专利名称：2r,4s,r,s－和2s,4r,r,s－羟基伊曲康唑－和羟基沙波康唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及羟基伊曲康唑(hydroxyitraconazole)的光学纯异构体、特别是仲丁基(R,S)-异构体的两个顺式二氧戊环非对映异构体的制备方法，以及其磷酸酯和硫酸酯衍生物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及它们治疗真菌感染的应用。
背景技术：
伊曲康唑是一种众所周知的抗真菌剂，其在USAN和USP药名词典中被定义为4-[4-[4-[4-[(2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-2-(1-甲基丙基)-3H-1,2,4-三唑-3-酮或者(±)-1-仲丁基-4-[p-[4-[p-[((2R*,4S*)-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-Δ2-1,2,4-三唑啉-5-酮。市售物质是二氧戊环中呈顺式的异构体，以结构式Ⅰ表示
将注意到，在式Ⅰ中有三个不对称碳(以星号表示)两个在二氧戊环中，一个在三唑酮之仲丁基侧链上。有三个不对称碳的结构有八个可能的异构体(R,R,R)、(R,R,S)、(R,S,S)、(S,S,S)、(R,S,R)、(S,R,S)、(S,R,R)和(S,S,R)。因为市售伊曲康唑是顺式异构体，其包含那些仅在二氧戊环中为顺式关系的异构体的混合物。按照惯例，第一个标记的手性中心在二氧戊环的C-2处，第二个在二氧戊环的C-4处，而第三个在仲丁基中，市售伊曲康唑是(R,S,S)、(R,S,R)、(S,R,S)和(S,R,R)异构体的混合物。本发明的化合物在二氧戊环中具有(2R,4S)和(2S,4R)构型。
对仲丁基侧链的亚甲基进行羟基化可产生另一个手性中心，而且产生另外八个可能的对映体。本发明的化合物是丁基链中的两个非对称中心是R(在α碳处)和S(在β碳处)的那些化合物。
在此所用的外消旋、ambiscalemic、scalemic或对映体纯的化合物的图解表示取自于Maehr J.Chem.Ed.62,114-120(1985)实心楔形和虚楔形用于表示手性元素的绝对构型波折线表示其所代表的键不会产生任何立体化学含意；实粗线和虚粗线是表明相对构型但有外消旋性质的几何符号；而楔形轮廓线和虚线表示未确定绝对构型的对映体纯化合物。因此，在以下结构中，那些具有空心楔形者包括两个该对纯的对映体，那些具有实心楔形者包括单一的、具有所示绝对立体化学的纯对映体。
伊曲康唑是一种口服的、广谱活性抗真菌剂，其结构上与咪康唑(miconazole)和克霉唑(clotrimazole)相近。其损坏麦角甾醇的合成，而麦角甾醇是真菌细胞膜的主要甾醇。这有可能导致细胞内容物的透过性和泄漏增加。在高浓度时，发生细胞内细胞器的退化、过氧物酶体的增加以及坏死。
口服给药后，伊曲康唑缓慢吸收。在每日给药的15天后达到峰值血浆浓度，而且伊曲康唑的药代动力学特性是非线性的。该化合物通过生物活性的羟基伊曲康唑被最终代谢为几种无活性的代谢物。代谢作用明显是通过肝代谢机理，而且在大多数患者中，没有代谢物从尿中排泄(见Hardin等人，Antimicro.Agents and Chemotherapy32,1310-1313(1988))。
伊曲康唑的外消旋化合物已被批准用作抗真菌剂，用于治疗芽生菌病和组织胞浆菌病。还调查了该化合物在治疗曲霉病、球孢子菌病、隐球菌病、甲真菌病、皮肤真菌和念珠菌病感染中的作用。
全身性真菌疾病(全身真菌病)通常是慢性的、发展非常缓慢的病症，通过机会致病的真菌诱发，该真菌在正常情况下不是致病性的。但是，当它们进入遭到HIV、电离辐射、皮质类固醇、免疫抑制剂等损害，或者被例如肺气肿、支气管扩张、糖尿病、白细病、烧伤等病症损害的宿主时，它们可变成致病性的。此等真菌疾病的症状通常不严重，可包括发烧、寒战、厌食和体重降低、不适、和抑郁。真菌疾病经常局限于典型的解剖学分布，而且许多病症涉及在肺中的原发病灶，当真菌从原发病灶扩散时，表现为更为特征性的具体真菌感染。例如，球孢子菌病的初期为急性的、良性的、自限性的呼吸疾病，从原发形式发展为进行性疾病，其表现为皮肤、淋巴腺、脾和肝脏的慢性感染，该感染通常是致命的。类似地，芽生菌病初期涉及肺，并有时扩展至皮肤。其他感染性疾病如念珠菌病和巴西芽生菌病则有不同的发病过程，而且根据病源学可表现为几种形式，其中涉及皮肤、粘膜、淋巴结、和内部器官。
