含有抗真菌多肽的抗头屑组合物的制作方法

专利名称：含有抗真菌多肽的抗头屑组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有抗真菌多肽的抗头屑组合物，抗真菌多肽在治疗或预防头屑中的应用，治疗或预防头屑的方法，和抗头屑多肽在制备用于治疗或预防头屑的组合物中的应用。
背景技术：
头屑是头皮功能失调引起的，但它不认为是皮肤病，因此，头屑应当和可能在早期阶段与它类似的疾病区分开来。尽管头屑只是一种美容问题，但是对于治疗这种症状的领域仍然进行了大量的研究。
广泛认可的是，头屑主要由酵母菌瓶形酵母(Pityrosporum ovale)引起，因此，抑制瓶形酵母生长的物质可能在治疗或预防头屑中有用。
传统上用于治疗头屑的活性物质包括例如各种煤焦油制品、水杨酸、一硫化硒和双(2-巯基吡啶氧化)锌。
新近，WO 95/27471描述了一种含有酮康唑或elubiol的新抗头屑洗发剂。
然而，现有物质中一些有非常令人不快的气味，而另一些则是只可在医疗指导和控制之下应用到头皮上的非常烈性的物质。因此，有必要开发容易生产(如通过微生物)，又不产生不愉快的气味，并且没有有害性质的物质。
本发明概要令人吃惊地发现，具有

图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽即使在低浓度下也能有效阻止瓶形酵母的生长。
因此，在第一方面，本发明涉及适合应用于人的头发或头皮的抗头屑组合物，其包含有效量的具有图1所显示之氨基酸序列的抗真菌多肽或其变体，所述变体是I)可与如下抗体反应的多肽，所述抗体可与具有图1所示氨基酸序列的多肽的至少一个表位反应，或II)其氨基酸序列与图1所示多肽的氨基酸序列基本同源的多肽。
在第二方面，本发明涉及以上定义的抗真菌多肽在治疗或预防头屑中的应用。
在第三方面，本发明涉及治疗或预防头屑的方法，所述方法包括用有效量的以上定义的抗真菌多肽接触头发。
最后，本发明还涉及以上定义的抗真菌多肽在制备用于治疗或预防头屑的组合物中的应用。
附图的简要说明图1显示本发明抗真菌多肽的全长氨基酸序列。
图2是生长了酵母瓶形酵母的微量滴定板的示意图，参见实施例1。
本发明的详述描述抗真菌多肽及其变体在本文中，按其传统意义使用氨基酸的三字母密码。除非明确指出，本文提到的氨基酸是L型氨基酸。
本文所用述语“抗真菌多肽”旨在包括所述多肽的线性和活性折叠结构，而且，在适当的地方，可和述语“抗真菌蛋白”互换使用。
与抗真菌多肽联用的述语“变体”是指具有图1所示氨基酸序列的多肽衍生出的多肽或天然存在的变体。典型地，该变体与天然抗真菌多肽有一个或多个氨基酸残基不同，这一个或多个氨基酸残基可以从所述多肽N末端或C末端的一端或两端插入或缺失，也可以在所述多肽氨基酸序列内部的一个或多个位点插入或缺失，或在所述多肽氨基酸序列内部或一端或两端被一个或多个氨基酸残基替代。
而且，本发明的变体具有上述特性I)和II)的一项或两项。
特性I)，即本发明变体与如下抗体的反应性，其中所述抗体抗具有下文图1所示氨基酸序列的多肽的至少一个表位或与之反应。该特性可使用按下文材料和方法部分标题“抗AFPP抗体的制备”中的描述制备的抗体制品来测定。抗体反应性可采用本领域已知的方法来测定，所述方法例如Western印迹或径向免疫扩散分析，例如Hudson等1989所描述的方法。
上文所述AFPP同源性用显示第一个序列由第二个序列衍生的两个蛋白质序列之间的一致性程度来确定。该同源性可通过本领域已知的计算机程序来适当确定，如GCG程序包中提供的GAP(Wisconsin程序包的程序手册(Program Manual for the Wisconsin Package)，第8版，1994年8月，Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711)(Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.，(1970)，分子生物学杂志(Journal of Molecular Biology)，48，第443—453页)。使用空缺(Gap)和下列用于多肽序列比较的设定空缺建立罚分3.0，空缺延伸罚分0.1，本发明类似DNA序列编码的多肽的成熟部分显示与图1所示氨基酸序列的成熟部分有优选至少约60％，如至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％，更优选至少约97％，最优选至少约99％的一致性程度。
优选地，AFPP包含图1的氨基酸序列；或其等位变体；或其具有AFPP活性的片段。
AFPP的片段是具有一个或多个选自该氨基酸序列氨基和/或羧基末端的氨基酸的多肽。等位变体是指一个基因位于相同染色体座位的两个或多个可替代形式的任意一个。等位变异通过突变天然发生，可导致种群内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的蛋白质没有改变)，也可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是基因等位变体所编码的多肽。
同源AFPP的氨基酸序列与图1的氨基酸序列的不同可以是一个或多个氨基酸残基的插入或缺失和/或由不同的氨基酸残基替代一个或多个氨基酸残基。优选地，氨基酸改变在性质上比较小，即是不显著影响蛋白质折叠和/或活性的保守氨基酸替代；小的缺失，典型是1至约30个氨基酸的缺失；小的氨基或羧基末端突出，如氨基末端的甲硫氨酸残基；不超过约20—25个残基的小的接头肽；通过改变净电荷或其它功能便于纯化的小的突出，如聚组氨酸片段、抗原表位或结合域。
本文所用述语“有效量”是指具有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽或其变体的量，该量足以防治(从而除去或至少是限制)由于头屑引起的起皮。
典型地，根据本发明所使用的多肽来自微生物。尽管可设想抗真菌多肽或其变体可通过其它微生物如细菌、原生动物和藻类产生，但该多肽通常来自真菌，特别是曲霉属(Aspergillus)的真菌。
