一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法
【专利摘要】本发明属于天然产物分离提取【技术领域】。具体涉及一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法。所述方法包括用丙酮、乙醇提取卵磷脂，柱层析法进行纯化，以异丙醇-甲醇作为洗脱剂，得到高纯度的卵磷脂。本发明从海洋加工副产物鱼卵中提取高纯度的卵磷脂。得到的产品纯度高，且无毒；本发明方法可为医药品，保健品和化妆品等产品提供含不饱和脂肪酸比例高达39.15%的高纯度卵磷脂。
【专利说明】一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然产物分离提取【技术领域】。具体涉及一种硅胶柱层析法分离纯化鱼卵中卵磷脂的方法。
【背景技术】
[0002]磷脂(Phospholipid)，也称磷脂类、磷脂质，是一类含磷酸根脂质的总称，属于复合脂质。磷脂在植物种子、动物脏器、血液、卵巢、蛋黄及细菌中与油脂并存，是生物细胞构成的必需物质，也是生命的基础物质之一。
[0003]一般磷脂组成成分包括:卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇。其中，卵磷脂是磷脂的主要组成成分，同时具有亲水性磷酸脂酪基、胆碱或胆胺等(极性基团)和疏水性脂肪酸基(非极性基团)，因此卵磷脂是一种两性表面活性剂。具有分散、润湿、溶解、消泡等作用，在营养和保健方面也起着非常重要的作用，能预防和治疗高胆固醇和高脂血症，缓解糖尿病的病情等功能，因此，卵磷脂是目前公认的最具有生物学活性的磷脂，在食品、医药、化妆品和饲料及其它工业部门都有着广泛的应用。
[0004]海洋食品加工副产物鱼卵等下脚料中含有丰富的磷脂，而且卵磷脂占比较高，且相比传统动植物来源磷脂，其结构中富含有不饱和脂肪酸。为增加海洋食品加工企业加工下脚料的经济附加值，可以开发上述资源用于提取富含不饱和脂肪酸的卵磷脂，增加相关产业的经济附加值。
[0005]柱层析的固定相分为氧化铝与硅胶两大类。由于氧化铝柱不能再生，无法重复使用，硅胶则成为最佳的固定相，流动相多种多样。因此，本专利采用硅胶柱层析的方法，从海洋食品加工副产物中分离纯化得到高纯度的卵磷脂，为海洋食品加工企业产业链的发展提供参考依据。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种硅胶柱层析法分离纯化卵磷脂的方法，可以从海洋加工副产物鱼卵中提取高纯度的卵磷脂。
[0007]本发明采取的技术方案如下:
(I)卵磷脂的提取:将鱼卵匀浆后，取匀浆后的鱼卵，用丙酮以l:5?l:9w/V的料液比浸提35?45min，抽滤后的滤饼用质量比为90?98%的乙醇，以料液比1:5?l:9w/v浸提，提取温度30?45°C，超声辅助萃取15?25min，超声波功率为300-500w，脉冲间隔I?5s，提取I?3次后抽滤，浓缩干燥得到卵磷脂粗品。
[0008](2)卵磷脂的纯化:将卵磷脂粗品溶于异丙醇中，用柱层析法进行纯化，以200-300目柱层析硅胶为固定相，流动相:异丙醇-甲醇作为洗脱剂，异丙醇-甲醇的体积比为1:1-1: 3，流速控制在2-4mL/min，洗脱液用TLC板定性分析，收集卵磷脂馏分，然后浓缩干燥，即得到卵磷脂产品。
[0009]本发明方法的优点: (1)本发明硅胶柱层析中的流动相采用异丙醇/甲醇体系，分离效果好；
(2)本发明方法中的洗脱剂回收率高，成本价格低；
(3)本发明方法得到的产品纯度高，且无毒；
(4)本发明方法可为医药品，保健品和化妆品等产品提供含不饱和脂肪酸比例高达39.15%的高纯度卵磷脂。
【具体实施方式】
[0010]实施例1