表面真菌感染是由皮肤真菌或涉及皮肤、头发或指甲外层的真菌导致的。该感染可形成轻度的炎症，并导致逐渐扩大的、鳞片状的、突起损伤的间断性复发和恶化。包括念珠菌病、口腔念珠菌病(真菌性口炎)的酵母感染通常局限于皮肤、和粘膜上，而且其症状随感染部位而变化。
与口服伊曲康唑有关的副作用包括肝毒性和抑制药物在肝脏中的代谢，导致多种临床上明显的、不利的药物相互作用(见Gascon和Dayer,Eur.J.Clin.Pharmacol.41,573-578(1991)(与咪达唑仑(midazolam)相互作用)；Honing等人，J.Clin.Pharmacol.33,1201-1206(1993)(与特非那定(terfenadine)相互作用)；以及Neuvonen等人，Clin Pharmacol.Therap.60,54-61(1996)(与洛伐他汀(lovastatin)相互作用))。包括荨麻疹和血清肝酶升高的过敏性反应也与给药该药物有关。肝毒性不常见，但却是更严重的副作用。的确，通常不鼓励口服使用康唑类药物作为首选抗真菌剂，这是因为低发生率的肝毒性的潜在严重后果(见例如，Lavrijsen等人，Lancet340,251-252(1992))。
我们在离体的豚鼠或兔心脏中进行了研究，证实给药外消旋的康唑类药物与心律不齐危险增加有关。目前并没有报道称心律不齐是伊曲康唑全身性给药的副作用，但是已有报道称在同时给药外消旋伊曲康唑和特非那定时产生心律不齐的一个特殊副型--尖端扭转型室速(Torsades de Pointes)(Pohjola等人，Eur.J.Clin.Pharmacol.45,191-193(1993))。缺乏有关心律不齐或QT异常的临床报道可简单地认为是由于目前患者数量较少。
伊曲康唑的相对非极性和不溶性产生另外两个缺陷其不易配制在非胃肠道给药的溶液中，而且不能透过血脑屏障。其结果是，许多治疗适应症需要快速达到有效血液浓度或者需要进入CNS，因此不能用伊曲康唑来治疗。具体而言，涉及与AIDS有关的痴呆的中枢念珠菌病就不能用伊曲康唑来治疗。
因此，特别希望发现具有伊曲康唑的优点但没有上述缺陷的化合物。
发明简述本发明的化合物和组合物对治疗局部和全身性真菌、酵母和皮肤真菌感染有强效活性，并同时避免了与给药伊曲康唑有关的副作用。本发明的化合物和组合物还具有特别的优点比伊曲康唑更易溶于生理相容性溶液中。羟基伊曲康唑之单独对映体的制备使得第一次可制得非常易溶性的单个非对映异构体及其衍生物。
在一个方面中，本发明涉及以下结构式化合物之基本上纯的单一对映体或其盐
其中X1和X2独立地是氯或氟，R是氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。在此有两个此等可能的单一对映体，分别用以下结构式A和B表示
在另一个方面中，本发明涉及包含上述化合物和药物学上可接受的载体的药物组合物。该组合物包含低于10重量％具有相同结构式的其他对映体或非对映体。优选的是，所述组合物包含单一的对映体A或B。
在另一个方面中，本发明涉及治疗或预防真菌感染的方法，其包括向患有真菌感染(或有真菌感染危险)的哺乳动物给药治疗有效量的上述化合物。
在另一个方面中，本发明涉及制备下式之2,4-二取代的3H-1,2,4-三唑-3-酮的方法
其中R1是芳基或经取代的芳基。所述方法包括使下式之2-芳基-3H-1,2,4-三唑-3-酮
与下式之反式4,5-二甲基-1,2,3-二氧硫代戊环(dioxathiolane)2,2-二氧化物反应，
其中，在惰性溶剂中，在至少1当量1,4,7,10,13,16-六氧环十八烷(18-冠-6)存在下，使所述2-芳基-3H-1,2,4-三唑-3-酮与过量的氢化钾反应形成相应的钾盐，然后在-5℃至25℃下添加所述二氧硫代戊环。在合成伊曲康唑的对映体时，R1优选是
其中R2是甲基或苄基。
在另一个方面中，本发明涉及制备下式之二氧戊环甲磺酸酯的方法
其中，Ph是苯基或经取代的苯基，Tos是甲苯磺酰基，而R3是杂环甲基。所述方法包括以下顺序的步骤(a)将式R3C(O)Ph的酮和约1当量的光学活性的1,2-二羟基丙基甲磺酸酯溶解在惰性溶剂中；(b)冷却至低于15℃的温度；(c)在＜15℃下添加过量的三氟甲磺酸；(d)使上述物质反应形成缩酮；然后(e)在0-10℃下将在溶液中的缩酮引入至过量的碱金属碳酸盐或碳酸氢盐水溶液中。发明详细描述本发明的化合物是通过以下合成路线1、2、3和4所示的常规途径来合成的反应路线1
反应路线2
反应路线3
反应路线4
如反应路线1所示，手性二氧戊环DTTT(3)根据立体特异性文献方法从R-3-甲苯磺酰氧基-1,2-丙二醇或者S-3-甲苯磺酰氧基-1,2-丙二醇通过酸催化的缩酮化反应来制备，分别产生对映体纯的RR或SS-DTT。
