多支链聚氧化亚烷基衍生物的制作方法

专利名称：：多支链聚氧化亚烷基衍生物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于包括修饰生物相关物质在内的用途的多支链聚氧化亚垸基衍生物和制备多支链反应性聚氧化亚垸基衍生物的中间体。另外，本发明涉及结合聚氧化亚垸基衍生物的修饰的生物相关物质。
背景技术：
：近年来，随着基因工程的进展，人们对药物的开发和研究活跃地进行开来，这使用了生物相关物质，例如细胞间信号传导物质(例如激素和细胞因子)、抗体和酶。当这些物质注入生物体内时，由于通过肾脏中的神经纤维球的过滤和通过肝脏、脾脏等中的巨噬细胞的摄取，这些生物相关物质通常被从体内清除，因此它们在血液中的半衰期较短，因此难以获得足够的药理效果。为了解决这些问题，尝试通过将生物相关物质包含在脂质体或聚合物胶束中、或者增加它们的分子量、或者通过使用两亲性聚合物(例如糖链、或聚乙二醇、或白蛋白)进行化学修饰以形成水化层来改善在生物体内的行为。另外，通过使用聚氧化亚烷基进行修饰，还获得降低毒性和抗原性以及增强水难溶性药剂的溶解性的效果。近年来，在使用聚氧化亚垸基修饰生物相关物质的情况中，为了不阻断活性位点或者为了使用更少的聚氧化亚烷基数目来获得更大的水化层，人们对增加聚氧化亚烷基衍生物的分子量进行了研究。然而，在制备高分子量的聚氧化亚垸基的情况中，在制备中产生了诸如纯度降低和粘度增加之类的问题，因此无法有效地获得适用于生物相关物质的修饰剂的聚氧化亚垸基。另一方面，为了更有效地增加分子量，提出开发使用具有支链结4构的聚氧化亚乙基。专利文献1描述了使用如下聚氧化亚烷基的天冬酰胺酶，所述聚氧化亚烷基具有含有氰尿酰氯作为主要骨架的双链结构，专利文献2描述了使用如下聚氧化亚垸基的干扰素-OC，所述聚氧化亚烷基具有含有赖氨酸作为主要骨架的双链结构。此外，专利文献3描述了使用聚氧化亚烷基的生物相关物质，所述聚氧化亚垸基具有含有1，2-丙三醇作为主要骨架的双链结构。这些结构都具有双链结构作为基本骨架，但为了获得更大的水化层，从开发医药用途的观点来看要求具有更多支链结构的聚氧化亚烷基。专利文献4和5描述了具有含有环己垸环、单糖(例如葡萄糖或山梨糖醇)、或多羧酸(例如柠檬酸)作为基本骨架的三至五支链结构的聚氧化亚烷基衍生物，专利文献6和7描述了具有含有三甘油作为基本骨架的四链结构的聚氧化亚烷基衍生物。由于专利文献4和5中描述的聚氧化亚烷基衍生物是通过使过量的单链聚氧化亚垸基衍生物反应而引入基本骨架(例如环状多元醇)中来制备的，未与基本骨架反应的多余的单链聚氧化亚垸基衍生物残留，因此其应该被除去。另外，在目标聚氧化亚烷基链的数量为较多的数量时，由于其中未引入目标链的数量的杂质作为副产物产生，因此非常难于消除这些杂质，因而其工业生产是更困难的。专利文献6和7中描述的聚氧化亚垸基衍生物是通过将环氧乙烷加入三甘油单烯丙基醚中而获得的。然而在使用碱作为加成反应的催化剂的情况下，烯丙基醚重排为丙烯基醚，并且进一步地在中和步骤等中使用酸的情况下，体系变得局部呈酸性，并且丙烯基醚被转化为羟基，使得目标产物的纯度变低。而且，在专利文献6和7中，尽管通过使烯丙基醚基团与具有巯基的羧酸或具有巯基的有机胺反应而形成硫醚键来引入羧基或氨基，但是使得所得化合物仅限于具有硫醚键的那些。如上所述，仍未获得这样的具有多个数量的聚氧化亚垸基链的衍生物，该衍生物能够有效地用于包括修饰生物相关物质在内的用途，并且工业上容易制备，因此十分期望开发这样的多支链聚氧化亚烷基衍生物。专利文献l:日本专利申请公开JP-B-61-42558专利文献2:日本专利申请公开JP-A-10-67800专利文献3:日本专利申请公开JP-A-2004-197077专利文献4:WO01/048052小册子专利文献5:WO02/060978小册子专利文献6:日本专利申请公开JP-A-2000-1542专利文献7:日本专利申请公开JP-A-2000-4467
发明内容本发明所要解决的问题本发明的目的是提供新型多支链聚氧化亚垸基衍生物和制备该多支链聚氧化亚烷基衍生物的中间体。具体而言，本发明的目的是提供高分子量多支链聚氧化亚垸基衍生物，其可以保持使用多支链聚氧化亚烷基衍生物修饰的生物相关物质的高活性，并且可以容易地制备所述修饰的物质；所述多支链聚氧化亚垸基衍生物的中间体；以及结合所述多支链聚氧化亚垸基衍生物的生物相关物质。解决问题的手段作为深入研究以解决上述问题的结果，本发明人开发了一种新型多支链聚氧化亚烷基衍生物并因此完成了本发明。艮P，本发明涉及一种多支链聚氧化亚垸基衍生物和制备该多支链聚氧化亚垸基衍生物的中间体，如式(1A)中所示，所述多支链聚氧化亚垸基衍生物在甘油的1位具有反应性基团，在甘油的2和3位具有氧化亚烷基链，并且在氧化亚烷基链的末端通过多元醇骨架还具有多支链结构。此外，本发明还涉及使用聚亚垸基二醇衍生物修饰的生物相关物质。即，本发明如下列方面所述。一种由式(1A)表示的聚氧化亚烷基衍生物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚垸基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，X表示能够与生物相关物质反应的官能团，并且a表示1、3或5。X」-0-(A10)」0(A20)n-R0-(A20)n-R-O—(A10)，-0-(A20)n-fR-0-(A20)n-R(1)其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，并且X表示能够与生物相关物质反应的官能团。—种生物相关物质，其是通过与所述由式(1A)表示的聚氧化亚垸基衍生物的反应而修饰的。一种由式(1B)表示的聚氧化亚烷基衍生物0-(A10),-0—(A10)X1_l0-(A20)n-R0(A20)n-R);(1B)-0(A20)n-R)a-0(A20)n_R其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚垸基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，Xi表示可被保护的羟基，并且a表示l、3或5。—种由式(A)表示的聚氧化亚烷基衍生物:[<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(A)其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的经基，并且乂1表示可被保护的羟基。发明的优点由于根据本发明的新型多支链聚氧化亚垸基衍生物(IA)具有多支链结构，并且所述衍生物还不降低与其结合的生物相关物质的活性，因此所述衍生物可以在保持生物相关物质的活性位点的条件下提供较大的水化层。另外，通过增加具有多支链结构的聚氧化亚烷基衍生物的支链，可以降低粘度。作为降低粘度的优点，例如可以提到在所述衍生物用于修饰生物相关物质时容易处理，更具体而言，可以提到能够降低注射所需要的压力、能够减轻注射时的疼痛等。另外，还可以提到下列优点还能够在通过分阶段地进行本身已知的生产步骤来进行制备时不产生问题的条件下制备高纯度的衍生物。此外，由于所述衍生物在能够与生物相关物质形成化学结合的官能团和多支链结构之间具有双链结构(其具有特定的分子量)，因此可以改善生物相关物质和多支链聚氧化亚烷基衍生物(IA)之间的反应性。根据本发明，可以提供具有这种特性的新型多支链聚氧化亚垸基衍生物及其中间体。200本发明的最佳实施方式在本说明书中，由式(1A)表示的聚氧化亚垸基衍生物的a为1、3或5，并且优选为1或3。特别地，从可以进一步降低在制备过程中形成的杂质的观点来看，优选其中a为1的一种衍生物，即由式(l)表示的聚氧化亚烷基衍生物。在本说明书中，A10和A20各自独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基。具体而言，其包括具有2至4个碳原子、优选2至3个碳原子的氧化亚垸基，例如氧化亚乙基、氧化亚丙基、氧化三亚甲基、氧基-l-乙基亚乙基、氧基1,2-二甲基亚乙基、和氧化四亚甲基。A10和A20中的氧化亚烷基可以彼此相同或不同，并且可以无规或嵌段方式加入。通常，碳原子数越少，亲水性越高。该基团优选为氧化亚乙基或氧化亚丙基，更优选为氧化亚乙基。在本说明书中，m和n各自为加入的氧化亚垸基的平均摩尔数。m为20至500，优选为40至300，更优选为50至230，进一步优选为80至150，n为15至700，优选为50至700，更优选为80至500，进一步优选为100至350。双链结构部分(A10链)的分子量为2,000至40,000，优选为5,000至25,000，进一步优选为8,000至15,000。在a为1、3或5的情况下，多链结构部分(八20链)的分子量为3,000至80,000，优选为10,000至75，000，进一步优选为20,000至65,000。多支链聚氧化亚垸基衍生物(1A)的分子量变化取决于"能够与生物相关物质反应的官能团"的种类，但其通常为5,000至120,000，优选为20,000至100,000，进一步优选为30,000至80,000。聚氧化亚垸基衍生物(1B)的分子量通常为5,000至120,000,优选为20,000至100,000，进一步优选为30,000至80,000。另外，关于双链结构部分(A10链)的分子量与多链部分(A20链)的分子量的比，在双链结构部分(A&链)的分子量被认为1时，在a为1、3或5的情况下，多链部分(八20链)的分子量为1至40，优选为1.5至10，进一步优选为2至5。在式(l)的多支链聚氧化亚垸基衍生物中由X表示的"能够与生物相关物质反应的官能团"并无特别限定，只要其是能够与生物相关物质反应的官能团并且是能够形成化学结合的基团即可。就此而言，聚氧化亚烷基链和官能团之间的结合部分中优选不含硫醚健。这是因为在结合部分中含有硫醚健时，结合的稳定性往往变差。官能团可通过连接体与生物相关物质结合，因此由X表示的"能够与生物相关物质反应的官能团"的概念也包括连接体部分。在优选的实施方案中，X是由组(I)表示的基团组(I):[化学式5]0.-NH2(a)-NO(b)OiiCO—N(c)0II00II0o0—C0_/~N02(d)——0_C-CH2W1(e)~~Z—6—NHNH2(f)ONH2(g)Oii,、Z——CH())OII1-O—S—R1(m)IIOCOOH(h)O,、、II/,'、-O—C_NI(k)-Z——SH(i)/\O匿O-CO~N\i(1)-C三CH(n)-N3(o)其中W表示具有1至10个碳原子的烃基，所述烃基可含有氟原子，Wi表示卣素原子，以及Z表示聚亚垸基二醇氧基和官能团之间的连接体。在与生物相关物质的氨基反应的情况下，由(c)、(d)、(h)、(j)、(k)和(l)表示的基团是优选的；在与生物相关物质的巯基反应的情况下，由(b)、(c)、(d)、(e)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)和(n)表示的基团是优选的；在与生物相关物质的不饱和键反应的情况下，由(i)和(o)表示的基团是优选的；在与生物相关物质的羧基反应的情况下，由(a)、(g)和(i)表示的基团是优选的；在与生物相关物质的醛基反应的情况下，由(a)、(f)、(g)和(i)表示的基团是优选的；以及在与生物相关物质的叠氮化物键反应的情况下，由(n)表示的基团是优选的。