专利名称：酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及马尾藻多糖的分离提取，尤其是一种酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺。
背景技术：
马尾藻多糖(Sargassum Polysaccharide)作为鸡的疫苗免疫增强剂，可显著提高疫苗的保护率和抗病力，应用前景广阔。据统计，目前国内每年鸡的存栏数为40亿只，若有 1. 0%的使用率，即每年应用鸡4000万只，以平均每只用量5克计，则年需求量达200吨。 按市场价格每公斤200元计，则年销售额达4000万元，纯利润可达为1200万元(利润率按 30%计)。然而，目前分离提取马尾藻多糖的水提醇沉法、碱提法存在多糖得率低和总糖含量低的问题，以致于生产效率低、供应不足，难以满足巨大的市场需求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种多糖得率高和总糖含量高的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺。为解决上述技术问题采用如下技术方案酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，该工艺包括如下步骤<1>准确称取马尾藻粉，，按料液比1 15 1 35加入蒸馏水，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为0. 5% 1%，先40°C水浴溶解lh，再100°C水浴灭酶0. 5h，然后80°C水浴浸提；<2>步骤<1>中浸提后，离心取上清液备用，沉淀按料液比 1 20 1 35加入蒸馏水，继续浸提，依法浸提1 3次；<3>合并步骤<2>各次上清液， 将其浓缩至原体积的1/4，浓缩液加入95 %的乙醇至最后醇沉浓度为65 85 %，醇沉过夜， 弃上清液，离心得沉淀；<4>取步骤<3>所得沉淀，加入马尾藻粉重量10倍的蒸馏水，IOO0C 水浴溶解，溶液离心取上清液，往上清液中加入95%的乙醇至最后醇沉浓度为65 85%， 醇沉过夜，弃上清液，离心得沉淀；<5>将步骤<4>所得沉淀冷冻干燥，即得多糖样品。多糖样品经研磨得粉状多糖样品。离心 3000r/min 进行 IOmin。本发明的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺的多糖得率和总糖含量明显高于目前的水提醇沉法和碱提法，应用于生产马尾藻多糖可提高效率、满足市场需求。
具体实施例方式酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺的研究一、二次析因设计1. 二次析因设计方案选定出对实验结果影响最大的6个主要因素为料液比、酶量、浸提温度、浸提时间、浸提次数、醇沉浓度，对这6个主要因素，预留空白进行正交试验析因分析。使用SAS软件，选用N = 12的PB (Plackett-Burman)设计，路径为SAS —解决方案一分析一实验设计一文件一创建新的设计一2级水平。每个影响因素全部选取2个水平进行分析，低水平为-1，
高水平为1，实验设计如表1。 表1 PB设计及结果(N = 12)
权利要求
1.一种酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，其特征在于该工艺包括如下步骤 <1>准确称取马尾藻粉，按料液比1 15 1 35加入蒸馏水，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为0. 5% 1%，先40°C水浴溶解lh，再100°C水浴灭酶0.釙，然后80°C水浴浸提；<2>步骤<1>中浸提后，离心取上清液备用，沉淀按料液比1 20 1 35加入蒸馏水，继续浸提，依法浸提1 3次；<3>合并步骤<2>各次上清液，将其浓缩至原体积的1/4，浓缩液加入95%的乙醇至最后醇沉浓度为65 85%，醇沉过夜，弃上清液，离心得沉淀；<4>取步骤<3>所得沉淀，加入马尾藻粉重量10倍的蒸馏水，100°C水浴溶解，溶液离心取上清液，往上清液中加入95 %的乙醇至最后醇沉浓度为65 85 %，醇沉过夜，弃上清液， 离心得沉淀；<5>将步骤<4>所得沉淀冷冻干燥，即得多糖样品。
2.根据权利要求1所述的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，其特征在于所述多糖样品经研磨得粉状多糖样品。
3.根据权利要求1所述的酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，其特征在于所述离心 3000r/min 进行 IOmin。
全文摘要
本发明公开了一种酶解法分离提取马尾藻多糖的生产工艺，选用木瓜蛋白酶为去蛋白催化酶采用酶解法分离提取马尾藻多糖，建立的较佳提取条件为料液比1:15～1:35，浸提次数2~4次，醇沉浓度65~85%。本法显著地提高了粗多糖得率和总糖含量，为今后规模化生产马尾藻多糖提供了很好的工艺路线，可有效保证禽类的疫苗免疫增强剂的市场供应。
文档编号C08B37/00GK102382200SQ20111026130
公开日2012年3月21日 申请日期2011年9月6日 优先权日2011年9月6日
发明者崔月明, 胡庭俊, 蓝仁龙, 韦现色 申请人:广西大学