取代的聚氨基羧酸大环化合物的金属螯合物和其在诊断成象中的应用的制作方法

专利名称：取代的聚氨基羧酸大环化合物的金属螯合物和其在诊断成象中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及由大环聚氨基羧酸和金属阳离子形成的螯合物和其在诊断成象，特别是在磁性阳离子的磁共振成象(MRI)中的应用。
弛豫性r1和r2特别是第一个给出了该螯合物的磁效力的量度，可以确定其作为造影剂的用途。对于最近上市的产品，r1没有超过6mM-1s-1(在20MHz和37℃条件下)，无论这些螯合物是直线型的(三胺五乙酸钆(gadopentetate或DTPA和gadoversetamide)还是大环化合物(四氮十二环酸盐(gadoterate)或DOTA和加多利通(gadoteridol))。此外，当这些化合物通过静脉给药时，它们迅速从血管区域扩散进细胞外的间隙腔，至今市场上还没有一种产品能充分局限在血管中以便精确评价组织灌注、毛细血管渗透性或血容量。
将标准螯合物接枝到生物相容的聚合物上得到的取代的大分子例如三胺五乙酸钆连接到聚乙二醇或聚赖氨酸上得到的，或者三胺五乙酸钆和四氮十二环酸盐接枝到多糖上得到取代的大分子，这些取代的大分子已被描述了10多年进行了动物实验，但还没有在人体中进行研究。
人们已经提出将这些标准的螯合物(DTPA或DOTA)接枝到独特分子量的支链聚合物上，称为阶式聚合物或树枝状聚合物(dendrimers)，它们由不同的重复单元组成，例如在EP-A-430863或EP-A-607222中公开的。已知这些产物的弛豫性高且它们具有一定量的血管滞留，但这些结果受到限制，因为，不管其大小，例如在EP-A-430863中描述的含有24或48个三胺五乙酸钆分子的聚胺的弛豫性r1仅有约13mM-1s-1，对单独的三胺五乙酸钆的弛豫性为4.8mM-1s-1。此外，在合成过程中似乎难以分离单一的化合物，即难以获得该聚胺的所有末端基的取代物，假定可以获得均匀分子量的单一化合物，就能够避免给予剂量的药物组分的物理化学和药物动力学特性的分散性，该分散性是标准取代的聚合物的已知缺点，限制了它们的开发。
在针对获得独特的分子量的具有高弛豫性和仅含一个螯合基的分子的最新研究中，可能涉及EP-A-661279和WO97/01359，它们强调了在已知分子结构的供体氮原子的侧基上引入至少3个重量大于200的亲水侧臂的优点，该供体氮原子侧基含其他配位基团，无论它们是酸基还是取代的基团；特别提到下式的四氮十二环酸盐的取代化合物的钆配合物在20MHz和37℃下的弛豫性r1＞20mM-1s-1，
其中
对于具有高弛豫性和具有一定量的血管滞留的化合物，亦应当提到在WO96/23526中描述的那些，它们在结构方面基本上不同于上面的化合物，它们的代表例之一是MS325，下式化合物的钆配合物可逆地结合在血浆中的白蛋白上，这样其在该介质中的弛豫性r1实际上是从其衍生的gadopendtetate的10倍，根据Acad.Radiol.S356-S358(1996)，在兔子中半衰期乘以4，分布体积除以2.5。
与MS325和其同系物相比，本发明的的顺磁金属配合物即使在水中也具有高弛豫性，因为其中r1大于30mM-1s-1(20MHz,37℃)；此外，尽管它们几乎不结合到血浆白蛋白上，但它们显示出显著的血管定位性，且主要通过肾排除，这样它们可有利地在MRI中作为造影剂，来揭示循环系统。
根据第一个方面，本发明涉及式Ⅰ的聚氨基羧酸大环化合物的顺磁或放射性金属离子螯合物
其中m是1或2,R＇是H，选择性羟基化的C1-C4烷基，CH2-COOH基，CH2-CONZ1Z2,Z1和Z2彼此独立地是H或选择性羟基化的C1-C4烷基或R′是基团
R是基团
其中a是1或2Z是键，CH2,CH2-CO-NH或(CH2)2-NHCOZ′是键，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ,CO-NQ-CH2-CONQZ″是CO-NQ,NQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO其中Q是H或选择性羟基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此独立地是选自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2组成的组,Q1和Q2(可以相同或不同)选自C2-C6烷基,该烷基是选择性羟基化的和由氧原子选择性间断的，这样Q1和Q2总共含有4-10个OH基，但须R1,R2,R3,R4和R5基的至少一个，但不多于2个的基团是酰氨基基团。
本发明的在螯合物中配合的金属阳离子是选自一般用于MRI中的顺磁阳离子，特别是包括Fe3+,Cr3+,Eu3+,Gd3+,Tb3+的三价阳离子，优选Gd3+，或用于闪烁照相时，选自放射性同位素例如99mTc或111In的阳离子。
可得到式Ⅰ化合物的金属配合物的含有选择性的游离酸基的药物上可接受的盐的无机碱优选选自碱金属(K+,Na+)或碱土金属(Ca++,Mg++)氢氧化物和碳酸盐，而有机碱是选自胺如氨基乙醇，thromethamine或N-甲基葡糖胺，或氨基酸如赖氨酸，甘氨酸或精氨酸。
优选的化合物是那些这样的化合物，其中m是2,a是1,R′不是H或烷基，Z是键，CH2或CH2CONH,Z＇是CONH,NHCO,CONHCH2CONH或NHCONH,Z″是CONH或CONHCH2CONH和R2=CONQ1Q2,R1,R2,R4和R5分别是H,Br,Cl或I，或者R2=R4=CONQ1Q2，在此情况下，R1,R2和R5分别是H,Br,Cl或I，或Z″是NHCO和R3=N(Q1)COQ2,R1,R2,R4和R5分别是H,Br,Cl或I，或者R2=R4=N(Q1)COQ2，在此情况下，R1,R3和R5分别是H,Br,Cl或I。
其中，优选的化合物是这样的化合物，其中Z′是CONH,CONHCH2CONH或NHCONH，更优选的是那些这样的化合物，其中Z′是CONH，较短的键，R1,R3和R5都是Br或I,R2=R4=CONQ1Q2，其中Q1和Q2是总共含有-10个OH基的C2-C6羟烷基，或者如果Q1和/或Q2由氧原子间断，它们含有4-8个OH基。
根据第二个方面，本发明涉及一种制备式Ⅰ化合物的金属螯合物的方法，其特征在于在适合于含水或有机反应介质的偶合剂存在下，特别是那些用于肽合成的偶合剂存在下，金属阳离子M3+和式Ⅱ化合物的螯合物Ⅱ
和式Ⅲ的胺
反应，其中字母的含义与式Ⅰ中的相同，其中式Ⅱ和Ⅲ的化合物至少部分是溶液态。在上述条件下，被保护的位于相对于化合物Ⅱ中的氮原子是α位的碳原子上的羧酸基团没有反应。
根据另一方面，本发明涉及当螯合物作为放射性标记的时候，通过闪烁照相法，或当螯合物含有顺磁离子时，通过磁共振，对人或动物成象的造影剂，该试剂选择性地是无机或有机阳离子的盐，在药物可接受的载体中，与相容的赋形剂混合。
根据最后方面，本发明涉及人体或动物体的成象方法，其特征在于给予个体有效单位剂量的本发明的组合物，将研究的组织或表面置于合适的磁场中以便观察质子磁共振，或当螯合物含有放射性核素时经受闪烁照相。
制备在中心大环化合物，1,4,7,10-四氮杂环十二烷或环烯(cyclen)的氮原子上含4个相同取代基的式Ⅰ化合物的螯合物，制备步骤比R＇是H,CH2COOH,CH2CONZ1Z2或C1-C4烷基或羟烷基化基团，例如CH3,CH2CH2OH或CH-CHOH-CH2OH的情况少，因为环烯的4个氮原子之一必须暂时选择性地用离去基保护或必须事先进行含基团R＇大环化合物的单取代。
本发明化合物中的基团R含有3或4个苯环，最远离大环化合物的一个苯环被一个或多个亲水基团取代，该亲水基团对螯合物的水溶解性和生物相容性有影响。在这些亲水基团当中，优选的是叔酰胺基团，其中取代基是选择性地被氧原子间断的C2-C6羟烷基，特别是那些衍生自直链氨基醇HNQ1Q2的基团，其中Q1和Q2彼此分别是CH2(CHOH)n(CH2OCH2)r(CHOH)pCH2OH，和，·如果在Q1和Q2中，r=0，那么p=0,n可以是0-4,Q1和Q2总共含有5-10个OH基团，特别对于HNQ1Q2，相当于H-N[CH2(CHOH)4CH2OH]2和
如果在Q1和/或Q2中，r=1，那么n和p彼此分别是O或1,Q1和Q2总共含有4-8个OH基团，特别对于HNQ1Q2，相当于
这些氨基醇前体可以商购得到或通过以下方法制备-例如通过糖的反应并还原由合适的伯氨基醇制备，当n=4,p=r=0时，反应记载在EP-A-675105中，或n=3,p=r=O时记载在EP-A-558395中。
-或者通过糖和苄基胺的反应，接着通过适当的卤化物或磺酸盐的反应，引入第二个羟基化的取代基，最后通过催化氢化除去苄基。
当Q1和/或Q2在链中含有一个氧原子时，当n=p=0时，从2-氨基乙氧基乙醇制备氨基醇，该2-氨基乙氧基乙醇可以和适当的羟基化的烷基卤化物或环氧化物或羟基化的脂族醛如单糖反应以便形成亚胺，然后该亚胺被催化或化学还原。
当n=1时，通过环氧化物
和适当的伯氨基醇的反应来制备氨基醇，所述的环氧化物通过用过酸或过氧亚氨基酸氧化相应的取代的乙烯获得，如在J.Org.Chem.(有机化学期刊)26 659-663(1961)和48888-890(1983)中描述的。
在苯环上的酰胺基旁有卤原子特别对于它们的稳定性来说是有利的，优选的基团R是那些R1=R3=R5=Br或I和R2=R4=CO-NQ1Q2的基团。
桥键Z″可以在桥键Z＇之前或之后在2个苯环之间形成。
例如，当Z是一个键时，式Ⅳ的化合物
可从二苯基衍生物Ⅴ或其酯制备
其中Z′的含义和式Ⅰ中的一样。
Z′是O的化合物Ⅴ在Makromoleculare Chemie(大分子化学)130 103-144(1969)中有描述；Z＇是HN的化合物在Indian J.Chem.(印度化学杂志)1335-37(1975)有描述，Z＇是CH2或CO的化合物在J.Pharm.Sci.(药物科学杂志)55(3)295-302(1966)中有描述，Z＇是一个键的化合物在Synth.Comm.(合成通讯)24(22)3307-3313(1994)有描述和Z′是S的化合物在ⅡFarmaco,44(7-8)683-684(1989)中有描述。
