专利名称：一种制备芦荟乙酰化甘露聚糖的方法
技术领域：
本发明涉及芦荟乙酰化甘露聚糖的制备方法，具体地说，是从天然植物——芦荟的鲜叶凝胶中分离、提纯芦荟乙酰化甘露聚糖的方法。
芦荟中的活性成分分布在两个不同的位置凝胶和黄汁。凝胶中主要是由甘露聚糖或葡甘露聚糖组成的多糖，其主要结构为乙酰化甘露聚糖(Acemannan)。它是芦荟具有药物活性的重要成分，其对人体的主要作用有抗病毒、提高机体免疫力、抗肿瘤、促进伤口愈合、治疗辐射烧伤及对皮肤的保湿、营养、修复等作用。
但目前还没有成熟的从芦荟的凝胶中制备芦荟乙酰化甘露聚糖的方法。主要的原因是芦荟凝胶的粘度过高，无法进一步地处理。
为实现上述目的，本发明采取以下方案在处理芦荟鲜叶时，预先洗净，消毒，消毒剂选用含氯的消毒剂，如次氯酸钠，通过将削去首尾的芦荟叶倒立放置1～2小时，沥出黄汁，人工剥叶，得到芦荟凝胶。将芦荟凝胶块在粉碎机中打浆，同时加入降粘剂，降粘剂选用果胶酶(pectinase)，其酶活性为30000～50000U/g。酶的添加量为芦荟凝胶0.5～2.0wt％，作用温度为20～40℃，作用时间为1～4小时。然后将处理液加入硅藻土过滤器中进行过滤，除去其中的间质纤维。
将滤液加入膜分离设备中，分离分为两个过程，首先用孔径为2000道尔顿的超滤器，以除去水、无机盐、酸和蒽醌类物质；第二次分离膜的孔径为10000道尔顿，可得到分子量为2000～10000道尔顿的混合物和分子量大于10000道尔顿的凝胶基质聚合物。将凝胶基质聚合物保存；将分子量为2000～10000道尔顿的混合物移入不锈钢罐中，加入6N的稀盐酸，调节pH为3.0～3.5，以溶解芦荟凝胶中所含的草酸钙，并将之除去。
将四倍重量的乙醇溶剂加入到上述混合物中，形成混合物溶液，并用螺旋式搅拌器将溶液搅拌20至30分钟，放置3～5小时后，溶液分层；除去分层中的上清液，将剩余部分放入离心机中，以高于1500转/分的转速离心，时间不短于5分钟，收集沉淀物。
将得到的沉淀物和分子量大于10,000的凝胶基质聚合物一起加入冷冻干燥设备中，处理时，真空度为650～750mmHg，干燥温度为-30～-20℃，干燥时间30～40小时，干燥后留下的样品是不降解的冻干芦荟乙酰化甘露聚糖提取物粉末。1kg的芦荟凝胶中大约可以获得1.6～1.7g的芦荟乙酰化甘露聚糖提取物。最后将提取物在γ射线下进行杀菌、消毒，并防腐保藏。
本发明的优点是提取芦荟汁时，采用果胶酶分解芦荟中的果胶，降低了芦荟凝胶的粘度，因而简化了后处理工艺；采用膜分离出大分子芦荟乙酰化甘露聚糖并除去小分子物质，通过调节酸碱度除去凝胶中所含的草酸钙，与极性溶剂混合沉淀出不溶物，最终将沉淀物和凝胶基质聚合物的混合物冷冻干燥成粉末，成为芦荟乙酰化甘露聚糖成品。
将芦荟凝胶块在粉碎机中打浆，同时加入酶活性为50000U/g的果胶酶1.0kg，作用温度为20℃，作用时间为3小时。然后将处理液加入硅藻土过滤器中进行过滤，除去其中的间质纤维。
将滤液加入膜分离设备中，分离分为两个过程，首先用孔径为2000道尔顿的超滤器，以除去水、无机盐、酸和蒽醌类物质；第二次分离膜的孔径为10000道尔顿，可得到分子量为2000-10000道尔顿的混合物和分子量大于10000道尔顿的凝胶基质聚合物。将凝胶基质聚合物保存；将分子量为2000-10000道尔顿的混合物移入不锈钢罐中，加入6N的稀盐酸，调节pH为3.0～3.5，以溶解芦荟凝胶中所含的草酸钙，并将之除去。得到不含草酸钙的芦荟汁混合物5.0kg。