如反应路线2所示，用亚硫酰氯处理，然后在存在三氯化钌的条件下，用高碘酸钠原位氧化所得的环状亚硫酸酯，由此从适宜构型的丁二醇制备所述二氧硫代戊环5。
如反应路线3所示，在冠醚存在下，用DMF中的氢化钾，将根据美国专利4,267,179中实施例ⅩⅦ之方法制备的2,4-二氢-4-[4-[4-(甲氧基苯基)-哌嗪基]苯基]-3H-1,2,4-三唑-3-酮(6)与根据Gao和Sharpless(J.Am.Chem.Soc.110,7538(1988))的方法制备的二氧硫代戊环5反应。在100-110℃下用48％HBr加热，由此将所得甲氧基硫酸酯盐裂解成酚-醇8。
如反应路线4所示，在氢氧化钾之DMF溶液存在下，将反应路线1中的甲苯磺酰酯3与反应路线3中的酚-醇8反应，得到基本上对映体纯的产物9。
当需要A或B中的R是硫酸酯时，可重排反应路线3和4中的步骤顺序，以便在加入仲丁基侧链前裂解6的甲氧基，或者先加入3，然后加入5。
当需要A或B中的R是磷酸酯时，首先用叔丁基二甲基甲硅烷基氯和二异丙基乙基胺处理8以保护酚，然后按照PCT申请WO95/17407的方法用二苄基二异丙基亚磷酰胺和叔丁基过氧化氢处理，以便将醇磷酸化。用无水四丁基氟化铵除去甲硅烷基保护基，然后按反应路线3将苄基保护的磷酸与二氧戊环甲苯磺酸酯盐偶联。在存在钯催化剂的条件下，通过氢解裂解苄基保护基以得到磷酸酯产物。制备(-)-(2R,4S)-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-4-甲苯磺酰氧基甲基-1,3-二氧戊环甲苯磺酸盐(3a苯甲磺酸酯盐)
将(R)-甲苯磺酰氧基-1,2-丙二醇(10.0g,40mmol)和1-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙烯酮(10.0g,39 mmol)在甲苯(50ml)中的悬浮液冷却至5℃。缓慢加入三氟甲基磺酸(15ml,4当量)，以便温度保持在15℃以下。完全加入后，将反应混合物(2相)在25℃搅拌60小时。用乙酸乙酯(EtOAc)(200ml)稀释混合物并缓慢滴入5℃的K2CO3(50g)水溶液(400ml)中。分离有机相，用EtOAc(150ml)洗涤水层。将合并的有机提取物在硫酸钠(10克)上干燥并过滤。在25℃缓慢加入甲苯磺酸(TsOH)(7.6g)水合物的乙酸乙酯溶液(50ml)。30分钟后，过滤白色固体产物，洗涤并干燥得到含5％反式的顺DTTT。用CH3CN(400ml)进行重结晶，得到13.5g纯(2R,4S)-DTTT(50％产率)[a]D25=+16.6°(c=1,MeOH)；ee=99.6％。制备(-)-(2S,4R)-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-4-甲苯磺酰氧基甲基-1,3-二氧戊环甲苯磺酸盐(3b苯甲磺酸酯盐)
将(S)-甲苯磺酰氧基-1,2-丙二醇(14.8g,60mmol)和1-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙烯酮(15.2g,58mmol)在甲苯(80ml)中的悬浮液冷却至5℃。缓慢加入三氟甲基磺酸(18ml)以便温度保持在15℃以下。完全加入后，将反应混合物(2相)在25℃搅拌60小时。用二氯甲烷(300ml)稀释混合物并缓慢滴入5℃的K2CO3(30g)水溶液(300ml)中。分离有机相并浓缩至约100ml。用甲基异丁基酮(MIBK)(300ml)稀释残余物并在25℃缓慢加入TsOH(11.0g单水合物)的MIBK(100ml)溶液。30分钟后，过滤白色固体产物，洗涤并干燥，得到含6％反式的顺DTTT。用CH3CN(600ml)进行重结晶，得到16.6g纯(2S,4R)-DTTT(44％产率)。[a]D25=-16.6°(c=1,MeOH)；ee=99.6％。制备(4S,5S)-4,5-二甲基-1,2,3-二氧杂四氢噻吩2,2-二氧化物(5)向备有回流冷凝器和氯化钙干燥试管的三颈500ml圆底烧瓶中加入(2S,3S)-(-)-2,3-丁二醇(4)(10.0g,10.1ml,0.11mol)和四氯化碳(120ml)。室温下滴加亚硫酰氯(16.0g,9.8ml,0.13mol)。气体迅速放出。将反应混合物在室温搅拌10分钟，然后加热回流30分钟以确保完全除去HCl气体。在冰水浴中将反应混合物冷却至0℃，分别加入乙腈(120ml)、RuCl3·H2O(14mg,0.07mmol)、NaIO4(35.6g,0.144mol)和水(180ml)。