快速高效提取卡柏林类生物碱的方法
【专利摘要】一种从植物药材中提取卡柏林类生物碱的方法，包括(1)选取的药材用乙醇浸泡，渗漉提取，减压浓缩后得乙醇浸膏，所得到的乙醇浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取处理；(2)将乙酸乙酯萃取层和/或正丁醇萃取层用硅胶柱层析进行粗提取，洗脱剂选自氯仿-甲醇体系、石油醚-丙酮体系和石油醚-乙酸乙酯体系，以TLC薄层色谱法进行追踪；(3)将粗提取物以MCI gel CHP-20P柱层析分离，以TLC薄层色谱法进行追踪；(4)将(3)的提取物以Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析分离，以甲醇-氯仿溶液为洗脱剂；及(5)将(4)的提取物以HPLC纯化得到卡柏林类生物碱产物，色谱柱为反相柱，流动相为甲醇-水溶液。本发明方法可以纯化得到纯度很高(99％以上)的生物碱，提取收率远高于现有方法。
【专利说明】快速高效提取卡柏林类生物碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种可用于快速、高效提取植物中卡柏林类生物碱的方法。
【背景技术】
[0002] 中药是人类几千年以来在与疾病和伤痛作斗争的过程中，通过不断认知、不断实 践，积累得到的宝贵财富，是凝聚着人类上千年智慧的结晶。中药一般主要来自植物、动物 等，种类较多。明代的伟大医学家李时珍在《证类本草》的基础上进行修订，编成了符合时 代发展需要的巨著一《本草纲目》，此书收录中草药1892种，附方11000多个，《本草纲目拾 遗》又补充了 1021种中草药。根据相关调查数据显示，世界上的20000多种高等植物中，曾 进行过活性研究或者活性筛选的不到15%。因此，天然产物研究工作的潜力是巨大的。
[0003] 在古代，由于受到当时科技水平的制约，许多中草药的药效及其作用机制均不明 确。而近年来，随着人们对自身健康的重视程度逐步加深，回归自然的呼声越来越高，以及 科学技术的飞速发展，中草药和中成药等天然产物的药效研究在全世界都得到了高度的重 视。各国的新药研究开发工作也紧紧围绕着天然产物有条不紊地进行。
[0004] 寻找天然产物的活性成分，并进一步揭示其药效及其作用机制是天然产物化学研 究领域的核心问题，而此问题的关键点在于探寻先进有效的分离提纯分析方法。换言之，天 然产物中的物质的有效分离及结构鉴定是天然产物活性研究的基础，是天然产物化学研究 领域中的重点部分。
[0005] 生物碱是存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱 性有机化合物，有似碱的性质，所以过去又称为赝碱。大多数有复杂的环状结构，氮素多包 含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。生物碱具环状结构，难溶 于水，与酸可以形成盐，有一定的旋光性和吸收光谱，大多有苦味。呈无色结晶状，少数为液 体。生物碱有几千种，由不同的氨基酸或其直接衍生物合成而来，是次级代谢物之一，对生 物机体有毒性或强烈的生理作用。
[0006] 天然产物化学中传统的分离方法有：溶剂提取法、萃取、沉淀、结晶以及过滤。随着 天然产物化学以及分离技术的不断发展，高效新颖的分离技术在国内外天然产物化学研究 中得到了广泛的应用，其中包括：色谱分离技术、超临界流体萃取技术、膜分离技术、大孔树 脂吸附分离技术、分子蒸馏技术等。
[0007] 卡柏林类生物碱的结构特征为，其母体结构为C6-N1-C5的基本骨架，其侧链可以 有多种变化，整个化合物的极性随着侧链所连基团的极性而变化。
[0008] 传统的卡柏林提取方法，依赖于硅胶柱层析或者重结晶的方法。但此法主要针对 于极性中等或者极性偏小的化合物，如若化合物的极性较大，硅胶柱层析这种分离提取方 法的效果和效率则不佳；而如若选择重结晶方法，如何选择到合适的溶剂是较难解决的问 题。此外，运用硅胶柱层析分离提取得到的卡柏林生物碱，其纯度也不是很好。
【发明内容】
[0009] 本发明在于克服现有分离技术对于卡柏林系列生物碱进行分离时的不足，在传统 分离技术的基础上，根据卡柏林系列生物碱的特征提出一种新的分离提取纯化方法。
