专利名称：一种用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物、制备方法及复合颗粒的制作方法
技术领域：
本发明涉及高聚物领域，特别涉及用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物、制备方法及复合颗粒。
背景技术：
随着近代生物技术的发展与人类基因库的不断完善，使人类从分子水平上认识某些疾病根源已逐步成为可能，为基因治疗提供了理论基础。在具体实施中，如何获取安全有效的基因载体日益成为制约基因治疗临床应用的瓶颈问题。利用病毒载体介导基因转移是基因治疗中应用最广泛的方法，其中包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒等载体。但是病毒类载体在临床应用中存在着很大的安全隐患，造成了基因治疗历史上首例患者死亡事件以及著名的法国“气泡婴儿”事件。相对于病毒类基因载体的不安全性，人工合成的阳离子聚合物由于其无免疫源性，分子设计多样，尺寸可控并能够连接靶向物质逐渐成为该领域的研究热点。在众多已经报道的聚阳离子载体中，聚乙烯亚胺(PEI) PEI类载体已经被证明了在质粒转染体系中具有很好的效果，并在siRNA转染方面也起到一定的作用。PEI的优点在于电荷密度集中，对基因物质有强的复合能力，与基因物质具有低质量(m/m)比即能获得最佳转染效率。但是聚阳离子带有的大量的正电荷，当剂量增大时会与细胞表面有强烈的作用而导致细胞死亡(Grayson A. C，Doody A. M. et al. Biophysical and structuralcharacterization of polyethyleniminemediated siRNA delivery in vitro Pharm. Res2006;(23):1868-1876)。人工合成的聚氨基酸(酯)具有与天然多肽相似的性质，能在生物体内被酶所降解，具有很好的生物降解性和生物相容性，是组织工程和药物释放体系载体材料中理想的医用材料之一。近期Kim等研究者通过胺解反应成功将PEI分子接枝到线型的聚天冬氨酸骨架上，制备得到了线型聚天冬氨酸接枝聚乙烯亚胺共聚物，并通过实验证实了该阳离子共聚物是一种高效低毒并可降解的体外基因转染载体(KimH. J.，Ishii A.，et al. Introduction of stearoyl moieties into a biocompatiblecationic polyaspartamide derivative, PAsp(DET)，with endosomal escapingfunction for enhanced siRNA—mediated gene knockdown, Journal of ControlledRelease, 2010; (145) : 141-148)。然而，该载体需在较高的质量比才能实现最佳的转染效果，由此可见线型聚天冬氨酸接枝聚乙烯亚胺共聚物电荷密度不够集中，复合基因物质能力弱。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物及其制备方法，得到的聚氨基酸嵌段共聚物电荷密度集中，复合siRNA的能力强。
本发明提供了式(I)所示的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物，
O
权利要求
1.式(I)所示的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物，
2.一种用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物的制备方法，包括以下步骤 (A)在惰性气体保护下，P-苄基-L-天冬氨酸-N-羧酸酐与枝化聚乙烯亚胺在有机溶剂中反应，得到中间产物； (B)将步骤(A)得到的中间产物与聚乙烯亚胺在催化剂作用下反应，得到用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物；所述用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物如式(I)所示
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中，所述￠-苄基-L-天冬氨酸-N-羧酸酐与枝化聚乙烯亚胺摩尔配比为100 10000:1 10。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中，所述￠-苄基-L-天冬氨酸-N-羧酸酐与有机溶剂的摩尔比为5 10:50 1000。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中，所述有机溶剂为氯仿、二氯甲烷或者N’，N’ - 二甲基甲酰胺。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(B)中，所述催化剂为2-羟基吡啶。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(B)中，所述中间产物与聚乙烯亚胺的摩尔比为I 10:6 600。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(B)中，所述反应的时间为10 80小时。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(B)中，所述反应的温度为15 50°〇。
10.一种复合颗粒，包括权利要求I所述的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物和siRNA，所述siRNA为沉默荧光素酶的LucsiRNA。
全文摘要
本发明提供一种式(I)所示的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物。其制备方法为在惰性气体保护下，β-苄基-L-天冬氨酸-N-羧酸酐与枝化聚乙烯亚胺在有机溶剂中反应，得到中间产物；将得到的中间产物与聚乙烯亚胺在催化剂作用下反应，得到用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物。本发明提供了一种复合颗粒，包括所述的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物和siRNA，所述siRNA为沉默荧光素酶的Luc siRNA。本发明的用作siRNA载体的聚氨基酸嵌段共聚物电荷密度集中，对siRNA具有强复合能力，具有良好的生物相容性，有效降低了聚氨基酸嵌段共聚物的毒性。
文档编号C08G81/00GK102746513SQ20121025871
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月24日 优先权日2012年7月24日
发明者林琳, 田华雨, 董璇, 陈学思 申请人:中国科学院长春应用化学研究所