一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法
【专利摘要】本发明涉及一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，板蓝根药材经干燥、粉碎、脱脂后，使用超声波细胞破碎仪进行提取，离心得到的上清液经浓缩、醇沉、过滤及真空干燥等技术制备板蓝根多糖。与现有技术相比，本发明所提出的工艺具有快速、简便、节省能源、收率高等特点，且有利于保护板蓝根多糖中含有的诸多活性物质。本发明的实验证明，使用超声波辅助提取得到的板蓝根多糖具有良好的体外抗氧化活性。
【专利说明】一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药【技术领域】的提取方法，尤其是涉及一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法。
【背景技术】
[0002]板蓝根(Isatidis Radix)，别名靛青根、蓝靛根、靛根，是十字花科植物菘蓝(Isatisin digotica Fort.)的干燥根,具有清热解毒、凉血利咽之功效,在临床上用于温疫时毒、发热咽痛、温毒发斑、痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等。作为我国抗病毒中药的典型代表，板蓝根是首个获美国国立卫生研究院资助的中药研究项目。
[0003]多糖是由多个单糖分子通过苷键连接而成的一类结构复杂的生物大分子，在天然药物中分布非常广泛。多糖在生物合成以及细胞间的识别、受精、胚胎形成、神经细胞发育、激素激活、细胞增殖、病毒和细菌的感染、肿瘤细胞转移等许多基本生命过程中发挥着重要作用，因此已成为医学、营养学和食品科学领域的研究热点。据报道，板蓝根多糖对特异性免疫和非特异性免疫均具有一定的促进作用，是一种比较理想的天然免疫增强剂，作为保健食品和药品有广泛的开发前景。
[0004]超声波技术在中药有效成分提取中的应用近年来发展的较为广泛。利用超声波的空化作用、机械效应和热效应等，加速细胞内有效物质的释放、扩散和溶解，可显著缩短提取时间，提高提取效率。目前，使用超声波细胞破碎仪提取板蓝根多糖尚未见文献报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种快速简便、节省能源、收率高的利用超声波辅助提·取板蓝根多糖的方法提取方法，且有利于保护板蓝根多糖中含有的诸多活性物质。
[0006]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
[0007]—种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，包括以下步骤:
[0008](I)将板蓝根烘干并粉碎成板蓝根粉末；
[0009](2)在板蓝根粉末中加入一定浓度乙醇脱脂后进行抽滤，然后对滤渣进行真空干燥；
[0010](3)在脱脂后的板蓝根粉末中加入水，使用超声波细胞破碎仪提取板蓝根多糖，冷却，离心分离，得到含有板蓝根多糖的上清液；
[0011](4)将上清液减压浓缩，加入等量或数倍量无水乙醇，4°C静置过夜，离心去除母液，收集沉淀；
[0012](5)依次用乙醇、丙酮洗涤沉淀，真空干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的多糖。
[0013]步骤(1)中烘干采用的温度为50~60°C，粉碎得到的板蓝根粉末的粒度为60~80目。[0014]步骤⑵中的脱脂采用板蓝根粉末的5~10倍(w/v)量95%乙醇回流脱脂两次，每次2h，所述真空干燥的温度为20~30°C，时间为24~48h。
[0015]步骤(3)在脱脂后的板蓝根粉末中加入水，使料液比为1: 10~1: 100，超声波细胞破碎仪提取的工艺参数为超声波功率400~800W，温度30~60°C，时间10~30min。
[0016]步骤(4)在减压浓缩时采用旋转蒸发仪，浓缩温度55~60°C，浓缩体积为原体积的1/5~1/10，无水乙醇加入量为浓缩液体积的I~5倍；离心处理时的转速为3500~4500rpm,时间 10 ~15min。
[0017]步骤(5)在洗涤时依次加入步骤(4)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分，真空干燥采用的温度为40~45°C，干燥时间为24~72h。