由(m)表示的基团被用作反应中间体。组(I)中的Z是聚亚垸基二醇氧基和反应性官能团之间的连接体，其并无特别限定，只要其不含硫醚键并且是能够在两种基团之间形成共价键的基团即可，但其优选包括具有1至8个碳原子、优选1至6个碳原子的基团，例如亚烷基、亚苯基、和含有酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、醚键、碳酸酯键或仲氨基的亚烷基。优选的亚垸基包括亚甲基、亚乙基、三亚甲基、亚丙基、亚异丙基、四亚甲基、亚丁基、亚异丁基、五亚甲基、六亚甲基等。更优选地，例如可以提到诸如下列(zl)之类的结构。作为含有酯键的亚烷基，进一步优选可以提到诸如下列(z2)之类的结构。作为含有酰胺键的亚垸基，更优选可以提到诸如下列(z3)之类的结构。作为含有醚键的亚垸基，更优选可以提到诸如下列(z4)之类的结构。作为含有氨基甲酸酯键的亚垸基，进一步优选可以提到诸如下列(z5)之类的结构。作为含有仲氨基的亚烷基，更优选可以提到诸如下列(z6)之类的结构。在各式中，s为l至6的整数，优选为l至3的整数，进一步优选为2至3的整数。组(n)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中S为l至6的整数，优选为1、2或3。W是具有1至IO个碳原子的烃基，所述烃基可含有氟原子，并且具体烃基包括下列烃基例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、己基、壬基、乙烯基、苯基、苄基、4-甲基苯基、三氟甲基、2，2,2-三氟甲基、4-(三氟甲氧基)苯基等。优选为甲基、乙烯基、4-甲基苯基、和2,2,2-三氟甲基。Wi表示卤素原子(例如Cl或Br)，优选为Br或I，更优选为I。在本说明书中，R为氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，具体烃基包括垸基(在式中，l至7个碳原子)，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、和庚基；芳垸基，例如节基、甲苯基、丁基苯基、和三苯甲基等。所述烃基优选为具有1至7个碳原子的烃基，更优选为具有1至4个碳原子的烃基，例如甲基、乙基、或叔丁基、或苄基，进一步优选为甲基。根据本发明，"生物相关物质"是指涉及生物体的物质，其例子包括构成生物体的物质或者对生物体具有生理活性的物质(生理活性物质)。例如，能够被式(l)的多支链聚氧化亚垸基衍生物修饰的生物相关物质包括下列这些物质。(1)动物细胞构成物质，例如磷脂、糖脂和糖蛋白动物细胞构成物质是构成细胞膜等的成分，其种类并无特别限定，但其例子包括磷脂、糖脂和糖蛋白。更具体的磷脂的例子包括磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、和磷脂酰肌醇。另外，还包括它们的溶血异构体。这些磷脂可以是衍生自天然产物(例如蛋黄或大豆)的那些，或者可以是合成产物。脂肪酸的组成并无特别限定，但可优选包括具有12至22个碳原子的脂肪酸。这些脂肪酸可以是饱和脂肪酸，或者可以是含有不饱和键的那些。更具体的糖脂的例子包括神经酰胺、脑苷脂、鞘氨醇、神经节苷脂、和甘油糖脂。另外，还包括脂肪酸、甘油一酸酯、甘油二酯、胆固醇、和胆汁酸。(2)体液构成物质，例如血液、淋巴液和骨髓液体液构成物质是指存在于细胞内部和外部的液体组分，并且其种类并无特别限定，但其例子包括血液、淋巴液和骨髓液。构成这些体液的更具体的组分的例子包括血红蛋白、白蛋白、凝血因子等。(3)生理活性物质，例如维生素、神经传递素、蛋白、多肽和药物生理活性物质是指控制机体功能的成分，并且种类并无特别限定，但其例子包括维生素、神经传递素、蛋白、多肽和药物。更具体的维生素的例子包括维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K等。更具体的神经传递素的例子包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、乙酰胆碱、GABA、谷氨酸、天冬氨酸等。更具体的蛋白和多肽的例子包括下列物质。激素，例如垂体后叶激素、甲状腺激素、雄性激素、雌性激素、和肾上腺皮质激素。血清蛋白，例如血红蛋白和血液因子。免疫球蛋白，例如IgG、IgE、IgM、IgA和IgD。细胞因子及其片段，例如白介素(IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL隱6、IL隱7、IL-8、IL陽9、IL-IO、IL-ll和IL-12亚型)、干扰素(-a、-卩、-Y)、粒细胞集落刺激因子(a和p型)、巨噬细胞集落刺激因子、粒-巨噬细胞集落剌激因子、血小板源生长因子、磷脂酶活化蛋白、胰岛素、高血糖素、植物凝集素、蓖麻毒、肿瘤坏死因子、表皮生长因子、转化生长因子(-a、-p)、成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、血管内皮生长因子、神经生长因子、骨生长因子、类胰岛素生长因子、肝素结合生长因子、肿瘤生长因子、胶质细胞系源神经营养因子、巨噬细胞分化因子、分化诱导因子、白血病抑制因子、双调蛋白、生长调节素、促红素、红细胞生成素、血栓形成素、和降钙素。酶，例如蛋白水解酶、氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、连接酶、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、超氧化物歧化酶、内毒素酶、过氧化氢酶、胰凝乳蛋白酶、脂肪酶、尿酸酶、弹性蛋白酶、溶栓酶、尿激酶、尿激酶原、二磷酸腺苷酶、酪氨酸酶、胆红素氧化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖酶(glucodase)、半乳糖苷酶、葡萄糖脑苷脂酶、和葡萄糖苷酸酶。单克隆抗体和多克隆抗体及其片段。聚氨基酸，例如聚-L-赖氨酸和聚-D-赖氨酸。疫苗，例如肝炎B疫苗、疟疾疫苗、黑素瘤疫苗、和HIV-1疫苗、以及抗原。另外，还包括醣蛋白。此外，还包括生理活性与这些生理活性物质的生理活性类似的结构相似的物质。另外，这些蛋白和多肽可从它们的天然源或经历基因工程的细胞中分离，或者可通过各种合成方法来制备。药物(即生理活性物质)并无特别限定，但更优选包括抗癌剂和抗真菌剂。更具体的抗癌剂并无特别限定，但包括(例如)紫杉醇、阿霉素、多柔比星、顺铂、道诺霉素、丝裂霉素、长春新碱、表柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿克拉霉素、依达比星、博来霉素、吡柔比星、培洛霉素、万古霉素、和喜树碱。具体的抗真菌剂并无特别限定，但包括(例如)两性霉素B、制霉菌素、氟胞嘧啶、咪康唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、和肽类抗真菌剂。另外，这些生理活性物质还包括(例如)具有抗氧化作用、PAF抑制作用、抗炎作用、和抗真菌作用的类黄酮、类萜、类胡萝卜素、皂角苷、类固醇、苯醌、蒽醌、吨酮、香豆素、生物碱、卟啉、和多酚。多支链聚氧化亚垸基衍生物(lA)可通过将下列化合物(pla)(其为聚氧化亚烷基衍生物)转化为具有能够与生物相关物质反应的官能团的化合物来制备。H2C-0(A20)n-R(H(-0(A20)n-R)a<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>(P1a)另外，化合物(pla)可通过(例如)下图中示出的路线来制备,[化学式8]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>1，2-环氧烷烃的聚合<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中E表示羟基的保护基团，L表示离去基团，并且其他符号的意思与上述相同。作为羟基的保护基团，可以提到苄基、叔丁基、三苯甲基等。作为离去基团，可以提到氧化钠基团、氧化钾基团、卤素基团(例如Cl或Br)、甲磺酰基、2,2,2-三氟乙垸磺酰基等。在上图中，中间体包括对应于聚氧化亚烷基衍生物(lB)的式(pla)、(plb)和(plc)的中间体。下面将描述制备化合物(pla)的合适的具体例子。在2,2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇的羟基被保护基团(例如苄基或叔丁基)保护后，环状縮醛结构在酸性条件下分开，从而产生两个羟基。通常40至IOOO摩尔的量的1,2-环氧烷烃与所述两个羟基聚合。CH2—OHICH—OHICH2—OH縮酮化3CH2—OHCH——0\,CH3CH—0\CH3H~0CH3CH2_0CH3(Pie)b为了使用其中a分别为1、3或5的多元醇获得其中b为0、l或2的多元醇衍生物(ple)，例如可以如PROCTECTIONGROUPSINORGANICSYNTHESIS(THEODORAW.GREENEatal.)中所述，使用通常的羟基保护方法来进行縮酮化。这种缩酮化可包括在相邻或非相邻的羟基上进行的一种縮酮化。另外，作为ple，可以使用通过这些方法制备的异构体中的任意一种。通过将离去基团L引入所得多元醇衍生物(ple)而获得的化合物(pld)与聚氧化亚烷基的末端结合，然后环状縮醛结构裂开，从而在a为l(即b为O)的情况下产生四个羟基，在a为3(即b为l)的情况下产生八个羟基，以及在a为5(即b为2)的情况下产生十二个羟基。裂开通常在酸性条件下进行。通常，50至2000摩尔的量的1,2-环氧垸烃与多个羟基聚合，然后末端进行垸基醚化。然后，保护基团E裂开，从而产生新的羟基(上述化合物(pla))。H2C-0(A20)n-RH2—OHH-0(A20)n—RHC—0(A10)m-CH2H2C—0(A10)m-CH2H(U0(A20>n-RH2C—0(A20)n-R(PO)由于相同的制备方法适用于a为1、3或5(即b为0、1、2)的情况中的任意一种，因此下文中将描述a为l(即b为O)的情况。其中a为l(即b为O)的化合物(pO)可通过下图中示出的路线来制备。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>团(例如Cl或Br)、甲磺酰基、2，2，2-三氟乙垸磺酰基等。在上图中，中间体包括对应于聚氧化亚垸基衍生物(A)的式(pO)、(pA)和(pB)的中间体。下面将描述制备化合物(pO)的合适的具体例子。在2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的羟基被保护基团(例如苄基或叔丁基)保护后，环状缩醛结构在酸性条件下分开，从而产生两个羟基。通常40至1000摩尔的量的1，2-环氧烷烃与所述两个羟基聚合。此外，在2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇与末端结合后，环状縮醛结构开裂，从而产生四个羟基。开裂通常在酸性条件下进行。通常，50至2000摩尔的量的1，2-环氧垸烃与四个羟基聚合，然后末端进行烷基醚化。然后，保护基团(例如苄基或叔丁基)开裂，从而产生新的羟基(上述化合物(pO))。