正如WO 94/01459所详细说明的，已在真菌种巨大曲霉(A.giganteus)的若干株系中发现具有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽，所述株系的一个例子是在真菌菌种保藏中心(Centraallbureauvoor Schimmelcultures，CBS)保藏的、保藏号为CBS 526.65的巨大曲霉株。
但是，适于根据本发明的应用的抗真菌多肽或其变体可期待来自其它真菌种，特别是其它曲霉属物种，如A.pallidus、棒曲霉(A.clavatus)、A.longivesica、A.rhizopodus和A.clavatonanicus，因为这些种和巨大曲霉之间存在近缘的关系。
如上所述，抗真菌多肽的变体可以是天然来源的变体，即从任何一种以上列举的真菌种分离的多肽，也可以是基于抗真菌多肽的氨基酸序列知识构建的、合成产生的变体。
如前文所述，抗真菌多肽的其它变体也可用于本发明的目的。因此，可以考虑，使用本领域已知的技术，如NMR(如蛋白质工程(ProteinEngineering)，编者Oxender，D.L.和Fox，C.F.，Alan R.Liss，Inc.New York(1987)所描述的)、X-射线衍射、计算机模拟等，根据对图1所示抗真菌多肽的构象结构和活性位点的分析，可鉴定图1所示多肽的有益的、也可用于治疗或防止头屑的变体。当鉴定了抗真菌多肽氨基酸序列的一个或多个有趣的改变时，即可通过适当修改编码该抗真菌多肽的核苷酸序列来制备相应的变体。
先前，Nakaya等(1990)公开了巨大曲霉抗真菌多肽的氨基酸序列。Wnendt等(1990)描述了相应的cDNA序列，而WO 91/19738描述了该cDNA序列在构建能产生该多肽的转基因植物中的应用。本文给出的实施例中所用的抗真菌多肽(即具有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽)与WO 91/19738中公开的抗真菌多肽有如下不同Asn-4已被Pro替代，Ala-24已被Gly替代，Lys-32已被Arg替代，Phe-42已被Leu替代，Tyr-50已被His替代。
因此，图1所示多肽用于治疗或预防头屑的有趣变体的一个具体例子是包含图1所示氨基酸序列，优选由该序列组成的抗真菌多肽，其中第4位的Pro用Asn替代，第24位的Gly用Ala替代，第32位的Arg用Lys替代，第42位的Leu用Phe替代，和/或第50位的His用Tyr替代。
另一个有趣变体公开于WO 94/01459。WO 94/01459所公开的氨基酸序列与图1所示氨基酸序列有如下不同Pro-4被Asp替代，Gly-24被Ala替代，Arg-32被Val替代，Leu-42被Phe替代，His-50被Tyr替代。
因此，图1所示多肽用于治疗或预防头屑的有趣变体的另一个具体例子是包含图1所示氨基酸序列，优选由该序列组成的抗真菌多肽，其中第4位的Pro用Asp替代，第24位的Gly用Ala替代，第32位的Arg用Val替代，第42位的Leu用Phe替代，和/或第50位的His用Tyr替代。
然而，可以设想，除以上提到的那些外，其它变体也可能在头屑的治疗或预防中有用。因此，图1所示抗真菌多肽第4、24、32、42和50位的一个或多个氨基酸残基被其它天然存在的氨基酸残基替代所产生的这些变体的根据本发明的应用，也包括在本发明的范围之内。
图1所示的抗真菌多肽及其变体可通过本领域已知的方法制备。WO 94/01459中给出了图1所示多肽的制备的详细描述。抗头屑组合物尽管为了简便，本文所述组合物通常被称为“洗发剂组合物”，但本领域技术人员应理解，所述抗真菌多肽也可掺入至适合应用于头皮或头发的任何其它组合物中。因此，包含所述抗真菌多肽的这类非洗发剂组合物也包括在本发明的范围之内。这些其它组合物的例子是溶液、悬浮液、乳状液、凝胶、泡沫、膏状物等。因此，尽管洗发剂是应用本发明抗真菌多肽的目前优选组合物，但可以设想，也可通过其它手段来应用该抗真菌多肽，例如配制成发用凝胶或摩丝、生发水、头发喷雾剂、护发素、头发整理剂等。
可使洗发剂组合物适合油性、干性或正常头发，并且可以按本领域技术人员熟知的方式，如“Woodruff氏成分和配方手册(Woodruff’singredients&formulary handbook)”，1997，Miller Freeman中所描述的方式，制备洗发剂组合物。同样，发用凝胶或摩丝、生发水、头发喷雾剂、护发素等，也可使用用于制备适合应用至头发或头皮上的这种组合物的本领域已知成分和方法来制备。然而，本领域技术人员应清楚，根据本发明的抗头屑组合物不应采用可能会失活抗真菌多肽的成分或方法(如过高的温度)。
活性成分，即含有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽或其变体，在洗发剂组合物以可有效治疗或预防头屑的量使用。
典型地，本发明的洗发剂组合物含有基于该洗发剂组合物总重量计算的约10-7至约10％重量的抗真菌多肽。优选抗真菌多肽的量在约5×10-6到约5％的范围内，如在任一如下子范围内约5×10-6到约0.5％；约5×10-6到约0.1％；约5×10-6到约10-5％；约10-5到约10-4％；约10-4到约10-3％；约10-3到约0.01％；约0.01到约0.1％；约0.1％到约1.0％；和约1.0％到约5.0％。
根据本发明的洗发剂组合物可含有主要用作清洁剂的一种或多种表面活性剂。适当表面活性剂的选择对于本领域技术人员而言是普通常识问题。通常在洗发剂组合物中使用阴离子表面活性剂。该阴离子表面活性剂的例子是烷基硫酸、烷基苯磺酸、烷基砜、α-链烯基磺酸、聚氧乙烯烷基苯基磺酸和聚氧乙烯烷基苯基硫酸的碱金属、铵或羟烷基胺盐。也可使用表面活性剂的混合物。
可包括在根据本发明的洗发剂组合物中的适合表面活性剂的一个具体例子是月桂基醚硫酸钠，其分子式是CH3(CH2)10CH2(OCH2CH2)nOSO3Na，其中n代表具有1-4平均值的数字。
可掺入至本发明洗发剂组合物中的适合表面活性剂的另一个具体例子是椰油基肌氨酸钠。椰油基肌氨酸是肌氨酸(N-甲基甘氨酸)的椰子油脂肪酸酰胺，而椰子脂肪酸是肉豆蔻酸、月桂酸、棕榈酸和硬脂酸的混合物。
