专利名称：二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物及其合成的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类具有抗癌活性的有机锡化合物及其合成方法。
Gielen等合成了一系列多核的取代苯甲酸二烃基锡化合物{[RR’SnOOCR”]2O}2(见文献Appl.Organomet.Chem.,1991,5,497～506；1993,7,119～125；1993,7,201～206)，普遍具有比顺铂(Cisplatin)好的体外抗MCF--7(乳腺癌)和WiDr(结肠癌)活性，但因化合物本身毒性太大而限制了抗癌活性。
本发明的目的在于开发一系列在低剂量(10-8mol/L)时具有广谱，低毒，强效抗癌活性的有机锡化合物。
已合成二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物{R2”Sn[OHNOCRCONHOH]}2O6种，正在合成和准备合成的达数十种。通过元素分析，红外光谱和核磁共振氢谱确认了该类配合物的结构通式为
其中，R”=Et,Bu,Ph等；R=(CH2)n,n=0、1、2、3、4等。及
等。(部分化合物见表1)1．合成路线(表1中的合成路线如下)[2]表1已合成的二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物合成路线归属
注表中缩写配体对应名称如下OxHA=Oxalylhydroxamic acid，乙二酰异羟肟酸；SuHA=Succinylhydroxamic acid，丁二酰异羟肟酸；AdHA=Adipylhydroxamic acid，己二酰异羟肟酸；MaHA=Malonylhydroxamic acid，丙二酰异羟肟酸；GIHA=Glutarylhydroxamic acid，戊二酰异羟肟酸；P-PhHA=p-Phthaloylhydroxamic acid，对苯二酰异羟肟酸。2．制备方法(合成路线中每一路线的操作方法如下)路线[1]将17.37克(0.25摩尔)盐酸羟胺用回流法溶于90毫升甲醇中，另将20.20克(0.36摩尔)氢氧化钾用同法溶于60毫升甲醇中。待二者冷却至30～40℃时，在边冷却边摇动的情况下，将后溶液倒入前溶液中，静置5分钟，确保氯化钾完全沉淀，滤去沉淀，得羟胺和氢氧化钾的甲醇溶液。向该滤液中加入酯R_OOCRCOOR_0.075摩尔，搅拌3小时，放置24小时，得KOHNOCRCONHOK沉淀，滤出，溶于少量水，搅拌，用2N醋酸酸化至PH=5，搅拌3小时，过滤，得粗产品，用水重结晶两次，真空干燥，得配体异羟肟酸HOHNOCRCONHOH。路线[2]将4毫摩尔的配体异羟肟酸HOHNOCRCONHOH用回流法溶于200毫升无水乙醇中(也可用甲苯∶无水乙醇为3∶1的200毫升混合液作溶剂)，然后加入4毫摩尔的二烃基氧化锡R2”SnO，回流6小时，反应完毕后，蒸去一半溶剂，余下的在抽空状态下蒸发，得粗产品，粗产品用无水乙醇/氯仿重结晶，最后得二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物{R2”Sn[OHNOCRCONHOH]}2O。
配体HOHNOCRCONHOH及配合物的元素分析和物理性质数据见表2，红外光谱数据见表3，核磁氢谱数据见表4。3．实验所用仪器上海物理光学仪器厂生产的数字式熔点仪；240C元素分析仪和Vario EL型元素分析仪；岛津IR-435红外光谱仪和Perkin-Elmer-983型红外光谱仪；1H NMR用BrukerDRX300MHZ和Bruker AM-500MHZ核磁共振仪测定，TMS为内标，以氘代DMSO和氘代氯仿为溶剂；分子量用凝固点降低法测定，溶剂为萘。
表2配体及配合物的元素分析和物理性质数据
表3配体及配合物的红外光谱数据(vcm-1)
