专利名称：新的异羟肟酸化合物及其制备方法和含有它们的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的异羟肟酸化合物及其制备方法和含有它们的药物组合物。这些新化合物是一类新的金属蛋白酶抑制剂。
胞外基质的重建在众多生理和病理过程中涉及例如胚胎发育、瘢痕形成、正常的和病理性的血管生成、结缔和关节组织的退化、癌症的入侵和转移。
胞外基质的金属蛋白酶(“基质金属蛋白酶”或MMPs)，起初被描述为在调节胞外物质的形成和破坏中所涉及的酶，在这类过程期间被过度表达并与病症发展有关。锌蛋白酶家族拥有至少十四个成员。已知其底物的主要成员是胶原酶(间质MMP-1、嗜中性MMP-8和胶原酶-3或MMP-13)、明胶酶(IV型胶原酶MMP-2和MMP-9或明胶酶A和B)、金属弹性蛋白酶MMP-12、基质溶素(包括基质溶素-1或MMP-3)和明胶酶A激活剂(MT-MMPs，具有跨膜结构域的唯一MMPs)。
在肿瘤的病理中，癌细胞和肿瘤外周基质的正常细胞分泌的那些酶直接参与间质组织中内皮细胞和肿瘤细胞的开放性迁移途径，并间接参与胞外基质中膜因子或隔离因子(血管生成或生长因子，炎症介质，例如α肿瘤坏死因子或α-TNF等)的释放和成熟化，因而有助于所有阶段的肿瘤发展(初期肿瘤的生长、血管生成、局部入侵和转移的形成)。因此，MMP抑制剂作为能够抑制许多病症，包括癌症发展的新药理学物质是特别有效的。
文献中已记载有各种金属蛋白酶抑制剂，更具体地说，其中包括专利申请EP 606046、WO 96/40101、WO 96/00214和WO 97/27174以及在“药物化学杂志”(J.Med.Chem.1998，41，640-649)中描述的化合物。
除了本发明化合物是新化合物的事实以外，据证明它们还是一类比文献中所描述的那些金属蛋白酶抑制剂更强的金属蛋白酶抑制剂，因此使得它们具有治疗癌症、风湿性疾病，如关节病和类风湿性关节炎等的潜在价值。
更具体地说，本发明涉及式(I)化合物
其中R1表示-直链或支链的(C1-C6)烷基(可任意地被一个或多个相同或不同的取代基取代，所述取代基各自彼此独立地选自羟基、卤素、直链或支链的(C1-C6)烷氧基、巯基、支链或支链(C1-C6)烷硫基、芳基、直链或支链(C1-C6)酰基和氨基，氨基自身还可任意地被一个或两个相同或不同的直链或支链的(C1-C6)烷基、环烷基或芳基取代)，-直链或支链(C1-C6)酰基，-环烷基，-芳基，-杂环基，-氨基羰基-(C1-C4)烷基，氨基部分可任意地被一直链或支链的(C1-C6)烷基所取代，所述(C1-C6)烷基可任意地被一个或多个相同或不同的选自芳基、芳基-(C1-C6)烷基(其中的烷基部分可以是直链或支链的)、环烷基和直链或支链的(C1-C6)烷基氨基羰基的基团所取代，R2表示直链或支链的(C1-C4)亚烷基，R3表示X或Y基团，其中·X表示直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)酰基、直链或支链(C1-C6)烷氧羰基、氨基-直链或支链(C1-C6)烷基(该氨基部分自身可任意地被一个或两个相同或不同的直链或支链(C1-C6)烷基取代)、羟基-直链或支链(C1-C6)烷基、羧基-直链或支链(C1-C6)烷基、氨基羰基-直链或支链(C1-C6)烷基、巯基-直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基、芳基或杂环基，和·Y表示式T-U-V-的基团(V部分与硫原子键合)，其中-T表示芳基或杂环基，-U表示一单键、硫原子、氧原子、NH、C＝O或式-R8O-、-R8S-、-R8NH-、-R8OR9-、-R8SR9-、-R8-NH-R9-、-R8-CO-R9-或-R9-的基团，其中R8表示直链或支链(C1-C6)亚烷基并且R9表示亚芳基或亚杂芳基，应该理解在这些基团中R8键于Y基团的T部分上并且R9或杂原子键于Y基团的V部分，-V表示直链或支链(C1-C6)亚烷基，R4表示-当R3表示Y基团时，表示选自下述的基团直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基、芳基、芳基-直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基-直链或支链(C1-C6)烷基、被杂环基取代的直链或支链(C1-C6)烷基和杂环基，-或者当R3表示X或Y基团时，表示选自下述的基团联芳基、芳基杂芳基和杂芳基芳基，涉及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐。