[0010] 本发明提供一种从植物药材中提取卡柏林类生物碱的方法，包括步骤：（1)选取 的药材用乙醇浸泡，渗漉提取，减压浓缩后得乙醇浸膏，所得到的乙醇浸膏依次用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇进行萃取处理；（2)将（1)中的乙酸乙酯萃取层和/或正丁醇萃取层用 硅胶柱层析进行粗提取，洗脱剂选自氯仿-甲醇体系、石油醚-丙酮体系和石油醚-乙酸乙 酯体系，以TLC薄层色谱法进行追踪；（3)将（2)中的粗提取物以MCIgelCHP-20P柱层析 分离，以甲醇-水溶液为洗脱剂，以TLC薄层色谱法进行追踪；(4)将（3)中得到的提取物以 SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离，以甲醇-氯仿溶液为洗脱剂，以TLC薄层色谱法进 行追踪；及（5)将（4)中得到的提取物以HPLC高效液相纯化得到卡柏林类生物碱产物，其 中色谱柱为反相柱，流动相为甲醇-水溶液。
[0011] 根据本发明具体实施例的方法，其中所述药材为白刺果、白刺杆、越南叶下珠、虎 皮楠或白饭树。
[0012] 根据本发明具体实施例的方法，经所述步骤（5)纯化，一一对应于所述白刺果、白 刺杆、越南叶下珠、虎皮楠及白饭树，分别得到如下结构式的卡柏林类生物碱：
【权利要求】
1. 一种从植物药材中提取卡柏林类生物碱的方法，其特征在于，包括步骤： (1) 选取的药材用乙醇浸泡，渗漉提取，再减压浓缩后得乙醇浸膏，所得乙醇浸膏依次 用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取处理； (2) 将（1)中的乙酸乙酯萃取层和/或正丁醇萃取层用硅胶柱层析进行粗提取，洗脱剂 选自氯仿-甲醇体系、石油醚-丙酮体系和石油醚-乙酸乙酯体系，以TLC薄层色谱法进行 追踪； (3) 将（2)中的粗提取物以MCI gel CHP-20P柱层析分离，以甲醇-水溶液为洗脱剂， 以TLC薄层色谱法进行追踪； (4) 将（3)中得到的提取物以S印hadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析分离，以甲醇-氯仿 溶液为洗脱剂，以TLC薄层色谱法进行追踪；及 (5) 将（4)中得到的提取物以HPLC高效液相纯化得到卡柏林类生物碱产物，其中色谱 柱为反相柱，流动相为甲醇-水溶液。
2. 根据权利要求1所述方法，其中步骤（2)中的洗脱剂选自100:1?3:1的氯仿-甲 醇体系、5:1?1:1的石油醚-丙酮体系和4:1?1:1的石油醚-乙酸乙酯体系。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（3)中以3:1?1:3的甲醇-水溶液为洗脱 剂。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（4)中以1:1?1:3的甲醇-氯仿溶液为洗 脱剂。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（5)中的流动相为1:4?4:1的甲醇-水溶 液体系，所述反相柱为C18-ODS-A柱。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中所述药材为白刺果、白刺杆、越南叶下珠、虎皮楠 或白饭树。
7. 根据权利要求6所述的方法，经所述步骤（5)纯化，一一对应于所述白刺果、白刺杆、 越南叶下珠、虎皮楠及白饭树，分别得到如下结构式的卡柏林类生物碱：
8. 根据权利要求1或7所述的方法，其中步骤（2)中的洗脱剂选自100:1?3:1的氯 仿-甲醇体系、5:1?1:1的石油醚-丙酮体系和4:1?1:1的石油醚-乙酸乙酯体系其中 步骤（3)中以3:1?1:3的甲醇-水溶液为洗脱剂；步骤（4)中以1:1?1:3的甲醇-氯 仿溶液为洗脱剂；步骤（5)中的流动相为1:4?4:1的甲醇-水溶液体系，所述反相柱为 C18-ODS-A 柱。
【文档编号】C07D417/04GK104327066SQ201410521507
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月30日 优先权日:2014年9月30日
【发明者】王成云, 沈永嘉, 王雨清, 姜坤 申请人:华东理工大学