将反应混合物加热至室温并搅拌1.5小时。将混合物注到甲基叔丁基醚(900ml)中，加入水以溶解剩余的NaIO4(约600ml)。分离相并用甲基叔丁基醚提取水相(2×100ml)。用水(1×50ml)、饱和的碳酸氢钠水溶液(2×50ml)和饱和的氯化钠水溶液(1×50ml)洗涤合并的有机相。在无水硫酸镁上干燥有机相并通过硅胶床过滤，得到澄清无色的溶液。真空除去溶剂，得到16.85g(定量性产率)的标题化合物。制备(2S,3R)-3-[2,4-二氢-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)]-1-哌嗪基]苯基]-3H-1,2,4-三唑-3-酮-2-基]丁-2-基硫酸钾(7)在室温，向用己烷(2×50ml)预洗涤的氢化钾(1.71g,15mmol,35wt％油分散液)在N,N-二甲基甲酰胺(120ml)中的悬浮液中加入18-冠-6(3.17g,12.0mmol)和2,4-二氢-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]苯基]3H-1,2,4-三唑-3-酮(6)(3.51g,10.0mmol)。将溶液加热至80-85℃1.5小时，然后在冰水中冷却到0℃。向该溶液中加入(4S,5S)-4,5-二甲基-1,2,3-二氧硫代戊环2,2-二氧化物(5)(1.60g,10.5mmol)。反应混合物放热至4℃。再冷却至0℃，然后将反应混合物加热至室温并搅拌16小时。将混合物注到1200ml甲基叔丁醚中，从溶液中过滤固体产物。粗固体在热水中搅拌，却至室温，然后由celite过滤，得到4.80g(89％产率)的标题化合物。制备2,4-二氢-4-[4-[4-(4-羟基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-2-[(1R,2S)-2-羟基-1-甲基丙基]-3H-1,2,4-三唑-3-酮(8)向(2S,3R)-3-[2,4-二氢-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)]-1-哌嗪基]苯基]-3H-1,2,4-三唑-3-酮-2-基]丁-2-基硫酸酯钾(7)(4.80g,8.86mmol)和亚硫酸钠(270mg,214mmol)中加入48％HBr(30ml)。将溶液加热至115℃6小时，然后冷却至室温。将反应混合物注到水(300ml)中，用饱和碳酸钾溶液将pH升至6-7。过滤收集产物并真空干燥。进行快速色谱纯制，用氯仿至95∶5氯仿∶甲醇的梯度洗脱，得到1.54g(35％产率)的标题化合物；[a]D25=12.7°(c=0.1,MeOH)。制备(2R,4S)-4-[4-[4-[4-[[2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-2-[(1R,2S)-(2-羟基-1-甲基丙基)]-3H-1,2,4-三唑-3-酮(A)向2,4-二氢-4-[4-[4-(4-羟基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-2-[(1R,2S)-(2-羟基-1-甲基丙基)]-3H-1,2,4-三唑-3-酮SO3加成物(8)(650mg,1.33mmol)和(-)-(2R,4R)-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-4-甲苯磺酰氧基甲基-1,3-二氧戊环甲苯磺酸盐(3a苯甲磺酸酯)(1.02g,1.56mmol)中加入氢氧化钾粉末(428mg,7.63mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(22ml)。将反应混合物温热至50-55℃7小时，然后冷却至室温。加入水(220ml)，通过过滤收集粗产物，然后真空干燥。用快速色谱纯制，用乙酸乙酯、然后氯仿、98∶2氯仿∶甲醇洗脱，得到425mg(44％产率)的标题化合物；[a]D25=22.3°(c=0.1,MeOH)。