应该理解-“环烷基”应理解为3-10个碳原子的单环或双环体系，-“芳基”应理解为苯基、萘基、四氢萘基、二氢萘基、茚基或二氢茚基，它们各自可任意地被一个或多个相同或不同的取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、氰基、硝基、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)三卤代烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、直链或支链(C1-C6)酰基、羧基、直链或支链(C1-C6)烷氧羰基和氨基，氨基本身可任意地被一个或两个相同或不同的直链或支链(C1-C6)烷基取代，-“联芳基”应理解为其中环碳原子之一被第二个芳基取代的芳基，-“杂环基”应理解为具有4-12个环原子并且含有一、二或三个相同或不同的杂原子的饱和或不饱和单环或双环基团，所述杂原子选自氧、氮和硫，应理解该杂环基可任意地被一个或多个相同或不同的取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)三卤代烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基和氨基，氨基本身可任意地被一个或多个相同或不同的直链或支链(C1-C6)烷基取代，-“杂芳基”应理解为不饱和的芳香杂环。
有利的是，本发明的优选化合物是那些其中R1表示直链或支链的(C1-C6)烷基，更优选R1是异丁基的化合物。
根据本发明的一个有益变化，优选的化合物是那些其中R3表示上文定义的基团X并且R4表示联芳基、芳基杂芳基或杂芳基芳基的化合物。
根据本发明的另一个有益变化，优选的化合物是那些其中R3表示上文定义的基团Y并且R4表示直链或支链的(C1-C6)烷基、环烷基、芳基、芳基-直链或支链(C1-C6)烷基，环烷基-直链或支链(C1-C6)烷基、被杂环基取代的直链或支链(C1-C6)烷基或杂环基的化合物。
根据第三种尤为有益的变化，本发明的优选化合物是那些其中R3表示上文定义的基团Y并且R4表示联芳基、芳基杂芳基或杂芳基芳基的化合物。
本发明的优选化合物是-4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸；-4-{[4-(苯基)-苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸；-4-{[4-(苄氧基)-苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸；-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}-4-(甲硫基)丁异羟肟酸；-4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸；和-2-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁异羟肟酸。
本发明的优选化合物的异构体以及它们与可药用酸或碱的加成盐是本发明整体的一部分。
可药用酸可列举，但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸等。
可药用碱可举例，但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔丁基胺等。
本发明还包括制备式(I)化合物的方法，该方法的特征在于使用式(II)化合物作为原料
其中R2如式(I)中所定义，Ra和Rb形成一个连接羰基与硫原子的单键，或者Ra表示直链或支链的(C1-C6)烷氧基并且Rb表示直链或支链的(C1-C6)烷基，在常规有机合成的条件下，用式(II’)化合物取代式(II)化合物的伯胺官能基R1-Z (II’)其中R1如式(I)所定义并且Z表示有机化学中的常见离去基团，得到式(III)化合物
其中R1和R2如式(I)中所定义并且Ra和Rb如上文所定义，式(III)化合物在碱性条件下用式(IV)化合物处理R4-SO2-Cl (IV)其中R4如式(I)所定义，得到式(V)化合物，
其中R1、R2、R4、Ra和Rb定义如上，当Ra和Rb形成一单键时，式(V)化合物在甲醇和钠的存在下用式(VI)化合物处理R3-Hal(VI)其中R3如式(I)所定义并且Hal表示卤素原子，得到式(VII)化合物
其中R1、R2、R3和R4如式(I)所定义，式(VII)与式(V)化合物合起来构成式(IX)化合物
其中R1、R2、R3、R4和Ra如上文所定义，式(IX)化合物的酯官能基在常规条件下水解，得到式(X)化合物
其中R1、R2、R3和R4如上文所定义，式(X)化合物直接用羟胺盐酸盐处理或用O-取代的羟胺处理，后者随后在常规操作条件下脱保护，得到上文定义的式(I)化合物，如果需要，可采用常规纯化技术纯化式(I)化合物，可任意地采用常规分离技术将其分离为其异构体，并且如果需要，可用可药用酸或碱将其转化为加成盐。
式(II)、(II’)、(IV)和(VI)化合物均是市售化合物，或者它们可按照有机合成的常规方法得到。
本发明还涉及含有至少一种式(I)化合物、其旋光异构体或其与可药用酸或碱的加成盐作为活性成分的药物组合物，该药物组合物可以是所述的活性成分本身，也可以结合有一种或多种惰性的无毒可药用赋形剂或载体。
