一种高纯栀子苷的制备纯化方法
【专利摘要】一种高纯栀子苷的制备纯化方法，即一种以茜草科植物栀子的未成熟果实为原料，采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制工艺提取制备高纯栀子苷的方法。该方法具体如下：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎、烘干，用70~80%乙醇常温浸泡提取3次，每次1h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液用硅藻土过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，先用水洗去极性杂质，再用20%乙醇洗脱栀子苷，收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、烘干，得栀子苷粗品，纯度可达80%以上，粗品经无水乙醇重结晶进一步纯化，最终可制得纯度大于95%的高纯栀子苷产品。该方法简单、生产成本低、产品纯度高，对环境无污染,具有一定的优势，适合工业化生产。
【专利说明】一种高纯栀子苷的制备纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种高纯桅子苷的制备纯化方法，特别是以茜草科植物桅子的未成熟果实为原料，采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制工艺提取制备高纯桅子苷的方法，属于天然产物提取分离纯化领域。
【背景技术】
[0002]药食两用传统中药桅子为菌草科植物桅子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦经，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛等功效，常用于热病虚烦不眠、黄疸、淋病、消渴、目赤、咽痛、吐血、血痢疫病、扭伤肿痛等症。桅子的有效活性成分为环烯醚萜类化合物，包括桅子苷、羟异桅子苷、京尼平苷酸、京尼平-l-β-龙胆二糖苷等，其中含量最高的为桅子苷，中国药典(2010版，一部)中即以桅子苷为桅子药材的标志性成分。现代药理学研究表明，桅子苷具有对肝脏、胰腺细胞的保护作用，可以促进胆汁分泌，以及具有降糖、降压、解热、抗菌、抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤、抗细胞凋亡及神经保护等作用。桅子苷也是生产天然色素桅子蓝的重要原料。
[0003]研究发现，桅子果实在成熟过程中桅子黄色素的含量逐渐累积，而桅子苷含量逐渐降低，未变黄的桅子青果中桅子苷含量高于成熟的桅子。我们调查研究也发现，江西的桅子在每年7月中旬至8月初果实基本发育至成熟时大小，8月中旬以后进入成熟期开始变黄，至10月下旬变红，成熟期间果实的粒重和水分没有较大变化。现有桅子苷的生产都是采用传统工艺，以成熟的桅子果实为原料，提取完色素后再从苷水中纯化桅子苷，工艺复杂，由于成熟果实中色素含量较高，杂质不容易去除，桅子苷很难结晶，用传统工艺生产的桅子苷纯度偏低，杂质较多，直接影响进一步生产的桅子蓝的品质。如果以未变黄的桅子青果为原料，因原料中不含桅子黄色素，杂质较少，可直接提取和纯化桅子苷，工艺简单，制得的桅子苷产品纯度高，成本低廉，可解决后续生产桅子蓝的品质问题，比传统工艺有明显优势。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提出一种高纯桅子苷的制备纯化方法，即一种采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制的工艺，从茜草科植物桅子的未成熟果实中提取制备高纯度桅子苷的方法。
[0005]本发明的具体方法如下:
(1)提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果干粉，用10~12倍原料量(W/W)的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得桅子青果醇提浓缩液。
[0006](2)大孔树脂纯化:将上述过滤澄清的桅子青果醇提浓缩液上D101大孔树脂柱吸附，控制流速为每小时1~2倍柱体积量，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显桅子苷吸收峰时停止上样。先用约4倍柱体积量(W/W)的纯水洗杂，再用20%乙醇洗脱桅子苷，检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显桅子苷吸收峰时停止洗脱。最后用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。
[0007](3)浓缩干燥:收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法检测其中桅子苷含量，纯度达80%以上。
[0008](4)重结晶精制:将上述桅子苷粗品用2~3倍量(W/W)无水乙醇于50~60°C加热溶解，趁热过滤，滤液冷却后于4~5°C静置析晶，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得纯度大于95%的桅子苷粉末产品。
[0009]本发明一种高纯桅子苷的制备纯化方法的有益效果是:以未变黄的桅子青果为原料，因原料中不含桅子黄色素，杂质较少，可直接提取和纯化桅子苷，方法简单，生产成本低，制得的桅子苷产品纯度高，可解决后续生产桅子蓝的品质问题，比传统工艺有明显优势；对环境无污染，适合工业化生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1桅子苷的结构图。
[0011]图2桅子苷理化特征数据表。
【具体实施方式】
[0012]实例1
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉50 g，室温下用74%乙醇浸泡提取三次，每次大约200 g乙醇，每次浸泡提取1小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得桅子青果醇提浓缩液。
[0013]大孔树脂纯化:使用一根装有50g预处理好的D101大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速1.0-1.5 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显桅子苷吸收峰时停止上样。用约200 g纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱桅子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显桅子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约250g。用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。
[0014]浓缩干燥:收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法检测粗品桅子苷含量，纯度为82.2%。
[0015]重结晶精制:将上述桅子苷粗品1.0 g，加入2.0 g无水乙醇，于60°C加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4°C冰箱静置，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，碾碎，得白色桅子苷粉末产品0.62 g，用HPLC法检测桅子苷含量为98.1%。