在R为氢原子的化合物的情况下，在末端烷基醚化时，在与保护2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的羟基的保护基团不同的保护基团醚化后，保护2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的羟基的保护基团开裂，从而产生新的羟基。在羟基通过下面提到的方法转化为官能团后，聚氧化亚垸基链的末端羟基的保护基团开裂，从而获得目标化合物。如上所述，通过使用1，2-环氧垸烃加成聚合反应可以以工业上合适的方式在不使用柱纯化的情况下高收率地制备高纯度的聚亚烷基二醇衍生物。作为使用保护基团的保护，例如2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的羟基的苄基醚化，可以提到下列方法。l)其可以通过在存在碱性催化剂(例如氢氧化钠或氢氧化钾)、在非质子溶剂中或不使用任何溶剂的条件下使氯甲苯或溴甲苯与2，2-二甲基-l,3-二氧戊环-4-甲醇反应来完成。2)其可以通过金属钠、金属钾、氢化钠、氢化钾、甲醇钠、甲醇钾、叔丁醇钾等在非质子溶剂中或不使用任何溶剂的条件下使2,2-二甲基-l,3-二氧戊环-4-甲醇的羟基转化为醇化物、然后在碱性条件下使醇化物与氯甲苯或溴甲苯反应来完成。3)其可以通过使用甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、2,2,2-三氟乙基磺酰氯等在非质子溶剂中或不使用任何溶剂的条件下活化2,2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇的羟基、然后与苄醇的醇化物反应来完成。在苄基醚化后环状縮醛结构的脱保护通过在使用酸(例如乙酸、磷酸、硫酸或盐酸)将pH调节至1至4的水溶液中反应来完成，从而可以制备式(7)的化合物。1,2-环氧烷烃与具有两个羟基(其通过环状縮醛结构的脱保护而新形成)的式(7)的化合物的加成聚合的方法并无特别限定，但可以通过下列步骤(D1)和(D2)来完成。CH2-OCH2《〉CHOHICHgOH..,("步骤(D1):作为式(7)的化合物的醇化方法，使用金属钠或钾、优选金属钠作为催化剂、在催化剂量为5至50摩尔％的条件下进行醇解，然后在10至50'C下溶解。步骤(D2):在5(TC至13(TC的反应温度下进行1,2-环氧垸烃的加成聚合关于步骤(D1)中的催化剂的量，由于在小于5摩尔％时1,2-环氧烷烃的聚合速率降低并且热累积增加，从而导致形成诸如末端乙烯基醚化合物之类的杂质，因此在高质量的高分子量化合物的制备中，催化剂的使用量为5摩尔％或更高是有利的。当催化剂的量超过50摩尔%时，在醇化反应时反应溶液的粘度增加或者溶液固化，因此存在搅拌效率降低和无法促进醇化的趋势。另外，当溶液固化时，其处理往往困难，这引起吸湿。当醇化物吸水时，衍生自水的亚烷基二醇化合物形成并且作为杂质不利地混入医药用途中。在溶解温度高于5(TC时，可能发生分解反应以形成苄醇和甘油。在形成苄醇时，其引发了与1,2-环氧垸烃的加成聚合，从而产生分子量为目标化合物的分子量0.5倍的低分子量杂质。在形成衍生自苄醇的低分子量杂质时，如同目标化合物中的情况那样，官能团通过羟基的垸基醚化和随后步骤中的脱保护而引入，使得杂质转化为能够与生物相关物质反应的低分子量杂质。可能存在这样的情况这种杂质可与生物相关物质反应并且改变所得制剂的性能。另外，在形成甘油时，其也引发了与1,2-环氧垸烃的加成聚合，从而产生分子量为目标化合物的分子量1.5倍的高分子量杂质。由于所述高分子量杂质不具有苄基，并且其末端羟基只被垸基醚化，因此没有引入官能团。然而，在含有这种杂质的同时与药剂等结合时，所得制剂是不均一的，因此质量往往变化。此外，该制剂不适用于要求高纯度产品的医药用途。当在低于l(TC的温度下进行溶解时，如同催化剂的量高于50摩尔％的情况那样，在醇化反应时反应溶液的粘度增加或者溶液固化，其处理往往变得困难并且引起吸湿。反应溶剂并无特别限定，只要其为非质子溶剂即可，例如甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，但优选为甲苯或无溶剂。反应时间优选为1至24小时。在时间少于1小时时，注意到催化剂不会完全溶解。在时间长于24小时时，注意到可能发生上述分解反应。关于步骤(D2)中的反应温度，当温度低于5(TC时，聚合速率较低并且热累积增加，从而导致式(6)的化合物的质量降低的趋势。另外，当温度高于13(TC时，在聚合过程中发生诸如末端的乙烯基醚化之类的副反应，因此目标化合物的质量往往降低。在聚合过程中，随着分子量增加，反应溶液的粘度也增加，使得可以可任选地加入非质子溶剂(优选甲苯)。作为醇化步骤中的另一种制备方法，可以提到下面的步骤(D3)。步骤(D3):加入5摩尔％至50摩尔％的量的甲醇钠、叔丁醇钾或甲醇钾、优选甲醇钠作为催化剂，并且在6(TC至8(TC下进行反应。此时，为了促进交换反应，可以进行减压操作。出于上述提到的原因，催化剂的量优选为5摩尔％至50摩尔％。关于反应温度，当温度低于6(TC时，交换反应的转化降低，并且残留醇(例如甲醇)，这导致通过1,2-环氧垸烃的加成聚合而形成分子量为目标化合物的分子量0.5倍的杂质。当温度高于8(TC时，发生分解反应。醇化反应需要高温，并且由于分解反应易于发生，反应时间优选为1至3小时。当时间少于1小时时，注意到醇化物的转化降低。当时间长于3小时时，可能发生分解反应。反应溶剂并无特别限定，只要其为非质子溶剂即可，但优选为甲苯或无溶剂。随后末端与2,2-二甲基-l,3-二氧戊环-4-甲醇的醚化(IPG化)可通过下列方法(1)或(2)来完成(l)将聚亚垸基二醇链的末端转化为醇化物、然后使其与甲磺酰化2，2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇(甲磺酸2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酯)反应的方法；(2)使用甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、2,2,2-三氟乙基磺酰氯等活化聚亚垸基二醇链的末端羟基、然后与2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的醇化物反应的方法。方法(2)是优选的，下面将对其进行更详细地描述。制备方法(2)包括下列步骤(C1)、(C2)和(C3)。步骤(C1):将脱卣剂和由式(6a)表示的化合物加入由式(6)表示的化合物中、然后使它们在2(TC至6(TC下反应以获得式(5)的化合物的步骤。CHO(A，O)巾HCH20(A10)mH…(6)14]R，(6a)Jf9s=o学V[化学式15]CH2—OCH2OCHO(A20)m—§-R16OCH20(A20)m—§-R1O','(5)使用的脱卤剂包括有机碱，例如三乙胺、吡啶和4-二甲基氨基吡啶；以及无机碱，例如碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙酸钠、碳酸钾和氢氧化钾。优选的脱氯化氢剂为有机碱，例如三乙胺、吡啶或4-二甲基氨基吡啶。另外，反应中使用的脱卤剂的量优选为式(6)中的一个羟基的1至8倍当量，更优选为1至4倍当量。在使用的式(6a)的化合物中，W为能够与羟基反应的基团，优选为Cl或Br，R1为具有1至10个碳原子的烃基(可含有氟原子)，优选为甲基、苯基、或对甲基苯基。更合适地，最优选其中W为Cl并且W为甲基的甲磺酰氯。另外，反应中使用的化合物(6a)的量优选为式(6)中的一个羟基的1至6倍当量，更优选为1至3倍当量。此时使用的溶剂并无特别限定，只要去为非质子溶剂即可，并且优选包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，但更优选为能够共沸除去体系中的水分的甲苯。反应中使用的溶剂的量优选为式(6)的化合物的0.5倍重量至10倍重量。在式(6)的化合物具有较大的分子量的情况下，反应溶液的粘度增加并且转化降低，使得优选使用所述溶剂稀释反应溶液。反应温度并无特别限定，但为了抑制副反应优选为6(TC或更低，并且为了抑制反应溶液的粘度的增加优选为2(TC或更高。反应时间优选为1至24小时。当时间少于l小时时，注意到转化较低。当时间长于24小时时，注意到可能发生副反应。在反应时，可在反应之前进行从初始材料中除去水分的操作，例如共沸除去水分。另外，可加入抗氧化剂，例如2,6-二叔丁基对甲酚。此外，随着反应的进行，伴随式(5)的化合物的形成而形成盐，但是反应混合物可这样用于随后的步骤中，或可以通过过滤除去盐，或在过滤后式(5)的化合物可通过纯化方式(例如萃取、重结晶、吸附处理、再沉淀、柱层析、或超临界萃取)来纯化。步骤(C2):将由式(7a)表示的化合物加入式(5)的化合物中、然后使它们在2(TC至8(TC下反应以获得式(4)的化合物的步骤。H3CH3C\2C1O-CH——CH，一OM(7a)在式(7a)中，M为碱金属，例如钠或钾，优选为钠。反应中使用的化合物(7a)的量优选为衍生自式(5)的化合物(6a)的个官能团的2至8倍当量，更优选为2至5倍当量。反应中使用的溶剂并无特别限定，只要其为上述非质子溶剂即可，并且优选为甲苯。反应中使用的溶剂的量优选为式(5)的化合物的0.5倍至IO倍当量。在式(5)的化合物具有较大的分子量的情况下，反应溶液的粘度增加，使得优选使用所述溶剂稀释反应溶液。反应温度并无特别限定，但为了抑制副反应优选为8(TC或更低，并且为了抑制反应溶液的粘度的增加优选为2(TC或更高。反应时间优选为1至24小时。当时间少于l小时时，注意到转化较低。当时间长于24小时时，注意到可能发生副反应。在反应时，可在反应之前进行从初始材料中除去水分的操作，例如共沸除去水分。步骤(C3):过滤反应溶液或使用浓度为10重量％或更高的无机盐水溶液洗涤反应溶液的步骤。在所述步骤中，无机盐并无特别限定，但优选为氯化钠。当浓度小于10重量％时，目标化合物移至水层中，从而降低方法的收率。使用水洗涤的操作可以重复数遍。进行步骤(C3)以除去过多加入的初始材料和作为副产物制得的盐。当在下个位置中再次进行步骤(C1)至(C3)的情况下，忽略所述步骤可引起副反应。另外，为了提高氧化亚烷基链末端的IPG化率，优选再次重复步骤(C1)至(C3)。在氧化亚垸基链末端的IPG化率较低时，如上所述，注意到可形成多官能杂质。这样获得的式(4)的化合物可通过纯化方式(例如萃取、重结晶、吸附处理、再沉淀、柱层析或超临界萃取)来纯化。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>式(4)的化合物的环状縮醛结构的脱保护通过转化为使用酸(例如<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>1至4的水溶液来进行，从而可以制备式(3)的化合物。通过1，2-环氧烷烃与具有四个羟基(其通过环状縮醛结构的脱保护而新形成)的式(3)的化合物的加成聚合而制备式(2)的化合物的方法并无特别限定，但所述化合物可以通过下列步骤(B1)和(B2)来制备。步骤(B1):进行下述交换反应来作为式(3)的化合物的醇化方法在不使用任何溶剂或者在化合物溶解于溶剂(如甲苯)并且进行回流除去水分后，使用甲醇钠、叔丁醇钾或甲醇钾、优选甲醇钠作为催化剂，在6(TC至IO(TC下加入催化剂量为新形成的羟基的2至25摩尔％的催化剂，然后在6(TC至IO(TC、0.05至0MPa的真空下0.2至4小时以除去所含的甲醇。