专利名称：：水溶性酵母β-葡聚糖及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种由酵母制备酵母多糖的方法，特别涉及到一种水溶性酵母P-葡聚糖的制备方法。
背景技术：
：酵母是一种非常重要的工业微生物，大多数酵母作为粗伺料进行廉价处理，没有做进一步的深加工，不能形成对副产物的真正综合利用。部分企业更是将其直接排放，造成了极大的资源浪费和环境污染。P-l，3-葡聚糖普遍存在于多种真菌、植物和海藻细胞壁中，是一种极富生物活性的免疫多糖，已证实对肿瘤、肝炎、糖尿病、心血管、降血脂等疑难病都有较好的治疗效果。P-l,3-葡聚糖还是一种良好的生物效应调节剂(BRMs)，它能够通过刺激免疫系统而提高机体的免疫能力，BRMs在相互依赖的机体系统中，对维持体内平衡是非常关键的，它帮助机体适应环境和心理压力。酵母细胞中除含有大量的蛋白质外，还含有甘露聚糖、甘露糖蛋白、P-l，3-葡聚糖、其他杂多糖和几丁质等成分。目前已被应用的酵母多糖产品主要有甘露糖系列的甘露聚糖、甘露寡糖、甘露糖蛋白，含多种多糖成分的酵母聚糖，非水溶性的酵母细胞壁P-1，3-D-葡聚糖等。尚未有水溶性酵母P-1，3-葡聚糖的生产和应用。利用酵母细胞壁提取p-l，3-葡聚糖的方法较多，主要有酸法提取、碱法提取、酸碱一体法、有机溶剂提取、自溶-酶-碱法、超声波提取、酶法等，通常所得的p-l,3-葡聚糖为非水溶性酵母葡聚糖，分子量巨大，为人体难以吸收的组分。在中国专利(CN:1583802A)中披露了一种P-1，3-葡聚糖的制备方法，该方法釆用碱提取、酸提取、有机溶剂浸提得到的酵母P-1,3-葡聚糖，为非水溶性酵母葡聚糖，对此P-1，3-葡聚糖再通过甲酸降解，得到不同分子量的水溶性酵母P-1，3-葡聚糖；在另一中国专利(CN:101012468)中披露了一种|3-1，3-葡聚糖的制备方法，该方法采用高温提取、酶处理、有机溶剂浸提得到的酵母0-1，3-葡聚糖，也是一种非水溶性酵母葡聚糖。此类酵母|3-1，3-葡聚糖的含量较低，一般在70%左右，含有多种非生物活性的杂质。由于非水溶酵母P-1,3-葡聚糖分子量高，不能溶解于水，而人体中没有P-糖苷酶，很难直接吸收，只能通过肠道微生物降解吸收，大大降低了酵母P-l,3-葡聚糖的生物利用率。目前，各种报道中所得到的酵母P-1,3-葡聚糖大都是非水溶性酵母葡聚糖，非水溶性葡聚糖由于难溶于水，其应用范围受到极大限制。部分水溶酵母P-l，3-葡聚糖也是通过非水溶性酵母葡聚糖降解或修饰得到。经过降解的寡葡聚糖或经过修饰的葡聚糖，虽然溶解性得到改善，但制备成本大大提高，同样限制了在某些领域的大量应用。
发明内容针对现有酵母0-葡聚糖存在的诸多不足，本发明提供一种以酵母完整菌体为原料制备的水溶性酵母0-葡聚糖及其制备方法，该葡聚糖的分子量为8-20万Daltun，可完全溶于水。所提供的水溶性酵母0-葡聚糖的制备方法工艺简单、产率较现有技术有了较大的提高，且对酵母菌达到了最大程度的利用。本发明所述的酵母P-葡聚糖以完整酵母菌为原料制得，为P-l，3-D-葡聚糖，以p-l，3-葡聚糖为主链，P-l，6-葡聚糖为支链,其重均分子量范围为8-20万Daltun,—般可以达到10万Daltiin以上，高度纯化后，其重均分子量为12-15万Daltun,可完全溶于水。本发明所述的P-葡聚糖的制备，是通过热水处理、碱提取、酸中和、醇沉淀、色谱柱层析等过程实现的。对制备水溶性酵母P-葡聚糖后的残渣，又通过酶解获得高含量的非水溶性酵母(3-葡聚糖，整个工艺具体步骤如下1.热水处理向酵母菌粉或鲜酵母中加入纯净水，使菌体重量为总重量的2-20y。