制备环状血管活性肽的方法

专利名称：制备环状血管活性肽的方法
技术领域：
本发明涉及环肽，该肽是血管活性肽(VIP)类似物，还涉及含有该环肽的药物组合物。该药物组合物可用于治疗支管气管气管缩窄病。
最初以猪肠中发现、分离并纯化血管活性肠(VIP)(US3879371)。该肽有28个氨基酸，它与肠促胰液肽和胰增血糖素在很多方面相同(Carlguist等人，Horm.Metab.Res.，14，28-29(1982)。VIP的氨基酸顺序如下His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Try-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn-NH2[(SEQ ID NO1)-NH2]已知VIP具有很宽的生物活性范围，它遍及胃肠道和循环系统。由于它类似胃肠激素，已发现VIP能刺激胰腺和胆汁分泌，肝糖原分解，胰增血糖素和胰岛素分泌，并能使胰碳酸氢盐释放[Kerrins，C.和Said，Said，S.I.，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，142，1014-1017(1972)，Domschke，S.等人.，Gastroenterology，73，478-480(1977)]。
已用免疫测定法确定了含VIP的神经元在内分泌和外分泌系统、肠和平滑肌细胞中的位置[Polak，J.M.等人.，Gut，15，720-724(1974)]。已发现VIP是导致几种激素释放的神经效应器，这几种激素包括促乳素[Frawley，L.S.，等人Neuroendocrinology，33，79-83(1981)]，甲状腺素[Ahren，B.，等人.，Nature，287，343-345(1980)]，胰岛素及胰增血糖素[Schebalin，M.，等人.，Aml.，J.Physiology E.，232，197-200(1977)]。也已发现VIP能在体内和体外刺激肾中释放血管紧张肽原酶[Porter，J.P.，等人Neuroendocrinology，36，404-408(1983)]。已发现VIP存在于各种动物和人的气道神经末端中[Dey，R.D.，和Said，S，I.，Fed.Proc.，39，1062(1980)；Said，S.I.，等人.，Ann，N.Y.Acad.Sci.，221，103-114(1974)]。VIP对心血管和支气管肺的影响值得注意，因为已发现VIP是有效的血管舒张药和有效的平滑肌松弛药，它作用于外周、肺和冠状血管床[Said，S.I.，等人.，Clin.Res.，20，29(1972)]。已发现VIP对大脑血管具有血管舒张作用[Lee，T.J.and Berszin，I.，Science，224，898-900[(1984)]。体外研究证明血管活性肠肽可外用于脑动脉，导致血管舒张，认为VIP可能作脑血管舒张的介质[Lee，T.and Saito，A.，Science，224，898-910(1984)]。也已证明是有效的眼血管舒张药[Nilsson，S.F.E.和Bill，A.，Acta Physiol.Scand.，121，385-392(1894)]。
VIP对免疫系统具有调节作用。O′Dorisio等人已证明VIP能调节淋巴细胞的增生和迁移[J.Immunol.，135，792s-796s(1985)]。
由于已发现VIP能使平滑肌松弛，通常它存在于气道组织中，如上所述，曾假定VIP为支气管平滑肌松弛的内生介质[Dey，R.D.andSaid，Said，S.I.，Fed.Proc.，39，1962(1980)]。现已证明，与来自正常病人的组织相比，来自哮喘病人的组织不含任何免疫活性VIP。这或许是与哮喘病有关的VIP或VIPergic神经纤维损失的征兆[Ollerenshaw，S.等人.，New England J.Med.，320，1244-1248(1989)]。体外和体内试验表明VIP能使气管平滑肌松弛，并对支气管收缩剂的作用有保护功能，如组胺和前列腺素F2a[Wasserman，M.A.等人.，in Vasoactive IntestinalPeptide，S.I.Said，de.，Raxen Press，N.Y.，1982，PP177-184；Said，S.I.等人.，Ann.N.Y.Acad.Sci.，221，103-114(1974)]。当静脉内给药时，已发现VIP能保护支气管收缩剂如组胺、前列腺F2a、白三烯(Leukotrienes)、血小板活性因子以及抗原诱导的支气管收缩[上述Said，S.I.，等人.，(1982)]。也已发现VIP能抑制在体外人的气道组织中粘液分泌[Coles，S.J.等人.，Am.ReV.Respir.Dis.，124，531-536(1981)]。
对于人来说，已证明若哮喘病人由静脉内注入药，VIP能使高峰呼气流的速率增加，并保护组胺诱导的支气管扩张[Morice，A.H.andSever，P.S.，Peptides，7，279-280(1986)；Morice，A.等人，The Lancet，II1225-1227(1983)]。然而，由这种VIP静脉内注入所观测到的肺效果伴随有心血管副作用，非常明显的是低血压和心动过速，也会引起面颊潮红。当静脉内给药剂量没有引起心血管副作用时，则VIP不会改变特定的气道传导性[Palmer，JIB.D.，等人.，Thorax，41，663-666(1986)]。活性不足可解释为由于给药剂量低，并且可能由于该化合物快速降解。
当以气溶胶对人给药时，天然的VIP在保护组胺诱导的支气管收缩方面只在一定程度上有效[Altieri等人.，Pharmacologist，25，123(1983)]。发现VIP对基线气道参数没有明显影响，但当用吸入法对人给药时，对组胺诱导的支气管收缩会有保护作用[Bames，P.J.and DixonC.M.S.，Am.Rev.Respir Dis.，130，162-166(1984)]。据报道，当以气溶胶给药时，VIP未出现与支气管扩张有关的心动过速或低血压反应[Said，S，I.等人.，in Vasoactivs Intestinal Peptide，S.I.Said，ed.，Raven Press，N.Y.，1928 PP 185-191]。
由于VIP有意义的、潜在的临床有效生物活性，该物质已成为以提高这种分子的一种或多种特性为目的的已报道的一些合成方案的目标。Takeyama等人报道的一种VIP类似物，它在位置8具有取代天冬氨酸的谷氨酸。发现该化合物不比天然VIP有效[Chem.Pharm.Bull.，28，2265-2269(1980)]。Wendlberger等人已公开在位置17具有取代蛋氨酸的正亮氨酸的VIP类似物的制法[Peptide，Proc.16th Eur.Pept.Symp，290-295(1980)]。发现该肽在显示来自肝膜制剂的放射碘VIP的能力方面与天然VIP是相同的。Watts和Wooton已报道一系列线状和环状VIP片段，它们含有6-12个天然序列的残基(EP184309和EP325044；US4737487和US4866039)。Tumer等人已报道片段VIP(10-28)是VIP的拮抗物[Peptides，7，849-854(1986)]。也已报道该取代的类似物[4-Cl-D-Phe6，Leu17]-VIP能与VIP受体结合，并对抗VIP的活性[Pandol，S等人.，Gastrointest.Liver Physio1.，13，G 553-G 557(1986)]。Gozes等人报道该类似物[Lys1，Pro2，Arg3，Arg4，Pro5，Tyr6]-VIP是胶质细胞上与受体结合的VIP竞争抑制剂[Endocrinology，125，2945-2949(1989)]。Robberecht等人报道的几种VIP类似物具有在天然VIP的N-末端中所取代的D-残基[Peptides，9，339-345(1988)]。所有这些类似物与VIP受体结合均不太紧，在C-AMP活化方面，其活性比天然VIP低。Tachibana和Ito报道了几种前体分子的VIP类似物[in Peptide Chem.，T.Shiba and S.Sakakibara，eds.，Prot.Res.Foundation，1988，PP481-486，JP1083012，US4822774]。已证明这些化合物是支气管扩张药，其药效比VIP高1-3倍，并具有1-2倍高的低血压活性。Musso等人也报道一些在位置6-7、9-13、15-17和19-28取代的VIP类似物[Biochemistry，27，8174-8181(1988)；EP8271141；Us4835252]发现这些化合物在与VIP受体结合及生物反应方面效能与天然VIP相等或更小。Bartfai等人报道了一系列多重取代的[Leu17]-VIP类似物[Intemational Patent Applicaion NO.WO 89/05857]。
本发明包括环状血管活性肽类似物。环肽是一种肽，其特征为肽链中一个氨基酸的侧链羧基端通过生成酰胺键与肽链中另一个氨基酸的侧链氨基端共价连接。肽链中二个氨基酸残基间的共价键生成环状结构。
与母体线性类似物相比，环肽的生物活性实质上是不同的。环肽构象更刚硬，具有较好确定的结构。这些变化反映在环肽的生物外形中。肽类似物的成环作用可延长肽的作用时间，这是由于刚性增加，使它不易发生化学和酶的降解。环肽的生物利用率增加，这是由于结构刚性化导致肽对靶受体有更大的专一性，从而可降低与所要环肽同时存在的不希望有的生物活性的倾向。
本发明包括新型的环肽，其化学式如下
其中R8是Asp，Glu或Lys；R12是Arg,Lys，Om或Asp；R17是Mel或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其在可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y、R8和R12如同上面化学式I。
本发明包括化学式为II的新型环肽
其中R8是Asp或Asn；R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y如同上面化学式II。
本发明包括化学式为III的新型环肽
其中R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y如同上面化学式II。
本发明包括化学式为IV的新型环肽
其中R12是Arg或Lys；R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X和Y如同上面化学式IV。
本发明也包括化学式为V的新型环肽
其中R1是His，N-CH3-Ala；R2是Ser或Ala；R6是
这里的Q是环己基低级烷基或芳基低级烷基；R8是Asp，Glu或Ala；R10是Tyr或R6；R12是Arg或Lys；R16是Gln或Ala；R17是Met，Nle或Ala；R19是Val或Ala；R22是Tyr或R6；R24是Asn或Ala；R26是Ile、Val或Leu；R27是Leu或Lys；R28是Asn、hr或Lys；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基、能水解的羧基保护基、或R29-R30-R31-Z；R29是Gly或Ala；R30是Gly或Ala；R31是Ala、Met、Cys(Acm)或Thr；Z是羟基或能水解的羟基保护基；或其可药用的盐。
Q最好是
其中n＝1或2；X1和X2分别为氢、OH、OCH3、F、Cl、I、CH3、CF3、NO2、NH2、N(CH3)2、NHCOCH3、NHCOC6H5或C(CH3)3。
更优选地，Q是苄基、P-氟代苄基、P-氨基苄基、P-羟基苄基、O-甲基苄基、1-萘甲基或2-萘甲基。Q最好为苄基。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y、R1、R2、R6、R8、R10、R12、R16、R17、R19、R22、R24和R27如同上面化学式V。
最优选的环肽是AC-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thy31]-VIP环(Lys21→Asp25)[AC-(SEQ ID NO52)-NH2]。
本发明肽能产生持续的气管平滑肌松弛作用而没有心血管副作用，因此，可用于治疗支气管收缩病如哮喘。
本发明涉及新型的血管活性肠肽(VIP)类似物，它能持续增加支气管扩张活性而没有明显副作用。
本文所用的术语“低级烷基”包括含有1-6个碳原子的直链和支链饱和脂族烃基。优选的低级烷基是甲基。
本文所用术语“芳基”表示单环芳烃基，如苯基，其中一个或多个位置可由低级烷基、低级烷氧基、氨基、硝基、一或二-低级烷基氨基、低级烷基酰氨基或苯基酰氨基取代或不取代。“芳基”也表示多环芳基，如萘基，它可被上述一个或多个取代基所取代。优选的芳基是苯基，未由氟取代或由氟单取代，或未取代的萘基。
本文所用的X是在氨基末端氨基酸的氨基氮上的一个取代基，Y是在羧基末端氨基酸的羧基上的一个取代基。X可为氢或能水解的氨基保护基。Y可为羟基或能水解的羧基保护基。
关于术语“能水解的氨基保护基”和“能水解的羧基保护基”，任何能通过水解除去的一般保护基团均能用于本发明。该基团的例子如下所述，优选的氨基保护基是
其中X3是低级烷基或卤代低级烷基。这些保护基团中，X3为C1-3烷基或卤代C1-3烷基是特别优选的。
优选的羧基保护基是低级烷基酯、NH2和低级烷基酰胺，含C1- 3的烷基酯，NH2和C1-3烷基酰胺是特别优选的。
本发明包括化学式为I的新型环肽
其中R8是Asp，Glu或Lys；R12是Arg，Lys，Om或Asp；R17是Mel或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y、R8和R12如同上面化学式I。
本发明包括化学式为II的新型环肽
其中R8是Asp或Asn；R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y如同上面化学式II。
本发明包括化学式为III的新型环肽
其中R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y如同上面化学式II。
本发明包括化学式为IV的新型环肽
其中R12是Arg或Lys；R17是Met或Nle；R26是Ile或Val；R28是Asn或Thr；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基或能水解的羧基保护基；或其可药用的盐。
最好是化学式如下的肽
其中X和Y如同上面化学式IV。
本发明也包括化学式为V的新型环肽
其中R1是His，N-CH3-Ala；R2是Ser或Ala；R6是
这里的Q是环己基低级烷基或芳基低级烷基；R8是Asp，Glu或Ala；R10是Tyr或R6；R12是Arg或Lys；R16是Gln或Ala；R17是Met，Nle或Ala；R19是Val或Ala；R22是Tyr或R6；R24是Asn或Ala；R26是Ile、Val或Leu；R27是Leu或Lys；R28是Asn，Thr或Lys；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基、能水解的羧基保护基、或R29-R30-R31-Z；R29是Gly或Ala；R30是Gly或Ala；R31是Ala、Met、Cys(Acm)或Thr；Z是羟基或能水解的羟基保护基；或 其可药用的盐。
Q最好是
其中n＝1或2；X1和X2分别为氢、OH、OCH3、F、Cl、I、CH3、CF3、NO2、NH2、N(CH3)2、NHCOCH3、NHCOC6H5或C(CH3)3。
更优选地，Q是苄基、P-氟代苄基、P-氨基苄基、P-羟基苄基、O-甲基苄基、1-萘甲基或2-萘甲基。Q最好为苄基。
最好是化学式如下的肽
其中X、Y、R1、R2、R6、R8、R10、R12、R16、R17、R19、R22、R24和R27如同上面化学式V。
本发明还涉及所述肽的制备方法，含有该肽的药物组合物，以及用该肽和无毒惰性的、药学上适用的载体物料治疗支气管气管缩窄病的方法。所述环状多肽的制备方法，其特征在于(a)使已保护和树脂结合的相应氨基酸顺序的肽选择性去保护以生成自由侧链氨基基团和自由侧链羧基基团；(b)使自由侧链氨基基团和自由侧链羧基基团经合适的酰胺生成试剂作用共价连接；和(c)用合适的去保护和分裂试剂处理，若需要，在有更合适的添加剂作阳离子净化剂情况下，去保护和从树脂上分裂该环肽，若需要，使环肽转化成可药用的盐。
本发明还涉及用该环肽制造药物组合物以用于治疗支气管气管缩窄病。
用于限定该肽的术语一般是现有技术使用的，其中N-端氨基基团位于左边，C-端羧基基团位于右边。所谓天然氨基酸意思是指在蛋白质中发现的一种天然存在的氨基酸，即，Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Lys、Arg、Asp、Asn、Glu、Gln、Cys、Met、Phe、Tyr、Pro、Trp和His。这里的氨基酸具有异构形式，除非另外特别指明，它表示氨基酸的L形式。
下列缩写符号用于表示除上述以外的氨基酸、保护基、溶剂、试剂和类似物。
符号 表示Ac 乙酰基Orm 鸟氨酸Nle 正亮氨酸Fmoc9-芴基甲氧羰基Fm 9-芴基甲基Boc t-丁氧基羰基Bom 苄氧基甲基CH2Cl2二氯甲烷CH3CN 乙腈DMF 二甲基甲酰胺DIPEAN，N-二异丙基乙基胺TFA 三氟乙酸HOBT N-羟基苯并三唑DCC N，N′-二环己基碳化二亚胺DIC N，N′-二异丙基碳化二亚胺BOP 苯并三唑-1-基氧-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐N-Me-Ala
FAB-MS快原子轰击质谱测定法在“VIP”前面括号是列出的取代氨基酸表示天然VIP肽顺序的类似物，在括号取代基左边的表示N-末端氨基的衍生，即如用X表示。VIP右边园括号中出现的顺序号表示氨基酸删除并加到天然顺序号中，即，例如，Ac-[Lys12，Nle17，Gly29]-VIP(1-29)-NH2表示一个多肽，它具有相应于人的天然VIP的氨基酸顺序，其中乙酰基已取代N-末端中的氢，赖氨酸已取代位置12的精氨酸，并且正亮氨酸已取代位置17的蛋氨酸。另外，甘氨酸已偶联在天冬酰胺28的羧基位点，称为位置29。附在VIP后面的“OH”和“-NH2”或园括号分别表示该多肽的游离酸和酰胺形式。若二者都不附带时，则用该表达方式来包括这两种形式。
如上所述，环肽(如本文所限定的)是一种肽，其特征为该肽中一个氨基酸的侧链羧基末端通过生成酰胺键与该肽链中另一个氨基酸链氨基基末端共价连接。用一些术语和符号表示环肽，其例子如下
Ac-[Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Asp8→12)b.[Ac-(SEQ ID NO20)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Asp8→Lys12)c.[Ac-(SEQ ID NO20)-NH2]上述三种结构(a-c)、附带用SEQ ID NO表示及下列顺序均表示和限定相同的多肽，该多肽具有相应于人的天然VIP的氨基酸顺序，其中乙酰基已取代N-末端中的氢，赖氨酸已取代位置12的精氨酸，正亮氨酸已取代位置17的蛋氨酸。缬氨酸已取代位置26的异亮氨酸，苏氨酸已取代位置28的天冬酰胺。另外，位置8中天冬氨酸的侧链羧基和位置12中赖氨酸的侧链氨基之间已形成一个酰胺键，从而形成环肽类似物。认为肽结构的上述这种表示方法是等效的且可互换。
本文所用的术语“Rn”表示本文所示一种结构中的位置n的一个氨基酸，“Xaa”表示下列顺序的位置n中的一个氨基酸，当Xaa表示选自二个或多个氨基酸的情况下，二者是等效的，且可互换。
本发明的环肽可用于下列构型，除非另有说明。
链中氨基酸结合生成肽环的氨基酸末端Lys ε氨基(ε＝epsilon)Orn δ氨基(δ＝delta)Asp β羧基(β＝beta)Glu γ羰基(γ＝gamma)本发明的代表性化合物包括具有下列氨基顺序的肽Ac-[Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Asp8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO20)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Glu8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO21)-NH2]Ac-[Asn8，Asp9，Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Asp9→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO22)-NH2]Ac-[Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Asp8→Orn12)[Ac-(SEQ ID NO23)-NH2]Ac-[Lys8，Asp12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys8→Asp12)[Ac-(SEQ ID NO24)-NH2]Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Glu8→Orn12)[Ac-(SEQ ID NO25)-NH2]Ac-[Lys12，Glu16，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys12→Glu16)[Ac-(SEQ ID NO26)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Asp24，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys20→Asp24)[Ac-(SEQ ID NO27)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO28)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO29)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，2-Nal10，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Met31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO30)-NH2]Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO31)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，cys(Acm)31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO32)-NH2]Ac-[Ala2，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO33)-NH2]Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo-(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO34)-NH2]Ac-[2-Nal10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO35)-NH2]Ac-[O-CH3-Tyr10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO36)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，p-NH2-Phe10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO37)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO38)-NH2]Ac- [N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO39)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO40)-NH2]Ac-[O-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO41)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIPcyclo(Lys21Asp25)[Ac-(SEQ ID NO42)-NH2]Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28Ala29-31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO43)-NH2]Ac-[N-Me-Ala1，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO44)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28] -VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO45)-NH2]Ac-[1-Nal6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28] -VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO46)-NH2]Ac-[Glu8，p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO47)-NH2]Ac-[Glu8，O-CH3-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO48)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO49)-NH2]Ac-[1-Nal6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO50)-NH2]Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO51)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO52)-NH2]Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO53)-NH2]Ac-[p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO54)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIPcyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO55)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO56)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO57)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO58)-NH2]Ac-[Ala8，Lys12，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO59)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO60)-NH2]Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO61)-NH2]Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO62)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO63)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28] -VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO64)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac- (SEQ ID NO65)-NH2]Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO66)-NH2]Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO67)-NH2]Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIPcyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO68)-NH2]Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO69)-NH2]
本发明化合物容易通过任何公知的常规方法在氨基酸之间形成肽键而合成。这些常规方法包括，如，能使一个氨基酸的自由α氨基基团或含有它的羧基或其它保护反应基团的残基，与另一个氨基酸的自由伯羧基或含有它的氨基基团或其它保护反应基团的残基之间发生缩合的任何液相方法。
本发明化合物的合成工序可按两种方法进行，一种方法是在一定时间内将所要顺序的各氨基酸连续地一个个加到一个氨基酸或其残基上，或另一种方法是先周常规方法合成具有所要氨基酸顺序的肽片段，然后缩合生成所要的肽。
合成本发明新化合物的这种常规方法包括，例如任何固相肽的合成方法。在这样一种方法中，新化合物的合成可按固相方法的一般原则进行，依次将所要的氨基酸残基在一定时间内一个个加到生长的肽链中[Merrifield，R.B.，J.Amer.Chem.Soc.85，2149-2154(1963)；Barany等人.，The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology，Vol.2，Gross，E.和Meienhofer，J.，Eds.Academic Press 1-284(1980)]。
通常肽的化学合成是用合适保护基团保护不同氨基酸部分的反应侧链基团以防止在该位点发生化学反应，直至最终除去保护基团。通常也是保护氨基酸或片段中的α氨基基团，而该本体在羧基基团反应，然后选择性除去α氨基保护基团，以便在该位点发生后续反应。然而，已公开有关固相合成方法的特定保护基，值得注意的是每个氨基酸中用溶液合成中通常用于相应氨基酸的保护基团来保护。
α氨基基团可用选自芳族和脂族尿烷型保护基的合适保护基保护，芳族尿烷型保护基如苄氧基羰基(Z)和取代的苄氧基羰基，如P-氯苄氧基羰基，P-硝基苄氧基羰基，P-溴苄氧基羰基，P-二苯基-异丙氧基羰基，9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)和P-甲氧基苄氧基-羰基(Moz)；脂族聚氨酯型保护基，如t-丁氧基羰基(Boc)，二异丙基甲氧基-羰基，异丙氧基羰基，和烯丙氧基羰基。对于α氨基保护而言，Boc是最优选的。
羧基可用选自芳族和脂族的合适保护基保护，芳族酯如苄基(OBZl)或用低级烷基、卤素、硝基、硫代、或取代的硫代[即，低级烷基(1-7碳原子)硫基]取代的苄基；脂族酯如，低级烷基，t-丁基(ot-Bu)，环戊基，环己基(OCHX)，环庚基，及9-芴基甲基(OFm)。对谷氨酸(Glu)而言，OBzl和OFm是最优选的。对天冬氨酸(Asp)而言，OChx、OBzl和OFm是最优选的。
羟基可用选自醚的合适保护基保护，如苄基(Bzl)或用低级烷基、卤素硝基、或甲氧基取代的苄基如2，6-二氯苄基(DCB)，t-丁基(t-Bu)，四氢吡喃基，和三苯甲基(trityl)。对丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Tyr)而言，Bzl是最优选的。对于酪氨酸(Tyr)而言，Bzl和DCB是最优选的。
侧链氨基基团可用选自芳族和脂族尿烷型保护基的合适保护基保护芳族尿烷型保护基如苄氧基羰基(Z)和取代的苄氧基羰基，如P-氯苄氧基羰基、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、P-硝基-苄氧基羰基、P-溴苄氧基羰基、P-二苯基异丙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)和P-甲氧基-苄氧基羰基(MOZ)；脂族尿烷型保护基如，t-丁氧基羰基(BOC)、二异丙基氧基羰基、异丙氧基羰基及烯丙氧基羰基。对于鸟氨酸(Om)，Z是最好的。对于赖氨酸(Lys)，2-Cl-Z和Fmoc是最好的。
胍基可用选自于硝基，P-甲苯磺酰(TOS)，Z，金刚烷氧基羰基和BOC中的一种合适保护基保护。对于精氨酸(Arg)，TOS是最好的。
侧链酰胺基可用咕吨基(xan)保护。对于天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)，不保护最好。
咪唑基团可用选自P-甲苯磺酰(TOS)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、三苯甲基(trityl)、2，4-二硝基苯基(DNP)、BOC和苄氧基甲基(BOM)中的合适保护基保护。对组氨酸(His)，TOS和BOM是最好的。
除非另有说明，下面所给的百分比对于固体混合物中的固体，液体中的液体及液体中的固体分别以Wt/Wt，Vol/Vol和Wt/Vol计。而且，除非另有说明，下面提到的试剂和仪器供应地不是强制性的。本领域技术人员能从其它供应地选择类似的试剂或仪器。
所有试剂，异丙醇(iprOH)均由Fisher或Burdick & Jackson购买，使用时无需另外蒸馏。三氟乙酸由Halocarbon购得，使用时不再纯化。二异丙基乙胺(DIPEA)由Pfaltz和Bauer购得，使用前从CaO和茚三酮中蒸馏出来。二环己基碳化二亚胺(DCC)和二异丙基碳化二亚胺(DIC)从Fluka购得，使用时不再纯化。羟基苯并三唑(HOBT)和1，2-乙二硫醇(EDT)从Sigma化学公司购得，使用时不再纯化。保护的氨基酸通常为L构形，可从Chemical Dynamics Corp或Bachem大批得到。使用前可通过薄层色谱、核磁共振和熔点确定这些试剂的纯度。Boc-O-Me-Tyr、Boc-2-Nal和Boc-P-F-Phe按Bolin，D.R.，US专利申请374503号报道的方法制备。Boc-Asp(OFm)和Boc-Glu(OFm)按报道的方法制备[Bolin，D.R.，等人.，Org.Prep.Proc.Int.，21，67-74(1988)]。二苯甲基胺树脂(BHA)是一种苯乙烯-1％二乙烯苯共聚物(100-200或200-400筛目)，它由Biomega、Bachem、Omni或Advanced Chemtech得到。这些树脂总氮含量通常为0.3-1.2毫克当量/g。
薄层色谱(TLC)在玻璃衬底预涂硅胶60F254的板(Merck)上用合适的溶剂体系进行。化合物用紫外线荧光(254nm吸收)，碘着色，或茚三酮喷雾(对于伯胺和仲胺)进行检测。
关于氨基酸组成的分析，在密封的真空水解管中，其中含有1-4mg苯酚的6NHCl于115℃，使肽水解达22-24小时。可在Beckman有121M氨基酸分析器中，或在Waters HPLC基氨基酸分析体系中用Waters Cat Ex树脂或Pierce AA511柱和茚三酮检测进行分析。
高效液相色谱(HPLC)在LDC装置中进行，该装置由ConstametricI和III泵，Gradient Master溶剂程序器和混合器，Spectromonitor III可变波长UV检测器构成。分析HPLC用WatersμBondapak C18柱(0.4×30cm)以反相方式进行。制备HPLC分离在装有Waters Guard-Pak C18 precolunmn的Whatman Magnum 20 Partisil 10 ODS-3柱(2×25cm或2×50cm)中完成。用2×85cm柱，LKB Vario-Perpex Peristaltic泵和IBM可变波长UV检测器进行凝胶色谱。
肽最好用固相合成，通常用Merrifeld所述[J.Amer.Chem.Soc.，85，2149(1963)]方法制备，虽然也能用如上所述的现有技术中公知的其它化学合成方法。固相合成由肽的C-末端开始，将保护的α-氨基酸连接到合适的树脂上。这种原料的制备可通过酯键将一个保护α-氨基的氨基酸连接到氯甲基化树脂或羟甲基树脂上；或通过酰胺键连接到二苯甲基胺(BHA)或对-甲基二苯甲基胺(MBHA)树脂上。羟甲基树脂的制备在现有技术中是众所周知的。氯甲基化树脂可从市场上买到，其制法现有技术中也是众所周知的。BHA和BHA树脂载体可从市场上买到，通常，当所要合成的肽在C-末端具有取代的酰胺时使用。
通常，待连接到BHA树脂上的第一个氨基酸是以Boc-氨基酸的对称酸酐加入的，其用量为每当量树脂氮为2-10当量活化氨基酸。连接后，洗涤树脂，并在真空条件下干燥。树脂上负载的氨基酸可通过等分量的Boc-氨基酸树脂的氨基酸分析而测定。负载范围通常为0.2-0.4毫摩尔/克树脂。任何未反应的氨基基团可通过该树脂与乙酸酐和二异丙基乙胺在二氯甲烷中反应而封端。
加入Boc-氨基酸后，使树脂依次经过几次反复加氨基酸的循环。在酸性条件下除去α氨基Boc保护。为此目的可用在二氯甲烷中的三氟乙酸(TFA)、在二噁烷或甲酸/乙酸混合物中的HCl。最好用二氯甲烷中50％TFA(V/V)。它还含有1-5％体积的EDT或二甲基硫化物作t-丁基正碳离子的净化剂。也能用现有技术中公知的其它标准分裂试剂。
去除α氨基保护基以后，按所要次序分步连接后面的已保护的氨基酸以得到一个中间产物，保护的肽-树脂。在肽固相合成中用于连接氨基酸的活化剂在现有技术中是公众所周的。例如，用于该合成的合适试剂是苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)，二环己基碳化二亚胺(DCC)和二异丙基碳化二亚胺(DIC)。这里最好是DCC和DIC。也能用如Barany和Merrifield所述的其它活化剂[in the Peptides，Voi.2，J.Meienhofer，ed.，Academic Press，1979，pp 1-284]。可将各种试剂如1-羟基苯并三唑(HOBT)，N-羟基丁二酰亚胺(HOSu)和3，4-二氢-3-羟基-4-氧-1，2，3-苯并三嗪(HOOBT)加到连接混合物中，以使合成循环最佳化。这里最好是HOBT。
典型的合成循环方案如下方案1步骤试剂 时间1CH2Cl22×30秒250％TFA/CH2Cl21分350％TFA/CH2Cl215分4CH2Cl22×30秒5iPrOH 2×30秒6CH2Cl24×30秒76％DIPEA/CH2Cl23×2分8CH2Cl23×30秒9偶联 10分-18小时10 CH2Cl22×30秒11 iPrOH 1×30秒12 CH2Cl21×30秒13 DMF2×30秒14 CH2Cl23×30秒所有用于洗涤和连接的溶剂其用量以体积计为10-40ml/g树脂。用预先生成的Boc-氨基酸的对称酸酐或O-酰基异脲衍生物进行连接。通常，每当量胺树脂加入2-10当量活化Boc氨基酸，用二氯甲烷作溶剂。在20-25％DMF/CH2Cl2中连接Boc-Arg(Tos)，Boc-Gln，Boc-Asn，Boc-His(Tos)和Boc-His(Bom)。Boc-Asn，Boc-Gln和Boc-His(Bom)作为它们的HOBT活性酯连接，从而使公知的副反应减至最少。
通常用现有技术中众所周知的方法按下列方式使肽环化。在肽内氨基酸位点中待连接的是侧链，可用不同的保护基。对于氨基位点的氨基酸，Lys和Om，可将Nε-和Nδ-Fmoc衍生物加到肽链中，对于羧基位点的氨基酸，Asp和Glu，可加入Oβ-和Oγ-Fm衍生物。当肽仍连接在树脂上时，其肽可用20-40％哌啶(在DMF中)处理以选择性除去Fmoc和Fm保护基。然后用合适的酰胺成剂，如二苯磷酰基叠氮化物(DPPA)，DCC，DIC或BOP，处理使自由侧链氨基和羧基基团在分子内共价连接。这里最好是DCC和BOP。
曲型的环合方案如下方案2步骤 试剂时间1 DMF 1×30秒2 20-40％哌啶/DMF 1分3 DMF 1×30秒4 20-40％哌啶/DMF 20分5 iPrOH 1×30秒6 DMF 1×30秒7 iPrOH 2×30秒8 DMF 2×30秒9 6％DIPEA/CH2Cl22×2分10CH2Cl21×30秒11DMF 1×30秒12连接剂 1-24小时13iPrOH 1×30秒14CH2Cl21×30秒15DMF 2×30秒
16CH2Cl23×30秒由开氏茚三酮试验监测整个合成过程中的连接反应以测定反应完成的程度[Kaiser等人.，Anal.Biochem.，34，595-598(1970)]。已观测到Bos-Arg(Tos)、Boc-Asn和Boc-Gln的反应动力学很低。任何不完全的连接反应用新配制的活化氨基酸再连接，或用上述乙酸酐处理肽树脂而封端。将完全连接好的肽-树脂在真空中干燥几小时。
对每个化合物，去除保护基团，并用下列方法从树脂中分开肽。通常，在Teflon HF装置(Peninsula)中，在0℃，用每克树脂为25-100μl乙烷二硫醇，1ml苯甲醚和9ml液态氟化氢处理肽-树脂达45-60分钟。或者可用经改进的二步分裂方法[Tam等人.，TetrahedronLetters，23，2939-2940(1982)]，其中在0℃，用3ml二甲硫醚和1ml氟化氢处理肽-树脂2小时，并在用90％HF处理前进行蒸发。然后在真空、在冰浴温度下除去挥发性试剂。用Et2O和EtOAc各20ml洗涤残余物2或3次，并过滤。用20ml 10％AcOH洗涤3-4次并过滤，从树脂中提取出肽。使合并的含水滤液冷冻干燥得到粗产品。
开始用Sephadex G-25细介质凝胶色谱纯化粗肽，以便从低聚物中分离单体。将肽溶于极小体积的10％AcOH中，加到凝胶柱中。用10％AcOH以0.5-1.5ml/分流速淋洗该柱。在254nm监测流出液，将含有所要色谱带的馏份收集在一起，并冷冻干燥以得到半-纯化品。
通常用制备HPLC进行半-纯化肽的纯化。以很小体积的1％AcOH或0.1％TFA将肽加到柱中。通常以8.1ml/分流速，开始用10％B缓冲液，10-25％B10分钟，25-35％B 3小时梯度洗脱(缓冲液A0.1％TFA/H2O，缓冲液B0.1％TFA/CH3CN)。220nm进行UV检测。以1.5-2.5分钟间隔收集馏份，用分析HPLC进行检测。将鉴定为高纯度的馏份集中在一起并进行冷冻干燥。
通过如上所述的反相柱分析HPLC检验最终产品的纯度。通常以2.0ml/分流速，在15分钟内用20-40％B的梯度洗脱(缓冲A0.022％TFA/H2O，缓冲液B0.022％TFA/CH3CN)。在210nm检测UV。经鉴定所有产品纯度约为97-99％。对各个肽进行了氨基酸分析，所得到的值是在可接受的限度内。一般，所有最终产品还进行快原子轰击质谱测定(FAB-MS)。所有产品均产生在可接受限度内的预期母体M＋H离子。
本发明的新化合物具有价值的药物性能。它们具有气管舒张活性，它们是有效的支气管扩张药。该化合物也没有任何心血管副作用。由这些新型肽产生的支气管扩张持续时间多于2小时。因此，由于是高活性支气管扩张药，所以该化合物是治疗支气管缩窄病，如哮喘的有用药剂。
化学式I-V的新化合物能与各种常用的药物载体，最好是一种无毒、惰性、治疗上可接受的载体物料相混合，以提供适用于治疗支气管缩窄病如哮喘的药物组合物。以盖仑制剂给药形式，这些化合物的剂量取决于各种因素，如所用的特定化合物和特定配方。本领域普通技术人员可根据本文公开的有效浓度(EC50)确定有效剂量。人常用的剂量是0.01-100μg/Kg。对于具有低ED50(如0.1μg)的化合物而言，人常用剂量约为0.02-20μg/Kg。
化学式I-V的新化合物可与下列各种无机和有机酸生成药学上适用的酸加成盐，该酸如硫酸、磷酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、氨基磺酸、柠檬酸、乳酸、丙酮酸、草酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、肉桂酸、乙酸、三氟乙酸、苯甲酸、水杨酸、葡糖酸、抗坏血酸及有关的酸。
本发明化合物可通过非肠道如静脉内、皮下、肌肉、口内或鼻内途径给予病人。最好是非肠道药途径用气雾剂通过口或鼻给药。
通过下列实施进一步说明本发明。
实施例1制备Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯苯交联树脂(9.5g，3.6毫当量，200-400ASTM目，Vega，Biochem)在100ml二氯甲烷中溶胀，过滤并按方案1的步骤7-8洗涤，Boc-Thr(Bzl)(3.35g，10.8mlol)和二环己基碳化二亚胺(1.12g，5.42mmol)在50ml CH2Cl2中反应1小时，过滤并将50ml CH2Cl2加到溶胀过树脂中。该混合物于室温下摇动18小时。加入DIPEA(630ml，3.6mmol)后再摇动1小时，过滤后完成方案1的步骤10-14。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。在50ml二氯甲烷中，用1ml乙酸酐和1ml DIPEA处理树脂使任何未反应的胺基封端，过滤并按方案1步骤13-14洗涤，树脂真空干燥过夜，可得9.8g Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂。部分该树脂经氨基酸分析表明负载量为0.17mmolThr/g。
实施例2制备Ac-[Lys12、Nle17、Val26、Thr28]-Vlp环(Asp8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO20)-NH2]采用上述方案1，使由实施例1制备的Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂(9.8g，1.7mmol)进行固相合成。所有的连接都是采用由Boc-氨基酸和二环己基碳化二亚胺制备的预先生成的对称酐进行的。连接Boc-天冬酰胺、Boc-谷氨酰氨和Boc-组氨酸(苄氧基甲基)作为各自的HOBT活性酯。通常用于完成连接步骤的反应时间为1-18小时。进行五次连接循环，用Boc-Leu(1.5g，6.0mmol)，Boc-Val(1.3g，6.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(1.8g，6.0mmol)，Boc-Asn(773mg，3.3mmol)和Boc-Leu(1.5g，6.0mmol)各进行一次循环。该树脂真空干燥后可得到12.2g Boc-六肽树脂。