另外，在60。C至130。C、0.05至0MPa的真空下除去所含的甲苯。步骤(B2):在5(TC至13(TC的反应温度下进行1,2-环氧烷烃的加成聚合关于步骤(B1)中的催化剂的量，由于在小于2摩尔％时1,2-环氧垸烃的聚合速率降低并且热累积增加，从而导致形成诸如末端乙烯基醚化合物之类的杂质，因此在高质量的高分子量化合物的制备中，催化剂的使用量为2摩尔％或更高是有利的。当催化剂的量超过25摩尔%时，在醇化反应时反应溶液的粘度增加或者液体固化，因此存在搅拌效率降低和无法促进醇化的趋势。另外，当溶液固化时，其处理往往困难，这引起吸湿。当醇化物吸收水时，衍生自水的亚烷基二醇化合物形成并且作为杂质不利地混入医药用途中。在交换反应的温度低于6(TC时，交换反应的转化降低并且残留诸如甲醇之类的醇，使得通过1,2-环氧烷烃的加成聚合形成不同于目标化合物的杂质。在反应温度高于8(TC时，可能发生分解反应。在醇化反应中，需要升高温度，但是由于易于发生分解反应，因此交换反应时间有利地为0.2至4小时。在反应时间少于0.2小时时，注意到醇化反应的转化降低。在时间长于4小时时，注意到可能发生分解反应。在除去甲苯时，如果温度高于130°C，发生分解反应，其中发生聚氧化亚垸基链的消除并且形成分子量为一半的产物。在温度低于60卩时，可能发生固化，这可能导致处理中的问题。反应溶剂并无特别限定，只要其为非质子溶剂即可，例如甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，但优选为甲苯或无溶剂。反应时间优选为1至24小时。在时间少于1小时时，注意到催化剂不会完全溶解。在时间长于24小时时，注意到可能发生上述分解反应。关于步骤(B2)中的反应温度，当温度低于5(TC时，聚合速率较低并且热累积增加，从而导致式(2)的化合物的质量降低的趋势。另外，当温度高于13(TC时，在聚合过程中发生诸如末端的乙烯基醚化之类的副反应，因此目标化合物的质量往往降低。在聚合过程中，随着分子量增加，反应溶液的粘度也增加，使得可以可任选地加入非质子溶剂(优选甲苯)。[化学式19]H2C-0(A20)n—HH2—O-CH2hQHC_0(A20)n—HHC—0(A10)m-CH2H2C—0(A10)m-CH2HC-0(A20)n—HH2i_0(A20)n—H随后末端的烷基醚化可通过下列方法(1)或(2)来完成(1)将聚亚烷基二醇链的末端转化为醇化物、然后使其与齒代垸反应的方法；(2)使用甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、2，2，2-三氟乙基磺酰氯等活化聚亚垸基二醇链的末端羟基、然后与垸醇的醇化物反应的方法方法(2)是优选的，下面将对其进行更详细地描述。制备方法(2)包括下列步骤(A1)、(A2)和(A3)。步骤(Al):将脱卣剂和由式(6a)表示的化合物加入由式(2)表示的化合物中、然后使它们在2(TC至6(TC下反应的步骤。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>[化学式21]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>一H2C-0(A20)n—f—R1H2-0-CH2hQH+-0(A20)n>^g—r1HC—0(A10)m-CH26H2C—0(A10)m-H2gH9-0(A20)n—#—R1l700H2C-0(A^D)n^~g—Ri6…(B)使用的脱卤剂包括有机碱，例如三乙胺、吡啶和4-二甲基氨基吡啶；以及无机碱，例如碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙酸钠、碳酸钾和氢氧化钾。优选的脱氯化氢剂为有机碱，例如三乙胺、吡啶或4-二甲基氨基吡啶。另外，反应中使用的脱卤剂的量优选为式(2)中的一个羟基的1至8倍当量，更优选为1至4倍当量。在使用的式(6a)的化合物中，W优选为Cl或Br,Ri优选为甲基、苯基、或对甲基苯基。更合适地，最优选其中W为Cl并且Ri为甲基的甲磺酰氯。另外，反应中使用的化合物(6a)的量优选为式(2)中的一个羟基的1至6倍当量，更优选为1至3倍当量。此时使用的溶剂并无特别限定，只要其为非质子溶剂即可，并且优选包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，但更优选为能够共沸除去体系中的水分的甲苯。反应中使用的溶剂的量优选为式(2)的化合物的0.5倍重量至10倍重量当量。在式(2)的化合物具有较大的分子量的情况下，反应溶液的粘度增加并且转化降低，使得优选用所述溶剂稀释反应溶液。反应温度并无特别限定，但为了抑制副反应优选为6(TC或更低，并且为了抑制反应溶液的粘度的增加优选为2(TC或更高。反应时间优选为1至24小时。当时间少于l小时时，注意到转化较低。当时间长于24小时时，注意到可能发生副反应。在反应时，可在反应之前进行从初始材料中除去水分的操作，例如共沸除去水分。另外，可加入抗氧化剂，例如2,6-二叔丁基对甲酚。此外，随着反应的进行并伴随式(B)的化合物的形成而形成盐，但是反应混合物可这样用于随后的步骤中，或可以通过过滤除去盐，或在过滤后式(B)的化合物可通过纯化方式(例如萃取、重结晶、吸附处理、再沉淀、柱层析、或超临界萃取)来纯化。步骤(A2):将由式(la)表示的化合物加入式(B)的化合物中、然后使它们在2(TC至8(TC下反应以获得式(0)的化合物的步骤。R—OM■(丄a)在式(la)中，R如上所述，并且M为碱金属，例如钠或钾，优选为钠。反应中使用的化合物(la)的量优选为衍生自式(B)的化合物(6a)的一个羟基的2至8倍当量，更优选为2至5倍当量。反应中使用的溶剂并无特别限定，只要其为上述非质子溶剂即可，并且优选为甲苯。反应中使用的溶剂的量优选为式(B)的化合物的0.5倍量至IO倍当量。在式(B)的化合物具有较大的分子量的情况下，反应溶液的粘度增加，使得优选使用所述溶剂稀释反应溶液。反应温度并无特别限定，但为了抑制副反应优选为8(TC或更低，并且为了抑制反应溶液的粘度的增加优选为2(TC或更高。反应时间优选为1至24小时。当时间少于l小时时，注意到转化较低。当时间长于24小时时，注意到可能发生副反应。在反应时，可在反应之前进行从初始材料中除去水分的操作，例如共沸除去水分。步骤(A3):过滤反应溶液或使用浓度为10重量％或更高的无机盐水溶液洗涤反应溶液的步骤。在所述步骤中，无机盐并无特别限定，但优选为氯化钠。当浓度小于10重量％时，目标化合物移至水层中，从而显著地降低方法的收率。使用水洗涤的操作可以重复数遍。进行步骤(A3)以除去加入的过多初始材料和作为副产物制得的盐。当在下个位置中再次进行步骤(A1)至(A3)的情况下，忽略所述步骤可引起副反应。在进行脱苄基步骤作为下个步骤的情况下，这些杂质作为催化剂毒物，因此可以影响转化。另外，为了提高氧化亚烷基链末端的垸基醚化率，优选再次重复步骤(A1)至(A3)。在氧化亚烷基链末端的烷基醚化率较低时，如上所述，注意到可形成多官能杂质。这样获得的式(O)的化合物可通过纯化方式(例如萃取、重结晶、吸附处理、再沉淀、柱层析或超临界萃取)来纯化。H2C_0(A20)n—RH2—0-CH2-<QHC-0(A20)n~~RHC—0(A10)m-CH2H2C—0(A10)m-CH2HC-0(A20)n—RH2C-0(A20)n—R...fn)通过连续的脱苄基来制备化合物(pO)的方法并无特别限定，但其可以通过在下面步骤(Z)中使用氢化还原催化剂和氢供体进行氢化来制备。步骤(Z):使由式(O)表示的化合物进行氢化还原反应的步骤。氢化还原催化剂有利地为金属催化剂等，优选为镍、钯，特别地为钯。载体并无特别限定，但优选为氧化铝或碳，更优选为碳。钯的量优选为式(0)的化合物的1至20重量％。在其量小于1重量％时，脱保护的转化降低，因此注意到下个步骤中官能化率降低。另外，在其量大于20重量％时，可发生聚亚烷基二醇链的分解反应，注意到产生上述反应性低分子量化合物作为副产物。反应溶剂并无特别限定，但优选包括甲醇、乙醇、2-丙醇等，更优选为甲醇。氢供体并无特别限定，但包括氢气、环己烯、2-丙醇、甲酸铵等。反应温度优选为60'C或更低。在温度高于6(TC时，可发生聚亚垸基二醇链的分解反应，注意到产生反应性低分子量化合物。反应时间并无特别限定。在使用大量的催化剂时，反应在短时间内完成。但在量很小时，需要更长的时间。反应时间优选为1至5小时。当时间少于1小时时，注意到转化较低。当时间长于5小时时，可发生聚亚垸基二醇链的分解反应。所得式(pO)的化合物可通过纯化方式(例如萃取、重结晶、吸附处理、再沉淀、柱层析或超临界萃取)来纯化。这样获得的化合物是由下式(pO)表示的聚亚垸基二醇衍生物，并且其基本上不含仲羟基[化学式24]H2C'0(A20)n-RH2—OHHC-0(A20)n—RH—0(A10)m一iH2H2C—0(A10)m—CH2H-0(A20)n—RH2C-o(A20)n—R(P0)其中A10和A20表示具有2至4个碳原子的氧化亚垸基，m表示20至500，n表示15至700，并且R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基。由于式(pO)的化合物基本上不含仲羟基，因此随后官能团引入反应的转化较高，并且可以获得高纯度的聚亚烷基二醇衍生物。在存在仲羟基的情况下，随后官能团引入反应的转化较低，并且修饰的生物相关物质的纯度降低，使得可能产生使药剂等含有杂质的问题。化合物(pO)的羟基可通过下列方法而转化为多种官能团。例如，可通过下列所述制备方法来进行制备LaboratorySynthesisofPolyethyleneGlycolDerivatives(J.MILTONHARRISetal)、POLY(ETHYLENEGLYCOL)CHEMISTRY(J.MILTONHARRIS)、JP-A-7-316285和JP-T-2007-508427。另外，即使在多支链聚氧化亚烷基衍生物(1B)的情况下，官能团也可以通过类似的方法引入。(l)使用卤代垸基羧酸衍生物、琥珀酸酐、戊二酸酐等引入羧基、然后转化为其活性酯卤代垸基羧酸衍生物可以按照下述方式获得例如，将具有羟基的支化的聚氧化亚烷基衍生物溶解于甲苯中，在ll(TC下除去水分后，在4(TC下加入氢氧化钠，并且滴加6-溴己酸乙酯进行反应；在将水加入反应溶液中进行水解后，使用盐酸使反应溶液变为酸性，在除去甲苯层后，使用氯仿萃取和浓縮，然后使用乙酸乙酯进行结晶化。另外，将具有羟基的支化的聚氧化亚垸基衍生物溶解于甲苯中，在11(TC下除去水分后，加入乙酸钠、琥珀酸酐或戊二酸酐以进行反应。在冷却后，过滤反应溶液，使用己垸进行结晶并且使用乙酸乙酯和己烷使晶体析出，从而可以获得聚氧化亚垸基琥珀酸酯或戊二酸酯衍生物。将这些羧基衍生物溶解于甲苯中，通过在4(TC下加入N-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳化二亚胺来进行活化，在过滤后，使用乙酸乙酯和己烷使晶体析出，从而可以获得活化的酯化衍生物。(2)与甲磺酰氯的甲磺酰化将具有羟基的支化的聚氧化亚烷基衍生物溶解于甲苯中，在110。