(w/v)优选5-10"/o(w/v)，其中当使用鲜酵母时，将鲜酵母的重量折算成干酵母重量计算即可，升温到50-121°C,搅拌反应0.5-2h，之后3000-12000r/min离心，收集沉淀物I;清液减压浓缩至原体积的1/3-1/15,加入乙醇，该乙醇浓度为80-100%(v/v),使清液中的醇浓度达到60-80°/(v/v)醇沉，使沉淀，该沉淀物为甘露聚糖；2.碱处理向沉淀物I中加入碱溶液，加入的碱溶液体积为沉淀I体积的2-30倍，优选为10倍，碱溶液浓度为3-10%(w/v)，其浓度优选为4%-10%,最优选择4%;之后升温到60-85。C，搅拌反应0.5-2h，3000-12000r/min离心,收集碱提沉淀物ffl;清液用酸中和，中和至pH5.0-8.0左右，优选中和至pH6.5-7.5,之后3000-12000r/min离心，清液浓縮至原体积的1/3-1/15,优选浓缩至原体积的1/5左右，一般保持在1/4-1/6,加入乙醇，该乙醇浓度为80-100%(v/v),使醇浓度达到60-85%，得到水溶性酵母P-葡聚糖沉淀II;将该沉淀物n分离复溶后，再经柱色谱分离，脱盐，干燥得到高纯度水溶性酵母P-葡聚糖；柱色谱分离所采用的洗脱剂为盐溶液或水等常用洗脱剂；3.酶处理向碱提沉淀物III中加入5-20倍体积的水，使该沉淀物悬浮于水溶液中，用碱调节pH4.0-9.0，加入蛋白酶，使蛋白酶总量达到混悬液总量的0.02-0.2%(W/V),升温到35-60。C，反应时间2-24h,之后3000-12000r/min离心收集沉淀物，对该沉淀物用水充分洗涤，即为非水溶酵母p-葡聚糖。釆用上述酶解过程处理后，非水溶性酵母P-葡聚糖的含量可以达到90%以上上述工艺过程中，所述碱处理过程所使用的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或碳酸钠或其混合物；所述碱处理过程中和时使用的酸为柠檬酸或乙酸或盐酸或硫酸或其混合物；柱色谱分离时采用的柱色谱分离介质为DOWEXMXA-1或Q-SepharoseFF或DEAE-Sephacel或DEAE-SepharoseFF。所述酶处理过程中调节PH所用的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或碳酸钠或其混合物；所采用的蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶或木瓜蛋白酶或其混合物。上述P-葡聚糖的制备方法，各处理过程的优选条件为热水提取过程的优选条件为热水提取中所述酵母菌体重量为纯净水和酵母菌体总重量的10-15%(w/v);温度80-10(TC,反应时间为l-2h;在碱提取过程的优选条件为所釆用的碱优选为氢氧化钠或碳酸钠或其混合物，浓度4-6"/。(w/v),碱液用量为沉淀I体积的10-15倍；温度60-75°C,反应时间为l-2h;中和时采用的酸为枰檬酸或乙酸或其混合物，其浓度为30-100%(w/v);所述酶处理过程的优选条件为酶为碱性蛋白酶，浓度为0.1-0.2%(w/v);温度45-60。C,反应时间为8-16h。上述e-葡聚糖的制备方法，各处理过程的最优选条件为提取过程的最优选条件为在热水提取过程中所述酵母菌体重量为纯净水和酵母菌体总重量的10%(w/v);温度8(TC,反应时间为lh;在碱提取过程的最优选条件为所釆用的碱优选为氢氧化钠，浓度4%(w/v),碱液用量为沉淀I体积的10倍；温度60'C，反应时间为lh;中和时釆用的酸为柠檬酸，其浓度为30%(w/v);所述酶处理过程的最优选条件为酶为碱性蛋白酶，浓度为0.1%(w/V);温度6tTC,反应时间为16h。