可通过相似方法制备其它化合物Ⅴ例如，当Z′是HNCONH时，通过在无水介质中O2NC6H4NCO和H2NC6H4COOH的反应，或当Z＇是NHCO或CONH时，通过芳香酰基氯和溶解在非质子传递溶剂如CH2Cl2,C6C5CH3,CH3CON(CH3)2中的适当的苯胺的反应，或在磺酰氯、三乙胺和二甲基氨基吡啶存在下，芳香酸和苯胺反应来制备，如在Synth.Communications(合成通讯)25(18)2877-2881(1995)中描述的。
用已知方法，在催化剂存在下用氢气将NO2基团还原为NH2，或进行化学反应。
当式Ⅳ中的Z是CH2-CONH时，其中NH2基团受到保护的活化甘氨酸和其中Z是一个键的化合物Ⅳ反应或和含有Z＇前体基团(选择性保护)的苯胺反应。甘氨酸被保护，例如以氨基甲酸酯的形式，特别是叔丁基氨基甲酸酯的形式(Synthesis(合成),48,1986)和苄基氨基甲酸酯的形式(Chem.,Ber.(化学报告),65,1192(1932))，苯邻二甲酰亚胺的形式(TetrahedronLetters(四面体通讯)25,20,2093-2096(1984))，用苄基保护(Bull.soc.Chim.Fr.(法国化学学会通报),1012-1015,(1954))，用N-烯丙基保护(Tetrahedron Letters 22,16,1483-1486(1981))。(亦参见在有机合成中的保护基团315-349,T.W.Greene(John Wiley&SonsInc.).)一般仅在化合物Ⅲ的阶段从与Z连接的NH2除去保护基团。常规地，通过肼的作用除去苯二甲酰亚氨基，而通过催化氢化除去苄氧基羰基或苄基。
当化合物Ⅳ中的Z=CH2和Z＇=CONH或CONHCH2CONH时，4-氨基甲基苯甲酸可和适当取代的保护的苯甲酸反应，其中NH2基团以氨基甲酸酯或酰亚胺的形式被保护，如在J.Org.Chem.43,2320-2325(1978)或在Rec.Trav.Chim.(荷兰化学论文集)Pays-Bas,79,688(1960)描述的。
当Z是(CH2)2NHCO时，可通过过量的1,2-乙二胺对适当的苯甲酸酯的作用来制备化合物Ⅲ，其含有取代的(Z＇-苯基)a-Z″-苯基链或仅含有一个选择性保护的前体基团Z＇。
而且，当a等于2时，其中氨基选择性地被保护的化合物Ⅳ可和氨基苯甲酸反应，该氨基苯甲酸的酸官能团选择性地被保护，以得到第二个Z′是CONH的式Ⅳ′的化合物Ⅳ′
然后化合物Ⅳ或Ⅳ′和式Ⅵ的适当取代的末端苯环在有机或水溶液中反应
其中R1,R2,R3,R4和R5是如式Ⅰ中的H，卤原子，CO-NQ1Q2或选择性地被保护，R″表示CO-CH2-NH2或H，化合物Ⅳ或Ⅳ′是酰基氯的形式或者存在偶合剂，例如那些用于肽合成的偶合剂，例如，脂族碳化二亚胺，磺酰氯或氯甲酸酯，选择性地含有增溶季铵或氨基。
通过本领域公知的方法制备其中R″=H的式Ⅵ的酰胺，用适当的、选择性卤化的芳香氨基酸起始，其中每个存在的羧基以酰基氨或混合酐的形式被活化，或者用酰胺化的硝基芳香酸开始，之后还原NQ2基团。在WO97/01359中描述了化合物Ⅵ，其中R1=R3=R5=Br或I,R2和R4=CO-NQ1Q2，其中Q1＝CH2(CHOH)4CH2OH和Q2=CH2CH2OH或CH2(CHOH)1-3-CH2OH和R″=CO-CH2-NH2。其它卤代的或非卤代的衍生物，特别是那些其中Q1和Q2的链被氧原子间断的衍生物可以用相似的方法，用适当的氨基醇起始制备。
当Z是一个键时，优选在进行还原反应之前，硝基化合物如Ⅴ和苯胺Ⅵ反应。
亦可以选择性地将化合物Ⅳ或Ⅳ和Ⅵ前体化合物反应，以便仅接着制备单酰胺或二酰胺，该前体化合物含有COOH基团，选择性地以酯的形式保护，代替基团CO-NQ1Q2，或者使化合物
其中NL1L2是被保护的氨基，与下列化合物反应
这样，Z′1和Z′2反应得到Z′。
为了制备化合物Ⅲ，其中R3或R2和R4代表N(Q1)CO-Q2和Z″=NH-CO或NH-CO-CH2-NH-CO，式Ⅴ的苯甲酸，
其中基团N(Q1)CO-Q2中的羟基选择性地被保护，可以和式Ⅶ的胺
反应，R″是H或COCH2-NH2，接着还原硝基得到其中Z是一个键的化合物Ⅲ。
在式Ⅴ的化合物当中，可以提及那些在Org.Synth.(有机合成)41,79-82(1961)中描述的由CH2(OCOCH3)CH(OCOCH3)4COCl制备的化合物和从适当的氨基苯甲酸制备的化合物，或者其中R1=R3=R5=I的化合物和EP357467中描述的分子式如下的化合物。
在酰胺基Z′和Z″中，以常规方式，通过在碱存在下相应的卤化物和其中Q=H的化合物反应而引入Q，优选在中间阶段。
进行式Ⅲ化合物和式Ⅱ螯合物的盐的反应，反应优选在含水介质中进行，选择性地在极性非质子传递溶剂例如二噁烷或四氢呋喃存在下，在可溶性碳化二亚胺例如那些含有氨基的碳化二亚胺存在下(在J.Org.Chem.21,439441(1956)和26,2525-2528,(1961)或US3135748有描述)，或那些含有季铵基的碳化二亚胺(在Org.Synth.V,555-558有描述)存在下进行，这些化合物涉及取代的1-乙基-3(3-二甲基氨基)丙基-碳化二亚胺(EDCI)或其类似物，1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)碳化二亚胺，N-甲-对-甲苯基磺酸盐。亦可以按照Bioconjugate Chem.(生物共轭化学)5,565-576(1994)中描述的在N-羟基磺基琥珀酰亚胺存在下或按照Tetrahedron Letters 30,1927-1930(1989)中描述的在2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基尿鎓四氟硼酸盐和类似物存在下进行。
另一个方法在于形成中间活化酯，例如通过在碳化二亚胺如EDCI存在下，N-羟基磺基琥珀酰亚胺(NHS)或羟基苯并三唑(HOBT)和螯合物Ⅱ反应形成，该螯合物Ⅱ可溶解为带有无机阳离子的盐，例如铵或钠阳离子。
在2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)存在下，可在水性醇介质中进行此反应。
由环烯制备其中m是1的式Ⅱ′化合物，该环烯和乙炔基二羧酸二酯反应得到烯胺，该烯胺通过常规的催化或化学方法被还原，接着水解酯基。在苄基酯的情况下，优选在第一步进行烯胺的化学还原，例如通过和氰基氢硼化物反应，接着在催化剂存在下，用氢脱苄基。
螯合物Ⅱ是已知的化合物，其中m=2，氮原子上的4个取代基是相同的，M3+是Gd3+，特别在EP-A-661279中有描述。
通过相同的方法制备其中m=1的螯合物Ⅱ。
用相似方法制备化合物Ⅱ，其中M3+代表另一种金属阳离子，通过金属盐特别是卤化物或金属氧化物在配位体的盐的水溶液中的反应制备，在US5554748和在其中引证的参考文献，或在Helv.Chim.Acta(瑞士化学学报)69,2067-2074(1986)中有描述，或当螯合物的相对稳定性允许时，通过阳离子交换制备，特别是用离子交换树脂。
对于具有放射性核素的螯合物，通过在超纯水中加热螯合物和放射性金属的无机盐进行放射性同位素交换，通过配位树脂除去非配合阳离子。亦可通过另一种过量的配位剂(优选给出不溶性Gd螯合物的配位剂，例如草酸)释放螯合物的金属阳离子，以便在配位另一种金属阳离子之前得到纯的式Ⅱ化合物。
从用R＇或可除去的保护基团单取代的环烯制备化合物Ⅱ′，其中m=2和R是H、选择性羟基化的烷基、CH2COOH和CH2CONZ1Z2，在此情况下，在用
三烷基化后引入R′。在单取代方法当中，可以分别提及在J.Org.Chem.583869-3876(1993)中描述的通过选择溶剂促进单烷基化反应和在Tetrahedron Letters32(5)639-641(1991)和Angew Chem.(应用化学)Int.Ed.30(5)560-561(1991)描述的通过硼或磷的衍生物进行3个氮原子的配位反应，或者在US5410043中描述的正酰胺中间体形成的反应。当R′不是H时，优选第一步引入R＇而不是直接用
的反应性衍生物进行环烯的三烷基化，因为通过简单操作不能除去同时形成的二烷基和四烷基的衍生物。
纯化各种合成中间体和终产物的方法是标准的，但不用说必须适合于产物的化学性质，其分子量，其溶解性和其溶液的粘度。可使用化学分离方法(选择性溶解，结晶)或在膜上经过滤或在悬浮液或柱中用吸附剂处理的物理方法。
特别地，对于溶于含水介质中的化合物Ⅲ，通过使它们经过阴离子和阳离子交换树脂或通过超滤或通过渗析超滤(diafiltration)或通过在适当选择的膜上的反渗透进行纯化，以便除去进入洗脱液中的低重量分子，溶剂和盐。
对于化合物Ⅱ，优选不进行能改善异构体相对比例的处理，溶解于不混溶有机溶剂中的中间体酯在搅拌下用酸性水相纯化，然后在倾析和分离之后，使它们与吸附剂如硅胶接触，之后，它们可在碱性或酸性介质中水解得到要配合的酸Ⅱ′。
一般通过上述方法之一，以碱性盐的形式纯化式Ⅰ螯合物，该碱性盐溶于水介质中；特别是通过用碳黑或用硅烷化过的二氧化硅处理其水溶液。
本发明这些螯合物的特征在于在中心螯合环侧臂上存在由短桥连接在一起的含有3或4个连续的苯环，最后一个苯环含有至少一个亲水基；尽管它们的高分子量和多个疏水苯环的存在，但这些化合物是水溶性的和生物相容性的，并且可以通过静脉给人使用。
此外，这是一个很重要的特性，它们仅少量穿过血管壁，而不象可商购得到的那些化合物，这样可以在磁共振成象过程中，在血管和周围组织之间得到强烈的对比；该特性和它们的高弛豫性的结合使得在病人体内注射低剂量的配位钆或检测迄今为止不能清楚说明的病态成为可能。
为了胃肠外给药或小肠内给药，本发明的顺磁螯合物可以和在本领域中是标准的药物载体和赋形剂结合而配制。
对于静脉内或动脉内给药，本发明的化合物是浓度为0.001-0.5mol/l的消毒水溶液，选择性地与使pH稳定在约7的试剂如Tris缓冲液或CO2混合，或与张力剂如甘露糖醇，甘油或葡萄糖，优选能改善螯合物的溶解性和分散度的NaCl，或与另一种配位剂如EDTA混合。