8.2g(1.13mmol)的该树脂进行六次连接循环，用Boc-Tyr(2.6-DCB)(1.77g，4.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.67g，4.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.67g，4.0mmol)，Boc-Val(876mg，4.0mmol)，Boc-Ala(762mg，4.0mmol)和Boc-Nle(932mg，4.0mmol)各进行一次循环，可得到10.2g Boc-十二肽树脂。
使1.26g(0.139mmol)的该树脂进行两次连接循环，用Boc-Gln(205mg，0.93mmol)和Boc-Lys(2-Cl-Z)(627mg，1.5mmol)各进行一次循环。使该树脂的一半(0.069mmol)进行十四次连接循环，用Boc-Arg(Toc)(32mg，0.76mmol)，Boc-Leu(188mg，0.76mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(354mg，0.76mmol)，Boc-Thr(Bzl)(234mg，0.76mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(333mg，0.76mmol)，Boc-Asn(97mg，0.76mmol)，Boc-Asp(OFm)(311mg，0.76mmol)，Boc-Thr(Bzl)(234mg，0.76mmol)，Boc-Phe(201mg，0.76mmol)，Boc-Val(164mg，0.76mmol)，Boc-Ala(143mg，0.76mmol)，Boc-Asp(OcHx)(238mg，0.76mmol)，Boc-Ser(Bzl)(223mg，0.76mmol)和Boc-His(Bom)(156mg，0.41mmol)各进行一次循环。使该肽-树脂完成方案1的步骤]-8。并在20ml二氯甲烷中，用1.0ml酸酐和66mlDIPEA(0.38mmol)处理30分钟。该树脂按步骤10-14洗涤。
然后用方案2的步骤1-11进行处理，使树脂选择性地被解封，20ml蒸馏过的的DMF中，七次与DCC(49mg，0.24mmol)和HOBT(32mg，0.24mmol)反应24小时。Kaiser茚三酮分析阴性。用方案2的步骤13-16洗涤树脂后真空干燥可得0.72g树脂。
所述树脂在0℃下用6ml二甲硫醚和2ml液体HF处理2小时。蒸发其反应混合物后的残渣在0℃下用0.7ml茴香醚和6ml液体HF处理45分钟。反应混合物再经蒸发，其残渣用1×15ml Et2O和3×15mlEtOAc洗涤。树脂用3×20ml10％AcOH提取。合并的含水滤液冻干后得到227mg白色固体。
这种粗物料通过制备HPLC Whatman Magnum-20 ODS-3柱(2×25cm)提纯，并用10-40％B(缓冲液A0.1％TFA/H2O，缓冲液B0.1％TFA/CH3CN)线性梯度洗脱4小时。通过分析HPLC分析所收集的馏份切割主峰，汇集起来冻干可得到26.7mg半纯产品。将这种物料再次加到Magnum-20 ODX-3柱上(2×50cm)，并用相同的梯度洗脱，切割的其主峰经冻干得9.5mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3277.8，实验值3276.1。
实施例3制备Ac-[Glu8、Lys12，Nle17、Val26、Thr28]-VIP环(Asp8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO21)-NH2]二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯苯交联树脂(17.7g，2.6毫克，200-400ASTM目，Vega Biochem)在160ml二氯甲烷中溶胀后，过滤并按方案1的步骤7-8洗涤。将树脂再悬浮于160ml二氯甲烷中，并向其中添加Boc-Thr(Bzl)(6.25g，20.2mmole)和二环己基碳化二亚胺(2.10g，10.1mmol)。该混合物在室温下摇动8小时，过滤后进行方案1的步骤10-14。Kaiser茚三酮分析结果呈阴性。用150ml二氯甲烷中有5ml乙酸酐和5ml DIPEA的溶液处理树脂60分钟，使未反应的胺基封端，过滤并按步骤13-14洗涤，树脂真空干燥过夜后可得到18.0克Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂。部分这种树脂经氨基酸分析，表明负载量为0.17mmol Thr/g。
使Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂(18.0g，3.06mmol)采用上述方案1进行固相合成。采用由Boc-氨基酸和二环己基碳化二亚胺制备的予先生成的对称酸酐来完成所有连接。Boc-天冬酰胺、Boc-谷氨酰胺和Boc-组氨酸(苄氧基甲基)连接作为各自的HOBT活性酯，进行五次连接循环，用Boc-Leu(6.1g，24.5mmol)，Boc-Val(5.32g，24.5mmol)，Boc-Ser(Bzl)(7.23g，24.5mmol)，Boc-Asn(3.1g，1.356mmol)，和Boc-Leu(6.1g，24.5mmol)，各进行一次循环，其树脂在真空干燥后得22.9gBoc-六肽树脂。
让7.48g(1.0mmol)这种树脂进行十次连接循环，用Boc-Tyr(2，6-DCB)(1.76g，4.0mmol)，Boc-Lys(2-cl-z)(1.66g，4.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.66g，4.0mmol)，Boc-Val(869mg，4.0mmol)，Boc-Ala(1.5g，8.0mmol)，Boc-Nle(925g，4.0mmol)，Boc-Gln(1.08g，4.4mmol)，Boc-Lys(2-cl-z)(1.66g，4.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(1.71g，4.0mmol)，和Boc-Leu(998mg，4.0mmol)，各进行一次连接循环，从而得到9.6g Boc-十六肽树脂。
使7.68g(0.8mmol)该树脂进行一次连接循环，用Boc-Lys(Fmoc)(1.5g，3.2mmol)连接得到8.32g Boc-十七肽树脂。
使6.24g(0.6mmol)该树脂进行两次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(742mg，2.4mmol)和Boc-Tyr(2.6-DCB)(1.06g，2.4mmol)各进行一次循环，从而得到6.28g Boc-十九肽树脂。
使2.09g(0.2mmol)该树脂进行两次连接循环，用Boc-Asn(204mg，0.88mmol)，Boc-Asp(OFm)(340mg，0.8mmol)，Boc-Thr(Bzl)(248mg，4.0mmol)，Boc-Phe(212mg，0.8mmol)，Boc-Val(174g，0.8mmol)，Boc-Ala(151mg，0.8mmol)，Boc-Asp(OcHx)(258mg，0.8mmol)，Boc-Ser(Bzl)(236mg，0.8mmol)和Boc-His(Bom)(330mg，0.88mmol)各进行一次连接循环。其肽树脂完成方案1的步骤1-8后，用20ml二氯甲烷0.25ml乙酸酐和70ml DIPEA的溶液处理20分钟。再按步骤10-14洗涤该树脂。
该树脂方案2的步骤1-11处理后被选择性地解封。四分之三的这树脂(0.15mmol)与DCC(77mg，0.37mmol)和HOBT(51mg，0.37mmol)在20ml蒸馏过的DMF中反应72小时和在20ml甲苯中反应24小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。该树脂采用方案2的步骤13-16洗涤并于真空下干燥得到1.72g树脂。
1.14g(0.099mmol)这种树脂，按实施例2处理而被解封，除在第2步使用1ml茴香醚和9ml的HF外。其反应混合物蒸发。残渣用1×5ml Et2O和3×5ml EtOAC洗涤。树脂用3×20ml 10％AcOH提取。将合并的含水滤液冻干得到535mg白色固体。
这种粗物料是用Sephadex G-25细料(2×100cm柱)凝胶过滤、10％AcOH洗涤纯化的。通过分析HPLC分析所收集的馏份切割单体峰，汇合冻干后得到83.5mg半纯品。这种物料通过如实施例2的制备HPLC进一步纯化，除了线性梯度在20-40％下操作3小时之外。主峰由分析HPLC分析所收集的馏份切割，汇合和冻干，从而获得18.9mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC分析是单一的，因而得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3292.0，实验值3291.8。
实施例4制备Ac-[Asn8，Asp9，Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Asp9→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO22)-NH2]使1.55g(0.15mmol)实施例3制备的Boc-十九肽树脂进行九次连接循环，用Boc-Asp(OFm)(247mg，0.6mmol)，Boc-Asn(153mg，0.66mmol)，Boc-Thr(Bzl)(248mg，0.8mmol)，Boc-Phe(159mg，0.6mmol)，Boc-Val(130mg，0.6mmol)，Boc-Ala(113mg，0.6mmol)，Boc-Asp(OcHx)(189mg，0.6mmol)，Boc-Ser(Bzl)(177mg，0.6mmol)，和Boc-His(Bom)(248mg，0.66mmol)各进行一次连接循环。其肽树脂按方案1的步骤1-8进行，再用20ml二氯甲烷0.25ml乙酸酐和70ml DIPEA处理30分钟。按步骤10-14洗涤该树脂。
采用方案2的步骤1-11处理使树脂选择性地被解封。与DCC(77mg，0.37mmol)和HOBT(51mg，0.37mmol)在20ml蒸馏过的DMF中反应两次达24小时和72小时，并于20ml甲苯中反应两次达24小时和48小时。Kaiser茚三酮分析是阴性的。树脂按方案2的步骤13-15洗涤后真空干燥得1.54g。
采用如实施例3用HF处理使1.26g(0.122mmol)的这种树脂解封。蒸发其反应混合物，残渣用1×15ml Et2O和3×15ml EtOA洗涤，树脂用3×20ml 10％AcOH提取，合并含水滤液，冻干后可得白色固体485mg。
这种粗物料通过如实施例3的Sephadex G-25细粒凝胶过滤纯化，可获得83.5mg半纯品。这种物料可通过实施例3的制备HPLC进一步纯化，除了以20-45％线性梯度操作3小时外，通过HPLC分析所收集的馏份来切割主峰，汇集并冻干而得到11.5mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3277.8，实验值为3277.6。
实施例5制备Ac-[Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Asp8→Orn12)[Ac-(SEQID NO23)-NH2]1.55克(0.2mmol)实施例3制备的Boc-十六肽树脂进行十二次连接循环，用Boc-Orn(OFm)(364mg，0.8mmol)，Boc-Thr(Bzl)(495mg，1.6mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(352mg，0.8mmol)，Boc-Asn(102mg，0.44mmol)，Boc-Asp(OFm)(329mg，0.8mmol)，Boc-Thr(Bzl)(495mg，1.6mmol)，Boc-Phe(212mg，0.8mmol)，Boc-Val(174mg，0.8mmol)，Boc-Ala(151mg，0.8mmol)，Boc-Asp(OcHx)(252mg，0.8mmol)，Boc-Ser(Bzl)(236mg，0.8mmol)，和Boc-His(Bom)(330mg，0.88mmol)各进行一次连接循环。肽树脂在完成方案1的步骤1-8后，用0.25ml乙酸酐和70ml DIPEA在20ml二氯甲烷中处理30分钟。其树脂按步骤10-14洗涤后，干燥过夜得2.38g。
按方案2的步骤1-11处理使1.38g(0.11mmol)这种树脂选择性地被解封。再与DCC(55mg，0.27mmol)和HOBT(37mg，0.27mmol)在20ml蒸馏过的DMF中反应24小时，在20ml甲苯中反应24小时，并且五次在20ml蒸馏过的DMF中反应24小时。Kaiser茚三酮分析稍为阳性。其树脂按方案2的步骤13-16洗涤并真空干燥。
按实施例3用HF处理0.8g(0.05mmol)这种树脂使其解封。蒸发反应混合物后残渣1×15ml Et2O和3×15ml EtOAc洗涤。该树脂用3×20ml 10％AcOH提取。合并的含水滤液冻干后可得到429mg胶质固体。
这种粗物料按实施例3通过Sephadex G-25细粒凝胶过滤加以纯化，得到107mg半纯品。这种物料可通过如实施例3的制备HPLC进一步纯化，除了在10-14％线性梯度下操作3小时外。通过分析HPLC分析所收集的馏份切割主峰，汇集并冻干，可得到17.5mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果，FAB-MSMH计算值3263.7，实验值3264.1。
实施例6制备Ac-[Lys8，Asp12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Asp8→Asp12)[Ac-(SEQ ID NO24)-NH2]使实施例3制备的1.0g(0.1mmol)Boc-十六肽树脂进行十二次连接循环，用Boc-Asp(OFm)(165mg，0.4mmol)，Boc-Thr(Bzl)(124mg，0.4mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(176mg，0.4mmol)，Boc-Asn(102mg，0.44mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(187mg，0.4mmol)，Boc-Thr(Bzl)(124mg，0.4mmol)，Boc-Phe(106mg，0.4mmol)，Boc-Val(87mg，0.4mmol)，Boc-Ala(76mg，0.4mmol)，Boc-Asp(OcHx)(126mg，0.44mmol)，Boc-Ser(Bzl)(118mg，0.4mmol)，Boc-His(Bom)(150mg，0.4mmol)各进行一次循环。肽树脂完成方案步骤1-8后，用0.5ml乙酸酐和35ml DIPEA在20ml二氯甲烷中处理30分钟。树脂按步骤10-14洗涤，并干燥过夜可得1.2g。
按方案2的步骤1-11处理可使0.8g(0.066mmol)这种树脂选择性地被解封，再与BOP(58mg，0.13mmol)在20ml蒸馏过的DMF中反应24小时，Kaiser茚三酮分析为阴性。其树脂按方案2的步骤13-16洗涤后真空干燥。
通过用HF按实施例3处理使这种树脂被解封。反应混合物蒸发后残渣用1×15ml Et2O和3×15ml EtOAc洗涤。树脂用3×20ml 10％AcOH提取。合并的含水滤液冻干后得胶质固体。
这种粗物料通过如实施例3 Sephadex G-25细粒凝胶过滤纯化，得到43.8mg半纯品。这种物料再通过制备HPLC，除10-40％线性梯度操作3小时外，均按实施例3进一步加以纯化。通过分析HPLC分析所收集的馏份切割主峰，汇集并冻干得7.5mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3277.8实验值3276.4。
实施例7制备Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Glu8→Orn12)[Ac-(SEQ ID NO25)-NH2]二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯苯交联树脂(25.08g，17.5毫克当量，200-400ASTM目，Bachem)在160ml二氯甲烷中溶胀，过滤和按表1中方案步骤7-8洗涤。将树脂再悬浮于160ml二氯甲烷中，再往其中加Boc-Thr(Bzl)(16.2g，52.5mmol)和二环己基碳化二亚胺(5.4d，26.2mmol)。这种混合物在室温下摇动6小时，过滤，然后完成方案1的步骤10-14。Kaiser茚三酮分析当阴性。通过用5ml乙酸酐和5mlDIPEA，在150ml二氯甲烷中处理树脂60分钟，使未反应的胺基封端，过滤并按方案步骤13-14洗涤。将树脂在真空下干燥过夜可得29.6g Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂。部分这种树脂氨基酸分析，表明负载量为0.21mmol Thr/g。
使用如同上述实施例2的方案，对14.0g(2.94mmol)这种树脂进行固相合成。进行十一次连接循环，用Boc-Leu(5.9g，23.5mmol)，Boc-Val(5.1g，23.5mmol)，Boc-Ser(Bzl)(6.9g，23.5mmol)，Boc-Asn(3.0g，13.0mmol)，Boc-Leu(5.9g，23.5mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(10.3g，23.5mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(9.8g，23.5mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(9.8g，23.5mmol)，Boc-Val(5.1g，23.5mmol)，Boc-Ala(4.4g，0.4mmol)，和Boc-Nle(5.4g，23.5mmol)各进行一次循环。得到26g Boc-十肽树脂。
5.5g(0.61mmol)这种树脂进行四次连接循环，用Boc-Gln(655mg，2.7mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(2.0g，4.8mmol)，Boc-Arg(Tos)(2.1g，4.8mmol)和Boc-Leu(1.2g，4.8mmol)，各进行一次循环。树脂在真空下干燥后可得6.12g，Boc-十六肽树脂。
使2.0g(0.2mmol)这种树脂进行十二次连接循环，用Boc-Orn(Fmoc)(91mg，0.2mmol)，Boc-Thr(Bzl)(250mg，0.8mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(352mg，0.8mmol)，Boc-Asn(102mg，0.44mmol)，Boc-Glu(OFm)(340mg，0.8mmol)，Boc-Thr(Bzl)(248mg，0.8mmol)，Boc-Phe(212mg，0.8mmol)，Boc-Val(174mg，0.8mmol)，Boc-Ala(152mg，0.8mmol)，Boc-Asp(OcHx)(252mg，0.8mmol)，Boc-Ser(Bzl)(236mg，0.8mmol)和Boc-His(Bom)(150mg，0.4mmol)树脂各进行一次循环。其肽树脂按方案步骤1-8实施后，用0.5ml乙酸酐和38ml DIPEA在30ml二氯甲烷中处理180分钟。树脂按步骤10-14洗涤，并在真空下干燥得2.4g。
然后，通过按方案2的步骤1-11处理，使1.15g(0.1mmol)这种树脂选择性地被解封，再两次与Bop(58mg，0.13mmol)和400mmolDIPEA在20mmol蒸馏DMF中反应24和6小时。Kaiser茚三酮分析为阴性。其树脂按方案2的步骤13-16洗涤，并在真空下干燥得1.05g。
通过用9ml HF，1ml茴香醚和100ml 1，2-乙二硫醇在0℃下处理1小时，使这种树脂解封。反应混合物蒸发后其残渣用2×15ml Et2O和2×15ml Et2OAc洗涤。树脂用4×20ml 10％AcOH提取。合并的含水滤液冻干后可得到385mg淡黄色固体。
这种粗物料按实施例3通过Sephadex G-25细柱凝胶过滤纯化，可得到半纯化产品134mg。这种物料通过制备HPLC，除了以线性梯度26-36％操作3小时外，均按实施例3进一步纯化。用分析HPLC分析收集的馏份切割主峰，汇集和冻干，可得23.2mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析。FAB-MSMH计算值3277.8。实验值3276.3。
实施例8制备Ac-[Lys12，Glu16，Nle17，Val26，Thr28]-VIP环(Lys12→Glu16)[Ac-(SEQ ID NO26)-NH2]二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯苯交联树脂(308g，21.4毫克当量，200-400ASTM目，Bachem)，除使用19.9g Boc-Thr(Bzl)和6.6g二环己基碳化二亚胺(32.1mmol)外，该混合物在室温下摇动18小时，过滤后再完成方案1的步骤10-14。Kaiser茚三酮分析为阴性。其树脂通过用8ml乙酸酐和8ml DIPEA在200ml二氯甲烷中处理60分钟，使未反应的胺基封端，过滤和按方案步骤13-14洗涤。树脂真空干燥过夜后可得34.2g Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂。一部分这种树脂经氨基酸分析，表明负载量为0.47mmol Thr/g。
0.85g(0.4mmol)这种Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂在Applied Biosystem430 A型肽合成器上进行固相合成。采用由Boc-氨基酸和二环己基碳化二亚胺制备的预先生成的对称酸酐进行所有连接。Boc-天冬酰胺、Boc-谷氨酰胺和Boc-精氨酸(甲苯磺酰基)可按常规法连接作为各自的HOBT活性酯。进行十一次连接循环，用Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，和Boc-Nle(462mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得Boc-十二肽树脂。
然后，使该树脂按实施例2进行五次连接循环，用Boc-Glu(OFm)(340mg，0.8mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(664mg，1.6mmol)，Boc-Arg(Tos)(685mg，1.6mmol)，Boc-Leu(398mg，1.6mmol)，和Boc-Lys(Fmoc)(375mg，0.8mmol)各进行一次循环。该树脂真空干燥后可得2.12g Boc-十七肽树脂。
