专利名称：PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法
技术领域：
本发明提供一种对PSD-95/nNOS解偶联剂有特异性识别作用 的分子印迹聚合物。 利用该分子印迹聚合物，可以识别具有PSD-95/nNOS解偶联作用的化合物。
背景技术：
脑缺血后N-甲基-D-天门冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid, NMDA)受体过 度激活，通过神经元型一氧化氮合成酶(Neuronal Nitric Oxide Synthase，nNOS)合成 的一氧化氮的病理性释放是脑缺血损伤后的神经元损伤的主要因素之一。突触后密度蛋 白-95 (Postsynaptic Density Protein-95, PSD-95)在此通路中扮演了重要角色。在脑 缺血情况下，NMDA受体过度激活，形成NMDA/PSD-95/nNOS复合物，病理性释放N0，与超氧 负离子(02_)反应产生毒性更强的过氧亚硝酸盐阴离子(0N00_)，导致神经元的损伤。由于 NMDA受体、PSD-95、nNOS具有多种重要的生理作用，抑制其功能可能导致严重的毒副作用。 PSD-95/nNOS的解偶联，可以在不影响NMDA受体、PSD-95、nNOS功能的前提下抑制NO的病 理性释放。文献报道4-N-(2-羟基-3，5-二氯苄基)氨基水杨酸(化合物1)，6-Ν-(2-羟 基-3，5-二氯苄基)氨基苯并三氮唑(化合物2)，具有明确的PSD-95/nNOS解偶联作用 (中国专利 200910025698. 1 ;British Journal ofPharmacology 2009，158，494-506)。黄 芩苷能够与PSD-95结合，可能具有PSD-95/nNOS解偶联作用(Phytomedicine 2004，11 277-284)。化合物1、化合物2、黄芩苷元的化学结构<formula>formula see original document page 3</formula>
化合物1化合物2黄芩苷元PSD-95/nNOS解偶联剂的活性评价可以采用核磁共振的方法，该方法需要分别获 得PSD-95以及nNOS，通过测定其给药前后核磁共振N-H相关谱的变化，判断目标化合物与 PSD-95的结合情况；或者采用采用免疫共沉淀法，考察小鼠MCAO条件下，给药组与空白组 nNOS与PSD95结合强度增强程度的差异。两种方法均费时费力，难以快速简便的分子印记 聚合物具有强特异性和高选择性，可以作为人工抗体，高通量快速筛选目标化合物。天然产 物中，许多有效成分往往因为含量低微而被漏筛或者难以纯化，利用分子印记聚合物可以 将一些含量很低的化合物直接从粗提物中提取出来。
发明内容
发明目的为了克服现有技术的不足，本发明提供一种可用于识别PSD-95/nNOS 解偶联功能的化合物分子印迹聚合物及其制备方法。该分子印迹聚合物能够识别具有PSD-95/nNOS解偶联作用的化合物，可用于高通量快速筛选PSD-95/nNOS解偶联目标化合 物，也能够识别具有PSD-95/nNOS解偶联作用的天然产物。技术方案一种PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物制备方法，其制备步骤为 将模板分子和功能单体按1 1-1 8的摩尔比溶解到含有交联剂、引发剂的乙腈溶液 中，制备成混合液，交联剂在乙腈中的浓度为20mmOl/L-80mmOl/L，引发剂在乙腈中的浓度 0. lg/L-lg/L ；将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合反 应温度为50-70°C，反应时间为12-24h ；将粉末状聚合物加入甲醇和三乙胺的混合溶液中 进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三乙胺； 将上述处理得到的聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到分子印迹聚合物。所述模板分子和功能单体的摩尔比优选为1 4。所述交联剂在乙腈中的浓度优选为80mmol/L。所述引发剂在乙腈中的浓度优选为0. 8g/L。所述模板分子为6-N- (2-羟基-3，5- 二氯苄基)氨基苯并三氮唑或者4_N_ (2_羟 基-3，5- 二氯苄基)氨基水杨酸。所述功能单体为4-乙烯吡啶、2-乙烯吡啶或丙烯酰胺中的一种或任意几种混合 物。所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯。所述弓丨发剂为偶氮二异丁腈。有益效果本发明的有益效果在于，制得分子印迹聚合物不仅对模板分子有特异 性的吸附能力，而且对其他PSD-95/nNOS解偶联剂同样存在特异性的吸附，能够识别具有 SD-95/nNOS解偶联作用的天然产物。
四
图1是PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物对化合物1、化合物2、黄芩苷元的吸 附曲线，由图可以看出，所得的PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物对化合物1、化合物2、 黄芩苷元均有良好的吸附效果，对于高通量快速筛选PSD-95/nNOS解偶联目标化合物，发 现具有PSD-95/nNOS解偶联作用的天然产物具有一定的应用前景。
五具体实施例方式下面的实施例可使本专业技术人员全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发 明。实施例1 将Immol的6_N_ (2-羟基-3，5_ 二氯苄基)氨基苯并三氮唑和6mmol的功能单体 丙烯酰胺溶解到IOOmL含有Smmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、80mg的引发剂偶氮二异 丁腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超声脱气5min，通氮气IOmin除去氧 分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合温度为 55-70°C，反应时间为16h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇和三乙胺的混合溶液，对合成好的 聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三 乙胺；将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到分子印迹聚合物。
实施例2:将lmmol的4_N_(2_羟基-3，5_ 二氯苄基)氨基水杨酸和8mmol的功能单体丙 烯酰胺溶解到IOOmL含有Smmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、80mg的引发剂偶氮二异丁 腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超声脱气5min，通氮气IOmin除去氧 分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合温度为 50-650C，反应时间为24h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇和三乙胺的混合溶液，对合成好的 聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三 乙胺。将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物。