在上述优选条件下，水溶性酵母葡聚糖的得率和P-葡聚糖含量最高(也就是单位原料的葡聚糖得率以及所得葡聚糖的纯度最高)，分别达到15%和90%(w/w)。采用上述工艺条件制备水溶性酵母P-葡聚糖，具有以下突出的优点釆用碱处理可以将水溶性酵母P-葡聚糖更多的溶出，釆用4%的碱液浓度以及60'C的反应温度,是为了保证在水溶性酵母p-葡聚糖更多的溶出的同时，尽量减少碱溶液对水溶性酵母P-葡聚糖的降解破坏，较之现有的采用2%的氢氧化钠溶出，P-葡聚糖的溶出率有较大提高，但又不至于破坏P-葡聚糖的基本结构，同时氢氧化钠用量的增加没有增加很多成本；釆用酸中和时，优选使用的柠檬酸为三元有机酸，可与氢氧化钠以l:3的摩尔质量分数反应，因而大大减少了酸的用量，生成的杆檬酸盐的量也随之减少，减少了产品中杂质的含量，提高了纯度，降低了生产成本；另一方面，使用柠檬酸不会给目标产品带来不愉快的滋味和口感，同时在碱处理过程中由于提高了碱处理的碱浓度，降低了处理的温度和时间，这样就降低了由于高温对于目标产物的损害程度，同时缩短了整个处理的时间，提高了生产的效率。对碱提取后的残渣ni釆用酶处理可以将其中的杂蛋白处理掉，进一步提高了非水溶性e-葡聚糖的含量，更好地保证目的产物的质量，较之目前巿场上常规的p-葡聚糖产品，无论是纯度还是质量方面都有较大的提高。对所获得的水溶性酵母P-葡聚糖进行结构测定的结果如下通过薄层层析分析和红外光谱分析可知，釆用上述方法制得的水溶性酵母多糖由单一葡萄糖组成；红外光谱图中3319-3329ctrT1、2922cnf1、1039-1076cm—1、1157cm—'、889cm—1、770cnf1六条特征谱带说明所获的的产物为P-1,3-D-葡聚糖，其特征是它的糖链中以p-l,3-葡聚糖为主链，&-1，6-葡聚糖为支链；利用系列标准分子量的葡聚糖标准曲线，通过高效液相凝胶色谱测定多批样品，其重均分子量范围是8-20万Daltun,对高度纯化的样品测定，其重均分子量为12-15万Daltun。其分子量较之非水溶性葡聚糖的分子量有了十分显著的降低，其生物活性和生物利用度较非水溶性酵母P-葡聚糖有较大程度的提高，同时，还具有良好的水溶性这一突出特点，使酵母p-葡聚糖可直接应用于液体物料中，无需使用稳定剂即可获得均匀而稳定的溶液，扩大了酵母P-葡聚糖的使用范围。采用上述制备方法制备水溶性酵母e-葡聚糖，还具有另一个突出的优点在获得水溶性酵母e-葡聚糖的同时，还获得了含蛋白的甘露聚糖和常规非水溶性酵母P-葡聚糖，有效的将酵母菌体中的各种有效成分加以回收利用，在提高收率的同时，最大程度的提高了酵母菌的利用率。经过热水提取、碱提取和酶处理三个连续进行的工艺过程，相继得到了甘露聚糖、水溶性酵母P-葡聚糖和常规酵母P-葡聚糖。其中，热水处理过程和酶处理过程所获得甘露聚糖和非水溶性多糖为本发明制备工艺的副产物。由于釆用本方法后在保证水溶性酵母0-葡聚糖收率的前提下，还同时得到了甘露聚糖和非水溶性p-葡聚糖，这样就改变了传统工艺对酵母菌的加工中只得到部分可以利用产品的方式，提高了产品附加值，实现了酵母菌的深加工，形成对酵母菌真正的综合利用，避免了废弃产物的直接排放，降低了资源浪费和对环境的污染。本发明制备工艺简单，制备生产过程可连续进行，工艺参数易于操作控制，产物水溶性酵母p-葡聚糖的得率、纯度都比较高。所得到水溶性酵母|3-葡聚糖具有显著的免疫激活作用，尤其是对巨噬细胞的吞噬作用、吞噬指数和抗体生成能力可大幅度提高，进而提高机体的免疫力和抵抗力，可广泛用于食品、乳品、饮料等领域。