1.06g(0.2mmol)这种树脂，通过按方案2的步骤1-11处理，可选择性地被解封，并且两次用BOP(177mg，0.4mmol)和200ml DIPEA在200ml蒸馏DMF中反应2小时和8小时。Kaiser茚三酮分析微显阳性。用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理树脂10分钟，可使未反应的胺基封端，过滤后按方案2的步骤13-16洗涤。然后用Boc-Thr(Bzl)(495mg，1.6mmol)对这种树脂进行一次连接循环，再如上述放回Applied Biosystems 430A型肽合成器。进行十次连接循环，用Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(513mg，2.0mmol)，Boc-Val(453mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)，和Boc-His(TOS)(819mg，2.0mmol)各进行一次循环，肽树脂完成方案1的步骤1-8后，与0.5ml乙酸酐和100ml崭DIPEA在20ml二氯甲烷中反应30分钟。树脂按步骤10-14洗涤后真空下干燥。
肽树脂按实施例7解封后可得340mg粗肽。该肽按实施例3凝胶过滤纯化之后得到35mg半纯品。这种物料按实施例3由制备HPLC进一步纯化，除了按25-35％线性梯度操作外，可得15.6mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3276.6，实验值3278.0。
实施例9制备Ac-[Lys12，Nle17，Asp24，Val26，Thr28]-VIP环(Lys20→Asp24)[Ac-(SEQ ID NO27)-NH2]对实施例8制备的0.42g(0.2mmol)Boc-Tyr(Bzl)树脂进行九次连接循环，用Boc-Leu(200mg，0.8mmol)，Boc-Val(174mg，0.8mmol)，Boc-Ser(Bzl)(236mg，0.8mmol)，Boc-Asp(OFm)(329mg，0.8mmol)，Boc-Leu(200mg，0.8mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(352mg，0.8mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(332mg，0.8mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(375mg，0.8mmol)和Boc-Val(174mg，0.8mmol)各进行一次循环。
按方案2的步骤1-11处理，可使这种树脂选择性地被解封，再与BOP(177mg，0.4mmol)和200ml DIPEA在20ml已蒸馏的DMF中反应6小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。
按实施例8让这种树脂在Applied Biosystems model 430A肽合成器上进行固相合成。再进行十七次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.ommol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(TOS)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，和Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)各进行一次循环。用Boc-His(Tos)(164mg，0.4mmol)对这种树脂进行一次连接循环，再实施方案1的步骤1-8，并用1ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理30分钟。其树脂按方案1的步10-14洗涤并于真空下干燥，可得到1.94g。
按实施例7使0.97g(0.1mmol)这种肽树脂解封可得265mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤进行纯化，得到149mg的半纯品。这种物料按实施例3的制备HPLC进一步纯化，除了按25-35％线性梯度操作外，得到28.1mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3278.6，实验值3278.8。
实施例10制备Ac-[Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO28)-NH2]二苯甲基胺共聚苯乙烯-1％二乙烯苯交联树脂(5.0g，2.6毫克当量，200-400ASTM目，Vega Biochem)在50ml二氯甲烷中溶胀，过滤和按方案1的步骤7-8洗涤。将该树脂再悬于60ml二氯甲烷后，往其中添加Boc-Thr(Bzl)(2.32g，7.5mmol)和二环己基碳化二亚胺(774mg，3.75mmol)。该混合物于室温下摇动4小时，过滤后实施方案1的步骤10-14。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。该树脂用5ml乙酸酐和5ml DIPEA于50ml二氯甲烷中处理60分钟。可使任何未反应的胺基封端，过滤并按方案步骤13-14洗涤。该树脂真空下干燥过滤后可得5.8g Boc-Thr(Bzl)-BHA树脂。一部分这种树脂经氨基酸分析后，表明负载量为0.276mmol Thr/g。
1.44g(0.4mmol)这种树脂，使用上述实施例2方案1进行固相合成。进行二次连接循环，用Boc-Leu(399mg，1.6mmol)，Boc-Val(348mg，1.6mmol)和Boc-Asp(Ofrn)(329mg，0.8mmol)各进行一次循环。使这种树脂的一半(0.2mmol)进行四次连接循环，用Boc-Asn(204mg，0.88mmol)，Boc-Leu(199mg，0.8mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(352mg，0.8mmol)和Boc-Lys(Fmoc)(375g，0，8mmol)各进行一次循环。
按方案2的步骤1-11处理可使这种树脂选择性地被解封，这种树脂再与BOP(177mg，0.4mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应2小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。
用Boc-Lys(2-Cl-Z)(332mg，0.8mmol)使树脂进行一次连接循环，然后按实施例8在Applied Biosystems model 430A肽合成器上进行固相合成。再进行十九次连接循环，用Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)，和Boc-His(Tos)(819mg，2.0mmol)各进行一次循环。然后进行方案1的步骤1-8，再用1ml乙酸酐在20ml6％DIPEA/二氯甲烷中处理30分钟。所述树脂按方案1的步10-14洗涤后真空下干燥。
这种肽树脂按实施例7解封后可得210mg粗肽。该肽按实施例3凝胶过滤纯化可得到93mg半纯品。这种物料除了以线性梯度27-37％操作外均按实施例3用制备HPLC进一步纯化，得到26.2mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果，FAB-MSMH计算值3305.8，实验值3305.8。
实施例11制备Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→ Asp25)[Ac-(SEQ ID NO29)-NH2]0.4g(0.1mmol)二苯甲基胺树脂(100-200ASTM目，Bachem)，采用上述方案进行固相合成。所有连接都是采用等摩尔量的Boc-氨基酸和二异丙基碳化二亚胺进行的，通过往连接混合物添加1.5摩尔量的Boc-氨基酸和二异丙基碳化二亚胺进行的，通过往连接混合添加1.5摩尔过量的HOBT，使Boc-天冬酰胺和Boc-谷氨酰胺结合起来作为各自的活性酯。连接步骤完成的反应时间一般为2-18小时。进行九次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(309mg，1.0mmol)，Boc-Leu(249mg，1.0mmol)，Boc-Val(217mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(206mg，0.5mmol)，Boc-Asn(232mg，2.0mmol)，Boc-Leu(249mg，1.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(440mg，1.0mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(234mg，0.5mmol)和Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)各进行一次循环。
这种树脂按方案3的步骤1-11处理可被选择性地解封，再与BOP(88mg，0.2mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF反应2小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。
进行十九次连接循环，用Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Nle(231mg，1.0mmol)，Boc-Gln(246mg，1.0mmol)Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(428mg，1.0mmol)，Boc-Leu(249mg，1.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(309mg，1.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(440mg，1.0mmol)，Boc-Asn(232mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(309mg，1.0mmol)，Boc-Phe(265mg，1.0mmol)，Boc-Val(217mg，1.0mmol)，Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(295mg，1.0mmol)，和Boc-His(Tos)(409mg，1.0mmol)各进行一次循环。肽树脂完成方案1的步骤1-8后， 用0.5ml乙酸酐在10m1 6％DIPEA/二氯甲烷中处理30分钟。树脂按步骤10-14洗涤后真空下干燥。
这种肽树脂按实施例7解封，可得304mg粗肽。该肽按实施例3凝胶过滤纯化，得215mg半纯品。这种物料通过实施例3的制备HPLC进一步纯化，除了按线性梯度26-36％操作外，可得到20.1mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因此可得到正确的氨基酸分析结果，FAB-MSMH计算值3277.6，实验值3277.7。
实施例12制备Ac-[P-F-Phe6，2-Nal10，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Met31]-VIP(1-31)-NH2环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO30)-NH2]0.4g(0.1mmol)二苯甲基胺树脂(100-200ASTM目，Bachem)按实施例11进行固相合成。进行三次连接循环。用Boc-Met(249mg，1.0mmol)、Boc-Gly(175mg，1.0mmol)和Boc-Gly(175mg，1.0mmol)各进行一次循环。按实施例11完成九次连接循环和环化作用。按实施例11完成十九次连接循环，但第十次循环中的Boc-Ala由Boc-Val(217mg，1.0mmol)取代，第十九次循环中的Boc-Tyr(2，6-DCB)由Boc-2-Nal(158mg，0.5mmol)取代和第二十三次循环中的Boc-Phe由Boc-P-F-Phe(142mg，0.5mmol)取代。
这种树脂按实施例7解封后可得245mg粗肽。按实施例3的凝胶过滤可纯化这种肽而得到215mg半纯品。这种物料经实施例3的制备HPLC，除以线性梯度30-40％操作外，可进一步被纯化，得到16.4mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3574.7，实验值3575.1。
实施例13制备Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO31)-NH2]0.4g(0.1mmol)二苯甲基胺树脂(100-200ASTM目，Bachem)按实施例11进行固相合成。按实施例11完成九次连接循环和环化作用。按实施例11完成十九次连接循环，除了第十次循环中的Boc-Ala由Boc-Val(217mg，1.0mmol)取代，第十七次循环中的Boc-Lys(2-Cl-Z)由Boc-Om(z)(366mg，1.0mmol)取代和第二十一次循环中的Boc-Asp(OcHx)由Boc-Glu(Bzl)(337mg，1.0mmol)取代外。
这种树脂按实施例7解封后可得255mg粗肽。经实施例3的凝胶过滤可使纯化而得到200mg半纯品。这种物料除了按28-38％线性梯度操作外，可通过制备HPLC进一步纯化，得到30.7mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因此可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3305.8，实验值3305.5。
实施例14制备Ac-[P-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Cys(Acm)31]-VIP(1-31)-NH2环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO32)-NH2]按实施例11使二苯甲基树脂(0.4g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成，进行三次连接循环，用Boc-Cys(Acm)(292mg，1.0mmol)，Boc-Gly(175mg，1，0mmol)和Boc-Cly(175mg，1.0mmol)各进行一次循环。按实施例11完成九次连接循环和环化作用，按实施列11完成十九次连接循环，除了第二十三次循环中Boc-Phe由Boc-P-F-Phe(142mg，0.5mmol)取代外。
这种树脂按实施例7解封后可得268mg粗肽。经实施例3的凝胶过滤可使纯化肽，得到165mg半纯品。这种物料除了按25-35％线性梯度操作外，可通过制备HPLC进一步纯化，得到28.1mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3584.1，实验值3584.0。
实施例15制备Ac-[Ala2，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO33)-NH2]二苯甲基树脂(1.5g，0.4mmol，100-200ASTM日，Bachem)按实施例11在Applied Biosystcms model 430A肽合成器上进行固相合成，进行八次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(619mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(822mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(938mg，2.0mmol)各进行一次循环。
经方案2的步骤1-11处理可使这种树脂选择性地被解封，并与Boc(356mg，0.8mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应2小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。该树脂按方案2的步骤13-16洗涤，再于真空下干燥。可得1.9g Boc-八肽树脂。
0.95g(0.2mmol)这种树脂实施例11在Applied Biosystems model430 A肽合成器上进行固相合成。再进行十八次连接循环，用Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.ommol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Iys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)和Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到1.54g Boc-廿六肽树脂。
0.77g(0.1mmol)这种树脂，采用上述如实施例2的方案进行固相合成。进行二次连接循环，用Boc-Ala(76mg，0.4mmol)和Boc-His(Tos)(328mg，0.8mmol)各进行一次循环。在肽树脂完成方案1的步骤1-8后，用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟。其树脂按步骤10-14洗涤，并在真空下干燥可得到0.74g。
按实施例7使这种肽树脂解封，得到172mg粗肽。经如实施例3的凝胶过滤可使纯化肽纯得到110mg半纯品。这种物料除了按22-37％线性梯度操作外，可由如实施例3的制备HPLC进一步纯化，得到40.0mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC是单一的，因而可获得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3261.7，实验值3261.8。
实施例16制备Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO34)-NH2]0.77g(0.1mmol)，实施例15制备的Boc-廿六肽树脂，采用上述如实施例2的方案进行固相合成。进行二次连接循环，用Boc-Ser(Bzl)(118mg，0.4mmol)，和Boc-N-Me-Ala(81mg，0.4mmol)各进行一次循环。在肽树脂完成方案1的步骤1-8后，用BOP(442mg，1.0mmol)，乙酸(57ml，1.0mmol)和DIPEA(523ml，3.0mmol)在20ml DMF处理6小时，然后用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA二氯甲烷中处理60分钟。其树脂按步骤10-14洗涤，并在真空下干燥可得到0.73g。
这种肽树脂实施例7解封可得到191mg粗肽。其肽经如实施例3的凝胶过滤可使纯化肽纯可得138mg半纯品。这种物料除了按22-37％线性梯度操作外，可用如实施例3的制备HPLC进一步纯化，得到28.0mg，白色无定形粉末。按HPLC其化合物是单一的，因而可获得正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3225.4，实验值3225.8。
实施例17制备Ac-[2-Nal10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO35)-NH2]采用如实施例2的方案1使二苯甲基胺树脂(4.0g，1.08mmol，100-200ASTM目，Bschem)进行固相合成。进行八次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(1.34mg，4.3mmol)，Boc-Leu(925mg，4.3mmol)，Boc-Val(938mg，4.3mmol)，Boc-Asp(OFm)(889mg，2.1mmol)，Boc-Asn(557mg，2.4mmol)，Boc-Leu(925mg，4.3mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(1.9mg，4.3mmol)，和Boc-Lys(Fmoc)(1.1g，4.3mmol)各进行一次循环。
经方案2的步骤1-11处理可使这种树脂选择性地被解封，其后与BOP(885mg，2.0mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应2小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。按方案2的步骤13-16洗涤树脂。
用Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.79g，4.3mmol)使这种树脂进行一次连接循环，再于真空下干燥，可得6.3g Boc-九肽树脂。
使1.89g(0.3mmol)这种树脂进行九次连接循环，用Boc-Ala(227mg，1.2mmol)，Boc-Ala(227mg，1.2mmol)，Boc-Nle(278mg，1.2mmol)，Boc-Gm(325mg，1.32mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(498mg，1.2mmol)，Boc-Arg(Tos)(514mg，1.2mmol)，Boc-Leu(299mg，1.2mmol)，Boc-Leu(498mg，2.0mmol)，和Boc-Thr(Bzl)(371mg，1.2mmol)各进行一次循环，可得到2.06g Boc-十八肽树脂。
使0.68g(0.1mmol)这种树脂进行十次连接循环，用Boc-2-Nal(126mg，0.4mmol)，Boc-Asn(102mg，0.44mmol)，Boc-Asp(OcHx)(126mg，0.4mmol)，Boc-Thr(Bzl)(124mg，0.4mmol)，Boc-Phe(106mg，0.4mmol)，Boc-Val(87mg，0.4mmol)，Boc-Ala(76mg，0.4mmol)，Boc-Asp(OcHx)(126mg，0.4mmol)，Boc-Ser(Bzl)(118mg，0.4mmol)和Boc-His(Tos)(164mg，0.4mmol)各进行一次循环。肽树脂完成方案1的步骤1-8后，用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟。树脂按步骤10-14洗涤中在真空下干燥，可获得到0.82g。
按实施例7解封这种肽树脂可得到261mg粗肽。经如实施例3的凝胶过滤肽纯可得186mg半纯品。这种物料除了按30-40线性梯度操作外，用如实施例3的制备HPLC进一步纯化，得到60.1mg，白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3296.8，实验值3295.6。