C下除去水分后，在4(TC下加入三乙胺和甲磺酸，通过加入乙醇来完成反应，然后用乙酸乙酯和己烷使过滤的反应溶液结晶析出。因此，可以获得甲磺酰化衍生物。(3)使用硫脲、二硫代碳酸酯等转化为巯基将在(2)中获得的甲磺酰化衍生物溶解于2-丙醇中，加入硫脲，在4(TC下反应后，在8(TC下加入氢氧化钠水溶液进行水解，在用盐酸使反应溶液变为酸性后，使用氯仿萃取，在浓縮后，用乙醇和己烷使晶体析出。因此，可以获得巯基衍生物。(4)使用对硝基苯基氯碳酸酯、二琥珀酰亚胺基碳酸酯、羰基二咪唑等引入活性碳酸酯基团关于对硝基苯基碳酸酯衍生物，将具有羟基的支链聚氧化亚烷基衍生物溶解于甲苯中，在ll(TC下除去水分后，在60'C下加入三乙胺和对硝基苯基氯甲酸酯进行反应，然后用乙酸乙酯和己烷使过滤的反应溶液结晶析出。因此，可以获得活性碳酸酯衍生物。(5)通过氰化、氢化、或甲磺酰化、胺化转化为氨基关于氰基衍生物，将具有羟基的支化的聚氧化亚烷基衍生物溶解于离子交换水中，在冰冷却下加入氢氧化钾水溶液，滴加丙烯腈以进行反应。在中和后，使用氯仿萃取，在浓縮后，用乙酸乙酯和己垸使晶体析出。因此，可以获得氰基衍生物。将氰基衍生物、甲苯、和氢化催化剂(例如镍)加入高压反应装置中并溶解，在13(TC下加入氢气直至4MPa以进行反应。可以用己垸使过滤的反应溶液结晶，从而获得氨基衍生物。可选择地，将在(2)中获得的甲磺酰化衍生物溶解于氨水中并在60r下反应。在通过鼓入氮气冒泡来除去氨后，使用甲苯萃取，在浓縮后，使用甲苯和己垸结晶。因此，可以获得氨基衍生物。(6)通过马来酰胺化、经过闭环反应的马来酰亚胺化、马来酰亚胺化试剂(马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酸酯、马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酸酯等)来引入马来酰亚胺基团将在(5)中获得的氨基衍生物溶解于甲苯中并和马来酸酐反应，然后使用乙酸乙酯和己垸结晶，从而可以获得马来酰胺衍生物。将其溶解于乙腈中，并在加入乙酸钠和乙酸酐后，使它们在8(TC下反应。在过滤后，将反应溶液浓縮并使用乙酸乙酯和己垸结晶，从而可以获得马来酰亚胺衍生物。可选择地，将在(5)中获得的氨基衍生物溶解于甲苯中，加入马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酸酯以进行反应。在将反应溶液过滤后，使用乙酸乙酯和己烷结晶。因此可以获得马来酰亚胺衍生物。(7)通过烷基縮醛化和水解引入醛基将在(2)中获得的甲磺酰化衍生物溶解于甲苯中，加入通过将钠溶解于3,3-二乙氧基丙醇中而获得的溶液，然后使它们在4(TC下反应。在反应溶液过滤后，使用乙酸乙酯和己烷结晶，从而可以获得丙醛衍生物。将其溶解于离子交换水中，在使用磷酸的酸性条件下进行水解，然后使用氯仿萃取，浓縮，将反应溶液过滤，使用乙酸乙酯和己烷结晶，从而可以获得马来酰胺衍生物。(8)使用乙炔化试剂(炔丙胺等)引入乙炔基将在(4)中获得的活性碳酸酯衍生物溶解于甲苯中，使炔丙胺与其在4(TC下反应，然后使用乙酸乙酯和己垸结晶，从而可以获得乙炔衍生物。(9)使用叠氮化试剂(例如叠氮化钠)引入叠氮基将在(2)中获得的甲磺酰化衍生物溶解于甲苯中，使叠氮化钠与其在6(TC下反应，然后将反应溶液过滤，使用乙酸乙酯和己烷结晶，从而可以获得叠氮化物衍生物。使用上述方法，式(pO)中的羟基可被转化为能够与生物相关物质反应的官能团。根据本发明，可以获得使用具有多支链结构的聚氧化亚垸基修饰的生物相关物质。由于结合的聚氧化亚烷基具有多支链结构，因此生物相关物质可以在不阻断活性位点的情况下提供较大的水化层，因此所述物质可以保持活性。另外，由于所述衍生物在能够与生物相关物质形成化学结合的官能团和多支链结构之间具有双链结构(其具有特定的分子量)，因此增强生物相关物质和多支链聚氧化亚垸基衍生物之间的反应性，使得可以高效地获得生物相关物质的聚氧化亚垸基修饰的产物。实施例下面将参照实施例来更详细地描述本发明。就此而言，使用^-NMR分析和羟基值(OHV)来分析和鉴定实施例中的化合物。—H-NMR分析方法>:在'H-NMR分析中，使用由NipponDenshiDatumK.K.制造的JNM-ECP400。NMR数据中的积分值为理论值。OHV分析方法、在OHV分析中，使用邻苯二甲酸酐法进行测定(根据JISK1557)。为了测定湿度，使用KarlFischer湿度计("7S8/3-20型"，由Metrohm-Shibata制造)，并且使用"HydramailComposite2"(由Sigma-Aldrich生产)作为KarlFischer试剂。(实施例1)多支链聚氧化亚垸基衍生物(1)(11=甲基，A10、八20=氧化亚乙基，n=114，m二170，并且分子量=约40,000的情况)的合成(实施例1-1)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的2L四颈烧瓶中加入1050.0g(7.94摩尔)的通过蒸馏Solketal[由ALDRICH生产]而获得的2,2-二甲基-l,3-二氧戊环-4-甲醇(IPG)和1050.0g的干甲苯。在搅拌下加入氮气，分批加入36.5g(1.59摩尔)的钠以获得IPG钠产物(IPG-Na)/甲苯的溶液。IPG3.78毫摩尔/g，钠0.76毫摩尔/g。(实施例1-2)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的1000ml圆底烧瓶中加入132.2g(l.O摩尔)的2，2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇、231.4g(1.2摩尔)的28%的甲醇钠的甲醇溶液、和500ml的甲苯。向其中加入氮气，在减压下回流甲苯1小时以通过蒸馏除去甲醇。将溶液保持在8(TC下，使用滴液漏斗在2小时的时间内分批加入126.6g(1.0摩尔)的氯甲苯，接着进一步进行2小时的反应。使反应溶液除去溶剂并通过蒸馏纯化(b.p.93-95°C/266Pa)以获得4-(节基氧基甲基)-2,2-二甲基-l,3-二氧戊环。iH-NMR(CDC13，内标TMS)S(ppm):1.36,1.42(3H,3H,s，C腿2)2),3.45-3.57(2H，m,￡H20-C(CH3)2)，3.73-3.76(1H，m，CHO-C(CHOA4.03-4.07，4.28-4.32(2H，m，CH20-CH7Ph),4.57(2H,q，-CH2Ph),7.15-7.40(5H,m，-CH2￡li)(Ph表示苯基)。(实施例1-3)向1L烧杯中称重加入222g(1.0摩尔)l-2中制得的4-(苄基氧基甲基)-2,2-二甲基-l，3-二氧戊环、250ml乙醇、和400ml蒸馏水，使用磷酸将整体的pH调节至2。加入氮气，将溶液加热至70。C。在反应1.5小时后，使用氢氧化钠将溶液的pH调节至7。使用吸附剂"KYOWAADIOOO"(由KyowaHakkoKogyoCo.,Ltd.生产)将所得盐进行吸附处理，然后除去溶剂以获得3-苄基氧基-l,2-丙二醇。iH-NMR(CDC13,内标TMS)5(ppm):3.50-3.71(4H,m,CH2OH,CH二O陽CH，Ph),3.86-3.91(1H,m，CHOH),4.54(2H,m，-纖Ph),7.27-7.38(5H,m，-CH逃)。(实施例1-4)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的300ml圆底烧瓶中加入27.3g(0.15摩尔)的3-苄基氧基-l,2-丙二醇、127g的干甲苯、和0.9g(39毫摩尔26摩尔％)的金属钠。向其中加入氮气，在室温下搅拌整体直至金属钠溶解。将溶液加入5L高压釜中，并将系统的内部用氮气取代后，接着加热至100。C。然后，在100。C至150°C、在lMPa或更低的压力下加入1473g(33.5摩尔)的环氧乙烷，接着连续进行反应另一小时。当在减压下除去未反应的环氧乙垸气体后，将残余物冷却至60'C并使用85%的磷酸水溶液将pH调节至7.5以获得下列化合物(pl)。'H曙NMR(CDC13，内标TMS)S(ppm):3.40-3.80(901H,m,_^lO(0)mH,CHO(CH2CH20)mH，CH2OCH7Ph),4.54(2H,s,-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m,-CH逃)。分子量(OHV):9，870(m,112)。HC—0(CH2CH20)mHH2C—0(CH2CH20)mH(pi)m:约112(实施例1-5)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的5L四颈烧瓶中加入870g的在1-4中制得的化合物(pl)、3.0kg的甲苯、和0.65g的2,6-二叔丁基对甲酚，然后在搅拌和加入氮气的同时将整体加热至6(TC以进行溶解。将所得溶液加热至ll(TC，使用甲苯除去约250g的馏分作为共沸物，从而实现水分除去。在冷却至40。C后，加入28.8g的三乙胺，然后在30分钟的时间内滴加26.5g的甲磺酰氯，接着在4(TC下反应3小时。向其中加入685g的在1-1中制得的IPG-Na/甲苯溶液，接着在40r下反应3小时。加入1.0kg的25重量。/。的氯化钠溶液，在50。C下整体搅拌15分钟。在静置15分钟后，除去下层。重复五次使用水的洗涤步骤。在使用水洗涤后使上层在50°C、微减压下除去250g的馏分以进行水的除去。另外，加入硫酸镁并通过搅拌30分钟来除去水分。将溶液过滤，收集滤液，加入5.0kg的正己烷以进行结晶。在通过过滤来收集晶体后，使用5.0kg的正己垸洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得880g的下列化合物(p2)。'H-NMR(CDC13,内标TMS)5(ppm):3.40-3.80(905H,m,-CH20(CH2CH20)mCH2-,￡HO(￡M2,0)￡Hr,CH2OCH，Ph),4.54(2H,s,-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m,-CH2￡h),1.37(12H，d,(-O-)，C(-CH二)，)，4.05(4H,m,-0-CH7-CH(0)-CH，-0-)。(实施例1-6)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和底栓的20L烧瓶中加入750g的在1-5中获得的化合物(p2)和13.5kg的离子交换水，加入氮气使化合物溶解。在避光的条件下，滴加85%的磷酸，使得将pH调节至pH为1.80，接着在室温下反应3小时。加入ION的氢氧化钠水溶液以进行中和，然后加入2.7kg的氯化钠，使用ION的氢氧化钠水溶液进一步将pH调节为6.0至7.0。使用2.25L的氯仿萃取，在取出下层后，再加入1.5L的氯仿以进行萃取。合并下层，浓縮，将浓縮残余物溶解于2.5kg的甲苯中。然后，将1.9kg的正己烷加入已经滤去不溶性物质的滤液中以进行结晶，在通过过滤收集晶体后，使用1.9kg的正己烷洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得720g的下列化合物(p3)。