专利名称：一种异臭椿酸甲酯及制备方法
技术领域：
本发明属于从海绵中提取分离、化学反应获得的异臭椿酸甲酯。
海绵是一类最原始的多细胞动物，人们已从海绵生物中发现了许多结构独特的有机化合物萜类、甾醇、苷类、生物碱、多肽、聚醚和大环内酯等，其中许多具有抗肿瘤、抗心血管病、抗菌和抗病毒等生理活性，不少化合物具有潜在的临床应用价值，特别是以这些化合物为模式，经过化学结构的修饰获得生理活性更强、毒性更低的有机化合物，更为引人注目，有些已在临床上得到广泛应用。
中国专利(申请号95116029．X，公开号CN1130619A)公开了一种异臭椿酸三萜化合物，本发明所提供的异臭椿酸甲酯是在该化合物结构上增加一个CH2，其化学结构式如下图
该化合物名称为(13E，15E，17E，22E，24E)-3，12-二氧-13，l5，l7，22，24-五烯-26-异臭椿酸甲酯，英文名称为methyl ester ofrhabdastrellic acid，俗名为罗特利酸甲酯。化合物的物理常数如下黄色圆片状晶体，m．p．102～104℃；[a]D20]]>(C=0．29，CH2Cl2)-17．2℃；λmax(C=0．29，CH2Cl2)nm296(logε=3．69)，381(logε=4．07)，395(logε=4．13)，418(logε=4．08)；νmaxKBr]]>(cm-1)2950，1702，1614，1577，1538，1434，1382，1270，1230，1168，1101，968；δ1H(CDCl3)7．29(1H，d，J=11．09Hz)，7．05(1H，dd，J=11．44，14．91Hz)，6．99(1H，dd，J=11．44Hz，15．25Hz)，6．73(d，J=14．90Hz)，6．64(1H，d，J=14．91Hz)，6．39(1H，d，J=11．44Hz)，3．79(3H，S)，2．72(1H，m)，2．40(1H，m)，2．38(1H，m)，2．35(3H，s)，2．23(2H，d，J=10．05Hz)，2．17(1H，m)，2．16(2H，m)，2．04(3H，s)，2．02(3H，s)，1．86(1H，t，J=10．4Hz)，1．62(1H，m)，1．51(2H，m)，1．44(3H，s)，1．13(3H，s)，1．06(3H，s)，0．86(3H，s)；δ13C(CDCl3)31．33(C1)，33．44(C2)，219．21(C3)，46．84(C4)，45．47(C5)，19．72(C6)，38．45(C7)，44．98(C8)，47．86(C9)，34．76(C10)，36．64(C11)，207．11(C12)，146．50(C13)，143．28(C14)，134．24(C15)，131．94(C16)，134．87(C17)，14．50(C18)，23．42(C19)，138．54(C20)，12．89(C21)，143．76(C22)，124．84(C23)，138．75(C24)，128．28(C25)，168．88(C26)，12．98(C27)，29．17(C28)，19．34(C29)，25．88(C30)，50．7l(OMe)；m／z478(M+，6．5)，463(4．8)，43l(6．2)，365(100)，313(18．6)．241(19．9)，159(11．0)，91(11．3)，55(11．0)，43(13．3)。
该化合物的提取分离、化学反应方法为晒干切碎的南海海绵(Rabdastrella sp．)用乙醇抽提，所得提取液浓缩至浆状物，然后将其分散在适量的水中，再以乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯可溶物，经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度淋洗，获得中等极性的半固体物，经硅胶柱和葡聚糖凝胶柱反复柱层析，以石油醚-乙酸乙酯和氯仿-甲醇作淋洗剂，得到金黄色固体物，再在石油醚-丙酮体系中重结晶获得金黄色圆片状结晶体。将此结晶体通过重氮化反应获得黄色固体物，即本发明所涉及的化合物。
