专利名称：土霉素纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种土霉素纯化方法。具体地说就是采用酸碱法进行行重结晶，其中加净化剂和膜过滤进行纯化的方法。
作为兽药，土霉素碱注射液(特效米先)由于其刺激性小，在国内外得到广泛应用。该注射液制备时，国内厂家多采用卫生部标准WS1-C2-001-89的普通土霉素碱为原料。由于原料杂质含量较高，并含有相当量的细菌和细菌内毒素，制得成品细菌和热源难以控制，稳定性也较差。欧美国家的厂家现多采用经纯化后的“注射级”土霉素原料，克服了上述缺点。目前国内尚未见有关土霉素纯化方法的报道，国外曾报道用醋酸丙酮进行纯化的方法，此技术已由美国专利US5387703公开。
本发明的目的是提供一种土霉素纯化方法，用此法可得到符合英国药典和美国药典现行版要求的，具有较高含量、较低杂质吸收度、无菌、细菌内毒素检查合乎要求的土霉素原料。
在达到上述目的中，本发明提供了一种土霉素纯化方法，此法包括先将土霉素溶解在含有盐酸和另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸的混合水溶液中，用碱回调至一定pH值，加入净化剂，而后用5-10万分子量超滤膜过滤除去净化剂及其吸附的杂质，再用6000-10000分子量超滤膜除菌、除热源，最后按无菌操作要求，稀释加碱调pH结晶，经分离、干燥得到成品。
本方法中所用土霉素碱原料应符合英国药典98版要求，溶解浓度一般在30000-80000u/ml之间，溶解温度为23-30℃，溶解时间为30分钟。
本方法所用酸溶液包括盐酸(分析纯或化学纯)和另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸(分析纯或化学纯)的混合水溶液。盐酸浓度为0.15-0.25mol/L；另一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸可用磷酸、乳酸或枸橼酸等，浓度为0.05-0.20mol/L。用盐酸有助于土霉素尽快溶解，而另外一种酸在结晶时能保证得到较好晶形。
本方法回调用碱为氢氧化钠或氨水，均为分析纯或化学纯，加入时浓度为1-3mol/L，回调pH值控制在1.40-1.70之间。回调目的是保证土霉素溶液处于一相对温和的pH环境，便于后步操作，但回调pH不可过高，否则过滤前土霉素会从溶液中析出。
本方法所用净化剂为黄血盐钠和硫酸锌，黄血盐钠和硫酸锌在水溶液中反应形成亚铁氰化锌钠胶状沉淀，这种沉淀可吸附溶液中的有色蛋白杂质，从而达到净化的目的。黄血盐钠符合GB6708-86的要求，硫酸锌符合HG/T2326-92的要求。二者用量均为土霉素碱重量的2-4％。操作时分别用10倍量的水溶解，而后在搅拌下分别加入二溶液，纯化40-60分钟后过滤。
本方法采用5-10万分子量聚砜材质中空纤维超滤膜除去净化剂及其吸附杂质，同时也可达到除菌的目的，采用6000-10000分子量超滤膜可除去细菌内毒素。
本方法利用土霉素两性化合物的性质，加碱调pH接近其等电点而结晶。所用碱为分析纯或化学纯的氢氧化钠，加入时浓度1-3mol/L，同时碱溶液中加入3‰浓度的亚硫酸钠，在向结晶液中加入时释放二氧化硫对结晶起到漂白作用。结晶液浓度为10000-15000u/ml，结晶温度28-31℃，结晶时间为60分钟，加碱后最终母液pH值控制在2.90-4.00范围内。
本纯化方法用水均为去离子水，符合美国药典23版纯水项下的要求。
本发明重要特点是提高了土霉素含量(≥98.5％)，降低了杂质吸收度(490nm＜0.02)，同时得到无菌、细菌内毒素符合要求的产品，按上述纯化方法，连续试制五批样品，分析数据如下
注杂质吸收度和含量按英国药典98版土霉素项下的方法检查和测定，无菌检查和细菌内毒素按美国药典23版及其增补项要求检查。
下列实例将进一步说明本发明。
实例1工艺配方无盐水800ml4M盐酸55ml浓磷酸7.0ml土霉素60g黄血盐钠1.8g硫酸锌1.8g工艺步骤按工艺配方将盐酸和浓磷酸加入无盐水中，搅拌均匀，并加热至24-26℃，加入土霉素，溶解30分钟后加入2MNaOH适量，回调pH至1.45左右，而后加入事先用无盐水溶解并经过滤的黄血盐钠溶液，搅拌均匀后再缓缓加入硫酸锌溶液，搅拌40分钟，先用5万分子量超滤膜过滤，再用经消毒处理后的6000分子量超滤膜过滤，滤液用经6000分子量超滤膜过滤后的无热源水稀释至约12000u/ml浓度，加热至28-30℃，加2M NaOH适量进行结晶，使60分钟后母液pH控制在2.90-3.10范围内，最后经分离、干燥得到成品。6000分子量超滤膜以后的各项操作均按无菌操作要求进行。本法收率在83.0％左右。
实例2工艺配方无盐水800ml4M盐酸40ml浓磷酸3.0ml土霉素40g黄血盐钠1.5g硫酸锌1.5g工艺步骤除回调pH1.60左右外，其他操作用实例1，制得成品收率在80.0％左右。
实例3工艺配方无盐水800ml4M盐酸55ml80％乳酸10.0ml土霉素60g黄血盐钠1.8g硫酸锌1.8g工艺步骤按实例1相同步骤进行操作，结晶最终pH控制在3.4-3.8范围内。成品收率在85.0％左右。
上述实例只能认为是对本发明的说明，而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。
权利要求
1.一种土霉素纯化方法，其特征在于它是先将土霉素溶解在含有盐酸和另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸的混合水溶液中，用碱回调至一定pH值，加入净化剂，而后分别用5-10万分子量超滤膜和6000-10000分子量超滤膜过滤，最后按无菌操作要求经稀释加碱调节pH值结晶。
2.按照权利要求1的方法，其特征在于所述另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸是指磷酸、乳酸或枸橼酸。
3.按照权利要求1的方法，其特征在于所述土霉素溶解浓度为30000-80000u/ml。
4.按照权利要求1的方法，其特征在于所述回调用碱为氢氧化钠或氨水，回调pH值在1.40-1.70之间。
5.按照权利要求1的方法，其特征在于采用5-10万分子量聚砜材质中空纤维超滤膜除去净化剂及其吸附的杂质，采用6000-10000分子量超滤膜除菌，除细菌内毒素。
6.按照权利要求1的方法，其特征在于所述结晶最终pH值控制在2.9-4.0范围内。
全文摘要
本发明公开了一种土霉素纯化方法。此法包括先将土霉素溶解在含有盐酸和另外一种在pH2.8—4.0有缓冲作用的酸的混合水溶液中,用碱回调至一定pH值,加入净化剂,而后经二次超滤,最后稀释,按无菌条件加碱调pH值结晶。此法可得到较高纯度、无菌、细菌内毒素合乎要求的土霉素原料。
文档编号C07C237/26GK1249303SQ9911876
公开日2000年4月5日 申请日期1999年9月9日 优先权日1999年9月9日
发明者郝运杰, 何建毅, 刘学合, 王文熳, 马星美, 李佳 申请人:石家庄市华曙联合制药厂