制备(2S,4R)-4-[4-[4-[4-[[2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-2-[(1R,2S)-(2-羟基-1-甲基丙基)]-3H-1,2,4-三唑-3-酮(B)向2,4-二氢-4-[4-[4-(4-羟基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-2-[(1R,2S)-(2-羟基-1-甲基丙基)]-3H-1,2,4-三唑-3-酮SO3加成物(8)(650mg,1.34mmol)和(-)-(2S,4S)-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-4-甲苯磺酰氧基甲基-1,3-二氧戊环甲苯磺酸盐(3b苯甲磺酸酯)(1.02g,1.56mmol)中加入氢氧化钾粉末(428mg,7.63mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(22ml)。将反应混合物加热至50-55℃7小时，然后冷却至室温。加入水(220ml)，通过过滤收集粗产物，然后真空干燥。用快速色谱纯化，用乙酸乙酯、然后氯仿、98∶2氯仿∶甲醇、95∶5氯仿∶甲醇洗脱，从甲醇中重结晶得到430mg(44％产率)的标题化合物；[a]D25=-10.6°(c=0.1,MeOH)。
其中X1和X2是氟的化合物可由适宜的3按类似的方法制得，所述3按反应路线1所示通过缩合由适宜的2,4-二卤代苯基乙烯酮制得。
本文所用的术语“基本上纯的单一对映体”指存在低于10％(重量)的其它对映体。所述组合物含有羟基伊曲康唑或其衍生物，其中至少90％羟基伊曲康唑有上述立体化学的顺式二氧戊环和仲丁基侧链。
可用微生物和药理学研究确定光学纯对映体的相对效用和特异性图，以及作为抗多种真菌、酵母和皮肤真菌的广谱抗真菌剂的伊曲康唑的外消旋混合物。
就前述化合物的抗微生物活性而言，用所选的试验绘出有用的抗微生物活性图，而不以任何方式限制本发明，包括敏感微生物的范围。可在体外对数个浓度(以μl/ml计)的抗真菌性康唑类药物抗多种真菌和细菌的能力进行评估。(参见Van Cutsem,Chemotherapy38 Suppl1,3-11(1992)；以及Van Cutsem等，Rev.Infec.Dis.9Suppl 1,S15-S32(1987))。用16×160mm试验试管，在Sabouraud′s液(每100ml蒸馏水含1g的neopeptone Difco和2g的葡萄糖Difco)完成抑真菌试验，每个试管含4.5 ml已在120℃高压锅中消毒5分钟的液体培养基。将试验化合物以20mg/ml的起始浓度溶解于50％乙醇。随后用无菌蒸馏水稀释该溶液达到10mg/ml的浓度。用蒸馏水进行连续十进制稀释。向含有4.5ml Sabouraud′s液体培养基的试管中加入0.5ml药物溶液，由此得到浓度为1000、500、100、10和1μg/mL的培养基。将0.5ml蒸馏水加至4.5ml培养基中，加入乙醇得到与含1000和500μg药物的试管相同的浓度，由此制备对照试管。在25℃，将丝状真菌在Sabouraud琼脂中培养2-3星期。然后将2×2×2mm的块接种至培养基中。所有培养物均一式两份并在25℃保温14天。在含10％灭活牛血清的Sabouraud液体培养基中，伊曲康唑体外抗真菌活性得到提高，所述活性取决于所用的试验培养基。用犬小孢子菌(Microsporum canis)、须发癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、白色假丝酵母(Candidaalbicans)、申克氏孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、巴西类球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、皮炎芽生菌(Blastomycesdeermatitides)、组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)、曲霉菌属(Aspergillusspp.)和其它真菌和细菌可观察培养14天后在Sabouraud液体培养基中完全或显著的生长抑制作用。
将含4ml Sabouraud右旋糖液体培养基的10ml试管用从纯培养平板中捡出的一个白色假丝酵母菌落接种。该菌株是从美国典型培养物收集中心(ATCC)定购的。使该生物体在30℃生长4小时，同时以150RPM振荡。在生物体生长时，将羟基伊曲康唑A和B的样品用DMSO溶解为10mg/ml的浓度。然后将每个样品以1∶10稀释以得到1mg/ml或1000μg/ml样品。然后将这些样品通过系列2倍稀释得到含1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6μg/ml的样品。用98μL液体生长培养基得到96孔微滴定皿，在每个试验孔中含1μL羟基伊曲康唑溶液。在生长4小时时，将白色假丝酵母稀释成0.5McFarland标准，该标准代表约105-106细胞/mL和1μL放在微滴定皿各试验孔中的所述接种物。然后将该皿覆盖并在30℃培养16小时。A和B的MIC分别为0.625和低于0.156μg/mL。