本发明的药物组合物中具体可提及适于口服、胃肠外(静脉内、肌内或皮下)、经皮或透皮、经鼻、直肠、经舌、眼或呼吸道给药的组合物，尤其是片剂或糖锭剂，舌下片剂、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、栓剂、霜剂、软膏剂、皮肤用凝胶、可注射或饮用制剂、气雾剂、滴眼剂或滴鼻剂等。
根据患者的年龄和体重，给药途径，疾病的性质和严重程度以及可能的相关治疗，给药的剂量有所变化，对于每日给药一次或多次，该剂量范围为1-500mg。
下列实施例将进一步说明而非限制本发明。
使用的原料是已知的产物或可按照已知方法制备。各种合成步骤得到用于制备本发明化合物的合成中间体。
实施例和合成步骤中所述的化合物的结构已通过常规的分光光度技术测定(红外、NMR、质谱)。实施例14-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸步骤A3-(异丁基氨基)四氢-2-噻吩酮在0℃和惰性气氛下，将4.6mmol三乙胺加到4.23mmol D-高半胱氨酸硫内酯(thiolactone)盐酸盐和8.46mmol异丁醛在20ml甲醇的溶液中。在室温搅拌4小时后，将该反应混合物冷却到0℃，用40分钟缓慢地加入8.8mmol NaCNBH3。在0℃搅拌30分钟后，将反应混合物水解，然后用乙醚萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇99/1)分离，得到糖浆形式的目的产物。步骤BN1-异丁基-N1-(2-氧代四氢-3-噻吩基)-4-甲氧基-1-苯磺酰胺在0℃下，将5mmol N-甲基吗啉和2.5mmol 4-甲氧基苯磺酰氯加到2.5mmol步骤A获得的化合物在15ml二氯甲烷中的溶液中。在室温搅拌12小时后，将该反应混合物倾入水中并用二氯甲烷萃取。合并的有机相用2N盐酸水溶液、再用5％碳酸氢钠溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥后，过滤并蒸发，经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇20/1)，得到目的产物。熔点92℃步骤C4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸甲酯在室温下，将1.1mmol步骤B获得的化合物加到1.26mmol钠的3ml甲醇溶液中。搅拌15分钟后，加入1.1mmol苄基溴并持续搅拌2小时。蒸发甲醇后，将所得固体在乙酸乙酯中研制并过滤。蒸发滤液，得到残余物，经硅胶色谱纯化(二氯甲烷/甲醇20/1)，得到糖浆状预期产物。质谱FAB+∶[M++1]m/z＝466步骤D4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸将1.77mmol氢氧化钾加到0.95mmol步骤C获得的化合物在3/1二噁烷/水的混合液中。于50℃搅拌3小时后，蒸除二噁烷，残余的水相用水稀释，加入5％盐酸溶液酸化到pH2，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经洗涤，干燥、过滤并减压蒸发。经硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇93/7)分离，得到糖浆状预期产物。步骤EN-叔丁氧基-4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酰胺将0.6mmol步骤D得到的化合物、0.6mmol 1-羟基苯并三唑、3mmolN-甲基吗啉和1.2mmol O-叔丁基羟胺盐酸盐溶于9ml二氯甲烷中。然后往该溶液中加入0.78mmol N-[(二甲氨基)丙基]-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐并将该反应混合物在室温搅拌12小时。加入水稀释该反应混合物后，用二氯甲烷萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇99/1)，得到糖浆状的产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝523步骤F4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-丁异羟肟酸将含有0.31mmol步骤E获得的化合物在2ml二氯甲烷和2ml三氟乙酸中的溶液在室温搅拌6小时，减压浓缩后，经硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇98/2)分离。获得糖浆状残余物，之后溶于乙酸乙酯。将该溶液滤过硅藻土后减压浓缩，分离得到糖浆状的预期产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝467 (M+-CONHOH)m/z＝406实施例24-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1描述的方法，在步骤C使用4-(苯基)苄基溴作为反应试剂得到该产物。