为了除去污染最终产物的内毒素，特别在通过液相色谱纯化之后，优选进行超滤，选择性地在膜上以基本上恒定的体积切向超滤，该膜的性质和截留极限取决于产物的分子量和溶液的粘度压力。亦可针对较小尺寸的化合物，在某些中间阶段特别是通过在离子膜上的微过滤，或通过超滤进行该纯化。亦可设想用吸附剂如碳黑处理，该吸附剂对于内毒素可以是特定的也可以不是。
对于阴道内给药，优选水溶液含有粘度改良剂如天然胶，多糖或纤维素衍生物。对于直肠给药，螯合物可以配制成栓剂或粘稠溶液。最后，对于口服，可以配制成明胶胶囊、片剂或糖浆，用通常的赋形剂制备。制剂的例子可参见Remingtond的Pharmaceutical science,18th Edition(1990),Mack.Pub.Cy。
单位剂量和其浓度取决于病人的大小和进行成象的类型，以及化合物的溶解度、在溶液中的粘度、磁效力、毛细血管壁的渗透性和药物动力学。通过使用快速和慢速技术，它们用于磁共振成像以便从血管造影照片研究灌注，特别是心肌、大脑、肾脏或肝脏灌注，或为了观察或说明异常渗透性，特别是肿瘤、炎性和局部缺血或软骨异常。
在引入放射性原子后，这些产物亦可用于核子医学，例如通过卤素的同位素交换或配位阳离子的同位素交换；在给予本发明的螯合物后，进行要成像区域的闪烁照相。
在下文中，描述了本发明的化合物的实例以及制备式Ⅱ化合物的钆螫合物和苯基前体化合物Ⅵ的方法，其中R＇=HOOC-CH(CH2)mCOOH,R＇=H和R′=CH2COOH。
根据情况的不同，回收的产物的特征在于它们在薄层色谱中的停留距离或它们在高效液相色谱(HPLC)或在空间排阻色谱(SEC)中的停留时间(tr)。通过质谱分析(电子喷射)确定它们的分子量。
A．[1,4,7,10-四氮环十二烷]-1,4,7,10-四(2-戊二酸)的钆螯合物(钠盐)1．将30g碳酸钠和78g按照例如在Acta Chim.Acad.Sci.Hung 41(3)331-6(1964)描述的方法制备的2-溴戊二酸乙酯加入到25g 1,4,7,10-四氮杂环十二烷和280ml乙腈的溶液中；该介质在回流下保持1天，在此期间，还加入2×78g溴衍生物和30g碳酸钠。冷却后过滤沉淀物，用水洗涤有机相，然后用稀盐酸水溶液萃取该有机相。将水相调节至pH约3-4，然后用甲苯萃取。
通过二氧化硅色谱纯化所需的产物，用选择性地与丙酮混合的二氯甲烷洗脱。
2．水解酯基团溶解于52m1乙醇中的46g八酯加入到350ml水中，在水中已加入50gNaOH颗粒。
在80℃下搅拌2天后，500ml弱酸性阳离子交换树脂加入到冷却的溶液中以便对其进行中和，分离出固相后，接着加入500ml强碱性阴离子交换树脂。分离出树脂并加入到500ml6N的醋酸水溶液中；通过在真空下蒸发掉溶剂回收进入溶液的最终产物，为粉状产物。HPLC:NucleosilC18100-5硅胶柱25cm×4.6mm。洗脱剂No.1含水H2SQ4(0.1％)10分钟，然后在10分钟内用0-10％(v/v)的CH3CN:f=1ml/min；T=25℃；tr=5.4；8.7；10.2；14分钟(异构体)(CH3COOH-tr=4.5分钟)。
3．配位反应用氧化钆0.47g氧化钆加入到2g上述八酸的30ml溶液中，pH为5.5-6，该混合物在80℃下保持3小时，在此期间，按需要调节pH。冷却后，在pH=6.5，加入2gNa+形式的Chelex100树脂(由Segma出售)；接触几小时后，分离出树脂，将溶液倒入10体积乙醇中以便沉淀螯合物。
用氯化钆通过加含水NaOH(1N),6.5g八酸和3.5gGdCl3·6H2O在130ml水中的混合物被调节至pH6.5，该混合物在60℃下保持2小时，在此期间，通过加总计21ml的含水NaOH(1N),pH保持在6.5。在室温下几小时后，混合物浓缩至25ml，用10体积C2H5OH沉淀最终产物。
B．1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)的钆螯合物(式Ⅱ)
1．10-苄基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷30.5g苄基氯滴加进50g 1,4,7,10-四氮杂环十二烷和500ml氯仿形成的溶液中。在室温下搅拌24小时后，过滤反应介质；浓缩过滤物至干燥。残余物溶解在350ml水和75ml甲苯中，倾析和分离甲苯相后，用2×200ml二氯甲烷萃取水相。在硫酸钠上干燥有机相，然后浓缩至干燥。得到21g油状产物。
2．10-苄基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸甲酯)56.3g2-溴戊二酸甲酯和50ml乙腈形成的溶液滴加进18.7g上述产物和24.7g碳酸钠在300ml乙腈中的悬浮液中。反应介质在回流下保持36小时；在室温下过滤后，通过蒸发除去溶剂，残余物溶解在最少量乙酸乙酯中并通过二氧化硅柱色谱纯化，用乙酸乙酯和石油醚的混合物(40/60-70/30v/v)洗脱。由此得到20.7g油状产物。
3．10-苄基-[1,4,7,10-四氮杂环十二烷]-1,4,7-三(2-戊二酸)溶解于40ml甲醇中的16.7g上面得到的油加入到125ml水中，该水中已溶解了25gNaOH；该混合物在70℃下保持搅拌48小时。然后在减压下除去甲醇，然后加入400ml弱酸性阳离子交换树脂(Amberlite～IRC50，由Rohm&Haas出售)，分离后，接着加入强碱性阴离子交换树脂(Amberlite～IRA458)，所希望的产物粘合于阴离子树脂上。通过用2升3N醋酸水溶液且接着用2升6N醋酸水溶液洗脱回收该产物。
除去溶剂后，得到13.5g白色晶体，为异构体混合物。HPLC柱No.1:25cm×4mm Lichrospher100-RP18-5μm(Merck,德国)；洗脱剂No.1tr=28,30分钟(2个异构体多重谱线，75/25面积)4．1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)13g溶解于210ml水和90ml甲醇中的上述化合物在含50％水的炭上于10％铂存在下，在室温和28×104Pa压力下氢化3小时。通过蒸发除去催化剂和溶剂后，得到11g白色粉末。HPLC柱No.1；洗脱剂No.1。tr=8,9分钟(2个异构体多重谱线，75/25面积)5．配位反应通过加入3N含水NaOH,60℃1.6g上述化合物和1gGdCl3·6H2O在30ml水中的溶液在pH5保持4小时。该溶液浓缩至10ml体积，用100ml乙醇沉淀残余物。通过过滤回收1.6g所希望的钆配合物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.1；tr=24,26分钟。
C．1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)-10-乙酸钆螯合物1．1g在制备B的步骤4中获得的酸溶解于8ml水和270mg溴乙酸中，该混合物在70℃下保持3小时，通过加入1N含水NaOH将pH空制在10。然后在室温下加入100ml水和10ml Amberlite-IRC50树脂；接触1小时后，分离出树脂并在介质中加入50ml Amberlite-IRA458树脂。12小时后，分离出树脂并加入柱中。通过用500ml 1N乙酸水溶液洗脱，从其中萃取所需的产物。由此得到0.8g白色晶体。HPLC柱No.2:25cm×4mm Symmetry-RP18-5μm(Waters)。洗脱剂No.1；tr=4分钟。
2．配位反应0.45gGdCl3·6H2O和0.75g上述化合物加入13ml水中；通过加NaOH水溶液(1N),pH调节至6；反应介质在60℃下保持5小时，在此期间，通过加NaOH溶液，几次调节pH。冷却后，介质加入130ml乙醇中，回收沉淀物得到0.75g螯合物。
D．N,N＇-(2,3,4,5-四羟基戊基)-N,N＇-[2-(羟基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)间苯二酰胺1．5-[2-(羟基乙氧基)乙基氨基]戊烷-1,2,3,4-四醇84g2-氨基乙氧基乙醇和150gD-木糖溶解于2.51甲醇中；该混合物在50g10％铂/炭存在下，在室温和6×105Pa压力下氢化。通过过滤除去催化剂并蒸馏掉溶剂。在100mlAmberlite-IRN77树脂(H+)上对溶解于最少量水中的残余物进行色谱分析，用NH4OH溶液洗脱，然后在1KgGeduranSI60硅胶上进行，得到170g褐色油状的氨基醇。TLC:CH3OH/NH4OH在25％-(7/3-v/v)-Rf=0.3。13C NMR:(DMSO-d6-50.3MHz)；δ(ppm):51.4,48.9(2×CH2NH)；62.9；60.5(2×CH2OH)；71.9；71.2；70.6(3×CHOH)；72.3；69.7(CH2OCH2)。用相同方式制备阿拉伯糖或核糖衍生物。
2．N,N＇-(2,3,4,5-四羟基戊基)-N,N＇-[2-(羟基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-(邻苯二甲酰氨基乙酰氨基)间苯二酰胺；在45℃下，上述制备的30g氨基醇溶解于100ml二甲基乙酰胺中，然后加入22g取代的间苯二酸二氯和12g三乙基胺，在该温度搅拌下放置该介质24小时。在室温下回收形成的沉淀物，通过真空蒸馏除去溶剂。
通过100ml Amberlite-IMAC HP1110树脂(H+)洗脱溶解于50ml水中的残余物；浓缩溶液至10ml后，残余物倒进1500ml异丙醇中，24小时后回收形成的沉淀物。
3．释放胺在80℃下，42g溶解于60ml水中的上述制备的产物加入到40ml水和2.7ml水合肼的溶液中。在此温度下搅拌5小时后，过滤介质，然后通过加浓盐酸酸化至pH1。分离出形成的沉淀物并浓缩滤液。在30ml Amberlite-IMACHP111E树脂(H+)，然后在55mlAmberlite-IRA 67树脂(OH-)上对溶解于30ml水中的残余物进行色谱分析。浓缩的洗脱液粘合于350mlAmberlite252Na树脂(H+)上，用NH4OH水溶液(2N)从其上洗脱。w=20g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2:H2O/CF3COOH(pH3.4)在50分钟内用乙腈梯度洗脱95/5-50/50v/v；tr=10-20分钟(异构体混合物)。