实施例18制备Ac-[O-Me-Tyr10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO36)-NH2]使0.68g(0.1mmol)由实施例17制备的Boc-十八肽树脂按实施例17进行十次连接循环，而第十九次循环中的Boc-2-Nal为Boc-Tyr(O-Me)(59mg，0.2mmol)所取代除外，得到0.61克肽树脂。
该肽树脂按实施例7解封可得到175mg粗肽。由如实施例3的凝胶过滤可使肽纯化而得到半纯品136mg。这种物料除了按28-38％线性梯度操作外，可通过如实施例3的制备HPLC进一步得到纯化，获得42.4mg，白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可获得正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3276.7，实验值3276.0。
实施例19制备Ac-[P-F-Phe6，P-NH2-Phe10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO37)-NH2]0.625g(0.09mmol)Boc-十八肽树脂按实施例17完成十次连接循环，而第十九次循环中的Boc-2-Nal为Boc-2-Nal为Boc-P-NH(z)-Phe(166mg，0.4mmol)所取代和第二十三次循环中Boc-Phe为Boc-P-F-Phe(113mg，0.4mmol)所取代除外，得到0.84g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后可得粗肽182mg。该肽通过如实施例3的凝胶过滤可被纯化，得到160mg半纯品。这种物料除了按25-35％线性梯度操作外，可通过如实施例3的制备HPLC进一步得到纯化，得到47.2mg，白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3279.7，实验值3279.8。
实施例20制备Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO38)-NH2]使用如实施2的方案1的二苯甲基胺树脂(1.25g，1.0mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。进行八次连接循环，用Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.66g，4.0mmol)，Boc-Lys-2-Cl-Z)(1.66g，4.0mmol)，Boc-Leu(925mg，4.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(823mg，2.0mmol)，Boc-Asn(511mg，2.2mmol)，Boc-Leu(925mg，4.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(1.76g，4.0mmol)，和Boc-Lys(Fmoc)(937mg，2.0mmol)各进行一次循环。
这种树脂完通过用方案2的步骤1-11处理可被选择性地解封，再与BOP(885mg，2.0mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应2小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。树脂按方案2的步骤13-16洗涤。
用Boc-Lys(2-Cl-Z)(1.66g，4.0mmol)使这种树脂进行一次连接循环并在真空下干燥，可得2.7g Boc-九肽树脂。
0.54g(0.2mmol)这种树脂按实施例8在Applied Biosytems model430A的肽合成器上进行固相合成。进行十八次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)和Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到1.16g Boc-廿七肽树脂。
使0.54g(0.1mmol)这种树脂用Boc-His(Tos)(819mg，2.0mmol)进行一次连接循环，再完成方案1的步骤1-8，用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤后于真空下干燥，可得0.5g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封，除了使用5ml HF和0.5ml茴香醚外，可得到127mg粗肽。通过如实施例3的凝胶过滤可使肽纯化，得到74.6mg半纯品。这种物料除按24-34％线性梯度操作外，可通过如实施例3的制备HPLC进一步得到纯化，从而得到17.1mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3333.8，实验值3333.4。
实施例21制备Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO39)-NH2]使0.58g(0.1mmol)实施例20制备的Boc-廿七肽树脂用Boc-N-Me-Ala(81mg，0.4mmol)进行一次连接循环，然后完成方案1的步骤1-8，并用BOP(443mg，1.ommol)、乙酸(57ml，1.0mmol)和DIPEA(523ml，3.0mmol)在20ml DMF中处理6小时，和用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟。树脂按方案1的步骤10-14洗涤后于真空下干燥可得到0.4g肽树脂。
这种肽树脂按实施例20解封后可得到165mg粗肽。该肽在用如实施例3的凝胶过滤法提纯后，可得到101mg半纯品。这种物料除按24-34％线性梯度操作外，经如实施例3的制备HPLC可进一步得到纯化，结果得到19.8mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3281.8，实验值3281.9。
实施例22制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO40)-NH2]使由实施例20制备的0.54g(0.2mmol)Boc-九肽树脂，在如实施例8的Applid Biosystems modal 430 A肽合成器上进行固相合成。进行十八次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Glu(OBZl)(675mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)和Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到0.58g Boc-廿七肽树脂。
使这种树脂用Boc-His(Tos)(164mg，0.4mmol)进行一次连接循环，然后完成方案1的步骤1-8，再于20ml6％DIPEA/二氯甲烷内用0.5ml乙酸酐处理60分钟。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤，并于真空下干燥可得0.53g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封，除了使用5ml HF和0.5ml茴香醚外，可得到15lmg粗肽。该肽用如实施例3的凝胶过滤可使肽纯化，得到110mg半纯品。这种物料除按23.5-33.5％线性梯度操作外，均按实施例3的制备HPLC可进一步得到纯化，得到22.8mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3347.9，实验值3347.0。
实施例23制备Ac-[O-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO41)-NH2]由实施例17制备的1.84g(0.3mmol)Boc-九肽树脂，在如实施例8的Applid Biosystems modal 430 A肽合成器上进行固相合成。进行九次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)和Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到2.2g Boc-十八肽树脂。
使0.73g(0.1mmol)的这种树脂进行十次连接循环，用Boc-Tyr(O-Me)(59mg，0.2mmol)，Boc-Asn(102mg，0.44mmol)，Boc-Asp(OcHx)(126mg，0.4mmol)，Boc-Thr(Bzl)(124mg，0.4mmol)，Boc-Phe(106mg，0.4mmol)，Boc-Val(87mg，0.4mmol)，Boc-Ala(76mg，0.4mmol)，Boc-Asp(OcHx)(126mg，0.4mmol)，Boc-Ser(Bzl)(118mg，0.4mmol)和Boc-His(Tos)(164mg，0.4mmol)各进行一次循环。这种肽树脂完成方案1的步骤1-8后，于20ml6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。其树脂按步骤10-14洗涤，并于真空下干燥可获得到0.77g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后可得到187mg粗肽。该肽通过如实施例3的凝胶过滤可被纯化而得到13lmg半纯品。这种物料除按26-36％线性梯度操作外，通过如实施例3的制备HPLC可进一步得到纯化，得到5.3mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3291.8，实验值3291.7。
实施例24制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO42)-NH2]采用如实施例2的方案1使二苯甲基胺树脂(1.1g，0.5mmol，200-200ASTM目，Bschem)进行固相合成。进行十三次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(823mg，2.0mmol)，Boc-Asn(511mg，2.2mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(881mg，2.0mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(936mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)和Boc-Ala(378mg，2.0mmol)各进行一次循环。
这种树脂通过用方案2的步骤1-11处理可被选择性地解封并与BOP(443mg，1.0mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应1小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。树脂按方案2的步骤13-16洗涤，并在真空下干燥，可得到2.02g Boc-十三肽树脂。
0.8g(0.2mmol)这种树脂按实施例8在Applied Biosytems model430A的肽合成器上进行固相合成。进行十六次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)和Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到1.2g Boc-廿九肽树脂。
如上述用Boc-ser(Bzl)(590mg，0.2mmol)和Boc-His(Tos)(81mg，2.0mmol)使0.6g(0.1mmol)的这种树脂在完成方案1的步骤1-8后，用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤后于真空下干燥得到0.645g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后可得到280mg粗肽。该粗肽通过如实施例3的凝胶过滤可被纯化而得到160mg半纯品。这种物料除按22-36％线性梯度操作外，可通过如实施例3的制备HPLC可进一步得到纯化，得到23.1mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因此可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3561.1，实验值3560.8。
实施例25制备Ac-[Ala2，Gln8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO43)-NH2]按照上述的用Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)和Boc-His(Tos)(819mg，2.0mmol)对实施例24的0.6g(0.1mmol)Boc-廿九肽树脂在完成方案1的步骤1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷内用0.5ml乙酸酐处理60分钟。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤，在真空下干燥可得0.56g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后可得到160mg粗肽。该肽用如实施例3的凝胶过滤被纯化而得到70mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，通过如实施例3的制备HPLC可进一步得到纯化，得到21.8mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3545.1，实验值3545.3。
实施例26制备Ac-[N-Me-Ala1，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO44)-NH2]1.1g(0.4mmol)实施例20的Boc-九肽树脂，在如实施例8的ApplidBiosystems modal 430 A肽合成器上进行固相合成。进行十七次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)和Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)各进行一次循环，可得到2.24g Boc-廿六肽树脂。
用Boc-ser(Bzl)(238mg，0.8mmol)和Boc-N-Me-Ala(163mg，0.8mmol)，使1.1g(0.2mmol)这种树脂进行两次连接循环，然后完成方案1的步骤1-8，并于20ml DIPEA中用Boc-Cl(100mg，0.2mmol)，乙酸(23ml，0.2mmol)和DIPEA(140ml，0.4mmol)处理1小时。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤后，于真空下干燥可获得到0.95g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到245mg粗肽。该肽经如实施例3的凝胶过滤可被纯化而得到165mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，通过如实施例3的制备HPLC可得到进一步纯化，得到33.7mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3295.8，实验值3294.5。
实施例27制备Ac-[P-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO45)-NH2]
使用如实施例2的方案1，对二苯甲基胺树脂(2.49g，2.0mmol，100-200ASTM目，Bschem)进行固相合成。进行六次连接循环，用Boc-Lys(2-Cl-Z)(3.32mg，8.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(3.32mg，8.0mmol)，Boc-Leu(1.85mg，8.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(823mg，2.0mmol)，Boc-Asn(1.02mg，4.4mmol)和Boc-Leu(1.05mg，8.0mmol)各进行一次循环。树脂干燥后移去0.4mmol。进行三次连接循环，用Boc-Tyr(2，6-DCB)(2.5g，6.4mmol)，Boc-Lys(Fmoc)(1.87g，6.4mmol)和Boc-Lys(2-Cl-Z)(2.65mg，6.4mmol)各进行一次循环。
这种树脂通过用方案2的步骤1-11处理，可选择性地解封，再与BOP(1.42g，3.2mmol)在20ml 1％DIPEA/DMF中反应4.5小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。树脂按方案2的步骤13-16洗涤，并在真空下干燥，可得到6.5g Boc-九肽树脂。
1.64g(0.4mmol)这种树脂，在如实施例8在Applied Biosytemsmodel 430A的肽合成器上进行固相合成。进行十三次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)各进行一次循环，可获得到2.56g的Boc-廿二肽树脂。
使0.64g(0.1mmol)这种树脂进行六次连接循环，用Boc-P-F-Phe(283mg，1.0mmol)，Boc-Val(218mg，1.0mmol)，Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(295mg，1.0mmol)和Boc-His(Tos)(818mg，2.0mmol)各进行一次循环，肽树脂完成方案1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟，树脂用步骤10-14洗涤并在真空下干燥，可得0.69g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到224mg粗肽。该肽通过如实施例3的凝胶过滤可纯化，得到213mg半纯品。这种物料除按25-37％线性梯度操作外，通过如实施例3的制备HPLC可得到进一步纯化，得到70.5mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3365.9，实验值3365.6。
实施例28制备Ac-[1-Nal6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO46)-NH2]使1.28g(0.2mmol)实施例27的Boc-廿二肽树脂进行如实施例27的六次连接循环，而第一次循环的Boc-P-F-Phe被Boc-1-Nal(315mg，1.0mmol)取代除外。该肽树脂完成方案1的步骤1-8后，用0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中处理60分钟，树脂用步骤10-14洗涤并在真空下干燥，可得1.41g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到420mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤可纯化可得305mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，通过制备HPLC可进一步得到纯化，得到66.9mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3398.0，实验值3398.8。
实施例29制备Ac-[Glu8，p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO47)-NH2]1.64g(0.4mmol)实施例27的Boc-九肽树脂，在如实施例8的Applied Biosytems model 430A的肽合成器上进行固相合成。进行九次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)和Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)各进行一次循环，得到2.2g的Boc-十八肽树脂。
1.1g(0.2mmol)这种树脂进行十次连接循环，用Boc-P-NH(CBZ)-Phe(415mg，1.0mmol)，Boc-Asn(512mg，2.2mmol)，Boc-Glu(Bzl)(675mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(620mg，2.0mmol)，Boc-Phe(532mg，2.0mmol)，Boc-Val(436mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)和Boc-His(Tos)(1.64g，4.0mmol)各进行一次循环，肽树脂完成方案1-8后，在20ml6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟，按步骤10-14洗涤并在真空下干燥，可得到1.45g肽树脂。
用实施例7解封该肽树脂可得到580mg粗肽。该肽按实施例3凝胶过滤可纯化，得到400mg半纯品。这种物料除了按22-32％线性梯度操作外，通过制备HPLC可得到进一步纯化，得到60.9mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3346.9，实验值3346.8。
实施例30制备Ac-[Glu8，O-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO48)-NH2]使1.1g(0.2mmol)实施例29的Boc-十八肽树脂按实施例29进行十次连接循环，除了第一循环中的Boc-P-NH(CBZ)-Phe被Boc-O-Me-Tyr(148mg，0.5mmol)取代外。肽树脂完成方案1的步骤1-8后，在0.5ml乙酸酐在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。树脂用步骤10-14洗涤并于真空下干燥，可得到1.45g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得555mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤可纯化，得到460mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到152.9mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3361.9，实验值3361.7。