步骤C4-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸甲酯步骤D4-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸步骤EN-叔丁氧基-4-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酰胺步骤F4-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-丁异羟肟酸实施例34-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1描述的方法，在步骤B使用4-联苯基磺酰氯作为反应试剂得到该产物。步骤BN1-异丁基-N1-(2-氧代四氢-3-噻吩基)-4-苯基-1-苯磺酰胺步骤C4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁酸甲酯步骤D4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁酸步骤EN-叔丁氧基-4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁酰胺步骤F4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸实施例44-{[4-(苄氧基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～D描述的方法，在步骤C使用4-(苄氧基)苄基溴作为反应试剂，然后进行下述步骤G得到该产物。步骤C4-{[4-(苄氧基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸甲酯步骤D4-{[4-(苄氧基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸步骤G4-{[4-(苄氧基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸将1mmol步骤D获得的化合物、1mmol 1-羟基苯并三唑、5mmol N-甲基吗啉和2mmol羟胺盐酸盐溶于15ml二氯甲烷中。然后往该溶液中加入1.2mmol N-[(二甲氨基)丙基]-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐并将该反应混合物在室温搅拌12小时。该反应混合物加入水水解，水相随后用二氯甲烷萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇98/2)，得到糖浆状的预期产物。实施例52-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}-4-(甲硫基)丁异羟肟酸步骤H2-氨基-4-(甲硫基)丁酸甲酯盐酸盐在-10℃下，往15ml甲醇中加入16.5mmol亚硫酰氯，然后少量多次地加入11mmol D-甲硫氨酸。添加完毕后，使反应混合物升至室温。12小时后，将反应混合物减压浓缩，得到晶体，用乙醚/甲醇混合液重结晶，分离得到预期产物。熔点143℃步骤I2-(异丁基氨基)-4-(甲硫基)丁酸甲酯在0℃和惰性气氛下，将4.3mmol三乙胺加到3.9mmol步骤H获得的化合物和7.8mmol异丁醛在20ml甲醇中的溶液中。在室温反应6小时后，将反应混合物冷却到0℃并用40分钟加入7.8mmol硼氢化钠。添加完毕后，在0℃继续搅拌30分钟，之后加入碳酸氢钠水溶液水解该反应混合物。用乙醚萃取后，合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩。经硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇99/1)分离，得到预期产物。步骤J2-{异丁基-[(4-苯基)苯基磺酰基]氨基}-4-(甲硫基)丁酸甲酯在0℃下，将3.71mmol三乙胺和1.8mmol 4-联苯基磺酰氯加到1.8mmol步骤I获得的化合物在15ml二氯甲烷中的溶液中。使该反应混合物升至室温并搅拌12小时，之后倾入水中，用二氯甲烷萃取。合并的有机相用2N盐酸溶液洗涤，然后用碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，过滤并减压浓缩。经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇20/1)，得到糖浆状预期产物。步骤K2-{异丁基-[4-(联苯基)磺酰基]氨基}-4-(甲硫基)丁异羟肟酸按照实施例1步骤D～F描述的方法处理步骤J得到的产物，获得预期产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝437；[M+-CONHOH]m/z＝376实施例62-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁异羟肟酸制备12-[(2-氧代四氢-3-噻吩基)氨基]乙酸叔丁酯在0℃下，将5.5mmol二异丙基乙基胺，然后将5.5mmol溴乙酸叔丁酯加到5mmol硫内酯的10ml乙腈溶液中。