E．N,N＇-[双(2,3,4,5,6-五羟基己基)]-2,4,6-三溴代-5-(甘氨酰氨基)间苯二甲酰亚胺1．5-氨基-2,4,6-三溴间苯二酸156g溴缓慢加入50g5-氨基间苯二酸的300ml水溶液和55ml37％盐酸中。搅拌过夜后，通过加亚硫酸氢钠水溶液中和过量的溴，然后回收沉淀物。产率90％。
2．5-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)-2,4,6-三溴代-间苯二酸在10℃下，27ml亚硫酰氯缓慢加入69gN-邻苯二甲酰甘氨酸在200ml二甲基乙酰胺的溶液中，搅拌2小时后，在约15-20℃下，加入100g上述得到的酸。在室温下静置过夜后，将该混合物倒入800ml的热水中。由此回收140g最终产物。
3．上述二酸的氯化物在18℃下，70ml亚硫酰氯缓慢加入100g二酸在300ml二噁烷和50ml二甲基甲酰胺内的溶液中。在室温下搅拌3天后，过滤掉形成的黄色沉淀物，用甲基叔-丁基醚洗涤。由此得到70g米色固体。
4．N,N＇-[双(2,3,4,5,6-五羟基己基)]-2,4,6-三溴代-5-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)间苯二甲酰胺在80℃下，150g二山梨糖胺(disorbitylamine)溶解于600mlN-甲基吡咯烷酮，在60℃下，16g干碳酸钠加入介质中，接着加入96g上述酰基氯。在此温度下搅拌1小时和在室温下搅拌16小时后，除去沉淀物，溶液倒入1.61异丙醇中。回收的沉淀物重200g。
5．肼解在70℃下，200g上述产物和17ml水合肼加入400ml水中。搅拌3小时后，通过在室温下加6N盐酸，该混合物酸化至pH4。然后除去形成的沉淀物，通过加1NNaOH水溶液，滤液被中和。通过反渗透，除去过量的肼。用10ml强阳离子树脂然后用65ml弱阴离子树脂处理残余溶液。
通过将其粘合于H+形式的强阳离子树脂，从溶液中萃取最终产物，用稀NaCl水溶液(0.1M)从其中洗脱。w=80g。
HPLC柱NO.1；洗脱剂No.2；tr=约7分钟。
F．N,N′-[双(2,3,4,5,6-五羟基己基)]-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)间苯二甲酰亚胺1．5-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)-2,4,6-三碘间苯二酰氯在10℃下，149ml SOCl2加入335gN-邻苯二甲酰甘氨酸和11 N-甲基吡咯烷酮的溶液中，3小时后，加入700g2,4,6-三碘代-5-氨基间苯二酰二氯。在室温下搅拌3天后，介质倒入4.5L2/1v/v含水乙醇中。通过加三乙基胺，pH调至5，之后，回收形成的沉淀物，并通过用异丙醇洗涤纯化。w=850g。
2．用二山梨糖胺H-N[CH2(CHOH)4CH2OH]2酰胺化(amidification)对于三溴化合物类似物，得到的产物的产率是85％。
3．肼解420g溶解于11水和300ml水合肼中的上述三碘苯邻二甲酰亚胺在80℃下保持几小时。将介质酸化至pH3.6后，通过阳离子交换树脂(H+)如Rohm&Haas出售的IMACHP111E色谱除去过量的肼，用阴离子交换树脂(OH-)除去过量的氯化物。
通过阳离子交换树脂(强H+)色谱纯化最终产物并从其乙醇水溶液中沉淀出来。产率50％。HPLC柱No.1；洗脱剂No.4:CH3CN/P.I.C.B8(0.05M)(Waters)15/85；流速1ml/min。tr=3分钟。
G．1-脱氧-1-[(2,3-二羟基丙基)氨基]-D-半乳糖醇
在140ml甲醇中的27g3-氨基丙烷-1,2-二醇和50gD-半乳糖在40℃下保持搅拌16小时。然后加60ml水，在7g铂/炭(10％)存在下，在60℃和20×105Pa氢气压力下，氢化亚胺7小时。
通过Celite过滤而分离出催化剂。在减压下除去溶剂后，溶解于最少量水(50ml)中的残余物缓慢加入600ml异丙醇中。回收形成的沉淀物。m.p.=132℃，产率90％。
在从异丙醇沉淀之前，亦可在500ml磺酸形式的离子交换树脂上对溶解于200ml水中的粗产物进行色谱分析，用稀NH4OH水溶液洗脱。
在这些条件下，氨基醇是两种非对映异构体的异构体混合物(约50/50)。
该混合物通过重结晶、分段沉淀或放置在悬浮体中而富集在异构体的一种或另一种中。
因此，通过用回流甲醇处理(500ml溶剂中有25g氨基醇)，获得含过量的异构体之一的混合物65％的异构体具有较长的停留时间，基于根据下列条件获得的在色谱上测量的面积气相色谱(通过在60℃下三氟乙酸酐的反应，衍生物完全三氟乙酰化)。设备Varian Star 3400；柱由J&W得到的DB 1701(0.25μm-30m×0.25mm)；载气氦-T注射器(1/40分裂)=290℃；T柱=150℃至280℃(5℃/min)-体积1μl；tr:14.5和14.9分钟(起始的氨基丙二醇是5.6min)。13C NMR(200MHz-DMSO d6-RefDMSO-T=30℃)δ(ppm):71.7；71.6；70.5；70.1；69.5；68.5；68.2-(CHOH)64.6；63.2；(CH2OH)-53.4；53；52.9(NCH2)。
亦可通过D-半乳糖和纯氨基丙二醇的对映体偶合或通过缩水甘油的对映体和N-(2,3,4,5,6-五羟基己基)苄基酰胺的反应获得每个非对映异构体，方法如下a)N-苄基-N-(2,3,4,5,6-五羟基基)胺29gD-半乳糖和17ml苄胺溶解于230ml甲醇中，加5g5％铂/炭后，该混合物在氢气压力8×105Pa和50℃下保持7小时。
氢化后，盐酸水溶液加入到40℃的反应介质中直至pH是酸性。
在室温下通过Celite过滤混合物以便除去催化剂，部分浓缩后，加5NNaOH水溶液直至pH是碱性。回收形成的沉淀物并用乙醇重结晶。13C NMR(200MHz-DMSO d6-RefDMSO-T=30℃)δ(ppm):140.8(CCH2N)-128.8；128.4；126.9(苯基)-72；70.6；69.9；68.8；(CHOH)-63.2(CH2OH)-53.1；52.4(CH2NH)。
b)N-苄基-N-(2，3-二羟基丙基)(2,3,4,5,6-五羟基己基)胺6.5g上步得到的仲胺在60℃下溶解于200ml甲醇中，然后在此温度下往溶液中加2.5g缩水甘油(外消旋混合物或纯对映体)，搅拌该混合物24小时。然后通过减压蒸馏除去溶剂，残余物溶解于200ml水中后，在H+形式的AmberliteIMAC 110树脂柱上对该溶液进行色谱分析，用稀NH4OH水溶液(0.1％)洗脱，由此得到5.5g胺。
C)N-(2,3-二羟基丙基)-N-(2,3,4,5,6-五羟基己基)胺在上步得到的溶解于30ml水中的2g叔胺在0.6g的10％铂/炭存在下，在45℃和氢气压力100×105Pa下氢化5小时。然后通过Celite过滤该溶液以除去催化剂并在减压下浓缩。残余物用乙醇重结晶。
当和(S)-缩水甘油偶合时，得到在上述气相色谱条件下的具有较长停留时间的氨基醇非对映异构体。
用D-葡萄糖和D-甘露糖开始，通过使用这些方法，将获得这些氨基醇的非对映异构体，而其它氨基醇通过用不同的氨基醇或用不同的糖开始而获得。
H．(1,4,7,10-四氮杂环十二烷)-1,4,7,10-四(2-琥珀酸)的钆螯合物1．乙炔二羧酸苄基酯和环烯的4个氮原子的偶合溶解于25ml乙腈中的按照J.C.S.Perkin I,p.2024-2029,(1973)的描述制备的23g乙炔二羧酸苄基酯在20℃下滴加进2.7g环烯在50ml乙腈中的溶液中。在50℃下搅拌3小时后，在减压下除去该溶剂，通过二氧化硅色谱纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇混合物(98/2-v/v)洗脱以回收19g黄色固体。
2．烯胺的还原在搅拌下，将7g氰基氢硼化钠分批加入19g上述固体在500ml乙腈和50ml乙酸中的溶液中，在室温下搅拌该混合物过夜。减压除去溶剂后，油状残余物溶解于二氯甲烷/甲醇混合物(99/1)中并通过二氧化硅过滤。蒸发掉溶剂后，回收19g黄色油。
3．脱苄基在水/甲醇混合物(175ml/75ml)中的得到的8g八酯，在4g10％铂/炭存在下，氢化(压力3.5×105Pa)6小时。通过过滤分离出催化剂和通过蒸馏除去溶剂后，得到3g白色粉末状的八酸。HPLC柱No.1；洗脱剂No.1；tr=18-19分钟。
4．配位反应得到的1g八酸悬浮于20ml水中，通过加1NNaOH水溶液，pH调至5.5，然后加0.285gGd2O3。反应介质在70℃下已搅拌4小时后，(该介质的pH通过加1NHCl水溶液保持在5.5-6.5之间)，对其进行过滤，浓缩滤液至干燥，得到螯合物的钠盐。实施例1式1的钆螯合物，其中m=2
(钠盐)1．4-[N-(4-硝基苯基)脲基]苯甲酸在10℃搅拌下，24.6g异氰酸4-硝基苯酯加入到80ml四氢呋喃中，接着慢慢加入20.5g溶解于70ml四氢呋喃中的4-氨基苯甲酸。让该混合物温热至室温并连续搅拌1小时，之后，回收形成的沉淀物。w=45g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；H2O/CF3COOH；pH=3.4，用乙腈梯度洗脱(95/5至50/50-v/v，在50min内)；流速1ml/min；tr=44分钟。
2．4-[N′-(4-氨基苯基)脲基]苯甲酸22g上述产物和37ml1NNaOH水溶液加入到280ml水和3g铂/炭(5％)中。该介质在65℃和氢气压力0.6MPa下保持6小时。冷却至室温后，pH调至10并在Celite上过滤催化剂，之后，通过加6NHCl水溶液，滤液酸化至pH5.3；用丙酮洗涤得到的沉淀物。w=13.2g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=33分钟。
