专利名称：一种透明质酸钠提纯优化的方法
技术领域：
本发明涉及一种透明质酸钠提纯优化的方法。
背景技术：
透明质酸钠的工业制法已知有纯化鸡冠提取物的方法，以及纯化由链球菌属的菌株得到的发酵液而获得透明质酸钠的方法。
作为除去透明质酸钠中作为杂质存在的热源物质等高分子量化合物的方法，已知有以下几种方法用大量的水溶性有机溶剂等有选择的使透明质酸钠沉淀的方法；离子交换树脂处理法；吸附树脂处理法；十六烷基氯化吡啶鎗等方法。
上述这些方法虽然能够提供无溶血性、无化学趋化性、热原试验呈阴性的透明质酸钠，但作为除去热源物质必须要进行繁杂的操作。
因此目前希望开发一种能够容易地从透明质酸钠除去热源物质的纯化方法。
本发明的目的在于提供一种容易的获得热源物质含量低的高纯度透明质酸钠的纯化方法以及由该纯化方法获得的透明质酸钠。
发明内容
本发明的方法包括如下歩骤
1) 8CTC复溶透明质酸钠；
2) 添加适量钠盐；
3) 然后将含有透明质酸钠的溶液在8CTC时通过带正电的尼龙-66聚酰胺树脂
膜的过滤器；
4) 然后再向滤液中加入钠盐及水溶性有机溶剂；5) 析出沉淀；
6) 反复析沉淀两次；
7) 真空干燥得医用级透明质酸钠精粉。
本发明中，透明质酸钠可以是细菌发酵法生产也可以是组织提取的均可，与透明质酸钠的分子量无关。
透明质酸钠例如可以是由玻璃体、脐带、关节液、鸡冠等分离得到的物质，以及山马链球菌、酿脓链球菌、停乳链球菌等微生物生产的物质。
透明质酸钠溶液优选是含有0.001 1% (W/V)透明质酸钠的水溶液，用于溶解透
明质酸钠的水，其中的热源物质优选低于0.01Eu/ml。
为除去该透明质酸钠溶液中的杂菌或不溶物，也可用0.2~0.5um的过滤器进行过滤处理。
另外，为除去透明质酸钠溶液中的热源物质，也可以使用在特定的pH范围带正电的过滤器进行过滤处理。
上述过滤器只要是在pH3 10的水溶液中带正电的过滤器即可，优选使用膜过滤器。
作为上述的过滤器，优选是由尼龙-66聚酰胺树脂作为一种成分组成的共聚物形成的膜孔径为0.2~0.5un的过滤器。
使用该过滤器进行过滤处理时，为提高过滤速度，可以添加盐或升高透明质酸钠溶液的液温。
所说的盐，其中的碱成分是由锂、钠、钾等碱金属离子，镁、钙等金属离子，其中的酸成分是由氯、溴等卤素离子，硫酸、硝酸等无机酸，以及甲酸、乙酸等有机酸的酸根组成的阴性成分，优选钠盐，盐可以单独或组合使用。
具体的盐例如可以举出氯化钠、硫酸钠、醋酸钠等。
相对于透明质酸溶液，优选加入1~30 (W/V)的盐。水溶性有机溶剂的添加量是要使透明质酸钠的最终浓度为30~90% (V/V)，这样可以使透明质酸钠析出。
作为水溶性的有机溶剂，只要是可溶于水的有机溶剂即可使用，具体可以举出甲醇、乙醇、丙酮等。另外，使用的水溶性有机溶剂优选热源物质含量低的。
通过想透明质酸钠溶液中加入水溶性有机溶剂，从析出、沉降的透明质酸钠中高效率地除去热源物质，为使透明质酸钠充分的沉降，通常在添加水溶性有机溶剂后放置2小时以上，使透明质酸钠沉降。
从透明质酸钠沉降后的溶液中除去上清液，从而除去热源物质。
具体实施例方式
以下给出本发明的实施例，进一歩对本发明进行详细说明，但本发明并不限于此。
实施例1
. 将热源物质含量0.1Eu/mg的透明质酸钠25g溶于热源物质含量低于0.01Eu/ml的10L水中，加入25gNaCl，升高透明质酸钠溶液的温度到80°C ，用0.45um的微孔过滤器进行过滤处理，得到滤液。
在上述滤液中加入氯化钠是氯化钠的浓度达到58.5g/L，之后加入乙醇使乙醇的浓度为50% (V/V)。
上述溶液放置5小时，使透明质酸钠析出、沉降，除去该溶液的上清液，得到透明质酸钠的沉降物。
用80%的乙醇水溶液洗涤上述沉降物，之后再用100%乙醇洗涤。真空干燥上述洗涤物，得到20g纯化的透明质酸钠。
实施例2