搅拌30分钟后，将反应混合物升至室温并放置12小时。将其减压浓缩，随后经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇97/3)，得到预期产物。步骤B2-{[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-(2-氧代四氢-3-噻吩基)氨基}乙酸叔丁酯按照实施例1步骤B的方法，使用制备例1得到的产物为反应物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝402步骤C4-(苄硫基)-2-{[2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁酸甲酯按照实施例1步骤C的方法，使用上面步骤获得的产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝524步骤L2-{[3-(苄硫基)-1-(甲氧羰基)丙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}乙酸将0.8mmol步骤C获得的化合物在2ml二氯甲烷和3ml三氟乙酸中的溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩后，残余物经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇95/5)，得到预期产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝468步骤M2-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁酸甲酯在0℃下，将1.8mmol苯并三唑-1-基三(二甲氨基)六氟磷酸鏻，然后将3mmol二异丙基乙基胺加到1.5mmol步骤L获得的化合物和1.6mmol氨基二苯甲烷在20ml乙腈中的溶液中。然后使该反应混合物缓慢地升至室温。反应6小时后，蒸除乙腈，残余物溶于乙酸乙酯中，用饱和氯化钠溶液洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。经硅胶色谱分离(二氯甲烷/甲醇20/1)，得到预期产物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝633步骤N2-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁异羟肟酸按照实施例1步骤D～F的方法，使用上面步骤M获得的产物作为反应物。质谱FAB+∶(M++1)m/z＝634实施例72-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁异羟肟酸按照实施例6描述的方法，在步骤B中使用4-联苯基磺酰氯作为反应试剂，获得产物。实施例84-{[(1-甲基-3-哌啶基)甲基]硫基}-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤B中使用实施例3中使用的试剂，在步骤C中使用3-氯甲基-1-甲基哌啶作为反应试剂，获得产物。实施例94-[(1-萘甲基)硫基]-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤C中使用1-(氯甲基)萘作为反应试剂，获得产物。实施例104-{[(苯硫基)甲基]硫基}-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤B中使用实施例3中使用的试剂，在步骤C中使用甲硫基苯基氯作为反应试剂，获得产物。实施例114-[(3-吡啶甲基)硫基]-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤B中使用实施例3中使用的试剂，在步骤C中使用3-氯甲基吡啶作为反应试剂，获得产物。实施例124-{[2-(四氢-2H-吡喃基)甲基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤C中使用2-(氯甲基)-四氢-2H-吡喃作为反应试剂，获得产物。实施例134-[(苯硫基乙基)硫基]-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸按照实施例1步骤A～F描述的方法，在步骤C中使用乙硫基苯基氯作为反应试剂，获得产物。本发明化合物的药理学研究实施例14金属蛋白酶的酶抑制作用对所有或某些下列四种纯化的人体酶在溶液中进行化合物的酶筛选试验间质胶原酶MMP-1、明胶酶MMP-2和MMP-9、基质溶素-1MMP-3。用适应96孔培养板模式的荧光测定法测定活性。MMPs的活化该步骤可使金属酶的酶原形式转化为可裂解所用底物的活化形式。