[0018]与现有技术相比，本发明采用粉碎、脱脂、超声波细胞破碎仪提取、离心、浓缩、醇沉及真空干燥等技术制备板蓝根多糖，所提出的工艺具有快速、简便、节省能源、收率高等特点，且有利于保护板蓝根多糖中含有的诸多活性物质。所采取的提取方法为超声波细胞破碎仪提取，相比常规热回流提取法，可将提取时间由数小时缩短至lOmin，而提取率提高近一倍，得到的板蓝根多糖具有良好的体外抗氧化活性，具有很好的ABTS+自由基清除效果，广泛适用于抗氧化功能产品中。
【具体实施方式】
[0019]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0020]实施例1
[0021]板蓝根多糖 的提取
[0022]将板蓝根于60°C烘干，粉碎过80目筛，加入5倍量(w/v) 95%乙醇回流提取两次，每次2h，抽滤除去滤液，滤渣于25°C真空干燥24h。
[0023]取脱脂后的板蓝根5g，加水200mL(料液比1: 40)，使用超声波细胞破碎仪提取板蓝根多糖，超声功率787w，温度60°C，提取时间lOmin。将冷却至室温的提取液离心(4500rpm, 15min)，收集上清液，滤渣用蒸馏水洗涤，并与上清液合并。
[0024]上述提取液用旋转蒸发仪60°C浓缩至40mL，在搅拌下缓慢加入4倍量无水乙醇，4°C静置过夜，4500rpm/min离心15min,收集沉淀产物；依次用80%乙醇、无水乙醇和丙酮各IOmL洗涤沉淀，抽滤近干时复盖；45°C真空干燥72h，称重。重复上述实验三次，分别得多糖1.25g、1.24g、1.26g，计算多糖提取率，结果取平均值为25.0l %。
[0025]实施例2-18
[0026]超声波辅助提取板蓝根多糖的工艺条件优化
[0027]采用Box-Benhnken的中心组合实验设计原理,设计三因素三水平的响应面分析试验的方案，以超声功率、超声时间、超声温度3个工艺参数为自变量，以多糖提取率为响应值，优化超声波辅助提取板蓝根多糖的工艺条件，试验设计和结果见表1。
[0028]表1
[0029]
【权利要求】
1.一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)将板蓝根烘干并粉碎成板蓝根粉末；(2)在板蓝根粉末中加入一定浓度乙醇脱脂后进行抽滤，然后对滤渣进行真空干燥； (3)在脱脂后的板蓝根粉末中加入水，使用超声波细胞破碎仪提取板蓝根多糖，冷却，离心分离，得到含有板蓝根多糖的上清液； (4)将上清液减压浓缩，加入等量或数倍量无水乙醇，4°C静置过夜，离心去除母液，收集沉淀；(5)依次用乙醇、丙酮洗涤沉淀，真空干燥，得到含有抗氧化活性板蓝根多糖的多糖。
2.根据权利要求1所述的一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，步骤(1)中烘干采用的温度为50~60°C，粉碎得到的板蓝根粉末的粒度为60~80目。
3.根据权利要求1所述的一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，步骤(2)中的脱脂采用板蓝根粉末的5~10倍(w/v)量95%乙醇回流脱脂两次，每次2h，所述真空干燥的温度为20~30°C，时间为24~48h。
4.根据权利要求1所述的一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，步骤(3)在脱脂后的板蓝根粉末中加入水，使料液比为1: 10~1: 100，超声波细胞破碎仪提取的工艺参数为超声波功率400~800W，温度30~60°C，时间10~30min。·
5.根据权利要求1所述的一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，步骤(4)在减压浓缩时采用旋转蒸发仪，浓缩温度55~60°C，浓缩体积为原体积的1/5~1/10，无水乙醇加入量为浓缩液体积的I~5倍；离心处理时的转速为3500~4500rpm，时间10 ~15min。
6.根据权利要求1所述的一种超声波辅助提取板蓝根多糖的方法，其特征在于，步骤(5)在洗涤时依次加入步骤(4)母液相同浓度的乙醇洗涤并过滤，逐步提高乙醇浓度，最后用无水乙醇、丙酮洗涤，抽滤近干时复盖以防沉淀物表面溶剂蒸发带入水分，真空干燥采用的温度为40~45°C，干燥时间为24~72h。
【文档编号】C08B37/00GK103848920SQ201210510656
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月3日 优先权日:2012年12月3日
【发明者】赵琳静, 李洪森, 燕方龙, 黄春晓, 杨娟, 林旭东 申请人:上海工程技术大学