可掺入至本发明洗发剂组合物中的适合表面活性剂的其它具体例子包括C14、C15和C16烯属磺酸钠、十二烷基硫酸钠、椰油酰胺丙基氧化胺、月桂酰胺二乙醇胺(1auramido diethanolamine)(月桂酰胺DEA)、椰油酰胺基丙基甜菜碱、油酰胺MIPA磺基丁二酸二钠、椰油酰胺MIPA磺基丁二酸二钠、月桂基醚磺基丁二酸二钠、椰油酰两性羧基甘氨酸盐(cocoaamphocarboxy-glycinate)和MEA磺基丁二酸二钠。
可加至本发明组合物中的另一类有趣表面活性剂是糖表面活性剂。糖表面活性剂形式的表面活性剂的例子包括(a)烷基和/或链烯基多葡糖苷和/或(b)脂肪酸N-烷基多羟基烷基酰胺。
烷基和/或链烯基多葡糖苷(a)可具有如下分子式(I)R1-O-[G]p(I)其中R1＝C4-22烷基和/或链烯基，G＝具有5或6个碳原子的糖残基，p＝1－10。
脂肪酸N-烷基多羟基烷基酰胺(b)可具有如下分子式R2CO-N(R3)-[Z](II)其中R2CO＝C6-22脂族酰基残基，R3＝H、具有1－4个碳原子的烷基或羟烷基，[Z]＝具有3－12个碳原子和3－10个OH基的线性或分支的多羟基烷基残基。
它也包括a)分子式为R1-O-[G]p的烷基和链烯基多葡糖苷和b)C12-22二级2，3-烷基硫酸的碱和/或碱金属盐，其中R1＝C4-22烷基和/或链烯基；G＝具有5或6个碳原子的糖残基，p＝1－10。(I)∶(II)的重量比优选1∶99－99∶1。
还包括脂肪酸N-烷基多羟基烷基酰胺；和糖表面活性剂蔗糖酯、脱水山梨糖醇酯和/或聚山梨酸酯。
糖表面活性剂也可包含10－40％按重量计算的分子式为R1-O-[G]p的烷基和/或链烯基多葡糖苷、10－40％按重量计算的分子式为R2-O-(G)p的烷基和/或链烯基多葡糖苷和80－20％按重量计算的分子式为R3-(OCH2CH2)nO-SO3M的烷基醚硫酸盐，其中R1＝C8-11烷基或链烯基；(G)＝葡萄糖基；p＝1－10，优选1－3；R2＝C12-22烷基或链烯基；R3＝C6-22烷基或链烯基；M＝碱或碱土金属，或铵或链烷醇铵离子，优选Na或Mg；n＝1－20，优选2－7。优选地，R2和R3是独立的C12-14烷基。
糖表面活性剂的另一个例子是聚甘油脂肪酸酯聚氧化烯醚R1R2R3N+-CH(Y)-CH2-O-CH2-C(CH3)2-C(OH)(H)-C(＝O)-NH-CH2-CH2-OHX-(I)，其中R1，R2＝C1-24烷基或C8-24链烯基；R3＝C1-18亚烷基；X-＝单价有机或无机阴离子；Y＝OH或H。
糖表面活性剂也可包括(A)1－5％按重量计算的脂肪醇聚乙二醇醚、1－5％按重量计算的Guerbet醇和1－5％按重量计算的多元醇部分酯，(B)1－5％按重量计算的阴离子聚合物，(C)15－30％按重量计算的脂肪醇聚乙二醇醚硫酸盐，(D)15－30％按重量计算的烷基多葡糖苷；和分子式为RuCO-N(R2)-Z的脂肪酸-N-烷基多羟基烷基酰胺的硫酸化产物，其中，R1CO＝C6-22脂族酰基；R2＝H、C1-4烷基或C1-4羟烷基；Z＝含有3－10个羟基的C3-12多羟基烷基。
糖表面活性剂也可选自分子式(I)的烷基多葡糖苷和分子式(II)的羧酸N-多羟基烷基酰胺R1-O(G)(I)
R2CO-NR3-Z (II)其中R1＝可任选的羟化C1-8烷基；G＝具有5－6个碳原子的糖残基；p＝1－10；R2CO＝C1-8脂族酰基；R3＝H、C1-8烷基或C1-8羟烷基；Z＝含有3－10个OH基团的C3-12多羟基烷基。
本发明的洗发剂组合物还可包含起泡剂如脂肪酸单或二链烷醇酰胺，如例如椰油酰胺MEA(cocamide MEA)(椰子酸单乙醇酰胺的混合物)、椰油酰胺DEA(cocamide DEA)(椰子酸二乙醇酰胺的混合物)、油酰胺DEA和油酰胺DEA。
本发明的洗发剂组合物也可包含一种或多种粘度增强剂以便赋予该洗发剂适当的“稠度”。该粘度增强剂的例子是Carbopol 1342和纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素等。为控制最终洗发剂组合物的粘度，也可加入少量(通常为0.2到5.0％重量)NaCl。
此外，本发明的组合物也可包括一种或多种保存剂如EDTA四钠(乙二胺四乙酸四钠)、quaternium-15(1-(3-氯烯丙基)-3，5，7-三氮杂-1-氮鎓-金刚烷氯化物)、Kathon CG杀虫剂(5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮的混合物)，对羟基苯甲酸酯、羟苯甲酸甲酯、苄醇等。
本领域技术人员将理解，本发明的组合物也可包含其它附助剂如香料、着色剂、不透明剂、调节剂如polyquaternium-7(它是丙烯酰胺和二甲基二烯丙基氯化铵的聚合季铵盐)、珠光剂如乙二醇二硬脂酸酯和乙二醇单硬脂酸酯、抗氧化剂如丁化羟基甲苯(BHT)和丁基化羟基苯甲醚(BHA)、和/或pH调节剂如柠檬酸、磷酸、氢氧化钠等。
此外，除抗真菌多肽外，本发明组合物还可包含一种或多种有治疗活性的成分。这种有治疗活性的成分的例子是羟甲辛吡酮(一种治脂溢性皮炎药，其化学名是1-羟基-4-甲基-6-(2，4，4-三甲戊基)-2(1H)-吡啶酮)、酮康唑和elubiol。
一般地，本发明洗发剂组合物的成分按传统量使用，例如i)10－65％的表面活性剂，
ii)1－10％的起泡剂，iii)0.1－2％的粘度增强剂，iv)足以延缓该洗发剂组合物降解从而提供足够长搁置寿命的保存剂和/或抗氧化剂，v)产生期望范围pH(典型为4到10)的酸、碱或缓冲液，vi)加适量水至100％。
下面给出了含有上文定义的抗真菌多肽的各种洗发剂组合物的许多具体例子(在这些例子中上文定义的抗真菌多肽简称为AFPP)洗发剂组合物I(“用于正常头发的通用型洗发剂)A. 水 50.00％月桂基醚硫酸钠 40.00％椰油酰胺基丙基甜菜碱 5.00％月桂酰胺DEA1.50％AFPP 5×10-6-1.0％B. 柠檬酸 0.07％C. 氯化钠 2.50％D. 香料，着色剂 适量100.00％洗发剂组合物II(“氨基酸洗发剂”)A.水 30.00％B.羟丙基瓜耳胶羟丙基三甲基氯化铵(Hydroxypropyl guar hydroxypropyltrimoniumchloride) 0.30％C.柠檬酸 0.05％D.EDTA四钠 0.10％羟苯甲酸甲酯 0.15％
