过低温乙醇法分离FV，压滤，取沉淀即得；分离FV后 的压滤过程中，使用PALL50P滤板,滤板的用量为10?13m 2/1000L血楽；采用娃藻土 A为助 滤剂，其中，预涂层所用硅藻土 A为40-60g/平方米滤板，待滤液中硅藻土 A的用量为1. 0? 1. 5g/L 血楽；
[0023] 制备球蛋白过程中，FI+III上清和FII沉淀的制备方法如下：
[0024] FI+III上清的制备：取FI+II+III沉淀，经过低温乙醇法分离提取FI+III，压滤， 取上清即得；所述压滤过程中，采用BECO Steril PR40滤板，滤板用量为10?13m2/1000L 血浆；以硅藻土 A为助滤剂与待滤液混匀，硅藻土 A用量为8?9g/L血浆；
[0025] FII沉淀的制备：取FI+III上清经过低温乙醇法分离FII，压滤，取沉淀即得；分 离FII后的压滤过程中，使用PALL50滤板,滤板的用量为5?10m 2/1000L ;采用娃藻土 A为 助滤剂，预涂层所用硅藻土 A为80-95g/平方米滤板，待滤液中硅藻土 A的用量为0. 2? 0. 3g/L 血浆。
[0026] 其中，本发明制备方法中，各个步骤中的压滤流速和滤板压力为：
[0027]
【权利要求】
1. 人血白蛋白和球蛋白的制备方法，它是以血浆为原料，经低温乙醇法分别依次制备 得到FI+II+III上清和FI+II+III沉淀、FIV上清和FI+III上清、FV沉淀和FII沉淀，取 FV沉淀和FII沉淀，精制，分别得到白蛋白和球蛋白；其特征在于：在制备FI+II+III沉淀 或FI+II+III上清的压滤过程中，使用PALL50P滤板，滤板的用量为10?13m 2/1000L血浆； 采用娃藻土 A为助滤剂与待滤液混勻，娃藻土 A的用量为4. 5?5. 5g血楽蛋白/lg娃藻土 A ;所述硅藻土 A中，Si02含量为96. 0?98. 7 %，A1203含量为0. 6?1. 2 %、Fe203含量为 0. 3?0. 4 %，酸溶物质含量为0. 05?0. 12 %，水溶物质含量为0. 15?0. 20 %。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述硅藻土 A中，Si02含量为96. 0? 96.2%，A1203含量为1.0?1.2 %、Fe203含量为0.3?0.4%，酸溶物质含量为0.05? 0· 12%，水溶物质含量为0· 15?0· 20%。
3. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述硅藻土 A的比表面积为 2. 2 ?2. 3m2/g，优选为 2. 228m2/g。
4. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述硅藻土 A的离心湿密度为 0· 23 ?0· 24g/cm2,优选为 0· 237g/cm2。
5. 根据权利要求1?4任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述娃藻土 A的型号 为 CELPURE1000。
6. 根据权利要求1?5任意一项所述的制备方法，其特征在于： 制备白蛋白过程中，FIV上清和FV沉淀的制备方法如下： FIV上清的制备：以FI+II+III上清为原料，经过低温乙醇法分离FIV，压滤，取上清即 得；所述压滤过程中，使用PALL50P滤板，滤板的用量为10?13m2/1000L血楽；采用娃藻土 A和珍珠岩为助滤剂与待滤液混匀，硅藻土 A的用量为3. 0?3. 5g FI+II+III上清液蛋白 /lg硅藻土；珍珠岩的用量为2. 0?3. OgFI+11+III上清蛋白/lg珍珠岩； FV沉淀的制备：取FIV上清经过低温乙醇法分离FV，压滤，取沉淀即得；分离FV后的压 滤过程中，使用PALL50P滤板,滤板的用量为10?13m2/1000L血楽；采用娃藻土 A为助滤 齐U，其中，预涂层所用硅藻土 A为40-60g/平方米滤板，待滤液中硅藻土 A的用量为1. 0? 1. 5g/L 血楽； 制备球蛋白过程中，FI+III上清和FII沉淀的制备方法如下： FI+III上清的制备：取FI+II+III沉淀，经过低温乙醇法分离提取FI+III，压滤，取上 清即得；所述压滤过程中，采用BECO Steril PR40滤板，滤板用量为10?13m2/1000L血浆； 以硅藻土 A为助滤剂与待滤液混匀，硅藻土 A用量为8?9g/L血浆； FII沉淀的制备：取FI+III上清经过低温乙醇法分离FII，压滤，取沉淀即得；分离FII 后的压滤过程中，使用PALL50滤板,滤板的用量为5?10m2/1000L ;采用娃藻土 A为助滤 齐[J，预涂层所用硅藻土 A为80-95g/m2滤板，待滤液中硅藻土 A的用量为0. 2?0. 3g/L血 浆。
7. 权利要求1?6任意一项所述方法制备的白蛋白和球蛋白。
8. 血液制品中FI+II+III沉淀或FI+II+III上清的制备方法，它是以血浆为原料，经过 低温乙醇法分离提取FI+II+III，压滤，分取沉淀或上清即得，其特征在于：所述压滤过程 中，使用PALL50P滤板，滤板的用量为10?13m 2/1000L血浆；采用硅藻土 A为助滤剂与待 滤液混勻，娃藻土 A的用量为4. 5?5. 5g血楽蛋白/lg娃藻土 A。
【文档编号】C07K14/47GK104086645SQ201410314633
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月3日 优先权日:2014年7月3日
【发明者】杨宇, 杨汇川, 余鼎, 吕家成, 兰学渊 申请人:成都蓉生药业有限责任公司