一种小钻中长南五味子素d的提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。通过梯度洗脱长南五味子素D，能有效提高柱效，提高了长南五味子素D的分离能力，最后得高纯度的长南五味子素D。
【专利说明】-种小钻中长南五味子轰D的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物的提取领域，尤其涉及一种瑶药小钻中长南五味子素D的提取 方法。
【背景技术】
[0002] 瑶药小钻来源于五味子科南五味子，属植物长梗南五味子的根和茎。主要分布于 我国南部，如云南、四川、浙江、福建、广东、广西等地。小钻味甘、苦、辛，性温。属风打相兼 药。健脾补肾，理气活血，巧风通络，消肿止痛。小钻为广西瑶医习用药材，用于治疗产后浮 肿、经闭腹痛、疵气痛、肾虚腰痛、胃痛、头风痛、风湿性关节炎、跌打损伤和骨折等。但迄今 基本没有小钻对照品长南五味子素D的提取制备与纯化的方法。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于根据小钻中含有长南五味子素D，提供一种小钻中长南五味子 素D的提取方法。
[0004] 本发明提供的技术方案为：
[0005] -种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
[0006] 步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与娃胶混合，得第一产物；
[0007] 步骤二：将所述第一产物上娃胶柱，用氯仿和丙丽的混合液对所述第一产物洗脱， 得第一洗脱产物；
[0008] 步骤H ;将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次 与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
[0009] 步骤四：将第一粗样上反相娃胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述 长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
[0010] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化 方法为：
[0011] 将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在英光下观察显色，将相同斑点的样品 合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含 有长南五味子素D的样品，若样品在英光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至 样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
[0012] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解， 将小钻研磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与己醇按1 : 8-1 : 12的比例混合，浸泡 5-9天后将混合物蒸发至无醇味。
[0013] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为己 酸己醋；娃胶为100-200目。
[0014] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中娃胶柱中 的娃胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙丽的配比依次为100 : 1、20 : 1、 10 : 1、5 : 1、1 : 1。
[0015] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤H中薄层层析包 括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取， 将萃取样在娃胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出 含有长南五味子素D的样品，得第一粗样。
[0016] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度 洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70%、80%和100%。
[0017] 优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层 层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将 萃取物用质量比为2 : 1-4 : 1的石油離和己酸己醋的混合物点板，在英光下观察，分样， 找出含有长南五味子素D的样品。
[0018] 本发明具有W下有益效果；一方面，本发明提取的长南五味子素D可W很好的治 疗骨科疾病，如促进骨折愈合，治疗骨折引发的感染等，疗效好，组方简单，可降低使用者的 经济负担。另一方面，采用萃取和洗脱的方法来提取小钻中的长南五味子素D，萃取具有提 取效率高，使长南五味子素D的提取更充分，小钻具有热稳定性好的优点，因此对温度的敏 感度不高，利用醇来萃取操作简单；通过梯度洗脱长南五味子素D，能有效提高柱效，改善 检测器的灵敏度，缩短了分析样品的周期，提高了长南五味子素D的分离能力，最后得到的 长南五味子素D的纯度可达到98. 5 % W上。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，W令本领域技术人员参照说明书 文字能够据W实施。
[0020] 一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
[0021] 步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与娃胶混合，得第一产物；
[0022] 步骤二：将所述第一产物上娃胶柱，用氯仿和丙丽的混合液对所述第一产物洗脱， 得第一洗脱产物；
[0023] 步骤H ;将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次 与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
[0024] 步骤四：将第一粗样上反相娃胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述 长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。 [00巧]所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
[0026] 将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在英光下观察显色，将相同斑点的样品 合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含 有长南五味子素D的样品，若样品在英光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至 样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
[0027] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研 磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与己醇按1 : 8-1 : 12的比例混合，浸泡5-9天后 将混合物蒸发至无醇味。
[0028] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为己酸己醋；娃 胶为100-200目。
[0029] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中娃胶柱中的娃胶为 200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙丽的配比依次为100 : 1、20 : 1、10 : 1、 5 : 1、1 : 1。
[0030] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤H中薄层层析包括；将所述 第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在 娃胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五 味子素D的样品，得第一粗样。