4．结构表征(1)．红外光谱分析由表3可看出配体HOHNOCRCONHOH的红外光谱在2800～3480cm-1范围中出现NH和OH伸缩振动吸收峰，但是，在配合物中由于配体只有一端配位，故NH和OH吸收峰未消失。配体中VC=O在1630～1655cm-1附近出现一个峰，在配合物中，在1630～1655cm-1和1540～1550cm-1处皆有强峰出现，证明配体一端羰基氧与锡配位，另一端未配位。因羟基吸收峰未消失，故不能确证羟基氧配位。但是，在配体中vN-O在840～1000cm-1附近，在配合物中，原位置处vN-O峰仍存在，而且，在高频处也出现了一个vN-O峰，且吸收强度增大，这一方面排除了NH-OH基团中氮原子的配位，另一方面也佐证了是NH-OH中的氧与锡配位。由于锡属于硬酸，这符合软硬酸碱规则。在配合物IR谱中只观察到vSn-O吸收峰，确实未观察到vSn～N吸收峰，此峰大约在415cm-1处。在该类配合物中，均观察到了处于610～667cm-1内的强峰，这是vSn-O-Sn，符合元素分析推测结果。
以上IR参数表明，配体是以一端的CO-NHOH基团中的氧原子与锡螫合配位的，一般情况下，异羟肟酸是以CO-NHO-配位的强螯合剂。在配合物中只观察到一个vSn-C，表明了两个烃基R″处于反式位置。
表4配体及配合物的核磁氢谱数据(δppm)
(2):1H NMR(核磁氢谱)分析由表4可看出所有配合物中的R基团，即配体上的(CH2)n环的质子的吸收峰较之自由配体都发生了明显的变化，这是配体与锡配位后的诱导效应所致。AdHA配位后，在12.06,10.52,8.87ppm处出现质子峰，分别归属于配位一端的NH，未配位一端的NH-OH之NH和OH，表明配体一端的NH-OH中羟基的去质子和氧的配位，排除了NH-OH基团中氮原子的配位，与IR光谱的推测一致。P-PhHA的配合物配位端的氮上质子未出现吸收信号，可能与活泼氢的快速交换有关，配体中配位端氮原子上的活泼氢转移到氧原子上，以HO-C=N-OH形式存在，氧原子脱氢后与锡配位，故在配合物中观察不到配位端的NH质子峰。OxHA,SuHA等配位后，未出现NH,OH的质子峰，可能是因为NH,OH上的质子与氘代试剂发生了置换反应。因此，1H NMR结果也证明了配体是以CO-NHOH(或HO-C=N-OH)基团中的氧原子与锡螯合配位的推测。另外，烃基R″表现为多重峰，也表明R″是处于非直线反位。
综合上述IR,1H NMR以及元素分析等参数，可以认为该类化合物为五配位氧桥联双核三角双锥结构。(如通式所示)化合物的抗癌活性经北京医科大学天然药物及仿生药物国家重点实验室(表5A，表5B)和中国科学院上海药物所新药筛选国家重点实验室(表6，表7)对上述化合物进行活性筛选，发现上述化合物具有强效活性。表5A-5B结果评价-无效+弱效++显效+++强效表5A不同浓度配合物对肿瘤细胞生长的抑制率％
注*人鼻咽癌KB采用磺胺罗丹明(SRB)蛋白染色法；人胃癌BGC-823(SRB法)表5B不同浓度配合物对肿瘤细胞生长的抑制率％
注*人肝癌Bel-7402(SRB法)；人结肠癌HCT-8(SRB法)；人白血病HL-60采用四氮唑盐(MTT)比色法；筛选方法四氮唑盐(microculture tetrozolium,MTT)还原法细胞株P388小鼠白血病作用时间48h结果评定无效10-5mol/L＜85％；弱效10-5mol/L≥85％或10-6mol/L＞50％；强效10-6mol/L≥85％或10-7mol/L＞50％；表6不同浓度(mol/L)配合物对肿瘤细胞生长的抑制率％
筛选方法磺胺罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)蛋白染色法细胞株A-549人肺腺癌作用时间72h结果评定无效10-5mol/L＜85％；弱效10-5mol/L≥85％或10-6mol/L＞50％；强效10-6mol/L≥85％或10-7mol/L＞50％；表7不同浓度(mol/L)配合物对肿瘤细胞生长的抑制率％
筛选方法磺胺罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)蛋白染色法，四氮唑盐(microculturetetrozolium,MTT)还原法细胞株HO-8910人卵巢癌，SPC-A4人肺癌，HCT-116人结肠癌作用时间72h结果评定无效10-5mol/L＜85％；弱效10-5mol/L≥85％或10-6mol/L＞50％；强效10-6mol/L≥85％或10-7mol/L＞50％；表8不同浓度(mol/L)顺铂对肿瘤细胞生长的抑制率％