实施例31制备Ac-[P-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO49)-NH2]1.2g(0.2mmol)实施例17的Boc-九肽树脂，在如实施例8的AppliedBiosytems model 430A肽合成器上进行固相合成。进行十三次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)和Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)各进行一次循环，得到1.3g Boc-廿二肽树脂。
按实施例27使0.65g(0.1mmol)这种树脂进行六次连接循环，该肽树脂完成方案l的步骤1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。树脂用步骤10-14洗涤后，再于真空下干燥，可得到0.85g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂可获得550mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤纯化，得到225mg半纯品。这种物料除按27-37％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到80.9mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因此可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3295.7，实验值3296.2。
实施例32制备Ac-[1-Nal6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO50)-NH2]按实施例27对0.65g(0.1mmol)实施例31的Boc-廿二肽树脂进行六次连接循环，除了第一循环中的Boc-P-F-Phe为Boc-1-Nal(315mg，1.0mmol)所取代外。肽树脂完成方案1的步骤1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。树脂用步骤10-14洗涤并于真空下干燥，可得到0.801g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂得到250mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤纯化，得到188mg半纯品。这种物料除按27-37％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到28.0mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3327.8，实验值3328.5。
实施例33制备Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO51)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(1.1g，0.5mmol，200-400目，Biomega)进行固相合成。实施例24进行十三次连接循环，除了第一次循环中的Boc-Ala被Boc-Thr(Bzl)(619mg，2.0mmol)所取代，第二次循环中的Boc-Ala被Boc-Gly(350mg，2.0mmol)所取代以及第三次循环中的Boc-Ala被Boc-Gly(350mg，2.2mmol)取代外，得到2.03g Boc-十三肽树脂。
1.22g(0.3mmol)的这种树脂，按实施例8在Applied Biosytemsmodel 430A肽合成器上进行固相合成。实施例24进行十六次连接循环，除了第十一次循环中的Boc-Asp(OcHx)被Boc-Glu(Bzl)(675mg，2.0mmol)所取代外，得到1.95g Boc-廿九肽树脂。
按上述用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)和Boc-His(Tos)(189mg，2.0mmol)对0.975g(0.15mmol)这种树脂进行两次连接循环，得到1.05g树脂。这种树脂在完成方案1的步骤1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。树脂用步骤10-14洗涤并于真空下干燥，并于真空下干燥得到0.897g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到270mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤纯化，得到150mg半纯品。这种物料除按24-34％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，获得28.7mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3547.1，实验值3546.9。
实施例34制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO52)-NH2]按实施例33对0.975g(0.15mmol)实施例33Boc-廿九肽树脂进行二次连接循环，除了第一次环中的Boc-Ala被Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)取代外，得到0.915g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂得到303mg粗肽。该肽按实施例3用凝胶过滤纯化，得到180mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到42.8mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3563.1，实验值3562.6。
实施例35制备Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO53)-NH2]按实施例8使0.27g(0.1mmol)实施例20的Boc-九肽树脂在Applied Biosytems model 430A肽合成器上进行固相合成。进行十九次连接循环，用Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Nle(462mg，2.0mmol)，Boc-Gln(493mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(856mg，2.0mmol)，Boc-Leu(499mg，2.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(830mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(880mg，2.0mmol)，Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Glu(Bzl)(675mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)和Boc-His(Tos)(818mg，2.0mmol)各进行一次循环，得到0.57g Boc-廿八肽树脂。
这种树脂在完成方案1的步骤1-8后，在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。其树脂按方案1的步骤10-14洗涤并于真空下干燥，可得到0.506g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂可得160mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤纯化，得到100mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，可按实施例3用制备HPLC进一步纯化，得到17.1mg白色无定形粉末。按HPLC这一化合物是单一的，因此可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3331.9，实验值3332.0。
实施例36制备Ac-[P-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO54)-NH2]由实施例17制备的0.6g(0.1mmol)Boc-九肽树脂，按实施例8在Applied Biosytems model 430A肽合成器上进行固相合成。按实施例23进行九次连接循环，可得0.72g Boc-十八肽树脂。用Boc-P-NH(CBZ)-Phe(166mg，0.4mmol)使这种树脂进行一次连接循环，获得0.79g Boc-十九肽树脂。该树脂按实施例8在Applied Biosytems model 430A肽合成器上进行固相合成。按实施例23进行九次连接循环，获得0.72g Boc-十八肽树脂。让这种树脂按实施例8在Applied Biosytems model 430A肽合成器上进行固相合成。进行九次连接循环，用Boc-Asn(464mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(618mg，2.0mmol)，Boc-Phe(531mg，2.0mmol)，Boc-Val(435mg，2.0mmol)，Boc-Ala(378mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(630mg，2.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(590mg，2.0mmol)，和Boc-His(Tos)(819mg，2.0mmol)各进行一次循环得到0.91g。这种树脂在完成方案1的步骤1-8后在20ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。其树脂用方案1步骤10-14洗涤并于真空下干燥，可得到0.85g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到350mg粗肽。该肽按实施例3的凝胶过滤纯化，得到138mg半纯品。这种物料除按25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，获得25.2mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3276.8，实验值3276.2。
实施例37制备Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO55)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，200-400ASTM目，Bachem)进行固相合成。进行九次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(310mg，1.0mmol)，Boc-Leu(267mg，1.0mmol)，Boc-Val(217mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OFm)(212mg，0.5mmol)，Boc-Asn(255mg，1.1mmol)，Boc-Leu(249mg，1.0mmol)，Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl)(80mg，0.2mmol)，Boc-Lys(Fmo)(234mg，0.5mmol)，和Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)各进行一次循环。
通过使用方案2的步骤1-11处理，该树脂可被选择性地解封，在10ml 1％DIPEA/DMF中与BOP(132mg，0.3mmol)反应3.5小时。Kaiser茚三酮分析结果为阴性。按方案2的步骤13-16洗涤树脂。
进行十九次连接循环，用Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Ala(189mg，1.0mmol)，Boc-Nle(231mg，1.0mmo1)，Boc-Gln(270mg，1.1mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)，Boc-Arg(Tos)(428mg，1.0mmol)，Boc-Leu(267mg，1.0mmol)，Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(310mg，1.0mmol)，Boc-Tyr(2，6-DCB)(220mg，0.5mmol)，Boc-Asn(256mg，1.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)，Boc-Thr(Bzl)(310mg，1.0mmol)，Boc-Phe(265mg，1.0mmol)，Boc-Val(217mg，1.0mmol)，Boc-Ala(189mg，2.0mmol)，Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)，Boc-Ser(Bzl)(295mg，1.0mmol)，和Boc-His(Tos)(409mg，1.0mmol)各进行一次循环。
这种树脂在完成方案1的步骤1-8后，在10ml 6％DIPEA/二氯甲烷中用0.5ml乙酸酐处理60分钟。树脂按方案1的步骤10-14洗涤并在真空下干燥，可得到0.814g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，得到265mg粗肽。按实施例3的凝胶过滤纯化肽，可得150mg半纯品。这种物料除以23-33％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到8.1mg白色无定形粉末。按HPLC这一化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3307.8，实验值3306.8。
实施例38制备Ac-[Lys12，N1e17，Ala19，m-F-L-Tyr22， Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO56)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(1.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Biomega)进行固相合成。按实施例37进行二十八次连接循环，除了第七次循环中的Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl)由Boc-m-F-Dl-Tyr(Bzl)(78mg，0.2mmol)取代外，获得0.75g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，得到254mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，得到114mg半纯品。这种物料除以27-37％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到15.1mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3295.7，实验值3295.5。
实施例39制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO57)-NH2]采用如实施例2的方案l，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例37进行二十八次连接循环，除了第一次循环中的Boc-Thr(Bzl)被Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)所取代，第二次循环中的Boc-Leu被Boc-Lys(2-Cl-Z)(415mg，1.0mmol)所取代，第三次循环中的Boc-Val被Boc-Leu(268mg，1.0mmol)取代和第二十一次循环中的Boc-Asp(OcHx)被Boc-Glu(O-Bzl)(337mg，1.0mmol)取代，得到0.90g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到270mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤使肽纯化，可得到155mg半纯品。这种物料除以25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到29.6mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3377.9，实验值3377.9。
实施例40制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO58)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例39进行二十八次连接循环，除了第七次循环中的Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl)为Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl)(78mg，0.2mmol)取代外，得到0.83g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得到240mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化其肽，得到100mg半纯品。这种物料除以25-35％线性梯度操作外，按实施例3周制备HPLC可进一步纯化，得到37.2mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3365.9，实验值3365.8。
实施例41制备Ac-[Ala8，Lys12，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO59)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例39进行二十八次连接循环，而第五次循环中的Boc-Asn被Boc-Ala(189mg，1.0mmol)取代，第七次循环中的Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl)被Boc-Tyr(2，6-DCB)(440mg，1.0mmol)取代和第二十一次循环中的Boc-Glu(OBzl)被Boc-Ala(189mg，1.0mmol)取代除外，得到0.85g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得255mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化其肽可得到112mg半纯品。这种物料除以25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到12.0mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3246.8，实验值3246.7。
实施例42制备Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO60)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例41进行二十八次连接循环，而第五次循环中的Boc-Ala为Boc-Asn(256mg，1.1mmol)取代，第十二次循环中的Boc-Nle为Boc-Ala(189mg，1.1mmol)取代，第十三次循环中的Boc-Gln为Boc-Ala(189mg，1.1mmol)取代，和第二十一次循环中的Boc-Ala为Boc-Glu(OBzl)(337mg，1.0mmol)取代除外，得到0.80g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得254mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，可得到115mg半纯品。这种物料除以20-30％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到32.1mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3248.7，实验值3248.3。
实施例43制备Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，Nle17，Asp19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO61)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例41进行二十八次连接循环，而第十三次循环中的Boc-Gln被Boc-Ala(189mg，1.1mmol)取代除外，得到0.93g肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，可得250mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，可得到100mg半纯品。这种物料除以27-37％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到23.6mg的白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3189.8，实验值3189.9。
实施例44制备Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO62)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。实施例43进行二十八次连接循环，而第十二次循环中的Boc-Nle被Boc-Ala(189mg，1.1mmol)取代除外，可得0.762g。
按实施例7解封这种肽树脂，可得240mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，可得到150mg半纯品。这种物料除了按22-32％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到55.3mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3147.7，实验值3148.0。
实施例45制备Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO63)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例43进行二十八次连接循环，而第十二次循环中的Boc-Ala被Boc-Nle(231mg，1.0mmol)取代除外，得到0.775g。