H^C—OCH^~^,HC—0(CH2CH20)H2C—0(CH2CH20)(p2)m,1123,5c3Hc/3H.c22oIIH￡H卜Hmmolc2H44!H-NMR(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.40-3.80(909H，m，-CH20(CH2CH20)mCH2-，CHO(CH2CH20)mCH2-,CH2OCH，Ph),-0-CH7-CH(0)-CH2-0-)，4.54(2H,s，-CH2Ph)，7.27-7.38(5H,m，-CH逃)。一H2C—OHH2-OCH2~^^HC-OHHC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC—OHIH2C-OH(p3)m:约112(实施例1-7)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的5L四颈烧瓶中加入713g的在1-6中制得的化合物(p3)和2850g的甲苯，然后整体在IIO'C下回流以除去水分。在冷却至6(TC后，滴加5.38g的28%的甲醇钠的甲醇溶液，然后在75'C、减压下除去甲醇。将反应溶液加入装有温度计、氮气加入管和搅拌器的5L耐压容器中，在95°C、减压下进一步除去甲苯。在将系统的内部用氮气取代后，接着将整体加热至100。C。然后，在IO(TC至150°C、在lMPa或更低的压力下滴加695g的环氧乙垸，接着连续进行反应另2小时。在取出672g的所得反应产物后，在1MPa或更低的压力下分批加入639g的环氧乙垸，接着连续进行反应另2小时。反应产物中加入1230g的甲苯以溶解。当在95'C、减压下除去520g的甲苯以除去水分后，在lMPa或更低的压力下加入279g的环氧乙烷，接着连续进行反应另2小时。在冷却至6(TC后，使用85。/。的磷酸水溶液将pH调节至7.5以获得760g的下列化合物(p4)。iH-NMR(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.40-3.80(3，631H,m,國區0(0)￡^-,CHO(CH2CH20)mCHr,CH2OCH7Ph,CHO(CH2CH20)CHr,-CH20(CH2CHzO)A4.54(2H,s,-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m，-CH2￡h)°分子量(OHV):39,790(11=约170)。[化学式28]H2—OCH2~^^HC-0(CH2CH20)n—HHC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC-0(CH2CH20)n—HH2C-0(CH2CH20)n—H(p4)m一勺112，11=约170(实施例1-8)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的500mL四颈烧瓶中加入150g的在1-7中制得的化合物(p4)、640g的甲苯和0.11g的2,6-二叔丁基对甲酚，然后在搅拌和加入氮气的同时将整体加热至6(TC以进行溶解。将所得溶液加热至ll(TC，使用甲苯除去约40g的馏分作为共沸物，从而除去水分。在冷却至4(TC后，加入2.54g的三乙胺，然后在10分钟的时间内滴加2.33g的甲磺酰氯，接着在4(TC下反应3小时。加入9.07g的28%的甲醇钠的甲醇溶液，接着在4(TC下反应3小时。加入1.5kg的25重量％的氯化钠溶液，在5(TC下搅拌整体15分钟。在静置15分钟后，除去下层。重复两次使用水的洗涤步骤。在使用水洗涤后使上层在5(TC、微减压下除去200g的馏分以进行水的除去。另外，加入硫酸镁并通过搅拌30分钟来除去水分。将溶液过滤，收集滤液，加入600g的正己垸以进行结晶。在通过过滤来收集晶体后，使用600g的正己垸洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得130g的下列化合物(p5)。'H-薩R(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.40-3,80(3,631H,m，-CH20(CH2CH20)mCHr,CHO(CH2CH20)mCH2-,CH2OCH7Ph,CHO(CH2CH20)nCHr,-CH20(CH2CH20)A4.54(2H，s,-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m,-CH逃)，3.38(12H，s，-CH二)。H2—OCH2~^^HC-0(CH2CH20)n-CH3HC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC-0(CH2CH20)n—CH3H2C-0(CH2CH20)n—CH3(p5)111=约112，11=约170(实施例1-9)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入120g的在1-8中制得的化合物(p5)和60g的5%钯-碳(含水50%的产物)。在被氮气取代后，加入1.2L的甲醇和200mL的环己烯，在52"C至55"C加热整体和缓慢回流以反应3小时。在将反应溶液冷却至室温后，通过过滤除去钯-碳，浓縮滤液。然后，加入1.2L的甲苯和1.2L的正己垸以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得107g的下列化合物(p6)。'H-廳R(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.-3.80(3,631H,m，-CH20(CH2CH20)mCHr,CHOfCI^CH^mCHr,CHO(CH2CH20)CHr，隱纖O(纖纖O)n),3.38(12H,s，-￡Hi)。[化学式30]H2-0(CH2CH20)n-CH3H2-OHHC-0(CH2CH20)n—CH3H-0(CH2CH20)m—d:H2H2C—0(CH2CH20)m—CH2，_0(CH2CH20)n_CH3H2C-0(CH2CH20)n-CH3(p6)111=约112,11=约170(实施例1-10)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入50g的在1-9中制得的化合物(p6)、3.1g的50%的氢氧化钾水溶液和50g的离子交换水。在被氮气取代后，将它们溶解并冷却至l(TC，然后加入50g的丙烯腈，接着反应4小时。在使用磷酸中和反应溶液后，加入100g的乙酸乙酯以进行萃取和除去杂质，然后使用300g的氯仿将目标产物萃取和收集。在将硫酸镁加入氯仿层中以除去水分，然后通过过滤除去，浓縮滤液。通过加入500mL的乙酸乙酯和500mL的正己烷析出晶体，通过过滤收集所得晶体，干燥以获得40g的下列化合物(p7)。!H-雇R(CDC13,内标:TMS)S(ppm):3.40-3.80(3,633H,m,-CCH20)mCH2-,CHO(CH2CH20)mCH2-,CHO(CH2CH20)nCH2、-CH20(CH2CH20)n,-OCH2CH7CN),3.38(12H，s,-CH!),2.62(2H,t,-CH2CN)。[化学式31]H2-0(CH2CH20)n—CH3Nsc-CH2CH20—，HC_0(CH2CH20)n-CH3H-0(CH2CH20)m—(!:H2H2C—0(CH2CH20)m—CH2H-0(CH2CH20)n-CH3H2C-0(CH2CH20)n—CH3(p7)111=约112，11=约170(实施例1-11)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的1L耐压容器中加入30g的在l-10中制得的化合物(p7)、2.7g的Ni催化剂、和545g的甲苯。在被氮气取代后，将整体在6(TC下溶解，加入氨气至0.5MPa，加入氢气至3.5MPa，整体加热至13(TC，接着反应3小时。在冷却后，通过鼓入氮气冒泡来使整体脱气，在将反应溶液过滤后，浓縮滤液。通过加入300mL的甲苯和450mL的正己烷来使浓縮液结晶析出。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得25g的下列化合物(p8)。!H-NMR(D20，内标DSS)S(ppm):3.40-3.80(3,633H，m,-CH20(CH2CH20)mCHr,CHO(CH2CH20)mCHr,CHO(CH2CH20)CH2-,-CH20(CH2CH20),-OCH2CH7CN)，3.38(12H,s,-CH二),2.80(2H,t，-CH2NHA1.80(2H,m，-,CH2NH2)。[化学式32]H2C-0(CH2CH20)n—CH3H2N—CH2CH2CH20—H2H_0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC-0(CH2CH20)n—CH3H2C-0(CH2CH20)n—CH3(p8)m二约112，11=约170(实施例1-12)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入15g的在1-11中制得的化合物(p8)、78g的甲苯、禾n12g的乙腈。在被氮气取代后，将整体在4(TC下溶解，冷却至25"C，然后加入0.19g的N-甲基吗啉和0.15g的马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酸酯，接着反应5小时。在将反应溶液过滤后，向滤液中加入150g的乙酸乙酯和200g的正己烷以析出晶体。另夕卜，向所得晶体中加入9g的乙腈、270g的乙酸乙酯和200g的正己垸以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得14g的下列化合物(p9)。iH-NMR(CDC13,内标TMS)5(ppm):3.40-3.80(3,633H,m，國,OC纖O)m纖-,CHO(CH2CH20)mCH2-,CHOfCHzCH^XH^-,-CH20(CH2CH20)n,-OCH2CH，CN,-CH2NHCO),3_38(12H，s,-CH^,2.48(2H,t,-NHCOCH2CH7-),1.75(2H，m,-CH2CH，NHCO),6.70(2H,s,-CH=CH-)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>(p9)111=约112，11=约170(实施例1-13)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入15g的在1-11中制得的化合物(p8)、65g的甲苯、0.0015g的2，6-二叔丁基对甲酚和0.15g的乙酸钠。在被氮气取代后，将整体在55'C下溶解，然后加入0.33g的戊二酸酐，接着反应5小时。另外，向反应溶液中加入0.7g的N-羟基琥珀酰亚胺，在冷却至40。C后加入1.2g的N',N-二环己基碳化二亚胺，接着反应4小时。在将反应溶液过滤后，向滤液中加入105g的正己烷以析出晶体。