专利名称：一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法
技术领域：
本发明涉及茶叶深加工领域，特别涉及一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。
茶提取物是从茶叶中萃取的有效成分的混合物，儿茶素是其中最主要的一类活性成分，儿茶素中又以EGCG、ECG、GCG、EGC最具经济价值，已被列为一种潜在的抗癌药物。以往从茶叶中分离提取上述儿茶素单体的方法采用Sephedax-LH20凝胶柱色谱(WilkinsC.K.et al,J.Sci.Food Agri.,22,1977,480.)和Sephedax-LH20初分离-制备型高效液相色谱再分离(Yuyabe F.Etal,Nippon NogeikagakuKaishi,1989,63(4):845)。其局限性是Sephedax-LH20凝胶价格昂贵,再生使用困难，因而单体生产成本较高；而高效液相色谱则不仅色谱柱昂贵，且设备也较复杂，是一种更不经济的方法。
本发明的目的在于提供一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案它以逆流色谱仪作为分离设备；其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶4～12，水的用量应至少保证使上下相分层，或者所述溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶1～4，乙酸乙酯与醇的容积比为1∶1～3，乙酸和醇的容积比为1∶4～50，水的用量应至少保证使上下相分层，上述烷烃为单一种烷烃或数种烷烃的混合物，上述醇为丙醇、丁醇、己醇或庚醇；并依次按以下步骤进行1)．配置溶剂系统，待静止分层后，将上、下两相分开备用，将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，取上述溶剂系统的部分下相溶解茶提取物；2)．开启逆流色谱仪，注入上述溶解的茶提取物及剩余的下相；其注入顺序可以是先注入上述溶解的茶提取物然后注入剩余的下相，也可以是先注入剩余下相的一部分以预平衡再注入上述溶解的茶提取物然后注入余下的下相，也可以是先注入剩余的下相然后注入上述溶解的茶提取物；3)．定时收集洗脱液。
在采用以上技术方案的同时，本发明还可采用以下进一步的技术方案所述烷烃以石油醚为最佳，所述醇以正丁醇为最佳。
由于采用了上述技术方案，逆流色谱仪为普通仪器，它较高效液相色谱仪远为简单便宜，其溶剂系统由普通溶剂配制，价格也远较现有技术中的色谱柱便宜，因此是一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。
图1为实施例5、6、7所采用的10L-V高速逆流色谱仪的示意图。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶水=1∶8∶20，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占23.80％、ECG占7.0％、GCG占14.80％、EC占7.22％、EGC占10.90％、DL-C占4.6％、咖啡因占7.57％、其余24％为不明物。
取石油醚30ml、乙酸乙酯240ml、水600ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物3克于50ml试剂瓶中，用40ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至800转/min，然后以1ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以1ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，每种儿茶素单体的流出时间段可在第一次制备时通过监测仪确定。收集各单一组分干燥得儿茶素单体2090mg，其中EGCG720mg纯度81％、ECG220mg纯度87％、GCG占450mg纯度90％、EGC350mg纯度75％、EC+DL-C350mg。
实施例2本实施例的溶剂系统采用戊烷∶乙酸乙酯∶水=1∶5∶10，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取戊烷60ml、乙酸乙酯300ml、水600ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物1.5克于50ml试剂瓶中，用40ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至600转/min，然后以1.4ml/min的流速泵入下相30分钟，再将茶提取物溶液以1.4ml/min的流速泵入色谱柱，待进完后改用余下的下相以1.4ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG800mg纯度87％。
实施例3本实施例的溶剂系统采用庚烷∶乙酸乙酯∶水=1∶11∶40，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取庚烷25ml、乙酸乙酯275ml、水1000ml，于1500ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物3克于50ml试剂瓶中，用100ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至900转/min，然后以1.4ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以1.4ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG1700mg纯度87％。
实施例4本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶正丁醇∶水∶乙酸=1∶1.5∶3∶12∶0.60，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取石油醚40ml、乙酸乙酯60ml、正丁醇120ml、水480ml、乙酸24ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物1.5克于50ml试剂瓶中，用12ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至400转/min，然后以2ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以2ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG780mg纯度87％。
实施例5本实施例的逆流色谱仪采用10L-V高速逆流色谱仪，其结构如下参照附图1。它包括壳体1、可绕其中轴2旋转的分离柱3及与分离柱连接的引入引出管4、5，分离柱的外侧还设有可旋转的引入引出管的固定框架6，其旋转轴与上述中轴同轴线，引入引出管与分离柱的连接端穿过中轴，另一端穿过旋转轴的被动端7。