在37℃和有2mM APMA(4-氨基苯基醋酸汞)的存在下，以等份量贮存于-80℃的市售酶在50mM Tris缓冲液、200mM NaCl、5mM CaCl2、0.1％Brij 35(pH7.7)中经30分钟(MMP-2和MMP-9)或1小时(MMP-1和MMP-3)以355μg/ml(MMP-1)、444μg/ml(MMP-2)、187μg/ml(MMP-3)和500μg/ml(MMP-9)的酶浓度稀释。荧光试验该原理基于在活化酶的存在下，肽模拟底物裂解后出现荧光。在活化酶MMP-1、MMP-2和MMP-9的作用下，肽Dnp-Pro-β-环己基-Ala-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(N-Me-Abz)-NH2(Bachem，瑞士)在甘氨酸和半胱氨酸之间裂解(分析生物化学(Anal.Biochem.)1993，212，58-64)。在活化酶MMP-3的作用下，肽(7-甲氧基香豆素-4-基)-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met-Lys(Dnp)-NH2(Bachem)在Ala和Nva之间裂解(分析生物化学，1993，212，58-64)(生物化学，1992，31，12618-12623)。该试验在含有稀释的纯化酶的50mM Tris缓冲液、200mM NaCl、5mM CaCl2、0.1％Brij 35(pH 7.7)中进行(MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9酶的终浓度分别为1.25、2、1.25和1μg/ml)。将酶本身或酶与试验产物(10∶10稀释5个剂量中最小者)一起预温育后，以总终体积为100μl(96孔培养板模式)的量加入20μM(终浓度)适宜肽的模拟底物以引发裂解反应。在潮湿环境下、37℃温育6小时后，将含样品的培养板在安装有分别为340nm和440nm的激发滤器和发射滤器的细胞荧光计(Cytofluor 2350，Millipore PerSeptiveSystems，法国)中读数。在各种条件下的试验均重复三次。然后由作为试验量函数显示裂解产物的荧光强度的曲线测定抑制50％反应的浓度(IC50)。每种试验至少进行两次。
在上面的试验中，本发明的化合物对MMP-1酶表现出的IC50值为100～200nM，对MMP-2、MMP-3和MMP-9酶表现出的IC50值为0.2～50nM。实施例15药物组合物片剂制备每片含20mg活性成分的1000个片剂的配方实施例2的化合物 20g羟丙基纤维素2g小麦淀粉10g乳糖100g硬脂酸镁3g滑石3g
权利要求
1.式(I)化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐
其中R1表示-直链或支链的(C1-C6)烷基(可任意地被一个或多个相同或不同的取代基取代，所述取代基各自彼此独立地选自羟基、卤素、直链或支链的(C1-C6)烷氧基、巯基、支链或支链(C1-C6)烷硫基、芳基、直链或支链(C1-C6)酰基和氨基，氨基自身还可任意地被一个或两个相同或不同的直链或支链的(C1-C6)烷基、环烷基或芳基取代)，-直链或支链(C1-C6)酰基，-环烷基，-芳基，-杂环基，-氨基羰基-(C1-C4)烷基，氨基部分可任意地被一直链或支链的(C1-C6)烷基所取代，所述(C1-C6)烷基可任意地被一个或多个相同或不同的选自芳基、芳基-直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基和直链或支链的(C1-C6)烷基氨基羰基的基团所取代，R2表示直链或支链的(C1-C4)亚烷基，R3表示X或Y基团，其中·X表示直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)酰基、直链或支链(C1-C6)烷氧羰基、氨基-直链或支链(C1-C6)烷基(该氨基部分自身可任意地被一个或两个相同或不同的直链或支链(C1-C6)烷基取代)、羟基-直链或支链(C1-C6)烷基、羧基-直链或支链(C1-C6)烷基、氨基羰基-直链或支链(C1-C6)烷基、巯基-直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基、芳基或杂环基，和·Y表示式T-U-V-的基团(V部分与硫原子键合)，其中-T表示芳基或杂环基，-U表示一单键、硫原子、氧原子、NH、C＝O或式-R8O-、-R8S-、-R8NH-、-R8OR9-、-R8SR9-、-R8-NH-R9-、-R8-CO-R9-或-R9-的基团，其中R8表示直链或支链(C1-C6)亚烷基并且R9表示亚芳基或亚杂芳基，应该理解在这些基团中R8键于Y基团的T部分上并且R9或杂原子键于Y基团的V部分，-V表示直链或支链(C1-C6)亚烷基，R4表示-当R3表示Y基团时，表示选自下述的基团直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基、芳基、芳基-直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基-直链或支链(C1-C6)烷基、被杂环基取代的直链或支链(C1-C6)烷基和杂环基，-或者当R3表示X或Y基团时，表示选自下述的基团联芳基、芳基杂芳基和杂芳基芳基。