图l为本发明制备水溶性酵母p-葡聚糖的工艺流程图；图2为本发明制备的水溶性酵母p-葡聚糖的薄层层析图；图2中卜8的点位分别为半乳糖标样，阿拉伯糖标样，葡萄糖标样，实施例l样品，实施例2样品，实施例3样品，甘露糖标样，木糖标样；图3为本发明实施例l制备水溶性酵母p-葡聚糖的红外光谱图。具体实施例方式实施例1取200g酵母粉，加入2L纯净水，与80。C下提取lh，4000r/min离心10min，收集沉淀I,清液浓缩，醇沉，干燥，得到酵母甘露聚糖；然后向沉淀I中加入2L4"/。(w/v)的氢氧化钠溶液，6(TC下搅拌反应lh,5000r/min离心20min，收集碱提沉淀III。清液用30%杼檬酸中和至PH6.O,待冷却到室温后，5000r/min离心10min,清液浓缩至原清液体积的1/5,加入95%乙醇使醇溶液中的醇浓度达到80%，醇沉，沉淀干燥后得到水溶性酵母P-葡聚糖，产物的p-葡聚糖含量为85%，得率15%。碱提沉淀m中加入2L水，调节pH8.0，加入碱性蛋白酶2g,6(TC酶解16h,收集沉淀，干燥，得到非水溶酵母p-葡聚糖。水溶性酵母P-葡聚糖复溶，配制成2%溶液，用0.22um中空纤维膜组件微滤，用6KD中空纤维膜组件超滤，调节浓缩液浓度至1%左右，用Q-Sepharose-FF柱色谱纯化，用0.2mol/LNaCl溶液洗脱，得到水溶性酵母(3-葡聚糖纯品。产物的P-葡聚糖含量98%,得率2.0%。实施例2向200g酵母粉中加入2L纯净水，100。C提取lh，4000r/min离心10min，收集沉淀I，清液浓缩，醇沉，干燥，得到酵母甘露聚糖；然后向沉淀I中加入2L10y。的氢氧化钠，80。C撹拌反应lh,3000r/min离心20min,收集碱提沉淀III。清液用10%(w/v)盐酸中和至pH7.O，待冷却到室温后，3000r/min离心15min,清液超滤浓缩为原体积的1/3后，加入95%乙醇使醇浓度达到80%,醇沉，沉淀干燥后得到水溶性酵母l3-葡聚糖，产物的0_葡聚糖含量90%,得率12%。碱提沉淀in中加入2L水，调节pH7.0，加入木瓜蛋白酶lg,50'C酶解16h,收集沉淀，干燥，得到非水溶酵母P-葡聚糖26g,含量95.1%。水溶性酵母P-葡聚糖复溶，配制成2%溶液，用0.22um中空纤维膜组件微滤，用6KD中空纤维膜组件超滤，调节浓缩液浓度至1%左右，用DEAE-SepharoseFF柱色谱纯化，用水洗脱，得到水溶性酵母l3-葡聚糖纯品。产物的(3-葡聚糖含量96%，得率1.1%。实施例3向100g酵母粉中加入1.2L纯净水，121。C提取1.5h，4000r/min离心10min,收集沉淀I，清液浓缩，醇沉，干燥，得到酵母甘露聚糖；然后向沉淀I中加入2L6y。的碳酸钠溶液，6(TC撹拌反应2h，12000r/min离心8rain,收集碱提沉淀III。清液用10%(w/v)乙酸中和至PH6.0，待冷却到室温后，12000r/min离心5min，清液超滤浓缩为原体积的1/12后，加入95%乙醇使醇浓度达到80%,醇沉，沉淀干燥后得到水溶性酵母P-葡聚糖，产物的P-葡聚糖含量85%,得率10%。碱提沉淀III中加入1.2L水，调节pH8.0，加入碱性蛋白酶2g,6(TC酶解16h,收集沉淀，干燥，得到非水溶酵母e-葡聚糖。水溶性酵母p-葡聚糖复溶，配制成2%溶液，用0.22imi中空纤维膜组件微滤，用6KD中空纤维膜组件超滤，调节浓缩液浓度至1%左右，用DOWEXMXA-l,用0.2mol/LNaCl溶液洗脱，得到水溶性酵母0-葡聚糖纯品。产物的P-葡聚糖含量96%,得率1.2%。