PCA钠 1.00％月桂基醚硫酸钠 30.00％TEA-椰油基谷氨酸盐(TEA-cocoyl glutamate) 15.00％椰油酰胺基丙基甜菜碱9.50％PEG-150二硬脂酸酯 1.00％E. 月桂酰胺DEA 2.00％F. 甲基氯异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮0.05％盐酸赖氨酸 0.05％脯氨酸 0.05％AFPP5×10-6-1.0％香料0.20％氯化钠 0.80％G. 水 适量100.00％洗发剂组合物III(“Full-Family Ultra中性洗发剂”)A. 水 50.00％着色剂(一种或多种) 适量PEG-80失水山梨糖醇月桂酸酯(和)椰油酰胺基丙基甜菜碱(和)sodium trideceth sulfate(和)月桂酰两性乙酸钠(和)PEG-150二硬脂酸酯(和)月桂基醚-13羧酸钠(和)柠檬酸(和)Quaternium-15(和)EDTA四钠(Miracare BC-10，Rhone-Poulenc)38.50％B. 丁二醇(和)水(和)春黄菊提取物(和)
Aloe barbadensis提取物(和)麦加香脂(Commiphora gileadensis)提取物(和)药蜀葵(Althea officinalis)提取物(Actiplex，Active Organics)1.00％AFPP 5×10-6-1.0％Quaternium-15 0.20％香料 适量C. 柠檬酸 0.10％D. 氯化钠 1.50％水 适量100.00％洗发剂组合物IV(“Marine Poultice洗发剂”)A. 水 30.00％B. 对羟基苯甲酸甲酯 0.05％对羟苯甲酸丙酯 0.15％C. 超微昆布 15.0％Lithothamne Lithothamne T-450 9.00％Marine silts(Int’l Sourcing) 5.00％D. 月桂基醚硫酸铵 32.50％PEG-7甘油椰油酸酯 1.50％E. 香料 适量AFPP 5×10-6-1.0％F. 水 适量100.00％洗发剂组合物V(“中性洗发剂”)A. 水 50.00％B. Polyquaternium-10 0.20％C. 月桂基醚硫酸钠，28％活性 25.00％辛酰/辛酰葡糖苷 8.00％椰油酰胺基丙基甜菜碱，30％活性 9.00％AFPP 5×10-6-1.0％D. PEG-120甲基葡萄糖二油酸酯1.50％E. 氯化钠 0.30％F. 柠檬酸 适量保存剂 适量香料 适量水 适量100.00％洗发剂组合物VI(“营养洗发剂”)A. 月桂基醚硫酸钠 25.00％保存剂 适量PEG-120甲基葡萄糖二油酸酯1.00％水 适量B. Polyquaternium-112.00％水解的胶原 2.00％椰油酰胺基丙基甜菜碱 8.00％油酰胺DEA1.30％可溶性胶原 3.00％水解的乳蛋白 2.00％AFPP 5×10-6－1.0％100.00％洗发剂组合物VII(“含有神经酰胺的燕麦粉洗发剂”)A. 水 15.00％黄原酸胶，0.25％溶液 30.00％B.水(和)甘油(和)羟丙基甲基纤维素(和)葡萄糖醛酸(和)葡萄糖(和)聚丙烯酸甘油酯25.00％AFPP 5×10-6-1.0％C.胶体燕麦粉2.00％D.椰油酰胺DEA 3.00％月桂基醚硫酸钠20.00％异十六烷醇(和)丁二醇(和)神经酰胺3 0.50％E.甲基氯异噻唑啉酮(和)甲基异噻唑啉酮0.05％F.水适量100.00％洗发剂组合物VIII(“蛋白质调节型洗发剂”)A.水35.00％月桂基醚硫酸钠50.00％DL-泛酰醇 2.00％椰油酰胺DEA 4.00％异硬脂酰乳酸钠3.00％B.羟丙基三甲基铵水解的角蛋白2.00％AFPP 5×10-6－1.0％香料 0.20％DMDM内酰脲0.20％C.水适量100.00洗发剂组合物IX(“珠光处理(Pearlescent Treatment)洗发剂”)癸基葡糖苷5.00％羟丙基月桂基二甲基铵水解的小麦蛋白质 4.00％肉豆蔻基醚硫酸钠 27.00％乙二醇二硬脂酸酯(和)月桂基醚-4(和)椰油酰胺基丙基甜菜碱(Euperian PK 300-AM) 3.00％丙二醇(和)水(和)短柄野芝麻(Lamium album)提取物(和)洋常春藤(Hedera helix)提取物(和)松果(松属(Pinus))提取物(和)春黄菊(Anthemis nobilis)提取物(和)豆瓣菜(Nasturtium officinale)提取物(和)Amica montana提取物(和)牛蒡(Arctium lappa)提取物(和)迷迭香(Rosemarinus officinalis)提取物(Prodhyatif Hair Treatment，Pro’Hyg Labs) 5.00％AFPP 5×10-6-1.0％氯化钠2.10％水和保存剂适量100.00％洗发剂组合物X(“用于干性头皮和头屑的洗发剂”)A.水 适量B.硅酸铝镁1.00％C.燕麦(Avena sativa)蛋白(Microat E，Tri-K)1.00％D.EDTA四钠(Kelate 220，Tri-K) 0.20％对羟基苯甲酸甲酯(Trisept M，Tri-K) 0.30％E.羟丙基甲基纤维素
(Methocel J1 2MS，Dow Chem) 1.00％F. 椰油酰胺基丙基甜菜碱 5.00％甘油 2.00％月桂酰基肌氨酸钠 20.00％月桂酰胺DEA 2.00％月桂基醚硫酸钠 20.00％G. 磷酸，调节pH至6.0-6.5适量J. 泛酰醇(DL-泛酰醇，Tri-K) 0.50％咪唑烷基脲(Tristat IU，Tri-K)0.50％AFPP 5×10-6-1.0％100.00％洗发剂组合物XI成份 水平％成份的功能月桂基硫酸酯三乙醇胺 10.00起泡/清洁剂月桂酰基硫酸钠 2.80 同上AFPP 5×10-6－1.0 抗真菌多肽羟丙基甲基纤维素 1.00 增稠剂水/保存剂/香料/等 加至100用NaOH/柠檬酸调节该组合物的pH。