固定框架6的一端设有连接架8，并通过连接架与电机9的动力输出轴10联结，旋转轴的被动端7的轴承11设在壳体1上。中轴的轴承12、13设在固定框架6上，分离柱的动力输入轴14穿过框架，其两端同轴设有齿轮15、16，齿轮15与动力输出轴10上的同轴齿轮17通过皮带或过桥齿轮18连接，齿轮16与中轴上的同轴齿轮19齿接。组成分离柱的管的内壁呈螺纹状或波纹状，并为Teflon管。所述引入引出管为Teflon管。
本实施例的溶剂系统采用己烷∶乙酸乙酯∶庚醇∶水∶乙酸=1∶2.5∶7∶25∶0.35，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取己烷1600ml、乙酸乙酯2400ml、庚醇10200ml、水40000ml、乙酸560ml，于100000ml混合-分层罐中混合，静置分层后，将上下两相分开备用。将上相以40ml/min的流速泵入或用气压方式压入逆流色谱柱。称取茶提取物120克，用2000ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至25转/min，然后以5ml/min的流速泵入下相1小时以预平衡，再以30ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以5ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。定时收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG62g纯度85％。
实施例6本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶戊醇∶水∶乙酸=1∶3.5∶4.2∶35∶0.14，逆流色谱仪采用10L-V高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取石油醚2500ml、乙酸乙酯8750ml、戊醇10500ml、水87500ml、乙酸350ml，于120000ml混合-分层罐中混合，静置分层后，将上下两相分开备用。将上相以40ml/min的流速泵入或用气压方式压入逆流色谱柱。称取茶提取物60克，用1500ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至15转/min，然后以30ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以10ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。定时收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG42g纯度87％。
实施例7本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶正丁醇∶水∶乙酸=1∶4∶8∶40∶0.2，逆流色谱仪采用10L-V高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取石油醚2500ml、乙酸乙酯10000ml、正丁醇20000ml、水100000ml、乙酸500ml，于150000ml混合-分层罐中混合，静置分层后，将上下两相分开备用。将上相以40ml/min的流速泵入或用气压方式压入逆流色谱柱。称取茶提取物180克，用1500ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至15转/min，然后以30ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以5ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。定时收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG93g纯度82％。
实施例8本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶正丁醇∶水∶乙酸=1∶2∶4∶45∶0.08，逆流色谱仪采用美国CPC-828正交轴型高速逆流色谱仪(Y.Shibusawa and Y.Ito,J.Chromatogr.596:118～122,1992)，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。
取石油醚100ml、乙酸乙酯200ml、正丁醇400ml、水4500ml、乙酸8ml，于6000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以20ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物10克，用150ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至500转/min，然后以20ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以3ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。定时收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG5g纯度82％。
权利要求
1.一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法，其特征在于它以逆流色谱仪作为分离设备；其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶4～12，水的用量应至少保证使上下相分层，或者所述溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶1～4，乙酸乙酯与醇的容积比为1∶1～3，乙酸和醇的容积比为1∶4～50，水的用量应至少保证使上下相分层，上述烷烃为单一种烷烃或数种烷烃的混合物，上述醇为丙醇、丁醇、已醇或庚醇；并依次按以下步骤进行1)．配置溶剂系统，待静止分层后，将上、下两相分开备用，将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，取上述溶剂系统的部分下相溶解茶提取物；2)．开启逆流色谱仪，注入上述溶解的茶提取物及剩余的下相；3)．定时收集洗脱液。
2.如权利要求1所述的一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法，其特征在于所述烷烃以石油醚为最佳，所述醇以正丁醇为最佳。
全文摘要
本发明提供了一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法,它以逆流色谱仪作为分离设备;其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成,或者由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成。本发明所采用的设备简单,其溶剂系统由普通溶剂配制,价格也相当便宜,是一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。
文档编号C07D311/00GK1301698SQ9912760
公开日2001年7月4日 申请日期1999年12月28日 优先权日1999年12月28日
发明者杜琪珍 申请人:杜琪珍