实施例4向200g酵母粉中加入6L纯净水，12lt提取2h,4000r/min离心10min,收集沉淀I,清液浓缩，醇沉，干燥，得到酵母甘露聚糖；然后向沉淀I中加入4L4%的氢氧化钾溶液，8(TC搅拌反应2h，8000r/min离心20min,收集碱提沉淀III。清液用8%(w/v)盐酸中和至pH6.O,待冷却到室温后,8000r/min离心10min,清液超滤浓缩为原体积的1/6后，加入95%乙醇使醇浓度达到75%,醇沉，沉淀干燥后得到水溶性酵母P-葡聚糖，产物的|3-葡聚糖含量86%,得率12%。碱提沉淀m中加入2L水，调节pH5.0，加入中性蛋白酶2g，42。C酶解8h，收集沉淀，干燥，得到非水溶酵母p-葡聚糖。水溶性酵母P-葡聚糖复溶，配制成4%溶液，用0.22um中空纤维膜组件微滤，用6KD中空纤维膜组件超滤，调节浓缩液浓度至0.5%左右，用DEAE-SepharoseFF柱色谱纯化，用0.2mol/LNaCl溶液洗脱，得到水溶性酵母P-葡聚糖纯品。产物的P-葡聚糖含量98y。，得率1.5%。实施例5向2000mL鲜酵母中加入2L^净水，60。C提取lh，4000r/min离心10fflin，收集沉淀l，清液浓缩，醇沉，干燥，得到酵母甘露聚糖；然后向沉淀i中加入6L6%的氢氧化钠，80。C搅拌反应0.5h，5000r/min离心20min,收集碱提沉淀m。清液用12%(w/v)乙酸中和至pH7.O,待冷却到室温后，5000r/min离心15min,清液超滤浓缩为原体积的1/5后，加入无水乙醇使醇浓度达到85%，醇沉，沉淀干燥后得到水溶性酵母p-葡聚糖，产物的p-葡聚糖含量8oy。，得率18%。碱提沉淀m中加入lL水，调节pH8.5,加入木瓜蛋白酶lg,55。C酶解4h,收集沉淀，干燥，得到非水溶酵母13-葡聚糖。水溶性酵母P-葡聚糖复溶，配制成3%溶液，用0.22um中空纤维膜组件微滤，用6KD中空纤维膜组件超滤，调节浓缩液浓度至1%左右，用DEAE-Sephacd柱色谱纯化，用0.4mol/LNaCl溶液洗脱，得到水溶性酵母P-葡聚糖纯品。产物的0-葡聚糖含量96%，得率1.8%。试验实施方式试验实施例1:炭粒廓清试验试验原理肌体内的吞嗡细胞有大、小两种。小吞噬细胞是外周血中的中性粒细胞。大吞喧细胞是血中的单核细胞和多种器官、组织中的巨^细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。巨噬细胞对颗粒性抗原具有很强的吞噬功能，肌体内注射碳粒(印度墨汁)后，计算吞噬系数、廓清指数，以及胸脾指数，与阳性对照及阴性对照比较，可以验证样品是否可以增强巨噬细胞的吞噬能力，从而判定其是否具有增强机体免疫能力的功能。试验方法取昆明种小白鼠，随机分组，连续灌胃给药(实施例1中制得的水溶性酵母P-葡聚糖产品)IO天。最后一次给药l小时后，分别由尾静脉准确注入用生理盐水5倍稀释的印度墨汁0.lmL/10g,于注入墨汁30秒及6分钟，分别自眼眶后静脉丛取血20jli1,立即吹入0.1%碳酸钠溶液2mL中，充分混匀。取血完毕以20jal正常小鼠血溶于2mL0.1%碳酸钠溶液校零，用752型紫外分光光度计在657體处测定光密度(OD),以0.1%碳酸钠溶液做空白对照。解剖小鼠，取肝脏和脾脏称重，计算廓清指数K值和肝脾吞噬系数a值、胸腺和脾脏指数。数据经统计学处理，结果见表1及表2。表l小鼠巨噬细胞吞噬试验结果(<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注*与生理盐水组比较，p值小于0.05。阳性对照为盐酸左旋咪唑片，用前用生理盐水配制成10mg/mL溶液。