另外，向所得晶体中加入12g的乙腈、110g的乙酸乙酯和80g的正己垸以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得13g的下列化合物(p10)。iH隱NMR(CDC13,内标:TMS)5(ppm):3.40-3.80(3,633H,m,-CH20(CH2CH20)mCHr,，0)￡1^-,皿00鹿2陽,-CH20(CH2CH20),-OCH2CH7CN,國C罕HCO)，3.38(12H，s,國CH二),2.7(2H,t,-NHCOCH，CHCH2CO-),2.3(2H,t,-NHCOCH2CH7CH7CO-),2.1(2H,multi,-NHCOCH7CH2CH7CO-),1.75(2H,m，-CH2CH7NHCO),2.85(4H,s，陽纖錢-)。[化学式34]OCH2CH2CH2-g-NHCH2CH2CH20-CH:，0(CH2CH20)m.CH2H2C-0(CH2CH20)m《H2H2C.O(CH;jCH20)nCH3H60(CH2CH20)n《H3HOO(CH2CH20)nCH3H^'0(CH2CH20)nCH3(plO)m,112，n-约170(实施例l-14)胰岛素的修饰使用实施例1-13中获得的琥珀酰亚胺化合物(plO)来修饰胰岛素(由SEROLOGICALSCORPORATIONPN生产，重组人胰岛素，Mw5800)。使用0.1N的碳酸钠缓冲液(pH-9.0)来制备10mg/ml的胰岛素缓冲液。在将6.9mg的式(plO)的化合物加入100pi的所述溶液中后，在4。C下反应20小时。将全部量的反应溶液加入在Q-SepharoseFF(由Amersham生产)柱上并用20mM的Tris-HCl缓冲液(pl^8.2)平衡。在平衡后，使通过将NaCl加入缓冲液中至1N而获得的溶液通过柱，获得使用(pl0)修饰的胰岛素部分，同时通过UV监测洗出液。在将20(il的部分和20^的tris-SDS样品处理液混合后，将混合物在沸水浴中加热2分钟30秒，然后使20^的溶液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(4至20%)分析，这表明胰岛素是使用式(pll)修饰的。通过CBB染色法进行染色。(实施例2)多支链聚氧化亚烷基衍生物(1A)(R^甲基，AiO、AZ(^氧化亚乙基，n=114，m=85，a=3，并且分子量=约40,000的情况)的合成(实施例2-1)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和底栓的20L烧瓶中加入100g(0.66摩尔)的木糖醇[由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.生产]、191.7g的2，2-二甲氧基丙垸和3.74mg的对甲苯磺酸一水合物。鼓入氮气冒泡，整体加热至65'C以进行反应直至木糖醇溶解。整体加热至80°C，在微减压下除去约54g的2,2-二甲氧基丙垸部分，进一步蒸馏以获得79.4g的下列化合物1,2,3,4-二亚异丙基木糖醇(下文中被称为DIXY)。1H-NMR(CDC13，内标TMS)5(ppm):1.38,1.44(6H,6H,s，C(CH3)2),3.58-3.67(1H，m,CHO-C(CH丄3.78-3.91(2H,m,CH20-C(CHQ,3,96-4.03(1H，m,CHO-C(CH丄4.03-4.09(2H,m，-CH2OH)4.18-4.24(1H,m，CHO-C(CIH(实施例2-2)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的2L四颈烧瓶中加入820.0g(3.53摩尔)的在2-1中制得的化合物DIXY和820.0g的干甲苯。在搅拌下加入氮气，分批加入16.2g(0.71摩尔)的钠并使其溶解，从而获得DIXY钠产物(DIXY-Na)/甲苯的溶液。DIXY2.15毫摩尔/g，钠0.43毫摩尔/g。(实施例2-3)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的5L四颈烧瓶中加入870g的在1-4中制得的化合物(pl)、3.0kg的甲苯、和0.65g的2，6-二叔丁基对甲酚，然后在搅拌和加入氮气的同时将整体加热至6(TC以进行溶解。将所得溶液加热至ll(TC，使用甲苯除去约250g的馏分作为共沸物，从而除去水分。在冷却至4(TC后，加入28.8g的三乙胺，然后在30分钟的时间内滴加26.5g的甲磺酰氯，接着在4(TC下反应3小时。向其中加入1210g的在2-2中制得的DIXY-Na/甲苯溶液，接着在4(TC下反应3小时。向其中加入1.0kg的25重量。/。的氯化钠溶液，整体在5(TC下搅拌15分钟。在静置15分钟后，除去下层。重复五次使用水的洗涤步骤。在使用水洗涤后使上层在50°C、微减压下除去250g的馏分以进行水的除去。另外，加入硫酸镁并通过搅拌30分钟来除去水分。将溶液过滤，收集滤液，加入5.0kg的正己垸以进行结晶。在通过过滤来收集晶体后，使用5.0kg的正己烷洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得900g的下列化合物(p12)。'H-雇R(CDC13,内标:TMS)S(ppm):4.54(2H,s，-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m,-CH逃)，1.37(24H,d,(-O-)，C(-CH!)，)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>(实施例2-4)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和底栓的20L烧瓶中加入750g的在2-3中获得的化合物(pl2)和13.5kg的离子交换水，加入氮气使化合物溶解。在避光的条件下，滴加85%的磷酸，使得将pH调节至pH为1.80，接着在室温下反应3小时。加入10N的氢氧化钠水溶液以进行中和，然后加入2.7kg的氯化钠，使用ION的氢氧化钠水溶液进一步将pH调节为6.0至7.0。使用2.25L的氯仿萃取，在取出下层后，再加入1.5L的氯仿以进行萃取。合并下层，浓縮，将浓縮残余物溶解于2.5kg的甲苯中。然后，将1.9kg的正己垸加入已经滤去不溶性物质的滤液中以进行结晶，在通过过滤收集晶体后，使用1.9kg的正己烷洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得708g的下列化合物(pl3)。iH-NMR(CDC13,内标:TMS)5(ppm):4.54(2H,s，-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m,-CH逃)。He—0《CH2CH20)m-H2c—0(CH2CH20)IHC—OHIH2C—OH(pl3)m,112HHHHSEHoooo99一一一IH2H2I一clclclclcc-cIc(实施例2-5)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的5L四颈烧瓶中加入700g的在2-4中制得的化合物(pl3)和2850g的甲苯，然后整体在ll(TC下回流以除去水分。在冷却至6(TC后，滴加5.30g的28%的甲醇钠的甲醇溶液，然后在75°C、减压下除去甲醇。将反应溶液加入装有温度计、氮气加入管和搅拌器的5L耐压容器中，在95°C、减压下进一步除去甲苯。在将系统的内部用氮气取代后，接着整体加热至10(TC。然后，在IOO'C至150°C、在lMPa或更低的压力下分批加入705g的环氧乙烷，接着连续进行反应另2小时。在取出680g的所得反应产物后，在1MPa或更低的压力下滴加650g的环氧乙垸，接着连续进行反应另2小时。在冷却至60'C后，使用85%的磷酸水溶液将pH调节至7.5以获得770g的下列化合物(p14)。1H-NMR(CDC13，内标:TMS)5(ppm):4.54(2H,s，-CH2Ph),7.27-7.38(5H，m,-CH逃)。分子量(OHV):40,494(11=约87)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula>(pi4)1!1=约112,11=约87(实施例2-6)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器、Dean-stark管和冷凝管的500mL四颈烧瓶中加入150g的在2-5中制得的化合物(p14)、640g的甲苯和0.11g的2，6-二叔丁基对甲酚，然后在搅拌和加入氮气的同时将整体加热至6(TC以进行溶解。将所得溶液加热至ll(TC，使用甲苯除去约40g的馏分作为共沸物，从而除去水分。在冷却至4(TC后，加入5.08g的三乙胺，然后在IO分钟的时间内滴加4.66g的甲磺酰氯，接着在40'C下反应3小时。加入18.14g的28%的甲醇钠的甲醇溶液，接着在4(TC下反应3小时。加入1.5kg的25重量％的氯化钠溶液，整体在5(TC下搅拌15分钟。在静置15分钟后，除去下层。重复两次使用水的洗涤步骤。在使用水洗涤后使上层在5CTC、微减压下除去200g的馏分以进行水的除去。另外，加入硫酸镁并通过搅拌30分钟来除去水分。将溶液过滤，收集滤液，加入600g的正己烷以进行结晶。在通过过滤来收集晶体后，使用600g的正己烷洗涤晶体。通过过滤来收集晶体，真空干燥以获得120g的下列化合物(p15)。tH-NMR(CDC13，内标:TMS)5(ppm):4.54(2H,s,-CH2Ph),7.27-7.38(5H,m，-CH2￡li),3.38(24H，s,-CH2)。[化学式39]H2C—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3—HC—0(CH2CH20>n—CH3H2C—0CH2~^""^H^-0(CH2CH20)n—CH3HC——0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—H2HC—0(CH2CH20)n—CH3H(Uo(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3H2C—0(CH2CH20)n—CH3(pi5)m二约112，n二约87(实施例2-7)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入120g的在2-6中制得的化合物(pl5)和60g的5%钯-碳(含水50%的产物)。在被氮气取代后，加入1.2L的甲醇和200mL的环己烯，在52'C至55'C降整体加热和缓慢回流以反应3小时。在将反应溶液冷却至室温后，通过过滤除去钯-碳，浓縮滤液。然后，加入1.2L的甲苯和1.2L的正己烷以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得112g的下列化合物(p16)。iH-顧R(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.38(24H，s,-CH^。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入50g的在2-7中制得的化合物(p16)、3.1g的50%的氢氧化钾水溶液和50g的离子交换水。