本发明所涉及的化合物，不但具有新的化学结构，而且具有显著的抗肿瘤活性。如观察小鼠口服化合物对艾氏腹水癌实体瘤的抑制作用，该化合物50，10，5μg／kg对小鼠艾氏腹水癌实体瘤的抑制率分别为64．7％，58．8％和45．1％，药理试验表明罗特利酸甲酯三个剂量对艾氏腹水癌实体瘤有明显的抑制作用，抑制率最高达65％，实验表明该化合物是一种具有较强抗肿瘤作用的有机化合物，具有良好的应用前景。
实施例1．罗特利酸的提取分离晒干的南海海绵Rhabdastrella sp．(3．0kg)，切碎后用95％工业乙醇(5kg)于室温下抽提三次，合并抽提物并减压浓缩至浆状物，将浆状物均匀地分散于500ml蒸馏水中，以乙酸乙酯(500ml)萃取三次，合并萃取物并减压浓缩得棕色浆状物71克。
上述浆状物经硅胶(200g，青岛海洋化工厂，硅胶H，10～40μ)柱层析(φ=3．6×48cm)，以500ml不同比例的乙酸乙酯-石油醚(10％，15％，20％，30％)和500ml 30％丙酮-石油醚进行梯度淋洗获得五个不同极性的洗出液，其中30％乙酸乙酯-石油醚的馏分经减压后获得固体物10．0g；再将此固体物进行硅胶(100g，青岛海洋化工分厂，300～400目)柱层析(φ=2．4×48cm，洗脱剂15％丙酮-石油醚)，获得粗馏分A(3．7g)。馏分A经葡聚糖凝胶LH-20柱层析，淋洗液为30％氯仿-甲醇，获得黄绿色固体物3．2g，将此固体物进行硅胶(100g，青岛海洋化工分厂，硅胶H，10～40μ)柱层析(φ=2．4×48cm，洗脱剂20％丙酮-石油醚)，获得黄色固体物2．5g，将此固体物溶于石油醚-丙酮体系中，低温下(-5℃～-10℃)放置获得金黄色圆片状晶体200mg，即罗特利酸。2．重氮甲烷的制备反应式步骤①在一个称过重量的500毫升三颈瓶中加入100克(0．75mol)甲胺水溶液。向溶液中滴加浓盐酸使甲基红呈红色(约需75ml浓盐酸)。
②加水使总重达250克，然后加入150克(2．5mol)尿素，使之回流和缓煮沸2小时45分，最后剧烈回流15分钟。
③将所得甲基脲溶液冷至室温，溶入55克(0．75mol)95％NaNO2，用冰盐浴冷至0℃，另在1．5升烧杯中加入300克冰、50克(0．5mol)浓硫酸，烧杯外用冰盐浴裹覆，在机械搅拌下，将0℃的甲基脲-亚硝酸钠混合溶液滴入烧杯中，速度使其温度不超过0℃。约1个小时，加完混合溶液。亚硝基甲基脲成结晶状泡沫沉淀，浮在液面上，立即用布氏漏斗将沉淀抽滤，用玻璃塞背面将沉淀压紧，50ml冷水洗涤2～3次，抽干后称重，得产物58克。
④配制50％KOH水溶液30ml，倒入250ml圆底烧瓶中，并加入100ml乙醚，冷至5℃，边摇边加入10克N-亚硝基-N-甲基脲，在烧瓶上装置冷凝器以便进行蒸馏，冷凝器的下端连一接受器，后者通过一个双孔橡皮塞，浸入盛在150ml锥形瓶中的30ml乙醚中。在50℃的水浴上蒸馏乙醚，通常蒸出三分之二的乙醚以后馏出物就变成无色，在任何情况下不能将乙醚全部蒸出。馏出液约80ml，浓度约35mg／ml，呈黄色。置冰箱中保存。3．罗特利酸甲酯的制备反应式
步骤在25ml蛋形瓶中加入罗特利酸晶体40mg，2ml乙醚和1ml氯仿。再向蛋形瓶中加入2ml重氮甲烷的乙醚溶液，在室温密封体系下，磁搅拌反应2～3小时(通过TLC判断反应是否完全)。减压除去溶剂，然后将产物过硅胶柱纯化(硅胶300～400目，洗脱液20％丙酮-石油醚)，浓缩干燥得黄色罗特利酸甲酯固体34．7mg，以罗特利酸计算产率为83．0％，总产率为0．0055％。经红外光谱，质谱，核磁共振光谱等方法确定其化学结构为
权利要求
1．(13E，15E，17E，22E，24E)-3，12-二氧-13，15，17，22，24-五烯-26-异臭椿酸甲酯，其化学结构式如下