表2小鼠免疫器官胸腺、脾指数试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上试验结果显示，水溶性酵母e-葡聚糖样品具有提高廓清指数和吞噬指数的功能，同时可提高胸腺指数和脾脏指数。试验实施例2:抗体生成试验试验方法取昆明种小白鼠，随即分组，灌胃给药(实施例1中制得的水溶性酵母P-葡聚糖产品)，连续9天，第二天小鼠腹腔注射10%SRBCO.2mL。以产生抗SRBC抗体。第8天眼眶静脉丛釆血，室温下放置lh,2000r/min离心10min，分离血清，经"。C水洛30min灭活。将分离血清用生理盐水做100倍比稀释，取lmL稀释血清加入1%SRBC0.lmL，与Hanks液稀释至麵卜体0.5mL混合，37。C水浴30min,O'C终止反应。离心，取上清液与721分光光度计540nm处比色,以不加血清作空白对照调零。数据经统计学处理，结果见表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>正常小鼠受SRBC免疫后即可产生溶血素，这种抗体在体外与SRBC、补体一起温育，即可使SRBC溶解，释出血红蛋白，使溶液呈红色。测定上清液中的光密度，可间接判断血清中抗体生成的数量，光密度越大，说明抗体生成越多。生理盐水对照管则无溶血现象。表3的实验结果显示，水溶性酵母P-葡聚糖样品各剂量组的吸光度均高于阳性对照组，且随着剂量的增加，光密度呈上升趋势，提示水溶性酵母P-葡聚糖具有增加小鼠抗体生成的功能。实验实施例3:成品检测将实施例1.2.3制得的水溶性酵母P-葡聚糖进行薄层层析检测，其结果如附图2所示点样后经展开剂展开后，实施例l样品、实施例2样品、实施例3样品均和葡萄糖样品在同一位置上，说明所获得的多糖只由葡萄糖一种单糖组成，为葡聚糖；将实施例1制备的水溶性酵母p-葡聚糖的进行红外检测，其红外光谱图如附图3所示图中"19-3329cm—1附近有强而宽的吸收峰，为-O-H键的伸展振动吸收，为多糖上O-H形成的分子间和分子内氢键；2922cm—'附近的吸收为饱和C-H伸缩振动信号，中等强度；1658cm-1f近的吸收为酰胺I的特征吸收，1531cm-1附近的吸收为酰胺II的特征吸收，1250-1425ci^附近的吸收为酰胺III的特征吸收，吸收信号弱，说明其中含有少量蛋白组分，推测为糖结合蛋白；1039、1076和1157cm—i附近有强而宽的吸收峰，是P比喃糖环特征吸收峰，是其糖苷键C-0-C的非对称振动峰，信号强，为典型多糖特征吸收峰；889cm-'附近有明显吸收而850cm—'无吸收峰，表明其多糖结构为p-糖苷键连接而非a-糖苷键连接，组成单糖为P-D-吡喃葡萄糖；在770cm—1附近为吡喃糖环C-O-C的对称振动峰，信号弱。同时含有强C-0-C非对称振动峰和弱C-0-C对称振动峰，表明其多糖主链之外含有支链。另外，在875cm—i和810cm-i附近无吸收峰，表明不含甘露吡喃糖、半乳吡喃糖。结合图2和图3显示的结构特征，说明应用本发明的制备方法从酵母中所获得的水溶性多糖为P-l，3-D-葡聚糖。权利要求1.一种水溶性酵母β-葡聚糖，其特征在于所述的酵母β-葡聚糖以完整酵母菌体为原料制得，其重均分子量为8-20万Daltun。2.制备如权利要求l所述的水溶性酵母p-葡聚糖的方法，包括热水处理、碱提取，其特征在于所述的碱处理过程为(1)向热水处理所得沉淀物I中加入碱溶液，加入的碱溶液体积为沉淀I体积的2-30倍，碱溶液浓度为3-10%(w/v),处理温度为60-85°C，搅拌反应时间O.5-2h，3000-12000r/min离心，收集碱提沉淀物III,得到清液；(2)碱提取后所得清液用酸中和，中和后清液的PH范围为5.0-8.0,3000-12000r/min离心，离心清液浓缩至原体积的1/3-1/15,加入80-100%(v/v)的乙醇，使乙醇浓度达到60-80%(v/v)进行醇析，醇析所得沉淀II中即含有所述的水溶性酵母P-葡聚糖。