在被氮气取代后，将整体溶解并冷却至l(TC，然后加入50g的丙烯腈，接着反应4小时。在使用磷酸中和反应溶液后，加入100g的乙酸乙酯以进行萃取和除去杂质，然后使用300g的氯仿将目标产物萃取和收集。在将硫酸镁加入氯仿层中以除去水分，然后通过过滤除去，浓縮滤液。通过加入500mL的乙酸乙酯和500mL的正己烷析出晶体，通过过滤收集所得晶体，干燥以获得45g的下列化合物(p17)。iH-NMR(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.38(24H,s,-CH工),2.62(2H,t,-纖CN)。[化学式41〗H2C—0(CH2CH20)n—CH3HCHD(CH2CH20)n—CH3H(Uo(CH2CH20)n—CH3N三C一CH2CH广0—CH2HC—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3HC~~0(CH2CH20)「CH3H2C—0(CH2CH20)n—CH3(pi7)111=约112，n^约87(实施例2-9)向装有温度计、氮气加入管和搅拌器的1L耐压容器中加入30g的在2-8中制得的化合物(p17)、2.7g的Ni催化剂、和545g的甲苯。在被氮气取代后，将整体在6(TC下溶解，加入氨气至0.5MPa，加入氢气至3.5MPa，整体加热至13(TC，接着反应3小时。在冷却后，通过鼓入氮气冒泡来使整体脱气，在将反应溶液过滤后，浓縮滤液。通过加入300mL的甲苯和450mL的正己烷来使浓縮液结晶析出。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得24g的下列化合物(p18)。JH國NMR(D20,内标DSS)S(ppm):3.38(24H,s，國CH二),2.80(2H,t-C罕HA1.80(2H，m,-CH2CH7NH7)。[化学式42]H2C—0(CH2CH20)rCH3HC-0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3H2N—CH2CH2CH2—0—(pH2HC—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)m—CH2H2C—0(CH2CH20)m—CH2HC—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)n—CH3H2C—0(CH2CH20)n—CH3(pi8)111=约112，n^约87(实施例2-10)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入15g的在2-9中制得的化合物(p18)、78g的甲苯、和12g的乙腈。在被氮气取代后，将整体在4(TC下溶解，冷却至25i:，然后加入0.19g的N-甲基吗啉和0.15g的马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酸酯，接着反应5小时。在将反应溶液过滤后，向滤液中加入150g的乙酸乙酯和200g的正己烷以析出晶体。另夕卜，向所得晶体中加入9g的乙腈、270g的乙酸乙酯和200g的正己垸以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得13g的下列化合物(p19)。丄H-麗R(CDC13,内标TMS)S(ppm):3.38(24H,s,-CH丄),2.48(2H,t，隱NHC0纖CH2-)，1.75(2H，m，-CH二C腦HCO)，6.70(2H，s，-CH=CH-)0[化学式43]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula>(实施例2-11)向装有温度计、氮气加入管、搅拌器和冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入15g的在2-9中制得的化合物(p18)、65g的甲苯、0.0015g的2，6-二叔丁基对甲酚和0.15g的乙酸钠。在被氮气取代后，将整体在55"C下溶解，然后加入0.33g的戊二酸酐，接着反应5小时。另外，向反应溶液中加入0.7g的N-羟基琥珀酰亚胺，在冷却至4(TC后加入1.2g的N',N-二环己基碳化二亚胺，接着反应4小时。在将反应溶液过滤后，向滤液中加入105g的正己垸以析出晶体。另外，向所得晶体中加入12g的乙腈、110g的乙酸乙酯和80g的正己垸以析出晶体。通过过滤收集所得晶体，干燥以获得13g的下列化合物(p20)。!H-NMR(CDC13，内标TMS)S(ppm):3.38(24H，s,-CH二),2.7(2H,t,-NHCOCH2CH2^CO-)，2.3(2H,t,-NHCO,CH2CH2CO-)，2.1(2H,multi,-NHCOCH,CH丄CH，CO-),1.75(2H,m,-CH2CHrNHCO)，2.85(4H,'CH2CH2CH2—C—N—CH2CH2CH2—O—CH2H^-0(CH2CH20)n—CH3,]1________I—IH—0(CH2CH20)m'丄2H2C—0(CH2CH20)m—CH2'0(CH2CH20)n—CH3HC—0(CH2CH20)「CH3HC_0(CH2CH20)n—CH3H2C_0(CH2CH20)n—CH3(p20)111=约112，n-约87(实施例2-12)胰岛素的修饰使用实施例2-11中获得的琥珀酰亚胺化合物(p20)来修饰胰岛素(由SEROLOGICALSCORPORATIONPN生产，重组人胰岛素，Mw5800)。使用0.1N的碳酸钠缓冲液(pH-9.0)来制备10mg/ml的胰岛素缓冲液。在将6.9mg的式(p20)的化合物加入100pi的所述溶液中后，在4"下反应20小时。将全部量的反应溶液加入在Q-SepharoseFF(由Amersham生产)柱上并用20mM的Tris-HCl缓冲液&11=8.2)平衡。在平衡后，使通过将NaCl加入缓冲液中至1N而获得的溶液通过柱，获得使用(p20)修饰的胰岛素部分，同时通过UV监测洗出液。在将20nl的部分和20^的tris-SDS样品处理液混合后，将混合物在沸水浴中加热2分钟30秒，然后使20pi的溶液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(4至20%)分析，这表明胰岛素是使用式(p20)修饰的。通过CBB染色法进行染色。(粘度的测定)使用实施例1-9中获得的化合物(p6)和实施例2-7中获得的化合物(pl6)来进行粘度的测定。作为比较化合物，使用SUNBRIGHTMEH-40T、根据JP-A-2004-197077的实施例16合成的分子量为40,000的二支链PEG。具体而言，按照下列方式进行粘度的测定。使用二甲基亚砜制备各样品的10%的溶液。将lmL溶液加入到E型粘度计RE-105(由TOKI生产)的样品杯中(其在低温恒温水浴中加热至4(TC)，将杯置于粘度计中，然后测定粘度。结果列于下表l中。支链的数目粘度(mPa-s)化合物(p6)化合物(pl6)SUNBRIGHTMEH-40T二支链PEG423.9818.8157.4250,3由表1清晰可见，由于通过本发明获得的化合物可以通过增加支链来降低粘度，因此不仅在制备方法中不会产生任何问题，而且在所述化合物用于生物相关物质的修饰时可以预期可操作性会得到改善。尽管己经参照其具体实施方案详细地说明了本发明，但对本领域技术人员而言显而易见的是，在不背离本发明的精神和范围的情况下可进行各种修正和改变。本申请基于2007年2月28日提交的日本专利申请No.2007-50782，其内容通过引用的方式并入本文中。此外，所有的参考文献都全部并入。工业实用性由于多支链聚氧化亚烷基衍生物(1A)具有多支链结构，因此所述衍生物可以在保持生物相关物质的活性位点的条件下提供较大的水化层，使得使用所述衍生物修饰的生物相关物质难以降低活性并且可以获得足够的药效。另外，聚氧化亚烷基衍生物可以通过增加支链来降低粘度，并且由于在制备方法中不会产生任何问题而可以高纯度地制备。另外，通过降低粘度，在用于修饰生物相关物质时的处理变得容易。因此，所述衍生物可明显用于使用所述生物相关物质作为活性物质的药物。权利要求1.一种由式(1A)表示的聚氧化亚烷基衍生物其中A1O和A2O独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，X表示能够与生物相关物质反应的官能团，并且a表示1、3或5。2.—种由式(l)表示的聚氧化亚烷基衍生物:-0-(A20)n-R-0-(A20)n-R，0-(A10)m」-0—(A10)m-X」-0-(A20)n-F5-0-(A20)n-R(1)其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，并且X表示能够与生物相关物质反应的官能团。3.—种生物相关物质，其是通过与所述由式(1A)表示的聚氧化亚垸基衍生物的反应而修饰的。4.一种由式(1B)表示的聚氧化亚垸基衍生物-0-(A10)m-0-(A10)X1m-0-(A20)n-R);(1B)-0(A20)n-R)a-0(A20)n-R其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚垸基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，乂1表示可被保护的羟基，并且a表示l、3或5。5.—种由式(A)表示的聚氧化亚垸基衍生物X1」-0(A20)n-R-0-(A20)n-R-0-(A10)m」Lo—(A1。)fh~0-(A20)n-K-0-(A20)n-R(A)其中A10和A20独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚垸基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，并且Xi表示可被保护的羟基。全文摘要本发明的目的是提供一种新型多支链聚氧化亚烷基衍生物和制备该多支链聚氧化亚烷基衍生物的中间体。具体而言，本发明的目的是提供多支链聚氧化亚烷基衍生物，其可以保持使用多支链聚氧化亚烷基衍生物修饰的生物相关物质的高活性，并且可以容易地制备所述修饰的物质；所述多支链聚氧化亚烷基衍生物的中间体；以及结合所述多支链聚氧化亚烷基衍生物的生物相关物质。根据本发明的新型多支链聚氧化亚烷基衍生物是具有能够与生物相关物质反应的官能团的聚氧化亚烷基衍生物(1)，并且根据本发明的生物相关物质具有通过与上述聚氧化亚烷基衍生物(1)反应而修饰的结构。此外，根据本发明的制备新型多支链聚氧化亚烷基衍生物的中间体为聚氧化亚烷基衍生物(A)。其中A¹O和A²O独立地表示具有2至4个碳原子的氧化亚烷基，m表示20至500，n表示15至700，R表示氢原子或具有1至20个碳原子的烃基，X表示能够与生物相关物质反应的官能团，以及X¹表示可被保护的羟基。文档编号C08G65/329GK101622295SQ20088000632公开日2010年1月6日申请日期2008年2月28日优先权日2007年2月28日发明者吉冈宏树,坂上研二,城崎智洋申请人:日油株式会社