[0016]实例2
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉200 g，室温下用70%乙醇浸泡提取三次，每次700~800 g乙醇，浸泡提取1小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得桅子青果醇提浓缩液。
[0017]大孔树脂纯化:使用一根装有200 g预处理好的D101大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速为4~5 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显桅子苷吸收峰时停止上样。用约800 g纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱桅子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显桅子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约800 go用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。
[0018]浓缩干燥:收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法检测粗品桅子苷含量，纯度为84.3%。
[0019]重结晶精制:将上述桅子苷粗品约5.0 g，加入12.0 g无水乙醇，于60°C加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4°C冰箱静置，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色桅子苷产品2.66 g，用HPLC法检测桅子苷含量为97.4%。
[0020]实例3
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉I kg，室温下用80%乙醇浸泡提取三次，每次大约4 kg乙醇，浸泡提取I小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得桅子青果醇提浓缩液。
[0021]大孔树脂纯化:使用一根装有500 g预处理好的DlOl大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速为10~12 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显桅子苷吸收峰时停止上样。用约4 kg纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱桅子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显桅子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约2 kg ο用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。
[0022]浓缩干燥:收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法检测粗品桅子苷含量，纯度为85.5%。
[0023]重结晶精制:将上述桅子苷粗品约10.0 g，加入20.0 g无水乙醇，于55°C加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4°C冰箱静置，待析晶完全，过滤，得白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色桅子苷产品6.17 g，用HPLC法检测桅子苷含量为98.6%ο
【权利要求】
1.一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤: (O原料:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干； (2)提取:用10~12倍原料量(W/W)的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次I小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得桅子青果醇提浓缩液； (3)大孔树脂纯化:将上述过滤澄清的桅子青果醇提浓缩液上DlOl大孔树脂柱吸附，控制流速为每小时1~2倍柱体积量，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显桅子苷吸收峰时停止上样。先用约4倍柱体积量(W/W)的纯水洗杂，再用20%乙醇洗脱桅子苷，检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显桅子苷吸收峰时停止洗脱。最后用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化； (4)浓缩干燥:收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法检测其中桅子苷含量，纯度达80%以上； (5)重结晶精制:将上述桅子苷粗品用2~3倍量(W/W)无水乙醇于50~60°C加热溶解，趁热过滤，滤液冷却后于4~5°C静置析晶，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得纯度大于95%的桅子苷粉末产品。
2.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于原料为生长至7-8月份的未成熟桅子果实，果皮颜色为青色，果仁未变黄。
3.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于提取溶剂为70-80%乙醇，用量为原料的10~12倍量(W/W)。
4.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化所用大孔树脂为DlOl或同类型大孔吸附树脂。
5.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时上样终点为树脂柱流出液检出桅子苷。
6.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用水洗脱杂质，水的用量不少于4倍树脂量。
7.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用20%乙醇洗脱桅子苷。
8.根据权利要求1所述一种高纯桅子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用无水乙醇为重结晶溶剂，用量为桅子苷粗品的2~3倍量。
【文档编号】C07H17/04GK104497076SQ201410614395
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月5日 优先权日:2014年11月5日
【发明者】王国艳, 张保霞, 林晓锋, 唐婷 申请人:潜江市绿海宝生物技术有限公司