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的碱处理过程为(1)向水处理所得沉淀物I中加入碱溶液，加入的碱溶液体积为沉淀I体积的10倍，碱溶液浓度为4%-10%(w/v)，处理温度为60-70°C,搅拌反应时间lh,3000-12000r/min离心，收集碱提沉淀物III,得到清液；(2)碱提取后所得清液用酸中和，中和后清液的PH范围为5,0-8.0,3000-12000r/min离心，离心清液浓缩至原体积的1/5，加入80-画(v/v)的乙醇，使乙醇浓度达到65-75%进行醇析，醇析所得沉淀II中即含有所述的水溶性酵母P-葡聚糖。4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于所述碱处理过程使用的碱为氢氧化钠或氢氧化钾或碳酸钠或其混合物。.5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于所述碱处理过程使用的酸为柠檬酸或乙酸或盐酸或硫酸或其混合物。6.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于所述含有水溶性酵母l3-葡聚糖的沉淀，用水复溶后再经柱色谱分离，脱盐，干燥得到高纯度水溶性酵母l3-葡聚糖。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的柱色谱介质为DOWEXMXA-1或Q-SepharoseFF或DEAE-Sephacel或DEAE-S印haroseFF。8.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于对碱提取后所得的碱提沉淀物m再进行酶处理，其具体步骤如下向碱提沉淀物m中加入5-20倍体积的水使之混悬，调节PH4.0-9.0，加入蛋白酶，使蛋白酶总量达到混悬液总量的0.02-0.2%(W/V)，升温到35-60。C,反应时间2-24h,得到非水溶性酵母e-葡聚糖。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于所述的蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶或木瓜蛋白酶或其混合物。10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于所得到的非水溶酵母P-葡聚糖经过酶解、水洗处理后，其中酵母p-葡聚糖含量为90-99%。全文摘要本发明涉及一种水溶性酵母β-葡聚糖及其制备方法。本发明所述的水溶性酵母β-葡聚糖糖链以β-1，3-葡聚糖为主链，β-1，6-葡聚糖为支链，分子量为8-20万Daltun。其制备方法包括水提取，碱提取和杂质处理。本发明制备工艺简单，工艺参数易于操作控制，产物水溶性酵母β-葡聚糖的得率、纯度都比较高。所得到水溶性酵母β-葡聚糖具有显著的免疫激活作用，尤其是可大幅度提高巨噬细胞的吞噬能力和抗体生成能力，进而提高机体的免疫力和抵抗力，可广泛应用于食品、乳品、饮料等领域。文档编号C08B37/02GK101353383SQ20081014021公开日2009年1月28日申请日期2008年9月17日优先权日2008年9月17日发明者艳丁,靖张,徐泽平,杨传伦,王秀芝,甄春峰,苏亚平申请人:山东京博控股发展有限公司