实施例3 将Immol的4_N_ (2_羟基_3，5_ 二氯苄基)氨基水杨酸和4mmol的功能单体2-乙 烯吡啶溶解到IOOmL含有Smmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、80mg的引发剂偶氮二异丁 腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超声脱气5min，通氮气IOmin除去氧 分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合温度为 55-650C，反应时间为24h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇和三乙胺的混合溶液，对合成好的 聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三 乙胺。将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物。实施例4 将Immol的4_N_ (2-羟基-3，5_ 二氯苄基)氨基水杨酸和Immol的功能单体4_乙 烯吡啶、4mmol的功能单体丙烯酰胺溶解到IOOmL含有5mmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸 酯、80mg的引发剂偶氮二异丁腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超声脱 气5min，通氮气IOmin除去氧分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生 成粉末状聚合物，聚合温度为55-65°C，反应时间为24h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇和三 乙胺的混合溶液，对合成好的聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物 加入甲醇中超声处理，去除三乙胺。将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到PSD-95/ nNOS解偶联分子印迹聚合物。实施例5 将Immol的4_N_ (2-羟基-3，5_ 二氯苄基)氨基水杨酸和4mmol的功能单体4-乙 烯吡啶溶解到IOOmL含有Smmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、80mg的引发剂偶氮二异丁 腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超声脱气5min，通氮气IOmin除去氧 分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合温度为 55-65°C，反应时间为16h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇和三乙胺的混合溶液，对合成好的 聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三 乙胺。将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物。实施例6 将4mmol的功能单体4_乙烯吡啶溶解到IOOmL含有8mmol三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、80mg的引发剂偶氮二异丁腈的纯乙腈溶液中，制备成混合液。将混合液密封后超 声脱气5min，通氮气IOmin除去氧分子，然后将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反 应生成粉末状聚合物，聚合温度为55-65°C，反应时间为16h。聚合完成后，用IOOmL的甲醇 和三乙胺的混合溶液，对合成好的聚合物进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三乙胺。将聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到空白的分子印迹聚合物。实施例7:50mg实施例5的分子印迹聚合物(MIP)、50mg实施例6的聚合物(NIP)，分别加 入到不同浓度的目标分子(化合物1，化合物2，黄芩苷元)的IOmL乙腈溶液，于室温下振 摇24小时，采用高效液相法(化合物1、化合物2检测波长为284nm，黄芩苷元检测波长为 276nm，流动相为体积比为70 30的甲醇水溶液，流速lmL/min)，测定其吸附容量，以溶液 浓度为横坐标，吸附容量为纵坐标，做吸附曲线。吸附容量(ymol/g)= (C0-C1) X 200其中=Ctl为吸附前溶液浓度(mmol/L)，C1为吸附后溶液浓度(mmol/L)从图1可见，所得的PSD-95/nNOS解偶联分子印迹聚合物对化合物1、化合物2、黄 芩苷元均有良好的吸附效果，对于开发具有PSD-95/nNOS解偶联作用的天然产物具有一定 的应用前景。
权利要求
一种PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物制备方法，其特征为a.将模板分子和功能单体按1∶1-1∶8的摩尔比溶解到含有交联剂、引发剂的乙腈溶液中，制备成混合液，交联剂在乙腈中的浓度为20mmol/L-80mmol/L，引发剂在乙腈中的浓度0.1g/L-1g/L；b.将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合反应温度为50-70℃，反应时间为12-24h；c.将粉末状聚合物加入甲醇和三乙胺的混合溶液中进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三乙胺；d.将上述处理得到的聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到分子印迹聚合物。
2.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于模板分子和功能单体的摩尔比为1 4。
3.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于交联剂在乙腈中的浓度为80mmol/L。
4.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于引发剂在乙腈中的浓度为0. 8g/L。
5.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于模板分子为6-N- (2-羟基-3，5- 二氯苄基)氨基苯并三氮唑或者4-N- (2-羟基-3，5- 二 氯苄基)氨基水杨酸。
6.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于功能单体为4-乙烯吡啶、2-乙烯吡啶或丙烯酰胺中的一种或任意几种混合物。
7.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯。
8.根据权利要求1所述PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物的制备方法，其特征在 于引发剂为偶氮二异丁腈。
全文摘要
一种PSD-95/nNOS解偶联剂分子印迹聚合物制备方法，其制备步骤为将模板分子和功能单体按1∶1-1∶8的摩尔比溶解到含有交联剂、引发剂的乙腈溶液中，制备成混合液，交联剂在乙腈中的浓度为20mmol/L-80mmol/L，引发剂在乙腈中的浓度0.1g/L-1g/L；将混合液密封后，采用加热搅拌的方式聚合反应生成粉末状聚合物，聚合反应温度为50-70℃，反应时间为12-24h；将粉末状聚合物加入甲醇和三乙胺的混合溶液中进行超声处理，去除模板分子，离心后将粉末状聚合物加入甲醇中超声处理，去除三乙胺；将上述处理得到的聚合物置于真空干燥箱中干燥至衡重，得到分子印迹聚合物。制得的分子印迹聚合物能够识别具有SD-95/nNOS解偶联作用的天然产物。
文档编号C08F220/56GK101817908SQ20101902609
公开日2010年9月1日 申请日期2010年2月4日 优先权日2010年2月4日
发明者周学敏, 孙旭, 李飞, 殷晓佳, 江珂, 胡琴, 许贯虹, 都述虎 申请人:南京医科大学