Kirby-Bauer试验按上述制备白色假丝酵母、新型隐球酵母(Cryptococcusneoformens)和啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的活性生长培养物。将培养物稀释成0.5McFarland标准并拭抹在150mm Sabouraud右旋糖琼脂平板上。用平板分液器将纸平板(7mm)放在琼脂平板上。接着移取10μl 10mg/ml各羟基伊曲康唑样品溶液放在每个纸平板上。然后在30℃下将平板培养16小时。然后以mm为单位测量抑制区。数据总结如下。
数据代表以毫米计的抑制区。
比较羟基伊曲康唑和衍生物对豚鼠试验性皮肤念珠菌病和大鼠阴道念珠菌病的体内活性。在卵巢切除和子宫切除的Wistar大鼠(100g)中用白色假丝酵母诱发阴道感染，由此评估所述化合物对于阴道念珠菌病的体内活性，其中每周用100μg芝麻油中的雌二醇十一酸酯皮下处理所述大鼠。用固定浓度的白色假丝酵母盐水溶液阴道内感染患假狂蝇(pseudooestrus)的动物。在感染后的固定时间，通过取阴道涂片来评估感染或治愈对照。以mg/kg计将待评估和比较的药物预防性或治疗性给药，然后通过比较阴性动物与每个药物组中总动物数的比例来判断效力。在类似的研究中，对豚鼠皮肤念珠菌病的活性(Van Cutsem等，Chemotherapy 17,392(1972))提供了比较基础。
本发明的化合物可治疗真菌感染，同时可避免与伊曲康唑有关的副作用。术语“副作用”包括但不限于致节律紊乱性(arrhythmo-genicity)、肝毒性和血清肝酶的升高、药物相互作用、包括荨麻疹的过敏性反应、恶心、呕吐、腹痛、头痛、头晕等。
检测羟基伊曲康唑异构体对人、犬和兔心的动作电位和收缩性的影响，由此评估促进节律紊乱的潜力。尖端扭转型室速是引起心脏复极化延长的抗节律紊乱药物熟知的副作用，所述药物例如奎宁、甲磺胺心定和乙酰普鲁卡因。所有这些药物都能够阻断称为延缓整流器的细胞钾通道(IK)，通常认为这在机制上与其诱导尖端扭转型室速综合征之能力有关。(参见Zehender等，Cardiovascular Drugs Ther.,5,515-530(1991))。因此，用离体豚鼠或兔心的QT期和动作电位期的增加来说明致节律紊乱作用。用包含0.0、1.0、5.0、10.0或30.0μM外消旋伊曲康唑的加氧Tyrode′s溶液灌注心。从心电极测量QT期和动作电位期。
为了观察体内作用，将体重5-20kg的任一性别的杂种狗麻醉并用血压和EKG标准技术检测。将dP/dT的固体传感器放在左心室，并插入心外膜电极。以逐渐升高的剂量输注试验化合物，开始的剂量为1μg/kg/分钟，输注15-30分钟，并逐渐增加直到发生心血管破裂。测量的参数是血压、心率、dP/dT和QT-间隔。测定试验化合物和对比化合物的血液动力学和电活性，包括QTc间隔。
用人肝微粒体、人肝淋巴细胞和其他细胞培养系统体外评估促进肝细胞毒性的潜力。肝微粒体是从人肝制备的。将组织融解，然后用Polytron匀浆器在0.15M KCl中匀浆。将匀浆液离心并用0.15M KCl重新悬浮，然后再匀浆。将等份样品冷冻并贮存于-70℃。从新鲜的肝素化人血中无菌分离人淋巴细胞。将血液用Eagle′s基本培养基稀释并在Ficoll-Paque上铺层。将样品离心，然后从含水-Ficoll界面除去淋巴细胞，然后悬浮在培养基(15mM HEPES,pH7.4)中。然后将细胞离心，用HEPES培养基洗涤一次，并重新悬浮。
通过将3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴(MTT)转变成formazan。在微孔中完成MTT向染料的转变。制备后，在湿润的保温箱中于37℃下将肝微粒体或淋巴细胞单独或与浓度为1-400μM的试验化合物一起保温。保温后，用含5％白蛋白的HEPES缓冲的培养基洗涤微粒体/细胞并重悬浮。保温后，将125μg MTT加至各孔中。将平板在37℃下保温并离心。离心后，加入100μl异丙醇，保温后，用自动平板阅读仪确定光密度。