(1)取30g匀浆后的鱼卵，丙酮与鱼卵以1:5的料液比浸提35min，抽滤后滤饼用90%的乙醇，在料液比1:5，提取温度30°C的条件下，超声辅助萃取15min，超声波功率为300w，脉冲间隔2s，提取I次，抽滤；
(2)浓缩干燥:将乙醇提取液经40°C下减压浓缩后，置于45°C真空干燥得到粗磷脂2.1g ；
(3)分别将2.1g粗磷脂溶于异丙醇，氯仿和95%乙醇中，以2mL/min流速倒入硅胶柱中，分别采用三种洗脱体系，包括异丙醇-甲醇溶液(1:1 )，氯仿-甲醇(1:1)和95%乙醇。用TLC板检测样品的洗脱顺序。通过TLC分析，把与标准品卵磷脂有相同R值的PC馏分收集在一起，减压浓缩至膏状，真空干燥得到的卵磷脂的纯度分别为:92%，93.12%，87.22% ；说明氯仿-甲醇体系洗脱效果最好，但是鉴于氯仿毒性较大，不宜用于卵磷脂的纯化。综合，选择异丙醇-甲醇洗脱体系为最佳洗脱条件。
[0011]实施例2
(1)取30g匀浆后的鱼卵，丙酮与鱼卵以1:7的料液比浸提40min，抽滤后滤饼用95%的乙醇以7的料液比，45°C超声辅助萃取20min，超声波频率400w，脉冲间隔3s，反复提取2次，抽滤；
(2)浓缩干燥:将乙醇提取液经45°C减压浓缩后，置于50°C真空干燥得到粗磷脂
2.5g ；
(3)分别将2.5g粗磷脂溶于异丙醇，氯仿和95%乙醇中，以3mL/min流速倒入硅胶柱中，分别采用三种洗脱体系，包括异丙醇-甲醇溶液(1:2)，氯仿-甲醇(1:2)和95%乙醇。用TLC板检测样品的洗脱顺序。通过TLC分析，把与标准品卵磷脂有相同R值的PC馏分收集在一起，减压浓缩至膏状，真空干燥得到的卵磷脂的纯度分别为93.16%，93.45%，86.78%说明氯仿-甲醇体系洗脱效果最好，但是鉴于氯仿毒性较大，不宜用于卵磷脂的纯化。综合，选择异丙醇-甲醇洗脱体系为最佳洗脱条件。
[0012]实施例3
(1)取30g匀浆后的鱼卵，丙酮与鱼卵以1:9的料液比浸提45min，抽滤后滤饼用98%的乙醇以1:9的料液比，45°C超声辅助萃取25min，反复提取3次，超声波频率500w，脉冲间隔3s，抽滤；
(2)浓缩干燥:将乙醇提取液经45°C下减压浓缩后，置于55°C真空干燥得到粗卵磷脂
3.0g ；
(3)分别将3.0g粗磷脂溶于异丙醇，氯仿和95%乙醇中，以4mL/min流速倒入硅胶柱中，分别采用三种洗脱体系，包括异丙醇-甲醇溶液(1:3)，氯仿-甲醇(1:3)和95%乙醇。用TLC板检测样品的洗脱顺序。通过TLC分析，把与标准品卵磷脂有相同R值的PC馏分收集在一起，减压浓缩至膏状，真空干燥得到的卵磷脂的纯度分别为94.16%，95.10%，86.39%说明氯仿-甲醇体系洗脱效果最好，但是鉴于氯仿毒性较大，不宜用于卵磷脂的纯化。综合，选择异丙醇-甲醇洗脱体系为最佳洗脱条件。
【权利要求】
1.一种硅胶柱层析法分离纯化卵磷脂的方法，其特征在于:所述方法包括以下步骤:(O卵磷脂的提取:将鱼卵匀浆后，取匀浆后的鱼卵，用丙酮以l:5?l:9w/V的料液比浸提35?45min，抽滤后的滤饼用质量比为90、8%的乙醇，以料液比1:5?1: 9w/v浸提，提取温度30^450C，超声辅助萃取15?25min，超声波功率为300-500w，脉冲间隔f 5s，提取f 3次后抽滤，浓缩干燥得到卵磷脂粗品； (2)卵磷脂的纯化:将卵磷脂粗品溶于异丙醇中，用柱层析法进行纯化，以200-300目柱层析硅胶为固定相，流动相:异丙醇-甲醇作为洗脱剂，异丙醇-甲醇的体积比为1:1-1:3,流速控制在2-4mL/min，洗脱液用TLC板定性分析，收集卵磷脂馏分，然后浓缩干燥，即得到卵磷脂产品。
【文档编号】C07F9/10GK104370954SQ201410501211
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年9月26日 优先权日:2014年9月26日
【发明者】梁鹏, 陈丽娇, 程文健, 许艳萍, 张惠婷, 李丹, 曾文武, 钟机 申请人:福建农林大学