3．4-[N′-[4-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)苯基]-脲基]苯甲酸在10℃下，5.8g苯二甲酰亚氨基乙酸溶解于26ml二甲基乙酰胺中，加2ml亚硫酰氯同时保持温度不变，搅拌2小时后，加7g在上步得到的化合物。
在室温下12小时后，反应介质倒入250ml水中，在25℃下用水洗涤形成的沉淀物，然后在95℃下洗涤直至中性。w=10.4g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=40分钟。
4．N,N′-(2,3,4,5-四羟基戊基)-N,N＇-[2-(羟基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-[4-[N′-(4-苯二甲酰亚氨基乙酰氨基苯基)脲基]苯甲酰基甘氨酰氨基]间苯二酰胺4g上面得到的化合物和1.7gHOBT·H2O和9.3gN,N′-双(2,3,4,5-四羟基戊基)-N,N′-双(羟基乙氧基乙基)-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)间苯二酰胺溶解于40ml二甲基乙酰胺，接着在0℃下加2.4gEDCI·HCl。在室温下搅拌过夜后，介质倒入300ml二氯甲烷中。用二乙基醚洗涤回收的沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=30-33分钟(异构体混合物)。
5．除去苯二甲酰亚氨基式Ⅲ的产物，其中Z=CH2CONH；Z＇=NHCONH；Z″=CONHCH2CONH；
在80℃下，11.5g上述化合物加入到45ml水中，接着加1.12ml水合肼(0.023mol)。在80℃2小时45分钟后，该混合物冷却至0℃并通过加12N含水HCl酸化至pH1。然后在室温下该混合物通过Celite过滤，然后通过16mlIMACHP111E阳离子树脂(H+)和80mlIMACHP661弱阴离子树脂(OH-)(Rohm&Haas出售)过滤。通过在硅烷化过的二氧化硅上过滤进行最终的纯化后，得到4.6g最终产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=24-27分钟(异构体混合物)。
6．产物A和Ⅲ的偶合在40℃下，0.057gNHS(钠盐)和0.76gEDCI·HCl加入到4.5g上述胺和0.63g根据(A)制备的螯合物A的20ml(pH6)水溶液中。15分钟后，该混合物倒入水中并回收沉淀物。除去原料后，得到式Ⅰ的化合物。空间排阻色谱(SEC)。条件No.1在含有聚羟基甲基丙烯酸酯胶的一系列4个柱(30cm×8mm)上进行，该柱在OH Pak SB-HQ标准下由Shodex(JP)出售，用茁霉多糖确定的排阻阻限顺序是106千道尔顿(SB-804)；105千道尔顿(SB-803)；104千道尔顿(SB-802-5)；104千道尔顿(SB-802-5)。洗脱剂含水NaCl(0.16M)/乙腈(70/30-v/v)；流速0.8ml/min。T=30℃；tr；38分钟(起始胺50-53分钟)。HPLC柱No.3,25cm×4.6mmPlatinumEPSC18 100；5μM(Alltech)；洗脱剂No.37/CH3CN,从98/2至60/40-v/v,50分钟内；流速1ml/min；T=25℃；tr=26分钟。实施例2式Ⅰ钆螯合物，其中m=2
(钠盐)1．4-[4-(苯二甲酰亚氨基甲基)苯甲酰氨基1苯甲酸37gN-乙酯基邻苯二甲酰亚胺加入到用25g4-氨基甲基苯甲酸，18gNa2CO3和165ml水制备的溶液中。回收形成的沉淀物，然后悬浮在60ml二甲基乙酰胺中，在10℃下向其中缓慢加4.7ml亚硫酰氯。在此温度下3小时后，加9g4-氨基苯甲酸，介质在室温下保持12小时，然后倒入600ml水中。回收形成的沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=48分钟。
2．N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三碘代-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲酰基甘氨酰氨基]间苯二甲酰胺a)搅拌160ml二甲基乙酰胺和39g5-甘氨酰氨基-N,N′-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三碘代间苯二甲酰胺，4.6ml三乙基胺，5.7gHOBT·H2O和12g上面获得的产物直至溶解，之后，该溶液冷却至0℃，加8gEDCI·HCl。反应结束时，将介质倒入1000ml二氯甲烷中。通过在甲醇中沉淀，从其水溶液纯化回收的沉淀物。w=43gb)肼解在80℃下，25g上面得到的邻苯二甲酰亚胺溶解于50ml水中，之后，加2.2ml水合肼。搅拌3小时后，介质冷却并通过加12NHCl酸化至pH1。然后通过Celite过滤介质，通过弱阳离子树脂(H+)，然后通过弱阴离子树脂(OH-)色谱纯化。
由此回收15g所需的产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=19分钟。c)和钆螯合物A偶合由此得到的15g胺和1.9g螯合物A(钠盐)溶解于40ml水中。通过加1N含水HCl酸化至pH6后，在40℃下加2.3gEDCI·HCl。搅拌2小时后，介质加入到400ml乙醇中；形成的溶解于水中的沉淀物通过Norit碳黑过滤。由此得到8.5g纯产物。SEC条件No.1；tr=36分钟。HPLC柱和洗脱剂No.3；tr=23分钟。实施例3式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
a)4-[4-硝基苯甲酰氨基]苯甲酸100g4-硝基苯甲酰氯滴加进74g4-氨基苯甲酸和360ml二甲基乙酰胺中，同时保持温度小于25℃。搅拌24小时后，在10℃下加500ml二氯甲烷，以便沉淀所需的产物。用水洗涤和干燥后，回收145g产物。
b)4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酸136g上述酸在1.8L水中的悬浮液保持在氢气压力0.6MPa下4小时，在悬浮液中已加入240ml1NNaOH水溶液和14g钯/炭(10％)。
然后最终的悬浮液的pH调至约10，之后，通过Celite过滤混合物以除去催化剂。回收在酸化滤液至pH5.3过程中形成的沉淀物并干燥。w=106g；F＞260℃。
c)4-[4-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酸在10℃下，32ml亚硫酰氯滴加进90g苯二甲酰亚氨基乙酸和400ml二甲基乙酰胺的溶液中，搅拌3小时后，在低于20℃下，加105g上面得到的氨基酸。
搅拌12小时后，介质倒入41水中，回收沉淀物和用热水洗涤。干燥后的重量176g。m.p.＞260℃。
d)上述酸的氯化物2.5ml亚硫酰氯加入到10g酸的50ml二噁烷和和1ml二甲基甲酰胺的悬浮液中，该混合物在50℃下保持搅拌5小时。
加1体积的二异丙基醚后，回收10g沉淀物。
酸亦可悬浮于甲苯和作为催化剂的三辛酰基甲基氯化铵中。
e)N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-[4-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基乙酰氨基]苯甲酰基甘氨酰氨基)间苯二酰胺2.25g酰基氯和5g N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-(甘氨酰氨基)间苯二酰胺和0.7ml三乙基胺的25ml二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮的溶液保持搅拌12小时，然后倒入60ml乙醇中。由此回收6.2g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=27-35min分钟(异构体的混合物)。
f)肼解在80℃下，0.6ml水合肼的10ml水溶液加入到10g上述邻苯二甲酰亚胺的40ml二甲基乙酰胺溶液中。在此温度下搅拌3小时后，冷却的混合物倒入125ml乙醇中。回收9g沉淀物并用强阴离子树脂(OH-)然后用弱阳离子树脂(H+)处理它们的水溶液而进行纯化。w=8g。
亦可酸化反应介质以便在含水乙醇中的最终沉淀之前分离出沉淀的邻苯二甲酰肼和通过超滤除去溶剂和低分子量的分子。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2但90/10v/v，而没有梯度洗脱；tr=28-35min分钟。
g)和螯合物A偶合以得到式Ⅰ化合物5g步骤(f)中得到的化合物和0.65g螫合物A(钠盐)溶解于135ml水中；通过加1N含水HCl，介质的pH降至6，之后，在40℃下0.8gEDCI·HCl加入到介质中。搅拌2小时和冷却至室温后，介质倒入135ml乙醇中。
1.6g螯合物A(钠盐)亦可加入到10g在f中得到的胺的25ml水溶液中，接着在pH6.5，顺次加18ml二噁烷、1.4gEDCI和0.08gHOBT。在室温下2小时后，反应介质倒入100ml乙醇中并回收沉淀物。重新溶解于100ml水中后，用2×1g碳黑处理并重新沉淀于3体积的乙醇中。
在pH7下，通过用5mlChelex 100离子交换树脂(Na+)(Sigma出售)处理，然后通过在截留极限为5KD的膜上dia-超滤，纯化形成的沉淀物。w=4g。SEC条件No.1；tr=34min。HPLC柱和洗脱剂No.3；tr=23min。实施例4式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2,R1=H和R=