将20kg乙醇加入到上述芦荟汁混合物中，形成混合物溶液，并用螺旋式搅拌器将溶液搅拌30分钟，放置4小时后，溶液分层；除去分层中的上清液，将剩余部分放入离心机中，以2000转/分的转速离心，时间为10分钟，收集沉淀物。
将得到的沉淀物和分子量大于10,000的凝胶基质聚合物一起加入冷冻干燥设备中，处理时，真空度为750mmHg，干燥温度为-30℃，干燥时间30小时，干燥后留下的样品是不降解的冻干芦荟乙酰化甘露聚糖提取物粉末85.0g。最后将提取物在γ射线下进行杀菌、消毒，并防腐保藏。
将所得的粉末进行红外光谱分析，其谱图见图2。由图2可知，所得产物确为芦荟乙酰化甘露聚糖。
改变降粘处理的各工艺条件，其它工艺条件与实施例1一致，得到实施例2～5，其结果见表1。
表1
改变极性溶剂沉淀和离心分离处理的各工艺条件，其它工艺条件与实施例1一致，得到实施例6～7，其结果见表2。
表2
改变冷冻干燥处理的各工艺条件，其它工艺条件与实施例1一致，得到实施例8～10，其结果见表3。
表3
权利要求
1.一种从芦荟鲜叶凝胶中提取芦荟乙酰化甘露聚糖的方法，其特征在于，含有以下步骤A.将新鲜芦荟叶片经过消毒、清洗后，沥出黄汁，去皮后取出芦荟凝胶并将其粉碎，进行降粘处理，降粘剂的添加量为芦荟凝胶的0.5～2.0wt％，处理温度为20～40℃，处理时间为1～4小时；将处理液加入硅藻土过程器中进行过滤，除去其中的间质纤维；B.将步骤A中得到的滤液加入超滤器进行两步法膜分离处理，第一次分离膜的孔径为2000道尔顿，第二次分离膜的孔径为10000道尔顿，可得到分子量为2000-10000道尔顿的混合物和分子量大于10000道尔顿的凝胶基质聚合物；将凝胶基质聚合物保存，混合物进行步骤C；C.向混合物中加入6N的盐酸，调节体系的PH值为3.0～3.5，再加入乙醇，乙醇与混合物的重量比为4∶1，得到混合物溶液；用螺旋式搅拌器将混合物溶液搅拌20～30分钟，放置3～5小时后，溶液分层；除去分层中的上清液，将剩余部分放入离心机内进行离心分离处理，转速不低于1500转/分，离心时间不短于5分钟，收集沉淀物；D.将步骤B中的凝胶基质聚合物和步骤C中的沉淀物混合，对该混合物进行冷冻干燥处理，处理时，真空度为650～750mmHg，干燥温度为-30～-20℃，干燥时间30～40小时，可得到芦荟乙酰化甘露聚糖粉末。
2.根据权利要求1所述的从芦荟鲜叶凝胶中提取芦荟乙酰化甘露聚糖的方法，其特征在于所述的降粘处理过程中，降粘剂为果胶酶，其酶活性为30000～50000U/g。
3.根据权利要求1所述的从芦荟鲜叶凝胶中提取芦荟乙酰化甘露聚糖的方法，其特征在于所述的离心分离处理中，离心机转速为2000转/分，离心时间为10分钟。
4.根据权利要求1所述的从芦荟鲜叶凝胶中提取芦荟乙酰化甘露聚糖的方法，其特征在于所述的冷冻干燥过程中，真空度为750mmHg，干燥温度为-30℃，干燥时间40小时。
全文摘要
本发明公开了一种从芦荟凝胶中分离、提纯芦荟乙酰化甘露聚糖的方法。在分离、提纯过程中，利用生物降凝技术，降低芦荟凝胶的粘度，简化了后处理工艺，同时提高产品品种，采用调节pH值的方法，除去凝胶中的草酸钙，采用膜分离技术和冷冻升华技术，既除去了小分子杂质，又使操作在常温或低温下进行，有效地保护了乙酰化甘露聚糖的活性。利用本发明得到的芦荟乙酰化甘露聚糖粉末可作为原料添加到生物制品、药品、保健品、化妆品中，具有增加机体抵抗力、抗肿瘤、抗病毒、促进伤口愈合等医疗作用和保湿、营养等美容作用。
文档编号C08B37/00GK1424329SQ0215972
公开日2003年6月18日 申请日期2002年12月30日 优先权日2002年12月30日
发明者董银卯, 赵华, 陆辛玫, 兰社益 申请人:北京工商大学