洗发剂组合物XII(调节型抗头屑洗发剂)成份 水平％ 成份的功能月桂基硫酸酯三乙醇胺8.00起泡/清洁剂椰油单乙醇酰胺 4.00增泡剂/泡沫稳定剂乙二醇单硬脂酸酯4.00不透明/珠光剂NaCl0.50增稠剂聚乙二醇0.50调节粘度AFPP5×10-6-1.0 抗真菌多肽水/香料/等 加至100用柠檬酸调节该组合物的pH值洗发剂组合物XIII(调节型抗头屑洗发剂)成份 水平％ 成份的功能月桂基醚硫酸钠 9.25起泡/清洁剂月桂酰基肌氨酸钠 2.45同上椰油酰胺丙基氧化胺 0.60温和性添加剂/泡沫稳定剂PEG-7椰油酸甘油酯 2.00润肤剂/温和性添加剂Crotein Q(季胺化胶原) 0.25调节成份AFPP 5×10-6-1.0 抗真菌多肽水/香料/等 加至100洗发剂组合物XIV成份 水平％ 成份的功能月桂基醚硫酸钠 10.50 起泡/清洁剂椰子油二乙醇酰胺 2.50泡沫稳定剂/洗发剂增稠剂AFPP 5×10-6-1.0 抗真菌多肽水/香料/等 加至100用柠檬酸/NaOH调节该组合物的pH至6.0-6.5。洗发剂组合物XV成份水平％ 成份的功能月桂基硫酸酯三乙醇胺14.00 起泡/清洁剂Briphos O3D*1.50 调节成份AFPP 5×10-6-1.0 抗真菌多肽Empicol WP40**10.00不透明/珠光剂水/香料/等 加至100*油基-3EO磷酸酯(Oleyl-3EO phosphate)**月桂基醚硫酸钠、乙二醇单硬脂酸酯和乙二醇二硬脂酸酯的专有混合物，由Albright和Wilson提供。洗发剂组物XVI成份 水平％ 成份的功能月桂基醚硫酸钠 7.00起泡/清洁剂月桂基硫酸酯三乙醇胺5.64同上Tegobetane L7*4.80泡沫稳定剂PEG-2硬脂酸酯 3.00粘度调节剂AFPP5×10-6－1.0 抗真菌多肽水/香料/等 加至100*椰油酰胺基丙基甜菜碱洗发剂组合物XVII成份水平％ 成份的功能月桂基醚硫酸钠 9.80 起泡/清洁剂椰油酰胺基丙基甜菜碱 4.80 泡沫稳定剂/温和性添加剂Antil 141 liquid 0.50 粘度调节剂AFPP 5×10-6-1.0 抗真菌多肽水/香料/等 加至100*Yh.Goldschmidt AG提供的丙二醇/PEG-55丙二醇油酸酯的专有混合物。
下面公开了其它抗头屑洗发剂组合物的例子，其中本发明的抗真菌多肽可包含在内，并可选择性地用该组合物中存在的抗头屑物质替换WO 99/13830公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)有效量的三唑，b)去污表面活性剂，和c)载体；WO 99/39683公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约7％—约30％重量的选自阴离子表面活性剂、两性表面活性剂和其混合物的去污表面活性剂，b)约0.1％-约10％重量的抗微生物剂，c)约0.5％—约10％重量的悬浮剂，d)约0.01％—约1.0％重量的具有约0.1—约3meg/mg电荷密度的阳离子瓜耳胶聚合物，e)选自龙脑、樟脑、桉树脑、甲烷、糖基-单基-乙酸酯(glycosyl-monomenthyl-acetate)、薄荷醇、3-1-氧丙烷、辣薄荷、留兰香、和它们的混合物的清凉剂(cool-feeling agent)，和f)约40％—约92％重量的水，其中，至少约50％重量的阳离子瓜耳胶聚合物是凝聚体形式，所述凝聚体含有去污表面活性剂和阳离子瓜耳胶聚合物；WO 97/39096公开了含有选自某些1-羟基-6-取代吡啶-2-酮和2-硫酮化合物的抗微生物化合物和洗发剂表面活性剂的洗发剂组合物，其中，该头发处理组合物的pH调节至至少7；WO 97/26854公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约7％—约30％重量的选自阴离子表面活性剂、两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、和它们的组合的去污表面活性剂，b)约0.1％—约10％重量的抗微生物剂，c)约0.5％—约10％重量的悬浮剂，d)约0.01％—约1.0％重量的具有约0.01meq/mg—约3meq/mg电荷密度的阳离子瓜耳胶聚合物，和e)约40％—约92％重量的水，其中，至少50％重量的阳离子瓜耳胶聚合物是凝聚体形式，所述凝聚体形含有去污表面活性剂和阳离子瓜耳胶聚合物；WO 97/47275公开了含有clotrimazol作为活性剂的抗头屑剂，特别是漂洗产品如洗发剂、药用洗发剂或头发漂洗液(rinse)；WO 95/02389公开了含有如下成份的抗头屑洗发剂组合物a)约5％—约29.5％重量的选自烷基硫酸盐和烷基乙氧基化物硫酸盐、其酸、和它们的混合物的阴离子表面活性剂，b)约0.5％—约5％重量的N-酰基氨基酸阴离子表面活性剂和它的盐，c)约0.1％—约10％重量的颗粒状抗头屑剂，d)约0.5％—约10％重量的用于所述抗头屑活性成分的结晶悬浮剂，e)约40％—约89％重量的水，其中在所述组合物中总的去污表面活性剂的浓度是约10％—约30％，成份b)成份a)的重量比是至少约1∶20，而且所述组合物基本没有甜菜碱表面活性剂和链烷醇酰胺泡沫促进剂；WO 95/17880公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约5％—约40％重量的含有如下物质的表面活性剂系统(i)80％—约99％重量的该表面活性剂系统为阴离子表面活性剂，它们是从约1∶1到1∶0之间比例的烷基乙氧基化物硫酸盐和烷基硫酸盐，和(ii)约1％—20％重量的该表面活性剂系统为多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂，b)约0.05％—约25％重量的功能物质，和c)约35％—约95％重量的水；和WO 92/14440公开了含有表面活性剂、特定颗粒大小的片层吡啶硫锌活性剂，悬浮剂、水和该活性剂的增效剂。
下面公开了其中可包含本发明抗真菌多肽的其它洗发剂组合物的例子WO 98/00498公开了一种含有表面活性剂系统的组合物，该表面活性剂系统包含双阴离子或烷氧基化双阴离子表面活性剂和一种或多种其它辅助表面活性剂，该双阴离子或烷氧基化双阴离子表面活性剂具有连接了两个相隔至少3个原子的阴离子取代基、含有至少5个碳原子的结构骨架，其中，一个阴离子取代基是硫酸盐基团或烷氧基连接的硫酸盐基团，另一个阴离子取代基选自硫酸盐和选择性地连接了烷氧基的磺酸盐。