按实施例7解封这种肽树脂，可得203mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，可得100mg半纯品。这种物料除了按227-37％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到40.0mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3290.8，实验值3290.5。
实施例46制备Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO64)-NH2]
采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例43进行二十八次连接循环，而第二十一次循环中的Boc-Ala被Boc-Glu(OBzl)(337mg，1.0mmol)取代除外，得到0.837g。
按实施例7解封这种肽树脂，得178mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，可得到126mg半纯品。这种物料除了按20-30％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步被纯化，得到24.9mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因此能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3205.7，实验值3205.2。
实施例47制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO65)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。进行三次连接循环，用Boc-Thr(Bzl)(310mg，1.0mmol)，Boc-Gly(175mg，1.0mmol)，和Boc-Gly(175mg，1.0mmol)，各进行一次循环。按实施例37进行二十八次循环，而第七次循环中的Boc-m-OCH3-Tyr(Bzl)为Boc-Tyc(2，6-DCB)(440mg，1.0mmol)取代，第二十一次循环中的Boc-Asp(OCHx)为Boc-Glu(O-Bzl)(337mg，1.0mmol)取代除外，得到0.895g，肽树脂。
按实施例7解封这种肽树脂，得到440mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化肽，得到120mg半纯品。这种物料除了按25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到27.7mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3506.9，实验值3205.8。
实施例48制备Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Hhr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO66)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例47进行三十一次连接循环，而第十三次循环中的Boc-Ala为Boc-Val(217mg，1.0mmol)所取代，第二十六次循环中的Boc-Phe为Boc-p-F-Phe(142mg，0.5mmol)所取代除外，得到0.754g，肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后得到280mg粗肽。该肽按实施例3用凝胶过滤纯化，得到152mg半纯品。这种物料除了按27-38％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到53.4mg白色无定形粉末。按HPLC这种化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3553.0，实验值3552.2。
实施例49制备Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO67)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例47进行三十一次连接循环，而第四次循环中的Boc-Thr(Bzl)为Boc-Lys(2-Cl-Z)(414mg，1.0mmol)所取代，第五次循环中的Boc-Leu为Boc-Lys(2-Cl-Z)(414mg，1.0mmol)所取代，第六次循环中Boc-Val为Boc-Leu(249mg，10mmol)所取代，第三十次循环中的Boc-Ala为Boc-Val(217mg，1.0mmol)所取代和第三十次循环中的Boc-Ser(Bzl)为Boc-Ala(189mg，1.0mmol)所取代外，得到0.838g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后，得到370mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化，得到196mg半纯品。这种物料除23-33％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到48.4mg白色无定形粉末。按HPLC该化合物是单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3575.1，实验值3574.0。
实施例50制备Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO68)-NH2]
采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例49进行三十一次连接循环，而第三十次循环中的Boc-Ala被Boc-Ser(Bzl)(295mg，1.0mmol)取代除外，得到0.913g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后，得到378mg粗肽。按实施例3用凝胶过滤纯化后，可得到240mg半纯品。这种物料除25-35％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，得到28.8mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC该单一的，因而可得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3591.1，实验值3590.3。
实施例51制备Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27-28，Ala29-31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO69)-NH2]采用如实施例2的方案1，使二苯甲基肽树脂(0.125g，0.1mmol，100-200ASTM目，Bachem)进行固相合成。按实施例47进行三十一次连接循环，而第一次循环中的Boc-Thr(Bzl)为Boc-Ala(189mg，1.0mmol)取代，第二次循环中的Boc-Gly被Boc-Ala(189mg，1.0mmol)取代，第三次循环中的Boc-Gly被Boc-Ala(189mg，1.0mmol)取代，第四次循环中的Boc-Thr(Bzl)被Boc-Lys(2-Cl-Z)(414mg，1.0mmol)取代，第五次循环中的Boc-Leu被Boc-Lys(2-Cl-Z)(414mg，1.0mmol)取代，第六次循环中的Boc-Val被Boc-Leu(249mg，1.0mmol)取代，和第二十四次循环中的Boc-Glu(OBzl)被Boc-Asp(OcHx)(315mg，1.0mmol)取代除外，得到0.844g肽树脂。
这种肽树脂按实施例7解封后，得到360mg粗肽。该肽按实施例3用凝胶过滤纯化后，可得115mg半纯品。这种物料除按24-34％线性梯度操作外，按实施例3用制备HPLC可进一步纯化，获得34.7mg白色无定形粉末。这种化合物按HPLC是单一的，因而能得到正确的氨基酸分析结果。FAB-MSMH计算值3547.1，实验值3546.0。
实施例52VIP类似物的气管扩张活性已利用豚鼠气管的模型研究过VIP类似扩张活性[Wasserman，M.A.等人.，in Vasoactivl Intestimal Peptde，S.I.Said，de.，Raven Press，N.Y.1982，PP 177-184]。所有组织皆取自用尿烷(2g/Kg，i.p.)麻醉的雄性白色变种豚鼠，其重量为400-600g。血管扩张后，取出气管并分成4个环状段(3mm长)。用30号标准不锈钢丝将每段环悬挂在10ml夹套的组织浴中，并通过4-0丝线与Grass压力位移传感器(FTO3C型，Grass Instruments co.，Quimcy，MA)连接，以便等距离记录拉力。将平滑肌浸泡于改性的Kreb溶液中，该溶液的组成如下NaCl，120mM；KCl，4.7mM；CaCl2，2.5mM；MgSO4.7H2O，1.2mM；NaHCO3，25mM；K2HPO4，1.2mM；和右旋糖，10mM。组织浴保温于37℃下，并不断地鼓入95％O2和5％CO2的气泡。在8通道和4通道Hewlett-Packard(型号各为7702B和7754A)记录仪上(Hewlett-Packard，Paramus，NJ)记录响应。气管环状物置于1.5g的静拉力下，在初步试验中已确定该静拉力是最佳的或接近最佳的。在随后60分钟稳定期间内，必须经常再调节拉力。组织每隔15分钟漂洗一次。
按照Vanrossum(Arch.Int.Pharmacodyn.，143，299-330(1963)法，通过VIP或VIP类似物浴浓度的μ1连续增加，得到了每个组织的累积浓度响应曲线。基于单一组织，只能获得一种累积剂量响应曲线。为了减小组织之间易变性，扩张响应以每一浓度响应试验结束时所加入的VIP(10-6M＝100％)所获得最大响应的百分比表示。汇集由三种组织所得到的响应并按照线性回归法确定EC50值。
表I中所汇集的结果显示了VIP类似物的气管扩张活性与天然VIP的对比。
表IVIP类似物对豚鼠气管平滑肌的扩张活性EC50化合物 (nM)VIP[(Seq ID NO1)-NH2] 10Ac-[Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Asp8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO20)-NH2]14Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Glu8→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO21)-NH2] 34Ac-[Asn8，Asp9，Lys12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Asp9→Lys12)[Ac-(SEQ ID NO22)-NH2] 17Ac-[Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Asp8→Orn12)[Ac-(SEQ ID NO23)-NH2] 40Ac-[Lys8，Asp12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys8→Asp12)[Ac-(SEQ ID NO24)-NH2] 38Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Glu8-Orn12) [Ac-(SEQ ID NO25)-NH2] 16Ac-[Lys12，Glu16，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys12→Glu16) [Ac-(SEQ ID NO26)-NH2] 37Ac-[Lys12，Nle17，Asp24，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys20→Asp24) [Ac-(SEQ ID NO27)-NH2] 5.3Ac-[Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO28)-NH2] 3.1Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO29)-NH2] 0.70Ac-[p-F-Phe6，2-Nal10，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Met31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO30)-NH2] 1.3Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO31)-NH2] 2.2Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Cys(Acm)31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO32)-NH2] 0.44Ac-[Ala2，Lys12，N1e17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO33)-NH2] 1.2Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO34)-NH2] 0.71Ac-[2-Nal10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO35)-NH2] 4.2Ac-[O-CH3-Tyr10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO36)-NH2] 0.84Ac-[p-F-Phe6，p-NH2-Phe10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO37)-NH2] 4.4Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28] -VIPcyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO38)-NH2] 0.13Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO39)-NH2] 0.95Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO40)-NH2] 0.45Ac-[O-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO41)-NH2] 2.6Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO42)-NH2] 0.61Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO43)-NH2] 0.55Ac-[N-Me-Ala1，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO44)-NH2] 0.36Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO45)-NH2] 0.47Ac-[1-Nal6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO46)-NH2] 0.26Ac-[Glu8，p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO47)-NH2] 0.32Ac-[Glu8，O-CH3-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25Leu26，Lys27，28]-VIP cycloLys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO48)-NH2] 0.41Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO49)-NH2] 0.39Ac-[1-Nal6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO50)-NH2] 2.9Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO51)-NH2] 0.92Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO52)-NH2] 0.35Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO53)-NH2] 0.78Ac-[p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO54)-NH2] 0.96Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO55)-NH2]0.31Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Val26Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO56)-NH2]0.52Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO57)-NH2]0.29Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28] -VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO58)-NH2]0.31Ac-[Ala8，Lys12，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO59)-NH2]1.1Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO60)-NH2] 0.26Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO61)-NH2]2.4Ac-Ala8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO62)-NH2]0.1Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-SEQ ID NO63)-NH2] 0.9Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO64)-NH20.22Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO65)-NH2] 0.88Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO66)-NH2) 0.57Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO67)-NH2] 0.19Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)-Ac-(SEQ ID NO68)-NH2] 0.43Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys→Asp25)Ac-(SEQ ID NO69)-NH2] 0.42
实施例53VIP类似物的支气管扩张活性通过气管滴注给药检测VIP和VIP类似物在豚鼠体内的支气管扩张活性。该项技术利用重量为400-600g的雄性豚鼠(Hartley Strain，Charles River)。在腹膜内用尿烷(2g/Kg)麻醉动物，并且为了静脉给药，将聚乙烯插管插入颈静脉中。
切开动物的气管后，用吸移管将蒸馏水的药液或溶于蒸馏水的试验化合物在大约距隆凸四分之三处滴入气管中。为了输入恒定的体积100ml，应调节药液的浓度。动物仰卧放置1分钟，以助于药品输入肺部。1分钟后，随着静脉注射氯化琥珀酰胆碱(1.2mg/Kg)而自发呼吸停止，用Harvard 680型小型动物呼吸给动物换气，该呼吸器定于每分钟呼吸40次，心博排血量4.0cm3，以最大的组胺收缩剂量剌激其动物(50mg/Kg，i.v.)，并根据Statham压力传感器(P 32 AA)记录气管压力(厘米水柱)。
对至少3个对照和3个药品处理动物的气管压力变化取平均值，再计算抑制百分比。由服用各种剂量的试验化合物和计算中值有效剂量(ED50值)确定滴注法服用化合物的相对效力。根据由引起10％-90％抑制效果的至少3种剂量得到的剂量-响应记录曲线来确定ED50，每种化合物的回归线校正系数大于0.95。
为了测定各种化合物的抑制时间过程，化合物投入和组胺激发之间的时间是改变的。当抑制降至40％时，按此时间计算活性的时间过程。
表II中汇集的结果表明VIP类似物体内支气管扩张活性与天然VIP的对比。