在急性或慢性疾病的处理中，羟基伊曲康唑或衍生物的预防或治疗剂量随待治疗疾病的严重程度和给药途径而不同。剂量，而且可能还有剂量频率也随患者的年龄、体重和个体反应变化。通常情况下，本文所述疾病的羟基伊曲康唑或衍生物的每天总剂量范围是从约50mg-约1200mg，可以是单一剂量或分装剂量。优选的是，每天的剂量范围应在约100mg-约800mg之间，可以是单一剂量或分装剂量，而最优选的是，每天的剂量范围应在约200mg-约400mg之间，是分装剂量。在治疗患者的过程中，治疗应从较小的剂量开始，大致是约100mg-约200mg，然后，根据患者的总体反应，增加到约400mg或更大的剂量。还推荐儿童、65岁以上的患者以及肾或肝功能损伤的患者，开始时接受小剂量，所述剂量可根据个体反应和血液浓度来确定。在某些情况下，需使用这些范围以外的剂量，这对于本领域技术人员是显而易见的。此外，应注意临床医生或治疗医生根据个体患者的反应应知道如何以及何时中断、调节或结束治疗。足以缓解或预防感染但不足以引起副作用的量被上述剂量和给药频率方案所包括。
为了给患者提供有效量的羟基伊曲康唑或衍生物，可以使用任何适宜的给药途径。例如，可以使用口、直肠、非胃肠道(皮下、肌肉内、静脉内)、透皮、局部等给药形式。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、混悬剂、溶液剂、胶囊、贴剂、软膏、乳膏、香波等。
本发明的药物组合物含羟基伊曲康唑或衍生物作为活性成分，或者其药物学上可接受的盐，还可含有药物学上可接受的载体，而且需要时，还可含有其他治疗成分。
术语“药物学上可接受的盐”或“其药物学上可接受的盐”指从包括无机酸和碱以及有机酸和碱的药物学上可接受的非毒性酸或碱制备的盐。由于本发明的羟基化合物是碱性的，所以可从包括无机和有机酸的药物学上可接受的非毒性酸制备盐。适宜的本发明化合物的药物学上可接受的酸加成盐包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。磷酸和硫酸，作为酸可用于制备碱的盐和内盐。本发明化合物的适宜的药物学上可接受的碱加成盐包括从铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐或从赖氨酸、N,N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制备的有机盐。
本发明组合物包括如悬浮剂、溶液剂、酏剂、汽溶胶剂和固体剂型的组合物。载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等常用于口服固体制剂(如粉末、胶囊和片剂)，而且口服固体制剂优选于口服液体制剂。最优选的口服固体制剂是片剂。
由于易于给药，片剂和胶囊代表了最有利的口服剂型，其中可使用固体药用载体。如果需要，可通过标准含水或不含水技术包衣片剂。
第二种优选的给药途径是局部给药，对于这种途径，乳膏、软膏、香波等是适宜的。
除上述所列的常规剂型外，还可通过控释方法和/或传递装置施用本发明化合物，由于其溶解度，还可用非胃肠道溶液，例如静脉内给药。
适用于口服的本发明药物组合物可作为单个单元提供，如胶囊、扁囊剂或片剂或汽溶胶喷雾剂，每单元含有预定量的活性成分，所述活性成分可以是粉末或颗粒，或含水液体、非含水液体、水包油或油包水中的溶液或悬浮液。可通过任何药学方法制备所述组合物，但所有方法均包括将活性成分与构成一种或多种必需成分的载体缔合的步骤。总之，将活性成分均匀完全地与液体载体或细固体载体或两种载体混合，然后，如果需要可将产品制成所需的形状，由此可制备所述组合物。
例如，选择性地通过压制或模压一种或多种辅助成分可制备片剂。用适宜机器通过压制选择性地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分来制备压制的片剂。模压片剂可用适宜的机器，通过模压用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物混合物来制备。希望每片包含约100mg-300mg的活性成分。最优选的是，片剂、扁囊剂或胶囊含有下列三种剂量之一的活性成分约50mg、约100mg或约200mg。
为了局部应用，可以非可喷雾剂型、粘或半固定或固体剂型使用，所述剂型含有与局部应用相适应并且动态粘度优于水的载体。适宜的剂型包括但不限于溶液剂、混悬剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、粉末剂、擦剂、油膏剂、汽溶胶剂等，如果需要，所述剂型可用辅剂如防腐剂、稳定剂、湿润剂、影响渗透压的缓冲液或盐等灭菌或混合。为了局部应用，还可用可喷雾汽溶胶制剂，其中优选将活性成分与固体或液体惰性载体物质用压缩瓶包装或与压缩挥发物通常是气体推进剂氟利昂混合。