WO 97/14405公开了如下洗发剂组合物，该组合物含有约5％—约50％重量的去污表面活性剂、约0.05—约10％重量的硅氧烷头发调节剂、约0.1％—约10％重量的悬浮剂、约0.025％—约1.5％重量的所选聚亚烷基二醇(优选具有约1,500—约2,500乙氧基化度的聚乙二醇)和水，以及任选的可在洗发剂或调节型组合物中使用的一种或多种其它物质；WO 97/25965公开了如下洗发剂组合物，其中每100份重量的该洗发剂组合物含有约5—约50份含有如下成份的敏感表面活性剂混合物a)占该混合物约10—约60％重量的至少一种强阴离子表面活性剂，b)占约10—约40％重量的至少一种两性表面活性剂和c)占该混合物约10—约60％重量的至少一种烷基糖类非离子表面活性剂；WO 97/14406公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物除阴离子氨基酸衍生物表面活性剂外，还含有去污阴离子表面活性剂，选自阴离子氨基酸衍生物表面活性剂、两性表面活性剂、阳离子表面活性剂和它们的混合物的稳定表面活性剂，选自脂肪族醇、脂肪酸、脂肪族醇衍生物、脂肪酸衍生物和它们的混合物的脂肪族化合物，选自不挥发的分散硅氧烷调节剂和它们的混合物的头发调节剂，和水；WO 98/04233公开了含有烷氧基化聚亚烷基胺和一种或多种去污表面活性剂的洗发剂组合物，在进一步的实施方案中，公开了如下头发调理洗发剂组合物，该头发调理洗发剂组合物含有按重量计算的约0.01％—约10％的烷氧基化聚亚烷基胺、约0.01％—约20％的阳离子表面活性剂调节剂、约5％—约50％的去污表面活性剂和约25％—约90％的水；WO 98/04238公开了含有季(铵)化聚烷氧基化聚亚烷基胺和去污表面活性剂的洗发剂组合物，在进一步的实施方案中，公开了含有按重量计算的约0.01％—约10％的季(铵)化聚烷氧基化聚亚烷基胺、约0.01％—约20％的阳离子表面活性剂调节剂、约5％的去污表面活性剂和约20％—约90％的水的调节型洗发剂组合物；WO 98/04239公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约0.1％—约10％重量的碳链长度为10个或更少碳原子的短链烷基硫酸盐表面活性剂，b)约0.1％—约10％重量的乙氧基化醇和c)约1％—约60％重量的选自除a)之短链烷基硫酸盐以外的阴离子表面活性剂、除b)之乙氧基化醇以外的非离子表面活性剂、两性和阳离子表面活性剂以及它们的混合物的辅助表面活性剂，d)水；
WO 98/18433公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物含有约5％—约50％重量的选自阴离子表面活性剂、具有在该组合物的pH处为阴离子的连接基团的两性离子或两性表面活性剂、和它们的组合物的表面活性剂，约0.025％—约3％重量的具有约0.2meq/mg—约7meq/mg的阳离子电荷密度和约5，000—约1千万的分子量的有机阳离子聚合物，约0.1％—约10％重量的水不溶性头发定形聚合物，约0.1％—约10％重量的水不溶性挥发溶剂，和约0.05％—约5％重量的用作上述头发定形聚合物的铺展剂的所选阳离子物质，和约22％—约94.3％重量的水；WO 98/04241公开了含有如下物质的洗发剂组合物a)约1％—约60％比重的选自阴离子表面活性剂，非离子、两性和阳离子表面活性剂，和它们的混合物的表面活性剂，b)约0.001％—约10％重量的含有至少4个酸酯基团的液体多元醇羧酸酯，其中多元醇部分选自含有约4—约12个羟基基团的糖或糖醇，每一个羧酸部分具有约8—约22个碳基团，而且该液体多元醇羧酸酯具有低于约30℃的完全熔点，c)约0.001％—约4％重量的具有通用分子式-H(OCH2CH2)nOH的非离子聚乙二醇聚合物，其中n是约1,000—约25,000范围内的乙氧基化平均值，和d)水；WO 98/18435公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物在含有颗粒大小范围小于约0.15μm的颗粒状不溶性分散非离子调节剂、晶体试剂(crystalline agent)和沉积聚合物的洗发剂中包含表面活性剂成分；WO 98/50007公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约5％—约50％重量的选自阴离子表面活性剂和两性表面活性剂之组合、以及阴离子表面活性剂和两性离子表面活性剂之组合的表面活性剂成份，b)约0.025％—约3％重量的具有约0.2meq/g—约2meq/g阳离子电荷密度的选自阳离子纤维素聚合物、阳离子瓜耳木胶衍生物、和其混合物的阳离子沉积聚合物，c)约0.5％—约10％重量的具有约2meq/g以上—约4.75meq/g以下的阳离子电荷密度的有机阳离子头发定形聚合物，和d)约27％—约94.5％重量的水。特别有效的是那些含有作为阳离子头发定形聚合物的Polyquaternium-16，作为阳离子沉积聚合物的Polyquaternium-10，以及包含月桂基醚硫酸铵和椰油酰胺基丙基甜菜碱的表面活性剂基质的头发定形洗发剂组合物；WO 99/38475公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物含有约5％—约50％重量的选自阴离子表面活性剂、具有在该组合物的pH处为阴离子的连接基团的两性离子或两性表面活性剂、和它们组合的表面活性剂，约0.025％—约3％重量的具有约0.2meq/mg—约7meq/mg阳离子电荷密度和约5,000—约1千万分子量的有机阳离子聚合物，约0.1％—约10％重量的水不溶性挥发溶剂，和约0.005％—约2.0％重量的晶体含羟基稳定剂，和约26.5％—约94.9％重量的水；WO 99/38476公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物含有约5％—约50％重量的选自阴离子表面活性剂、两性离子或两性表面活性剂、和它们的组合的表面活性剂，约0.1％—约1.0％重量的有机或硅氧烷接枝头发定形聚合物，和约40％—约94.9％重量的水，其中发感指数(Hair Feel Index，HFI)是至少约0.65，发型持久值(CurlRetention Value，CRV)是至少约70；WO 97/35546公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物含有阴离子去污表面活性成份，阴离子、阳离子头发调节聚合物，和约0.01％—约1.0％重量的具有约1—约300厘泊之粘度、并符合分子式(I)和(II)之任一项的水不溶性合成酯，以及具有约1—约399厘泊之粘度、选自烃油、除上述合成酯之外的脂肪族酯和其组合的有机水不溶性调节油，其中分子式(I)和(II)中的R1是具有7—9个碳原子的烷基、链烯基、羟烷基或羟链烯基，n是值为2—4的正整数，R2是具有8—10个碳原子的烷基、链烯基、羟烷基或羟链烯基，Y是具有约2—约20个碳原子的烷基、链烯基、羟基或羧基取代的烷基或链烯基。