[0031] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇 溶液的质量分数依次为70%、80%和100%。
[0032] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层层析包括： 将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质 量比为2 : 1-4 : 1的石油離和己酸己醋的混合物点板，在英光下观察，分样，找出含有长 南五味子素D的样品。
[0033] 实施例1 ;
[0034] -种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
[00巧]步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与娃胶混合，得第一产物；
[0036] 步骤二：将所述第一产物上娃胶柱，用氯仿和丙丽的混合液对所述第一产物洗脱， 得第一洗脱产物；
[0037] 步骤H ;将第一洗脱产物薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长 南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
[0038] 步骤四：将第一粗样上反相娃胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述 长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
[0039] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
[0040] 将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在英光下观察显色，将相同斑点的样品 合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含 有长南五味子素D的样品，若样品在英光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至 样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
[0041] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研 磨成60目的粉末，之后将小钻粉末与己醇按1 : 10的比例混合，浸泡7天后将混合物蒸发 至无醇味。
[0042] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为己酸己醋；娃 胶为150目。
[0043] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中娃胶柱中的娃胶为 200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙丽的配比依次为100 : 1、20 : 1、10 : 1、 5 : 1、1 : 1。
[0044] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤H中薄层层析包括；将所述 第一洗脱产物分成多份，每份500ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在娃胶 下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五味子 素D的样品，得第一粗样。
[0045] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇 溶液的质量分数依次为70%、80%和100%。
[0046] 所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层层析包括： 将所述第二洗脱产物分成多份，每份50ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质量比 为3 : 1的石油離和己酸己醋的混合物点板，在英光下观察，分样，找出含有长南五味子素 D的样品。
[0047] 下面通过对提取物长南五味子素D的样品鉴定及纯度检查来进一步验证小钻中 的提取物。
[0048] 实验一；提取物长南五味子素D的鉴定，将实施例1得到的提取物长南五味子素D 置于氣代氯仿中，进行核磁共振检测其结果见表1。
[0049] 表1提取物长南五味子素D在氣代氯仿中氨和碳的数据
[0050]
【权利要求】
1. 一种小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物； 步骤二：将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第 一洗脱产物； 步骤三：将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长 南五味子素 D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素 D的粗样，得第一粗样； 步骤四：将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南 五味子素 D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素 D。
2. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述第二洗脱 产物的纯化方法为： 将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在荧光下观察显色，将相同斑点的样品合并， 并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素 D的标样对比，找出并提取含有长南 五味子素 D的样品，若样品在荧光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至样品中 无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素 D。
3. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述步骤一中 小钻的溶解，将小钻研磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与乙醇按1 : 8-1 : 12的比 例混合，浸泡5-9天后将混合物蒸发至无醇味。
4. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述步骤一中 萃取剂为乙酸乙酯；娃胶为100-200目。
5. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述步骤二 中硅胶柱中的硅胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙酮的配比依次为100 : 1、 20 : 1、10 : 1、5 : 1、1 : 1。
6. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述步骤三中 薄层层析包括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样 进行萃取，将萃取样在硅胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素 D的标样 对比，找出含有长南五味子素 D的样品，得第一粗样。
7. 如权利要求1所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述步骤四中 洗脱为梯度洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70^^80%和100%。
8. 如权利要求2所述的小钻中长南五味子素 D的提取方法，其特征在于，所述第二洗脱 产物的薄层层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产 物萃取，将萃取物用质量比为2 : 1-4 : 1的石油醚和乙酸乙酯的混合物点板，在荧光下观 察，分样，找出含有长南五味子素 D的样品。
【文档编号】C07D493/10GK104447785SQ201410745886
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】缪剑华, 唐炳兰, 王硕, 周小雷, 莫单丹, 龚小妹, 韦范, 樊溪源, 刘振杰 申请人:广西壮族自治区药用植物园