参考下列本发明组合物制备方法以及其用途的详细描述的实施例来进一步定义本发明。对本领域技术人员显而易见的是，可对材料和方法进行许多修饰而不偏离本发明的目的。
实施例1口服制剂-胶囊
将活性成分羟基伊曲康唑或衍生物过筛并与赋形剂混合。用适宜的机器将混合物填充到适宜大小的两片硬明胶中。通过改变填充剂量，如果需要并改变胶囊大小可制备其它剂量。
实施例2口服制剂-片剂<
*在制备过程中，水蒸发。
将活性成分与乳糖混合直到形成均匀混合物。将较小量的玉米淀粉与水混合以形成玉米糊。然后将玉米糊与均匀混合物混合直到形成均匀的湿物质并加入剩余的玉米淀粉，混合直到形成均匀的颗粒。用1/4”不锈钢筛网通过适宜的碾磨机筛选颗粒。将碾磨的颗粒用适宜的干燥烤箱干燥，并再通过适宜的碾磨机器碾磨。然后将硬脂酸镁混合并将所得的混合物压成所需的形状、厚度、硬度和崩解性能。
权利要求
1.下式化合物的基本上纯的单一对映体或其盐
其中X1和X2独立地是氯或氟，R是氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。
2.如权利要求1所述的化合物，其具有下列结构式
3.如权利要求1所述的化合物，其具有下列结构式
4.如权利要求1-3之一所述的化合物，其中，R是氢。
5.如权利要求1-3之一所述的化合物，其中，R是磷酸酯。
6.如权利要求1-3之一所述的化合物，其中，R是硫酸酯。
7．含下式化合物的药物组合物
所述组合物含少于10％(重量)的所述化合物的其它对映体或非对映异构体或其盐和药物学上可接受的载体，其中X1和X2独立地是氯或氟，R是氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其含有所述化合物的单一对映体和小于10％(重量)的所述化合物的其它对映体。
9.治疗真菌感染的方法，其法包括向患有所述真菌感染的哺乳动物给药治疗有效量的下式化合物
所述化合物包含少于10％(重量)的所述化合物的其它对映体或其盐，其中X1和X2独立地是氯或氟，R是氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。
10.预防真菌感染的方法，其包括向有患所述真菌感染危险的哺乳动物给药治疗有效量的下式化合物
所述化合物含少于10％(重量)的所述化合物的其它对映体或其盐，其中X1和X2独立地是氯或氟，R是氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。
11.如权利要求9或10所述的方法，其包括给药治疗有效量的含少于10％(重量)所述化合物的其它对映体的基本上纯的所述化合物的单一对映体。
12.如权利要求9或10所述的方法，其包括给药下式化合物
13.如权利要求9或10所述的方法，其包括给药下式化合物
14.如权利要求9或10所述的方法，其中，所述真菌感染是中枢念珠菌病。
15.制备下式之2,4-二取代的3H-1,2,4-三唑-3-酮的方法，
其中R1是芳基或取代的芳基，该方法包括，使下式的2-芳基-3H-1,2,4-三唑-3-酮
与下式的反式4,5-二甲基-1,2,3-二氧硫代戊环2,2-二氧化物反应，
其中，在惰性溶剂中、在至少一当量1,4,7,10,13,16-六氧环十八烷(18-冠-6)存在下，用过量氢化钾将所述2-芳基-3H-1,2,4-三唑-3-酮形成钾盐，然后于-5℃至25℃下加入所述二氧硫代戊环。
16.如权利要求15所述的方法，其中，R1是
其中R2是甲基或苄基，而所述二氧硫代戊环是(4S,5S)-4,5-二甲基-1,2,3-二氧硫代戊环2,2-二氧化物。
17.制备下式的二氧戊环甲苯磺酸酯的方法，
其中Ph是苯基或取代的苯基，Tos甲苯磺酰基，R3是杂环基甲基。该方法包括如下一系列步骤(a)将式R3C(O)Ph的酮和约1当量光学活性的1,2-二羟基苯基甲苯磺酸酯溶于惰性溶剂中；(b)将温度冷却至15℃以下；(c)于15℃以下加入过量的三氟甲磺酸；(d)使上述物质反应生成缩酮；和(e)于0℃-10℃下，将所述缩酮的溶液加入到过量碱金属碳酸盐或碳酸氢盐的水溶液中。
18.如权利要求17所述的方法，其中，R3是(1,2,4-三唑-2-基)甲基，Ph是2,4-二氯苯基，所述光学活性的1,2-二羟基苯基甲苯磺酸酯是S构型。
全文摘要
本发明涉及式(A)之化合物的基本上纯的单一对映体或其盐,其中:X
文档编号C07D249/12GK1237172SQ97199656
公开日1999年12月1日 申请日期1997年11月12日 优先权日1996年11月12日
发明者约翰·R·麦卡洛, 克里斯·H·森纳那亚克, 杰拉尔德·J·塔努里, 洪亚平, 帕特里克·科克 申请人:塞普拉科公司