在40℃下保持搅拌在5ml水中的0.3g根据(B)制备的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三戊二酸的钆配合物、2g在实施例3(f)中制备的胺和0.3gEDCI·HCl5小时，同时通过加1NHCl水溶液保持pH为7。介质倒入50ml乙醇中并回收形成的沉淀。沉淀物在以120ml水溶液的形式，通过在截留极限为3KD的膜上超滤进行纯化以除去未反应的起始原料。在碳黑上搅拌和过滤后，溶液被干燥，得到1g白色固体。SEC条件No.1；tr=36.8min。HPLC柱和洗脱剂No.3；tr=31min。实施例5式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2,R1=CH2COOH和R=
(钠盐)通过采用和实施例4相同的方法，从0.3g起始螯合物C和2g在实施例3f中制备的胺得到0.8g最终产物。SEC条件No.1；tr=35.7min。HPLC柱和洗脱剂No.3；tr=22min。实施例6式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
1．5-[4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]-2,4,6-三溴间苯二甲酸(a)4-(4-硝基苯甲酰氨基)苯甲酰氯70g酸在250ml亚硫酰氯和0.1ml二甲基甲酰胺中回流8小时。在减压下蒸馏掉过量的亚硫酰氯，在搅拌下，残余物倒入1.51乙酸乙酯和500g破碎的冰中。
最终产物萃取成为有机相，用水、用碳酸氢钠水溶液洗涤该有机相，然后干燥和浓缩。w=64g。
(b)5-[4-(4-硝基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]-2,4,6-三溴间苯二甲酸64g酰基氯和67g5-氨基-2,4,6-三溴间苯二甲酸的170ml二噁烷溶液回流18小时。蒸发掉溶剂，用300ml热乙酸乙酯洗涤后，残余物溶解于600ml水和足量的5NNaOH中以得到pH7；用乙酸乙酯洗涤和酸化后，回收沉淀的所需的产物。w=73g。
(c)还原19g上述产物的水溶液(pH6)在氢气压力0.5MPa下和2g铂/炭型156(Johnson Matthey)存在下，在PH6下保持7小时。过滤后，蒸发溶液。w=15g。
2．N,N′-(2,3-二羟基丙基)-N,N′-(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-[4-(4-甘氨酰氨基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]间苯二甲酰亚胺(a)在10℃下，13g上述衍生物加入到10ml用4.7g邻苯二甲酰甘氨酸和1.7mlSOCl2制备的邻苯二甲酰亚氨基乙酰氯溶液中。在20℃下搅拌2小时后，在80℃下，该溶液倒入150ml水中，回收沉淀物。w=10.6g。
(b)酰基氯16ml亚硫酰基氯加入到12.4g上述衍生物的60ml二噁烷和10ml二甲基甲酰胺的溶液中，同时保持温度低于10℃。搅拌30分钟后，该溶液倒入200ml水中，用100ml乙酸乙酯洗涤回收的沉淀物。w=12g。
(c)和氨基醇偶合在60℃下，11.6g酰基二氯加入到120ml根据G制备的含13.5g 1-脱氧-1-(2,3-二羟基丙基氨基)-D-半乳糖醇的N-甲基吡咯烷酮中。搅拌4小时后，该混合物加入到1200ml二氯甲烷中并回收沉淀物。w=35g。
(d)除去苯二甲酰亚氨基保护基团在80℃下，14g上述衍生物加入到30ml含1.2g水合肼水中。在此温度下3小时后，通过加5NHCl水溶液，该溶液酸化至pH1。几小时后分离出形成的沉淀物，依次用树脂IMACHP1110Na和HP661(Rohm&Haas)处理滤液。HPC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=25-28min分钟(起始原料32-36分钟)。
3．和螯合物A反应0.6g钆螯合物A(Na盐)、0.7EDCI·HCl和4g上述胺加入到15ml水中；通过加1NHCl水溶液，pH调至6，该混合物在40℃下保持2小时，然后加入到200ml乙醇中。回收形成的沉淀物，其在100ml水中的溶液在截留极限为5KDa的聚醚砜膜上超滤。HPLC柱和洗脱剂No.3；tr=26min。SEC条件No.1；tr=36min。实施例7式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
1．4-(4-氨基苯基氨基甲酰基)苯甲酸(a)4-(4-硝基苯基氨基甲酰基)苯甲酸甲酯在约10℃下，10ml亚硫酰氯滴加进25g对苯二酸一甲基酯的125ml二甲基乙酰胺溶液中；在15℃下搅拌1小时30分钟后，该混合物缓慢加入到19g4-硝基苯胺的125ml相同溶剂的溶液中。在50℃下2小时后，回收形成的沉淀物。产率97％。
(b)还原10g上述硝基衍生物在2.5g 10％钯/炭(50％水)存在下悬浮于100ml二甲基乙酰胺中，并在氢气压力0.5Mpa下保持7小时。通过ClarcelR过滤介质去除催化剂，滤液加入500ml水中。回收形成的沉淀物。
(c)酯基的水解9g上述化合物、50ml含水NaOH(2N)和25ml甲醇在60℃下保持2小时。在20℃下，通过加浓盐酸溶液(37％)，该溶液酸化至pH4.5，回收形成的沉淀物7g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=29min分钟。
2．N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-5-[4-(4-氨基苯基氨基甲酰基)苯甲酰基甘氨酰氨基]-2,4,6-三碘间苯二酰胺在室温下搅拌25g在F中制备的碘代氨基乙酰氨基间苯二酰胺和3ml三乙基胺、5.8g上述产物、4.3gHOBT和6gEDCI·HCl2小时，然后该混合物倒在700ml二氯甲烷上。回收形成的沉淀物，通过RP-2硅烷化过的二氧化硅柱色谱(Merck)纯化，用水洗脱。回收16g所需的产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=14min分钟。
3．用钆螯合物A偶合在40℃下，搅拌0.125g螯合物(钠盐)、1.8g上述化合物、0.15gEDCI·HCl和100mg磺酸NHS几天，同时通过加1NHCl水溶液保持pH在约7。回收通过加50ml乙醇形成的沉淀物和通过在5KDa膜上的超滤纯化，得到1g所需的产物。SEC条件No.1；tr=30min。HPLC柱No.3；洗脱剂No.3；tr=20min分钟。
实施例8式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
(钠盐)1．3-[3-(苯二甲酰亚氨基乙基氨基甲酰基)苯甲酰氨基]苯甲酸(a)3-(氨基乙基氨基甲酰基)苯甲酸搅拌9g间苯二酸一乙基酯和1.5mll,2-乙二胺的90ml甲醇溶液18小时，然后浓缩至干燥。用冰冷却的甲醇洗涤残余物。产率91％。
(b)保护作为邻苯二甲酰亚胺的NH2:
9g胺和14gN-乙酯基邻苯二甲酰亚胺加入到6.9g碳酸钠的180ml水溶液中。搅拌1小时30分钟后，回收固体，滤液酸化至pH2。邻苯二甲酰亚胺沉淀物是白色晶体。产率80％。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=32分钟。
(c)在10℃下，2.6ml亚硫酰氯滴加到12g上述邻苯二甲酰亚胺的45ml二甲基乙酰胺溶液中。在15℃下搅拌2小时后，橙色溶液缓慢地加至5g3-氨基苯甲酸的45ml二甲基乙酰胺溶液中。反应介质在55℃下保持3小时，然后倒入900ml水中。回收形成的沉淀物。产率96％。
2．N,N′-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-5-[3-[3-(氨基乙基氨基甲酰基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基乙酰氨基]-2,4,6-三碘间苯二酰胺(a)搅拌在100ml二甲基乙酰胺中的20根据F制备的碘代氨基乙酰氨基间苯二酰胺、2.5ml三乙基胺、8.3g上述化合物、3.4gHOBT和4.9gEDCI·HCl1小时30分钟。然后反应介质倒入700ml二氯甲烷中，回收形成的沉淀物26g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=26分钟。
(b)肼解在80℃下，3.5ml水合肼加入到25g上述产物的55ml水溶液中。在此温度下8小时后，该介质酸化至pHl并回收形成的沉淀物。通过阳离子树脂(H+)色谱，然后通过阴离子树脂(OH-)色谱纯化该沉淀物。产率为70％。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=23分钟。
3．和钆螯合物A偶合在40℃和搅拌下，2g螯合物A(钠盐)、2.3gEDCI·HCl和16g上述化合物在50ml水中(pH7)保持1小时，之后，加200mg磺酸NHS并在40℃下继续搅拌3小时。然后介质倒入500ml乙醇中，通过超滤纯化回收的沉淀物，得到10g所需产物的钠盐。SEC条件No.1；tr=36min。HPLC柱No.3；洗脱剂No.3；tr=21分钟。
实施例9式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
(钠盐)1．4-[4-(4-[苯二甲酰亚氨基甲基]苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酸在15℃下，3.5ml亚硫酰氯加入到19.3g4-[4-[苯二甲酰亚氨基甲基]苯甲酰氨基]苯甲酸的溶液中，搅拌2小时45分钟后，加8g4-氨基苯甲酸。在20℃下12小时后，该介质倒入500ml水中。用二噁烷洗涤形成的沉淀物。w=11.5g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=53分钟。
2．N,N′-(2,3,4,5,6-五羟基己基)-N,N′-(2-羟基乙基)-4-[4-[4-(氨基乙基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酰胺(a)在20℃下，搅拌4.8gl-脱氧-1-(2-羟基乙基氨基)-D-葡萄糖醇(glucitol)、4gHOBT·H2O、11g上述酸和6.7gEDCI·HCl过夜。然后反应介质倒入500ml二氯甲烷中，用300ml二乙基醚洗涤形成的沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=39分钟。