所述有机调节油优选聚烯烃。n-Y(I)[R2-O-CO]n-Y(II)；WO 99/24004公开了含有按重量计算的如下成份的洗发剂组合物a)约0.05％—约50％的polyhydrophilic阴离子表面活性剂，b)约0.05％—约20％的选自阳离子表面活性剂、阳离子聚合物和其组合的阳离子调节剂，c)约0.01％—约20％的硅氧烷化合物，和d)水载体；WO 98/50011公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)约5％—约50％重量的在该组合物的pH处具有一个阴离子部分的表面活性成分，b)约0.025％—约3％重量的阳离子沉积聚合物，c)约0.1％—约10％重量的产生臭气的头发定形聚合物，d)约0.0075％—约2.5％重量的气味掩盖香基(odor masking base)，和e)约25％—约94.5％重量的水。该气味掩盖香基含有(按该香基的重量计算)约15％—约75％重量的具有约250℃以上沸点的芷香酮香料、约5％—约65％重量的具有约250℃以上沸点的麝香、和约20％—约80％重量的具有约250℃以下沸点的高挥发性香料。还公开了进一步含有产生嗅气的液体载体以溶解或分散该组合物中产生嗅气的聚合物的洗发剂组合物；WO 99/13828公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)有效量的荧光增白剂，b)阴离子去污表面活性剂，c)两性去污表面活性剂，d)非离子去污表面活性剂，和e)载体，其中该组合物的pH不高于约7；WO 99/13829公开了含有如下成份的洗发剂组合物a)有效量的荧光增白剂，b)去污表面活性剂，c)有效量的多价阳离子，和d)载体；WO 93/18737公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物含有烷基乙氧基化物硫酸盐表面活性剂、特定类型的咪唑啉鎓盐型两性表面活性剂、优选在预混合的组合物中溶解和重结晶的晶体悬浮剂、和相对少量的水。优选的组合物含有烷基乙氧基化物硫酸盐表面活性剂、咪唑啉型两性表面活性剂、甜菜碱表面活性剂、重结晶的悬浮剂和水；和WO 97/35549公开了如下洗发剂组合物，该洗发剂组合物在包含不溶性分散调节剂、低粘度有机调节油和所选可溶性纤维素阳离子有机聚合物头发调节剂的洗发剂中含有特定的表面活性剂组分，该特定表面活性剂组分包括具有约1—约8摩尔氧乙烯单元的乙氧基化烷基硫酸盐表面活性剂和两性表面活性剂。
实施例材料和方法按WO 94/01459所述进行图1所示抗真菌多肽(AFPP)的产生和随后的纯化。简而言之，该抗真菌多肽按如下所述制备巨大曲霉株系本实验使用保藏于真菌菌种保藏中心(CBS)、保藏号为CBS 526.65的巨大曲霉株系。产生AFPP的巨大曲霉株系的培养使用由39g马铃薯葡萄糖琼脂(Difco产)加蒸馏水至1000ml制备的琼脂培养基进行琼脂斜面培养。用上述巨大曲霉株系接种该琼脂斜面，并在26℃生长一周。深层培养用5ml由上述所获巨大曲霉琼脂斜面培养物制备的含106孢子/ml的孢子悬液接种含100ml AMC培养基(15g肉膏，20g蛋白胨，20g玉米淀粉，5g NaCl，1ml Pluronic，1升水)的500ml锥形瓶。将该锥形瓶在30℃以220rpm的速度振荡培养3天，之后可回收AFPP。AFPP的分离、纯化和氨基酸序列测定将上述所获发酵培养液离心，菌丝体悬浮在pH7的Tris缓冲盐溶液中，然后进行第2次离心。合并两次离心的上清液，并将其无菌过滤。调节所获上清液制品的pH至6.5—9之间，将该上清液制品应用到在应用前已用pH6.5的磷酸盐缓冲液平衡过的阳离子交换树脂(SSepharose Fast Flow)上。通过使用高离子强度缓冲液如含有20mM磷酸盐、1.5mM NaCl、pH6.5的缓冲液，实现从该树脂洗脱活性部份。如果必要，在用离子强度低于或接近pH6.0的10mM磷酸盐的缓冲液稀释或对该缓冲液透析后，可重复上述程序。如果必要，该第二步的洗脱以梯度洗脱进行。活性部份的纯度通过HPLC评价。
在测试对瓶形酵母的抗真菌特性之前，将合并的活性部份用0.22μm滤器(Millipore)过滤除菌。
已纯化的AFPP用Nakaya等1990所述方法进行S-羧甲基化，并用反相HPLC脱盐。按厂家说明操作，将该S-羧甲基化的AFPP在Applied Biosystem 473A测序仪上进行N-端氨基酸序列测定。消光系数AFPP的消光系数用下列公式从图1所示氨基酸序列估计 (Gill和von Hippel，1989)其中(No.Trp)、(No.Tyr)和(No.Cys)是所述氨基酸序列中Trp、Tyr和Cys残基的数目。
根据该公式计算280nm处的消光系数为1.3。所有多肽测定均基于该计算的消光系数和OD280测量值。抗AFPP抗体的制备将按如上所述产生和纯化的AFPP在磷酸盐缓冲盐(pH6.5-8)中稀释至25—250μg/ml浓度。采用基本按照Hudson等1989所述标准程序的免疫方案，用弗氏完全佐剂中的纯化多肽免疫兔。收集血清，使用上述所获纯化AFPP作为抗原，在单成分辐射免疫扩散试验或Western印迹试验中测定该血清中抗AFPP的多特异性抗体。这些试验可按照标准程序如Hudson等1989所述的程序进行。该抗体可通过标准方法纯化，这些方法如使用固定至载体上的纯化AFPP的标准免疫吸附技术，例如Hudson等1989所述的方法。本发明AFPP变体的抗体反应性的测定AFPP变体与上述所获抗体或含有抗体的血清的反应性可在基本按Hudson等1989所述进行的单成份辐射免疫扩散或Western印迹中测定。