2.权利要求1的式I化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐，其特征在于其中R3表示上文定义的基团X并且R4表示联芳基、芳基杂芳基或杂芳基芳基。
3.权利要求1的式I化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐，其特征在于其中R3表示上文定义的基团Y并且R4表示直链或支链(C1-C6)烷基、环烷基、芳基、芳基-直链或支链(C1-C6)烷基，环烷基-直链或支链(C1-C6)烷基、被杂环基取代的直链或支链(C1-C6)烷基或杂环基。
4.权利要求1的式I化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐，其特征在于其中R3表示基团Y并且R4表示联芳基、芳基杂芳基或杂芳基芳基。
5.权利要求1的式I化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐，其特征在于其中R1表示直链或支链(C1-C6)烷基。
6.权利要求1-5任一项的式I化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐，其特征在于R1表示异丁基。
7.权利要求1的式I化合物，为4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸。
8.权利要求1的式I化合物，为4-{[4-(苯基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸。
9.权利要求1的式I化合物，为4-(苄硫基)-2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸。
10.权利要求1的式I化合物，为4-{[4-(苄氧基)苄基]硫基}-2-{异丁基-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}丁异羟肟酸。
11.权利要求1的式I化合物，为2-{异丁基-[(4-联苯基)磺酰基]氨基}-4-(甲硫基)丁异羟肟酸。
12.权利要求1的式I化合物，为2-{[2-(二苯甲基氨基)-2-氧代乙基]-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-4-(苄硫基)丁异羟肟酸。
13.制备权利要求1的式(I)化合物的方法，该方法的特征在于使用式(II)化合物作为原料
其中R2如式(I)中所定义，Ra和Rb形成一个连接羰基与硫原子的单键，或者Ra表示直链或支链的(C1-C6)烷氧基并且Rb表示直链或支链的(C1-C6)烷基，在常规有机合成的条件下，用式(II’)化合物取代式(II)化合物的伯胺官能基R1-Z (II’)其中R1如式(I)所定义并且Z表示有机化学中的常见离去基团，得到式(III)化合物
其中R1和R2如式(I)中所定义并且Ra和Rb如上文所定义，式(III)化合物在碱性条件下用式(IV)化合物处理R4-SO2-Cl (IV)其中R4如式(I)所定义，得到式(V)化合物，
其中R1、R2、R4、Ra和Rb定义如上，当Ra和Rb形成一单键时，式(V)化合物在甲醇和钠的存在下用式(VI)化合物处理R3-Hal (VI)其中R3如式(I)所定义并且Hal表示卤素原子，得到式(VII)化合物
其中R1、R2、R3和R4如式(I)所定义，式(VII)与式(V)化合物合起来构成式(IX)化合物
其中R1、R2、R3、R4和Ra如上文所定义，式(IX)化合物的酯官能基在常规条件下水解，得到式(X)化合物
其中R1、R2、R3和R4如上文所定义，式(X)化合物直接用羟胺盐酸盐处理或用O-取代的羟胺处理，后者随后在常规操作条件下脱保护，得到上文定义的式(I)化合物，如果需要，可采用常规纯化技术纯化式(I)化合物，可任意地采用常规分离技术将其分离为其异构体，并且如果需要，可用可药用酸或碱将其转化为加成盐。
14.一种药物组合物，含有至少一种权利要求1～12任一项的式(I)化合物作为活性成分，该药物组合物可以是所述的活性成分本身，也可以结合有一种或多种惰性的无毒可药用赋形剂或载体。
15.权利要求14的药物组合物，含有权利要求1～12任一项的活性成分，用作金属蛋白酶抑制剂。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物及其异构体和其与可药用酸或碱的加成盐:其中R
文档编号C07D309/00GK1245798SQ99117519
公开日2000年3月1日 申请日期1999年8月10日 优先权日1998年8月10日
发明者S·哈尼斯安, G·阿塔斯, G·图克, D-H·加格那德, P·兰那德 申请人:阿迪尔公司