表IIVIP类似物对豚鼠气管平滑肌的扩张活性ED50化合物(μM)VIP[(Seq ID NO1)-NH2]7.3Ac-[Lys12，Glu16，Nle17，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys12→Glu16)[Ac-(SEQ ID NO26)-NH2] 39Ac-[Lys12，Nle17，Asp24，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys20→Asp24)[Ac-(SEQ ID NO27)-NH2] 2.3Ac-[Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO28)-NH2] 1.2Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO29)-NH2] 0.34Ac-[p-F-Phe6，2-Nal10，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Met31]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO30)-NH2] 0.90Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO31)-NH2] 0.19Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Cys(Acm)31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO32)-NH2] 0.19Ac-[Ala2，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO33)-NH2] 0.6Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO34)-NH2] 1.0Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIPcyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO38)-NH2] 0.09Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO39)-NH2] 0.06Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25) [Ac-(SEQ ID NO40)-NH2] 0.022Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，25，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO42)-NH2] 0.072Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO43)-NH2] 0.14Ac-[N-Me-Ala1，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO44)-NH2] 0.097Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO45)-NH2] 0.026Ac-[1-Nal6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu6，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO46)-NH2] 0.036Ac-[Glu8，p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO47)-NH2] 0.075Ac-[Glu8，O-CH3-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，25]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO48)-NH2] 0.094Ac-[p-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo (Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO49)-NH2]0.26Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO51)-NH2] 0.1Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO52)-NH2] 0.1Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO53)-NH2] 0.14Ac-[p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO54)-NH2] 0.35Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Val26Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO55)-NH2] 0.14Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO56)-NH2] 7.2Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO57)-NH2] 0.019Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO58)-NH2] 0.03Ac-[Ala8，Lys12，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO59)-NH2] 0.17Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Asp25，Leu26，Lys7，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO60)-NH2] 0.17Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO61)-NH2] 0.045Ac-Ala8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO62)-NH2] 0.24Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO64)-NH2] 0.13Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19Asp25，Val26，Thr28Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO65)-NH2] 0.84Ac-[p-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO66)-NH2] 0.12Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO67)-NH2] 0.077Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28Gly29，30，Thr31]-VIP cyclo Lys21→Asp25)Ac-(SEQ ID NO68)-NH2] 0.04Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP cyclo(Lys→Asp25)Ac-(SEQ ID NO69)-NH2] 0.0权利要求
1.一种制备下式环肽或其可药用盐的方法
其中R1是His，N-CH3-Ala；R2是Ser或Ala；R5是
其中Q是低级烷基环己基或低级烷基芳基；R8是Asp，Glu或Ala；R10是Tyr或R6；R12是Arg或Lys；R16是Gln或Ala；R17是Met，Nle或Ala；R19是Val或Ala；R22是Tyr或R6；R24是Asn或Ala；R26是Ile，Val或Leu；R27是Leu或Lys；R28是Asn，Thr或Lys；X是氢或能水解的氨基保护基；Y是羟基、能水解的羧基保护基或R29-R30-R31-Z；R29是Gly或Ala；R30是Gly或Ala；R31是Ala、Met、Cys(Acm)或Thr；Z是羟基或能水解的羧基保护基；其特征在于(a)使保护的和树脂结合的相应氨基酸顺序肽选择性去保护，以生成自由侧链氨基基团和自由侧链羧基基团；(b)用合适的酰胺生成剂使自由侧链氨基基团和自由侧链羧基基团共价连接；和(c)用合适的去保护和分裂剂处理，必要时在更合适的添加剂作为阳离子清除剂存在下，脱去保护基并从树脂上分裂该环肽，若需要，使该环肽转化成可药用盐。
2.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽的Q是环己基甲基。
3.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽的Q是芳基C1-2烷基。
4.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽的Q是苯基C1-2烷基，其中苯环未取代或用一个或多个选自下列基团的取代基取代OH，OCH3，F，Cl，I，CH3，CF3，NO2，NH2，N(CH3)2，NHCOOH3，NHCOC6H5或C(CH)3。
5.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽的Q是萘基C1-2烷基，其中萘环未取代或用一个或多个选自OH，OCH3，F，Cl，I，CH3，CF3，NO2，NH2，N(CH3)2，NHCOCH3，NHCOC6H5，或C(CH3)3的取代基取代。
6.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽中R26是Val，R28是Thr[X-(SEQ ID NO11)-T]。
7.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽中R17是Nle，R26是Val，和R28是Thr[X-(SEQ ID NO12)-Y]。
8.按权利要求7的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Orn12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO31)-NH2]。
9.按权利要求7的方法，其特征在于该环肽中R12是Leu，R17是Nle，R19是Ala，R26是Val，R28是Thr[X-(SEQ ID NO13)-Y]。
10.按权利要求9的方法，其特征在于该环肽是Ac-[2-Nal10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO35)-NH2]。
11.按权利要求9的方法，其特征在于该环肽是Ac-[O-Me-Tyr10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环[Ac-(SEQ ID NO36)-NH2]。
12.按权利要求9的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，p-NH2-Phe10，Leu12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO37)-NH2]。
13.按权利要求7的方法，其特征在于该环肽R12是Lys，R17是Nle，R26是Val，R28是Thr[X-(SEQ ID NO14)Y]。
14.按权利要求13的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO28)-NH2]。
15.按权利要求13的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，2-Nal10，Lys12，Nls12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Met31-VIP(1-31)-NH2环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO30)-NH2]。
16.按权利要求13的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO66)-NH2]。
17.按权利要求7的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R17是Nle，R19是Ala，R26是Val，和R28是Thr[X-(SEQ ID NO15)-Y]。
18.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25[Ac-(SEQ ID NO29)-NH2]。
19.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Cys(Acm)31]-VIP(1-31)-NH2环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO32)-NH2]。
20.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala2，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO33)-NH2]。
21.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO34)-NH2]。
22.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[O-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21-Asp25)[Ac-(SEQ IDNO41)-NH2]。
23.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO49)-NH2]。
24.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[1-Nal6，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO50)-NH2]。
25.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO54)-NH2]。
26.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO55)-NH2]。
27.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Val26，Thr28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO56)-NH2]。
28.按权利要求17的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Val26，Thr28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO65)-NH2]。
29.按权利要求1的方法，其特征在于该环肽中R26是Leu，R27和R28均是Lys[X-(SEQ ID NO16)-Y]。
30.按权利要求29的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R17是Ala，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均是Lys[X-SEQ ID NO17)-Y]。
31.按权利要求30的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO60)-NH2]。
32.按权利要求30的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lysu27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO62)-NH2]。
33.按权利要求30的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，17，19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO64)-NH2]。
34.按权利要求29的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R17是Nle，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ ID NO18)-Y]。
35.按权利要求34的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO67)-NH2]。
36.按权利要求34的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO68)-NH2]。
37.按权利要求34的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R17是Nle，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ ID NO19)-Y]。
38.按权利要求37的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R16是Gln，R17是Nle，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ IDNO70)-Y]。
39.按权利要求38的方法，其特征在于该环肽中R2是Ser，R12是Lys，R16是Gln，R17是Nle，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ ID NO71)-Y]。
40.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO38)-NH2]。
41.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[N-Me-Ala1，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO39)-NH2]。
42.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO40)-NH2]。
43.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP环[Ac-(SEQ ID NO42)-9NH2]。
44.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[N-Me-Ala1，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO44)-NH2]。
45.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[P-F-Phe6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO45)-NH2]。
46.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[1-Nal6，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO46)-NH2]。
47.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，p-NH2-Phe10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO47)-NH2]。
48.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，o-Me-Tyr10，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO48)-NH2]。
49.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29，30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO52)-NH2]。
50.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-OCH3-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21-Asp25)[Ac-(SEQ ID NO57)-NH2]。
51.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，m-F-L-Tyr22，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO58)-NH2]。
52.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala8，Lys12，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO59)-NH2]。
53.按权利要求39的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ IDNO69)-NH2]。
54.按权利要求38的方法，其特征在于该环肽中R2是Ala，R12是Lys，R16是Gin，R17是Nle，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ ID NO72)-Y]。
55.按权利要求54的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Ala29-31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO43)-NH2]。
56.按权利要求54的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28，Gly29-30，Thr31]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO51)-NH2]。
57.按权利要求54的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala2，Glu8，Lys12，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO53)-NH2]。
58.按权利要求37的方法，其特征在于该环肽中R12是Lys，R16是Ala，R17是Nle，R19是Ala，R26是Leu，R27和R28均为Lys[X-(SEQ IDNO73)-Y]。
59.按权利要求58的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Ala8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Ala24，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQ ID NO61)-NH2]。
60.按权利要求58的方法，其特征在于该环肽是Ac-[Glu8，Lys12，Ala16，Nle17，Ala19，Asp25，Leu26，Lys27，28]-VIP环(Lys21→Asp25)[Ac-(SEQID NO63)-NH2]。
全文摘要
本发明涉及血管活性肽(VIP)类似物，其中肽链中一个氨基酸的侧链羧基端与肽链中另一个氨基酸的侧链氨基端通过生成酰胺链而共价连接。肽链中二个氨基酸残基间共价键合形成环状结构。本发明提供环状血管活性肽及用于治疗支气管气管缩窄病的含有这种环状血管活性肽的药物组合物。
文档编号C07K14/575GK1153785SQ9611152
公开日1997年7月9日 申请日期1996年8月15日 优先权日1991年10月11日
发明者D·R·波林, M·奥唐奈 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司