从表5-表8的测试结果可知，本发明的系列有机锡化合物具广谱、低毒和强效抗癌活性(1)广谱该系列化合物对人鼻咽癌KB，人胃癌BGC-823，人肝癌Bel-7402，人结肠癌HCT-8，人白血病HL-60,P388小鼠白血病和A-549人肺腺癌肿瘤细胞等都有较强的抑制力。(2)低毒以Wish-人羊膜细胞为例，用SRB法，作用时间72h，发现该系列化合物对正常细胞的毒性浓度为10-6mol/L，比其对肿瘤细胞的抑制浓度10-8mol/L差两个数量级。(3)强效该系列化合物对P388小鼠白血病和A-549人肺腺癌肿瘤细胞的抑制率呈强效性，而目前广泛应用于临床的顺铂对HO-8910人卵巢癌，SPC-A4人肺癌，HCT-116人结肠癌的抑制率为无效(见表8)。
实施例1配合物[(MaHA)SnBu2]2O，结构如前所述，其中R=CH2,R″=Bu。(1)合成路线[2](2)制备方法路线[1](合成配体MaHA)将17.37克(0.25摩尔)盐酸羟胺用回流法溶于90毫升甲醇中，另将20.20克(0.36摩尔)氢氧化钾用同法溶于60毫升甲醇中。待二者冷却至30～40℃时，在边冷却边摇动的情况下，将后溶液倒入前溶液中，静置5分钟，确保氯化钾完全沉淀，滤去沉淀，得羟胺和氢氧化钾的甲醇溶液。向该滤液中加入丙二酸二乙酯12.014克(0.075摩尔，11.39毫升)，搅拌3小时，放置24小时，得丙二酰异羟肟酸钾盐白色沉淀，滤出，溶于少量水，搅拌，用2N醋酸酸化至PH=5，搅拌3小时，过滤，得粗产品，用水重结晶两次，真空干燥，得白色粉末状配体丙二酰异羟肟酸。路线[2](合成配合物[(MaHA)SnBu2]2O)将0.5364克(4毫摩尔)的丙二酰异羟肟酸用回流法溶于200毫升无水乙醇中(也可用甲苯∶无水乙醇为3∶1的200毫升混合液作溶剂)，然后加入0.996克(4毫摩尔)的二丁基氧化锡Bu2SnO，回流6小时，反应完毕后，蒸去一半溶剂，余下的在抽空状态下蒸发，得粗产品，用无水乙醇/氯仿混合液重结晶，抽滤收集，真空干燥，得白色粉末状[(MaHA)SnBu2]2O。(3)用途该化合物对人鼻咽癌KB，人胃癌BGC-823，人肝癌Bel-7402，人结肠癌HCT-8，人白血病HL-60有较强的抑制力，对P388小鼠白血病和A-549人肺腺癌肿瘤细胞的抑制率呈强效性。
权利要求
1．一种二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物，其特征在于它的结构通式为
所述的R”=Bu；所述的R=(CH2)n,n=0、1、2、3、4及
2．如权利要求1所述锡化合物的合成方法，其特征在于步骤如下将17.37克(0.25摩尔)盐酸羟胺用回流法溶于90毫升甲醇中，另将20.20克(0.36摩尔)氢氧化钾用同法溶于60毫升甲醇中。待二者冷却至30～40℃时，在边冷却边摇动的情况下，将后溶液倒入前溶液中，静置5分钟，确保氯化钾完全沉淀，滤去沉淀，得羟胺和氢氧化钾的甲醇溶液。向该滤液中加入酯R_OOCRCOOR_0.075摩尔，搅拌3小时，放置24小时，得KOHNOCRCONHOK沉淀，滤出，溶于少量水，搅拌，用2N醋酸酸化至PH=5，搅拌3小时，过滤，得粗产品，用水重结晶两次，真空干燥，得配体异羟肟酸HOHNOCRCONHOH(2)将4毫摩尔的配体异羟肟酸HOHNOCRCONHOH用回流法溶于200毫升无水乙醇中(也可用甲苯∶无水乙醇为3∶1的200毫升混合液作溶剂)，然后加入4毫摩尔的二烃基氧化锡R2”SnO，回流6小时，反应完毕后，蒸去一半溶剂，余下的在抽空状态下蒸发，得粗产品，粗产品用无水乙醇/氯仿重结晶，最后得二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物{R2”Sn[OHNOCRCONHOH]}2O。
全文摘要
一种二配体双核二酰异羟肟酸类二烃基锡化合物,其结构通式为:其合成方法为右式;R”’OOCRCOOR”’+2NH
文档编号C07F7/22GK1238335SQ9910823
公开日1999年12月15日 申请日期1999年6月2日 优先权日1999年6月2日
发明者杨频, 王联红, 王丽, 丁健 申请人:山西大学