名称为(13E，15E，17E，22E，24E)-3，12-二氧-13，15，17，22，24-五烯-26-异臭椿酸甲酯，命名为methyl ester of rhabdastrellic acid，该化合物的物理常数为黄色圆片状晶体，m．p．102～104℃[a]D20]]>(C=0．29，CH2Cl2)-17．2℃；λmax(C=0．29，CH2Cl2)nm296(logε=3．69)，381(logε=4．07)，395(logε=4．13)，418(logε=4．08)νmaxKBr]]>(cm-1)2950，1702，1614，1577，1538，1434，1382，1270，1230，1168，1101，968；δ1H(CDCl3)7．29(1H，d，J=11．09Hz)，7．05(1H，dd，J=11．44，14．91Hz)，6．99(1H，dd，J=11．44Hz，15．25Hz)，6．73(d，J=14．90Hz)，6．64(1H，d，J=14．91Hz)，6．39(1H，d，J=11．44Hz)，3．79(3H，S)，2．72(1H，m)，2．40(1H，m)，2．38(1H，m)，2．35(3H，s)，2．23(2H，d，J=10．05Hz)，2．17(1H，m)，2．16(2H，m)，2．04(3H，s)，2．02(3H，s)，1．86(1H，t，J=10．4Hz)，1．62(1H，m)，1．5l(2H，m)，1．44(3H，s)，1．13(3H，s)，1．06(3H，s)，0．86(3H，s)；δ13C(CDCl3)31．33(C1)，33．44(C2)，219．21(C3)，46．84(C4)，45．47(C5)，19．72(C6)，38．45(C7)，44．98(C8)，47．86(C9)，34．76(C10)，36．64(C11)，207．11(C12)，146．50(C13)，143．28(C14)，134．24(C15)，131．94(C16)，134．87(C17)，14．50(C18)，23．42(C19)，138．54(C20)，12．89(C21)，143．76(C22)，124．84(C23)，138．75(C24)，128．28(C25)，168．88(C26)，12．98(C27)，29．17(C28)，19．34(C29)，25．88(C30)，50．71(OMe)；m／z478(M+，6．5)，463(4．8)，431(6．2)，365(100)，313(18．6)，241(19．9)，159(11．0)，91(11．3)，55(11．0)，43(13．3)。
2．一种专门制备权利要求1中所述化合物的方法，其特征在于海绵的乙醇提取液浓缩物分散在水中，以乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩物经反复硅胶柱层析和凝胶柱层析(分别以石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇为淋洗剂)，所得的固体物在石油醚-丙酮体系中低温(-5℃～-10℃)放置获得金黄色片状晶体，将此结晶体经重氮化反应获得黄色固体物。
3．权利要求2中所述的方法，其特征在于所述的海绵为南海海绵。
全文摘要
本发明属于从海绵中提取分离、化学反应得到的异臭椿酸甲酯及制法。海绵生物中发现了许多结构独特的有机化合物如萜类、甾醇、苷类、生物碱、多肽和聚醚等。其中许多具有抗肿瘤、抗病毒、抗心血管病等生理活性。本发明所涉及的异臭椿酸甲酯,命名为methyl ester of rhabdastrellic acid,该化合物是从海绵中分离提取、化学反应得到的,不但有新的化学结构,而且具有显著的抗肿瘤活性,具有重要的理论价值和应用前景。
文档编号C07C67/58GK1204641SQ9811328
公开日1999年1月13日 申请日期1998年7月16日 优先权日1998年7月16日
发明者邓松之, 肖定军, 章勤 申请人:中国科学院广州化学研究所