(b)肼解上述沉淀物加入到60ml二甲基乙酰胺中，在80℃下，3.2ml水合肼溶解于25ml水中。3小时后，浓缩介质，残余物溶解于水中。通过加浓HCl溶液，水相调至pH7.5，在强阳离子树脂(H+)，然后在弱阴离子树脂(OH-)上进行色谱分析。在乙醇中，得到3.5g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=27分钟。
3．和钆螯合物A偶合使在15ml水和5ml二甲基乙酰胺中的0.5g螯合物A和1.5g上述化合物的温度调为40℃，加0.75gEDCI·HCl和0.05g磺酸NHS(钠盐)。在此温度下搅拌2小时后，反应介质倒入2体积乙醇中，回收1.3g沉淀物。HPLC柱No.3；洗脱剂No.3；tr=31分钟。
实施例10式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
1．4-[4-[4-硝基苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酸在5℃下，25.4g4-硝基苯甲酰氯加入到35g4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酸的140ml二甲基乙酰胺溶液中。在20℃下搅拌1天后，反应介质倒入500ml二氯甲烷中。w=50g。
2．还原硝基在3g5％Pd/C(50％水)存在下，在压力0.15MPa下氢化13g上述酸的400ml二甲基乙酰胺的悬浮液4小时。过滤和蒸发溶剂后，回收12g产物。
3．4-[4-[4-(苯二甲酰亚氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酸16.4g苯二甲酰亚氨基乙酸的40ml亚硫酰氯的溶液回流4小时。浓缩后，反应介质加入到100ml二异丙基醚中。回收10g酰基氯沉淀物。8.5g该产物加入到12g在步骤2得到的苯胺溶液中，在10℃下溶解于50ml二甲基乙酰胺中。使该介质升至20℃，通过蒸馏除去溶剂并用二乙基醚洗涤残余物。w=16g。
4．在E中制备的胺的偶合和肼解在35℃下，18g胺E、10g上述酸和3.5gHOBT溶解于80ml二甲基乙酰胺中；然后4.9gEDCI·HCl加入到反应介质中，冷却至20℃；1天后，该混合物倒入600ml二氯甲烷中并用400ml乙醇洗涤形成的沉淀物。该沉淀物在80℃下溶解于90ml二甲基乙酰胺和22ml水中；然后加1.85ml水合肼并搅拌该介质3小时，之后，蒸发掉溶剂。残余物溶解于800ml水中，通过加HCl水溶液(12N)，pH调至1。通过Celite和阴离子树脂色谱和阳离子树脂色谱过滤后，接着通过碳黑过滤洗脱液，回收13g所需的化合物。
5．式Ⅱ和式Ⅲ产物的反应1g螯合物A和8g上述胺溶解于40ml水中。通过加稀HCl水溶液酸化至pH6后，使反应介质至40℃，向其中加0.09g磺酸NHS和1.2gEDCI·HCl。在此温度下搅拌2小时后，该介质倒入400ml乙醇中，回收沉淀物。
经过通常的纯化处理后，回收6g最终产物。SEC上述条件tr=38min。
实施例11式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
1．5-(4-硝基苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴间苯二酸50g对硝基苯甲酰氯和75g5-氨基-2,4,6-三溴间苯二酸在400ml二噁烷中回流18小时。冷却后，过滤掉沉淀物，用50ml二噁烷洗涤并干燥。w=115g。
2.5-(4-氨基苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴间苯二酸通过加5NNaOH水溶液使180g上述硝基衍生物的600ml水溶液至pH6，并在Pt型156(Johnson Matthey)存在下，在压力5×105下氢化7小时。通过过滤分离出催化剂，在减压下蒸发水。w=80g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.6；水/三氟乙酸(pH2.8)和甲醇(99/1-v/v)；流速1ml/min.；tr=27分钟(硝基化合物是18.8分钟)。
3．5-(4-[4-(苯二甲酰亚氨基甲基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴间苯二酸10g4-氨基甲基苯甲酸、14.5gN-乙酯基邻苯二甲酰亚胺和9.2ml三乙基胺在140ml四氢呋喃中的混合物回流72小时。用二乙基醚和1N盐酸水溶液洗涤在室温下通过过滤从反应介质回收的沉淀物。得到14.5g固体，其中的12.2g在10℃下溶解于90mlN,N-二甲基乙酰胺和3.5ml亚硫酰氯中；搅拌3小时后，在步骤2得到的23.4g苯胺加入到介质中，该混合物搅拌过夜，之后将其倒入900ml水中。回收和用水洗涤的沉淀物用200ml二噁烷重结晶。w=30g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.5；水/CH3COONH4(0.01M)/CH3CN)；流速1ml/min.；在20分钟内梯度从85/15-50/50。
4．酰基二氯在上述步骤得到的30.3g间苯二酸衍生物溶解于150ml含26ml二甲基甲酰胺的二噁烷中，在5℃下，滴加42ml亚硫酰氯。在0℃下30分钟后，该混合物倒入550ml水中，过滤掉形成的沉淀物，用水和用二异丙基醚洗涤。干燥后w=26g。
5．N,N′-(2,3,4,5,6-五羟基己基)-N,N′-(2,3-二羟基丙基)-2,4,6-三溴-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]间苯二酰胺(a)在60℃下，10g酰基二氯加入到15g1-脱氧-1-(2,3-二羟基丙基氨基)-D-半乳糖醇的100mlN-甲基吡咯烷酮溶液中。在此温度下搅拌4小时后，冷却至室温的该介质倒入11异丙醇中。回收形成的沉淀物并干燥。HPLC柱No.1；洗脱剂No.5；tr=16min。
(b)除去苯二甲酰亚氨基在80℃和搅拌下，20.4g上述固体加入到80mlN,N-二甲基乙酰胺中，接着1.6ml水合肼溶解于20ml水中。在此温度下3小时后，在室温下该反应介质倒入11乙醇中。回收形成的沉淀物，干燥，然后溶解于40ml水中。在0℃下，加约2ml6NHCl水溶液以降低pH至2；通过Celite过滤该介质，然后通过离子交换树脂(Amberlite阴离子和IMAC阳离子)纯化。由此得到6g所需的产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.5；tr=24-29min。
6．和螯合物A反应
5.8g上述胺和1.1g螯合物(钠盐)溶解于12.5ml水中，通过加1NHCl水溶液，pH降低至6。加12.5ml二噁烷、0.06gHOBT然后加1.8gEDCI，该介质在pH6下保持4小时，之后，将其倒入150ml乙醇中。回收形成的沉淀物，然后通过在50cm2截留极限为30KD的再生纤维素膜(从Millipore得到的Labscale模件)上切向超滤，纯化该沉淀物。由此回收5.6g所需的产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.3；tr=16min。
实施例12式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
(钠盐)1．N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]间苯二酰胺(a)在60℃下，搅拌10g按照实施例11的步骤4制备的酰基二氯和20.6g二山梨醇酰胺(disorbitylamine)的200mlN-甲基吡咯烷酮溶液4小时。然后反应介质倒入1.5L异丙醇中，从其中回收17.5g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.5；tr=15min。
(b)除去苯二甲酰亚氨基进行与上述实施例相同的方法，从步骤(a)的16g产物开始，得到6.2g所需的胺。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=15-20mm。
2．进行与上述实施例11相同的方法，用0.78g螯合物A和4.8g胺开始，得到2.5g所需的产物。HPLC柱No.1；洗脱剂No.3；tr=13min。
实施例13式Ⅰ的钆螯合物，其中m=2
1．4-(苯二甲酰亚氨基甲基羰基氨基)苯甲酸在10℃下，3.9ml亚硫酰氯加入到10g邻苯二甲酰甘氨酸的30mlN,N-二甲基乙酰胺溶液中，在此温度下搅拌3小时后，加4g4-氨基苯甲酸。在室温下放置过夜，在80℃下，该介质倒入500ml水中。回收形成的沉淀物。
2．5-(4-[4-(苯二甲酰亚氨基甲基羰基氨基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴间苯二酸在10℃下，4.8rml亚硫酰氯加入到19.5g上述酸的120mlN,N-二甲基乙酰胺溶液中，2小时30分钟后，加38g5-(4-氨基)苯甲酰氨基-2,4,6-三溴间苯二酸。在室温下放置过夜，该介质倒入11水中，回收形成的沉淀物并用400ml热二噁烷洗涤。w=7.4g。
3．N,N＇-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-(4-[苯二甲酰亚氨基甲基羰基氨基]苯甲酰氨基)苯甲酰氨基)间苯二酰胺在5℃下，21ml亚硫酰氯加入到16.5g上述二酸的90ml二噁烷和13.6ml二甲基甲酰胺的溶液中。搅拌2小时30分钟后，该介质倒入400ml水中并干燥形成的沉淀物，然后在70℃下，加入到29.3g二山梨醇酰胺(disorbitylamine)的150mlN-甲基吡咯烷酮溶液中。在此温度下搅拌4小时后，该介质冷却至室温，回收盐，滤液倒入11异丙醇中。用1.2L乙醇洗涤形成的沉淀物。w=23g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=28-33min。