实施例1酵母瓶形酵母的抑制瓶形酵母在含美国典型培养物保藏中心推荐的培养基的微量滴定板中于37℃生长。该培养基每升含有30g沙氏葡糖培养基(Sabouraud’s glucose broth)、5g酵母提取物和2ml橄榄油。
通过将AFPP溶解于10mM磷酸盐缓冲液(pH7.5)中制备含AFPP的标准溶液。
如图2所示，每个微量滴定板包括4个相同的竖道，每个竖道含有—一个仅含培养基(200ml)和50ml 10mM磷酸盐(pH7.5)的孔(作为对照以测试该培养基的无菌性。包含磷酸盐缓冲液是为了与接种瓶形酵母的孔相比实验条件相同)。
—一个除接种了瓶形酵母外与上述孔相同的孔。
—一个接种了瓶形酵母并含有0.005 OD280浓度(约5mg AFPP/升)的AFPP的孔。
—一个接种了瓶形酵母并含有0.027 OD280浓度的AFPP的孔。
—一个接种了瓶形酵母并含有0.068 OD280浓度的AFPP的孔。
—一个接种了瓶形酵母并含有0.136 OD280浓度的AFPP的孔。
跟踪作为时间函数的瓶形酵母生长。该酵母并不均一地生长，而是以大的团聚生长。该事实和橄榄油的存在，使得不可能用分光光度法来测量生长。因此，将细胞重新悬浮，取10μl铺在含相同培养基的琼脂上。微量滴定板和固体培养基平板上大致生长的测定给出了相同的结果(见表1)。表1中显示的结果是4个竖道的平均生长。
该生长取决于用于接种的菌落的大小。菌落越大，则在平板上的生长越快。在本实施例中，培养基仅接种了一个小菌落。如下表1所示，这产生了一个延长的生长期。但是，如果培养基接种了一个更大的菌落，表1所示结果也相同，只是生长期缩短了。表1
0在该孔中没有观察到生长×在该孔的中心观察到少许生长××在该孔的中心观察到一些生长，并在边缘观察到较少的生长×××在整个培养基表面观察到强劲的生长结论本发明清楚地说明AFPP阻止酵母菌瓶形酵母的生长。即使极低浓度的AFPP(例如约5mg/升)也抑制瓶形酵母的生长这一事实使得AFPP适于在治疗或预防头屑中应用。
说明书中引用的参考文献Gill和yon Hippel，Anal.Biochem.182，319-26，1989；Hudson，L.，和Hay，F.，实用免疫学(Practical Immundogy)，第3版(1989)，Blackwell Scientific Publications；Lipman和Pearson，科学(Science)227，1435(1985)；Nakaya，K.等，Eur.J.Biochem.193，31—38，1990，“从巨大曲霉分离的抗真菌多肽的氨基酸序列和二硫桥”；Wnendt，S等，核酸研究(Nucleic Acids Research)，第18卷，第13期3987，1990，“编码巨大曲霉的抗真菌蛋白的cDNA的克隆和核苷酸序列，以及该天然基因的初步特征分析”。
权利要求
1.适用于应用至人头发或头皮上的抗头屑组合物，其包含有效量的含有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽或其变体，所述变体是I)可与如下抗体反应的多肽，所述抗体可与具有图1所示氨基酸序列的多肽的至少一个表位反应，或II)其氨基酸序列与图1所示多肽的氨基酸序列基本同源的多肽。
2.根据权利要求1的组合物，其中抗真菌多肽来自微生物。
3.根据权利要求2的组合物，其中抗真菌多肽来自真菌，特别是曲霉属的真菌。
4.根据权利要求3的组合物，其中抗真菌多肽来自属于巨大曲霉、A. pallidus、棒曲霉、A. longivesica、A. rhizopodus或A.clavatonanicus的真菌。
5.根据权利要求4的组合物，其中抗真菌多肽来自属于巨大曲霉的真菌。
6.根据权利要求5的组合物，其中抗真菌多肽来自巨大曲霉的CBS 526.65株。
7.根据前述权利要求之任一项的组合物，其中抗真菌多肽含有图1所示氨基酸序列。
8.根据权利要求7的组合物，其中抗真菌多肽由图1所示氨基酸序列组成。
9.根据权利要求1—6之任一项的组合物，其中图1所示抗真菌多肽第4、24、32、42和50位上的一或多个氨基酸残基已被另一种天然存在的氨基酸残基替代。
10.根据权利要求9的组合物，其中抗真菌多肽含有图1所示氨基酸序列，其中第4位的Pro已被Asn或Asp替代，第24位的Gly已被Ala替代，第32位的Arg已被Lys或Val替代，第42位的Leu已被Phe替代，和/或第50位的His已被Tyr替代。
11.根据权利要求10的组合物，其中抗真菌多肽由图1所示氨基酸序列组成，其中第4位的Pro已被Asn或Asp替代，第24位的Gly已被Ala替代，第32位的Arg已被Lys或Val替代，第42位的Leu已被Phe替代，和/或第50位的His已被Tyr替代。
12.根据前述权利要求之任一项的组合物，它采用洗发剂、溶液、悬浮液、乳状液、凝胶、泡沫或膏状物的形式。
13.根据权利要求12的组合物，它采用洗发剂的形式。
14.根据前述权利要求之任一项的组合物，其中所述活性成分以基于该组合物重量计约5×10-6％-约10％的量存在。
15.权利要求1—11之任一项所定义的抗真菌多肽在头屑的治疗或预防中的应用。
16.治疗或预防头屑的方法，所述方法包括用有效量的 1—11之任一项所定义的抗真菌多肽或权利要求12—14之任一项所定义的组合物接触头发。
17.权利要求1-11之任一项所定义的抗真菌多肽在制备用于治疗或预防头屑的组合物中的应用。
18.根据权利要求17的应用，其中所述组合物是权利要求12—14之任一项所定义的组合物。
全文摘要
本发明涉及含有抗真菌多肽的抗头屑组合物,抗真菌多肽在治疗或预防头屑中的应用,治疗或预防头屑的方法,和抗头屑多肽在制备用于治疗或预防头屑的组合物中的应用。发现具有图1所示氨基酸序列的抗真菌多肽即使在低浓度下也可有效抑制酵母瓶形酵母的生长。
文档编号C07K14/37GK1329500SQ99813927
公开日2002年1月2日 申请日期1999年11月26日 优先权日1998年11月30日
发明者J·文德, N·H·索伦森 申请人:诺沃奇梅兹有限公司