专利名称：一种纯化甘草多糖的方法
技术领域：
本发明属于医Hj药物、化工领域，特别涉及"种用大孔吸附树脂纯化甘草 多糖的方法。
背景技术：
甘草多糖是甘草的主要活性成分之一，具有较强的免疫作用和抗肿瘤活 性。H前,甘草多糖的纯化主要是用层析柱法，层析材料主要用Deae-Cellulose 和Seperdex等，这种方法有操作复杂、效率底、成本高等缺点；如中国专利"甘 草多糖"(CN1387855)中纯化甘草多糖的层析材料是Dese—Cellulose(DE —32)和SeperdexG-75。
发明内容
本发明公齐了一种纯化甘草多糖的方法，目地是提供-一种操作简便、成本
低的纯化甘草多糖的工艺方法。本发明包括下述步骤
(1) 将甘草根或茎用水冲洗除杂，晾千后粉碎过筛。
(2) 先用乙醇浸泡后，再用水浸提取、热水浸提取、稀碱液提取、超声提取或
微波提取屮的任意一种提取方法，提取2~3次
(3) 合并提取液，将提取液减压蒸溜浓縮；(4) 川乙醉沉淀浓缩液，得粗廿i','，:多糖;
(5) 粗廿草多糖液川Sevage法除蛋白质；
(6) 计草多糖液用MD (3000-4000)透析袋透析；
(7) 将处理好的it草多糖液过LSA-5B型大孔树脂柱。
(8) 静置；
(9) 用乙醇作洗脱剂洗柱。
(10) 用乙醇沉淀洗脱液，干燥后得甘草多糖。
木发明和目前常用的分离纯化甘草多糖的方法有所不同，主要是本发明用 的柱层析材料是新型大孔树脂材料LSA-5B，以及最佳上柱及洗脱条件。其主要 优点是；
1、 树脂材料价格低，总体成本低。
2、 处理量大，效率高。
3、 操作简便，重复性好。
4、 树脂对甘草和特异性吸附效果好。
5、 适于工业化生产。
综上所述，该方法可以替代目前的纯化甘草多糖的方法。
附图是甘草多糖制备工艺流程的多糖制备工艺图。 具体实施方案 实施例1
取3-4年生甘草根或茎，水洗去杂，晾干后粉碎过30目筛；
用75%左右的乙醇浸泡二次，每次浸泡时间为8-10小时，浸泡后的甘草粉 末用水冲洗，目的是除去醇溶性杂质，然后晾干；
用超声波辅助提取法提取甘草多糖；参数如下；超声功率1000w，提取时 间为30分钟，提取水温45t:,提取料液比1:10，提取次数3次。
将提取液合并，然后减压蒸馏浓缩；减压蒸馏时温度设定在60t:。将甘草多糖液和95。/。的乙醇按1:4(体积比)，搅拌均匀后放入温度《CTC冰箱 内沉淀8-10小时，将上层清液弃去。沉淀在离心机中离心分离(转速为每分钟 2000转，离心时间为4分钟)。沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚交替洗涤2-3次,温 水溶解后重复醇沉一次，沉淀用真空干燥箱在6(TC温度下干燥，得灰白声块状甘 草多糖；
将灰白色块状甘草多糖研磨溶解后用Sevage法除蛋白质4次；方法如下； 按体积比甘草多糖液:氯仿:正丁醇=25:5:1比例将氯仿和正丁醇的混合液倒入甘 草多糖液中，二者混合后剧烈振荡25-30分钟，然后倒入分液漏斗中静置4-5小 时；上层为氯仿和正丁醇中层为蛋白质下层为甘草多糖液。
甘草多糖液用MD34 (4000-6000)透析袋透析12小时；
用95%乙醇醇沉淀一次；
将预处理好(预处理的方法按说明书里的方法)的LSA-5B型大孔树脂湿法 装柱。将上样液配制成pH为7.5-8.5、甘草多糖浓度为2mg/mL后以2BV/hr流速 上柱。上样量为5BV。用2.5BV的蒸馏水以4BV/hr流速冲洗层析柱，静置8小时 后用55。/。乙醇为洗脱剂，以3BV/hr的流速洗脱，洗脱剂用量为3BV。洗脱下来的甘 草多糖液减压浓縮(温度为60 °C )干燥后得甘草多糖。所得甘草多糖纯度达50% 左右。
:附图是甘草多糖制备工艺流程图。
权利要求
1、以LSA-5B型大孔吸附树脂为层析材料纯化甘草多糖。
2、 最佳上柱条件为；上样液(甘草多糖溶液)pH值7.5-8.5、甘草多糖浓 度为2mg/mL、流速上柱为2BV/hr。上样量为3BV。用2. 5BV蒸馏水以4BV/hr 的流速冲洗层析柱。
3、 洗脱剂为乙醇，最佳浓度约55%。
4、 最佳洗脱条件为55%乙醇，以3BV/hr的流速洗脱，洗脱剂用量为3BV。
全文摘要
本发明公开了一种用大孔树脂纯化甘草多糖的方法。其包含有以下步骤用超声提取方法提取甘草多糖，将浓缩后的甘草多糖液用4倍的95％乙醇醇析二次；用Sevege法除蛋白质4次；用透析袋透析12小时；最后用LSA-5B型大孔树脂纯化，其最佳工艺为上样液浓度2mg/ml、吸附速率2BV/hr、洗脱液为55％乙醇溶液、洗脱速率为3BV、洗脱液用量为3BV。优点是成本低、效率高、操作简便；纯化后甘草多糖纯度为50％左右。工艺较目前的纯化甘草多糖的工艺简单，成本低。是目前较为理想的纯化甘草多糖的方法。
文档编号C08B37/00GK101492510SQ20081000430
公开日2009年7月29日 申请日期2008年1月21日 优先权日2008年1月21日
发明者申 黄 申请人:黄 申;李炳奇;李 红