将热源物质含量0.1Eu/mg的透明质酸钠25g溶于热源物质含量低于0.01Eu/ml的10L水中，加入25gNaCl，升高透明质酸钠溶液的温度到80°C ，用0.45um的微孔过滤器进行过滤处理，得到滤液。
在上述滤液中加入氯化钠是氯化钠的浓度达到58.5g/L，之后加入丙酮使丙酮的浓 度为44% (V/V)。
上述溶液放置5小时，使透明质酸钠析出、沉降，除去该溶液的上清液，得到透明 质酸钠的沉降物。
用80%的丙酮水溶液洗涤上述沉降物，之后再用100%丙酮洗涤。 真空干燥上述洗涤物，得到20g纯化的透明质酸钠。
实施例3
将热源物质含量0.1Eu/mg的透明质酸钠25g溶于热源物质含量低于0.01Eu/ml的 10L水中，加入25gNaCl，升高透明质酸钠溶液的温度到80°C ，用0.45um的微孔过滤 器进行过滤处理，得到滤液。
在上述滤液中加入氯化钠是氯化钠的浓度达到58.5g/L，之后加入乙醇使乙醇的浓 度为44% (V/V)。
上述溶液放置5小时，使透明质酸钠析出、沉降，除去该溶液的上清液，得到透明 质酸钠的沉降物。
用80%的乙醇水溶液洗涤上述沉降物，之后再用100%乙醇洗涤。 真空干燥上述洗涤物，得到18g纯化的透明质酸钠。
发明结果
下表给出上述得到的透明质酸钠中的热源物质的含量。
析出使有机溶剂浓度(v/v%)热源物质含量(Eu/mg)
乙醇500,01
丙酮440.25
乙醇440.25
权利要求
1.一种透明质酸钠提纯优化的方法，其特征在于，包括如下步骤1)80℃复溶透明质酸钠；2)添加适量钠盐；3)然后将含有透明质酸钠的溶液在80℃时通过带正电的尼龙-66聚酰胺树脂膜的过滤器；4)然后再向滤液中加入钠盐及水溶性有机溶剂；5)析出沉淀；6)反复析沉淀两次；7)真空干燥得医用级透明质酸钠精粉。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中在透明质酸钠溶液中含有 0.001 1% (W/V)的透明质酸钠。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，选用细菌发酵法生产的透明质酸或 组织提取的透明质酸。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中的细菌发酵法利用的微生物足 属于链球菌属的微生物。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中钠盐的添加量是1 30。/。(W/V)。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中钠盐可以是氯化钠、硫酸钠和醋 酸钠。
7. 根据权利要求l所述的方法，其特征在于，其中水溶性有机溶剂是甲醇、乙醇或 丙酮。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中使用的带正电的尼龙-66聚酰胺 树脂膜的过滤器，其过滤膜的pH为3~10 。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中制得的医用透明质酸钠热源物 质含量低于0.25Eu/mg。
全文摘要
本发明提供了一种透明质酸钠提纯优化的方法，以及由该方法获得的透明质酸钠。本发明的纯化方法的特征在于在含有透明质酸钠的溶液中及含有透明质酸钠的溶液通过带正电的过滤器后的滤液中，加入盐和水溶性有机溶剂，使透明质酸钠析出沉降，通过抽出上清液从而除去热源物质。
文档编号C08B37/08GK101676307SQ200810200148
公开日2010年3月24日 申请日期2008年9月19日 优先权日2008年9月19日
发明者玲 丁, 任彩霞, 孔淑静 申请人:上海建华精细生物制品有限公司