4．除去苯二甲酰亚氨基在80℃下，22g上述邻苯二甲酰亚胺和1.4ml水合肼加入到80mlN,N-二甲基乙酰胺和20ml水的混合物中。在此温度下3小时后，该介质冷却至约20℃，然后倒入300ml乙醇中。干燥形成的沉淀物并溶解于40ml水中，该溶液冷却至0℃并加3ml6N盐酸至pH1.5。通过Celite过滤后，通过45mlAmberliteIRA67阴离子树脂(Rohm&Haas),50mlIMACHPmE阳离子树脂，然后用16mlAmberliteIRA458阴离子树脂洗脱该滤液。中和并通过0.22μm膜过滤后，该溶液被干燥。w=11.7g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.2；tr=16-20min。
5．和螯合物A偶合11.2上述胺和1.9g螯合物A(钠盐)溶解于24ml水中。通过加2NHCl水溶液，使溶液的pH至6.1。然后加24ml二噁烷，接着加2.7g1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物和0.094g羟基苯并三唑。在室温下搅拌3小时后，该混合物倒入300ml乙醇中并回收形成的沉淀物。用Labscale模件超滤后，该模件的膜的截留极限为10KD，该溶液被冷冻干燥。w=10.2g。HPLC柱No.1；洗脱剂No.7；CH3CN/P.I.C.A*(Waters)梯度从25/75-30/70，时间25分钟；P.I.C.A=H2O/H3PO4/(C4H9)4N+HSO4-；tr=14分钟。
实施例14式Ⅰ的钆螯合物，其中m=1
1.8g(1,4,7,10-四氮杂环十二烷)-1,4,7,10-四(2-琥珀酸)的钆螯合物和13.5g按照实施例3的步骤f制备的N,N′-双(2,3,4,5,6-五羟基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-[4-氨基乙酰氨基苯甲酰氨基]苯甲酰基甘氨酰氨基)间苯二酰胺溶解于70ml的水中，加11NHCl水溶液至pH6。加2gEDCI后，该混合物在40℃下保持2小时。然后在截留极限为5KD的含聚醚砜膜的MinisetteFiltron模件上进行切向超滤，直至得到2L滤液；然后截留液与15gDarcoG60 black(以Aldrich出售)接触2小时。通过过滤分离碳黑和浓缩至干燥后，回收5g白色固体。SEC条件No.1；tr=35分钟。
权利要求
1．顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物
其中m是1或2，R′是H,C1-C4烷基或羟烷基，CH2-COOH基或CH2-CONZ1Z2基，Z1和Z2彼此分别是H或选择性羟基化的C1-C4烷基，或R′是基团
R是基团
其中a是1或2,Z是一个键，CH2,CH2CONH或(CH2)2-NHCO,Z′是一个键，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ或CO-NQ-CH2-CONQ,Z″是CO-NQ,NQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO，其中Q是H或选择性羟基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此分别是选自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2组成的组，Q1和Q2可以相同或不同，选自C2-C6烷基，该烷基是选择性羟基化的和由氧原子选择性间断的，这样Q1和Q2总共含有4-10个OH基，但须R1,R2,R3,R4和R5基的至少一个，但不多于2个的基团是酰氨基基团，及其与可药用的有机碱或无机碱形成的盐。
2．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物及其盐，其中m是2R＇是
CH2COOH，或CH2CONZ1Z2,a是1,Z是一个键，CH2或CH2CONH,Z′是CONH,NHCO,CONH-CH2-CONH或NHCON,Z″是CONH或CONH-CH2-CONH和R2=R4=CONQ1Q2,或R3=CONQ1Q2和R1,R2,R4和R5是H,Br,Cl或I，或Z″是NHCO和R2=R4=N(Q1)COQ2，或R3=N(Q1)COQ2和R1,R2,R4和R5是H,Br,Cl或I。
3．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物及其盐，其中m是2R′是
或CH2COOH，a是1,Z是一个键，CH2或CH2CONH,Z″是CONH,NHCONH或CONH-CH2-CONH,Z是CONH或CONH-CH2-CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2,Q1和Q2选自共含有6-10个OH基的C2-C6羟烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子间断的，Q1和Q2选自含有4-8个OH基的C2-C6羟烷基。
4．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螫合物及其盐，其中m是2,R′是
a是1,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH或NHCONH,Z″是CONH或CONH-CH2-CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2选自共含有6-10个OH基的C2-C6羟烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子间断的，Q1和Q2选自含有4-8个OH基的C2-C6羟烷基。
5．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物及其盐，其由m是2，R′是CH2CO2H,或
a是1，Z是CH2或CH2CONH，Z′和Z″是CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2选自共含有6-10个OH基的C2-C6羟烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子间断的，Q1和Q2选自含有4-8个OH基的C2-C6羟烷基。
6．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物及其盐，其由m是2,R＇是CH2CO2H，或
a是2,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH或NHCO,Z″是CONH或CONH-CH2CONH，和R1,R3和R5都是Br或IR2和R4都是CONQ1Q2，或R3是CONQ1Q2和R1,R2,R4和R5是H,Br或I。
7．根据权利要求1的顺磁金属阳离子和式Ⅰ化合物的螯合物及其盐，其中m是1,R′是
a是1,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH,Z″是CONH或CONH-CH2CONH,R1,R3和R5是Br,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2是共含有6-10个OH基的C2-C6羟烷基。
8．权利要求1-7之一的螯合物，其中金属阳离子是Gd3+。
9．根据权利要求1的式Ⅰ化合物的钆螯合物及其盐，其中m是2
和R是
10．根据权利要求1的式Ⅰ化合物的钆螯合物及其盐，其中m是2,R’是
其中Z″是CONH-CH2CONH,Q1和Q2是CH2(CHOH)4CH2OH，在此情况下，Z是CH2和R1,R3和R5是I，或者Z是CH2CONH和R1,R3和R5是Br，或者其中Z″是CONH,Z是CH2或CH2CONH和R1,R3和R5是Br和Q1是CH2(CHOH)4CH2OH和Q2是CH2CHOH-CH2OH或CH2(CHOH)4CH2OH。
11．用于诊断的磁共振成象的造影试剂，含有在可药用载体中的有效量的权利要求1-10中之一的螯合物。
12．含有放射性标记的金属阳离子和式Ⅱ化合物的螯合物的闪烁试剂
其中m是1或2,R′是H,C1-C4烷基或羟烷基，CH2-COOH基或CH2-CONZ1Z2基，Z1和Z2彼此分别是H或选择性羟基化的C1-C4烷基，或R′是基团
R是基团
其中a是1或2Z是一个键，CH2,CH2CONH或(CH2)2NHCOZ′是一个键，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ或CO-NQ-CH2-CONQZ″是CO-NQ,CQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO其中Q是H或选择性羟基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此分别是选自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2组成的组，Q1和Q2可以相同或不同，选自C2-C6烷基，该烷基是选择性羟基化的和由氧原子选择性间断的，这样Q1和Q2总共含有4-10个OH基，但须R1,R2,R3,R4和R5基的至少一个，但不多于2个的基团是酰氨基基团，及其与可药用的有机碱或无机碱形成的盐。
全文摘要
式I化合物与金属离子的螯合物其中R是含3或4个连续苯环的亲水基团;m 是1或2,其用于诊断成象。
文档编号C07F5/00GK1225922SQ9812692
公开日1999年8月18日 申请日期1998年12月10日 优先权日1997年12月10日
发明者D·梅耶, M·泼特, O·洛瑟克斯, C·斯莫诺特 申请人:古尔比特公司