一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法
【专利摘要】一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其具体步骤为：（1）材料预处理；（2）超声提取；（3）酶解提取；（4）制备洗脱液；（5）制备截留液；（7）减压浓缩；（8）离心得沉降物；（9）真空干燥；本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，增加内容物的溶出率，同时应用树脂层析柱进行脱色脱蛋白，除去了蛋白质等分子杂质，使提取的多糖含量更高、更纯。
【专利说明】一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多糖提取方法，特别是一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法。
【背景技术】
[0002]灰树花又名粟蘑、莲花菌，日本称“舞茸”，是一种珍稀的食、药兼用真菌。灰树花不仅食用味道鲜美，有“食用菌王子”之美称，富含维生素，并含有锌、钙、磷、铁、硒等多种对人体有益的矿物质，而且具有医疗保健作用，在日本民间用来治疗糖尿病、高血压等疾病。
[0003]灰树花的调节免疫力、抗肿瘤、治疗糖尿病等药用功效来源于其含有的多种生理活性物质，如多糖(糖蛋白)、核酸、多酚、矿物质等，尤其灰树花多糖(糖蛋白复合体)是研究重点。灰树花的生物活性主要来自其多糖成分。灰树花多糖具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗HIV等多种生物活性。
[0004]目前常用的灰树花多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量，也比较多，有一定的适用范围，所以本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提高了多糖的提取含量。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提闻了多糖的提取含量。
[0006]本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其具体步骤为:
(1)材料预处理:取干燥灰树花粉碎，过60?100目筛，得灰树花干燥粉末，加入5?20倍质量的蒸馏水，于50°C?65°C的温度条件下，浸泡1-5小时；
(2)超声提取:把步骤(I)的物质放入超声波中，于20?60°C的温度条件下，用5?20KHz超声波萃取0.5h?2.0h，过滤，取滤液I ;
(3)酶解提取:调节滤液IpH为3?6，加入其质量体积0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，于30?60°C的温度条件下，水解0.5h?3.0h，离心分离，取滤液2 ；
(4)制备洗脱液:滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0?4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4?5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6?7BV洗脱液；
(5)制备截留液:调节洗脱液pH为6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和1KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
(7)减压浓缩:将(6)步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70°C，压力小于
0.1MPa，浓缩到 500°C热测比重 1.050—1.080 ；
(8)离心得沉降物:4000rmp高速离心，得沉淀物； (9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa,干燥温度20_50°C的条件下，干燥20min，得到灰树花多糖。
[0007]本发明的有益效果:本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，增加内容物的溶出率，同时应用树脂层析柱进行脱色脱蛋白，除去了蛋白质等分子杂质，使提取的多糖含量更高、更纯。
【具体实施方式】
[0008]实施例1
(1)材料预处理:取干燥灰树花粉碎，过60目筛，得灰树花干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50°C?65°C下，侵泡3小时；
(2)超声提取:接着把步骤(I)的物质放入超声波中，20?60°C下用5?20KHz超声波萃取0.5h,过滤,取滤液I ;滤洛可重复进行以上操作,滤液进行下一步提取；
(3)酶解提取:调节滤液pH为3?6，加入质量体积比为0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，30?60°C水解0.5h，离心取滤液2 ;
(4)制备洗脱液:滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0?4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4?5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6?7BV洗脱液；
(5)制备截留液:调节洗脱液pH为6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和1KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
(7)减压浓缩:将(6)步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70°C，压力小于
0.1MPa0 浓缩到比重 1.050-1.080(500°C热测)；
(8)离心得沉降物:4000rmp高速离心，得沉淀物；
(9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥温度20_50°C下，干燥20min，得到灰树花多糖。
[0009]实施例2
(1)材料预处理:取干燥灰树花粉碎，过60目筛，得灰树花干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50°C?65°C下，侵泡4小时；
(2)超声提取:接着把步骤(I)的物质放入超声波中，20?60°C下用5?20KHz超声波萃取1.0h,过滤,取滤液I ;滤洛可重复进行以上操作,滤液进行下一步提取；
(3)酶解提取:调节滤液pH为3?6，加入质量体积比为0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，30?60°C水解1.0h，离心取滤液2 ；
(4)制备洗脱液:滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0?4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4?5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6?7BV洗脱液；
(5)制备截留液:调节洗脱液pH为6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和1KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
(7)减压浓缩:将(6)步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70°C，压力小于
0.1MPa，浓缩到比重 1.050-1.080(500°C热测)；
(8)离心得沉降物:4000rmp高速离心，得沉淀物；
(9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa,干燥温度20_50°C下，干燥20min，得到灰树花多糖。
[0010] 提取的灰树花多糖得率为22.15%。
【权利要求】
1.一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其特征在于:其具体步骤为: (1)材料预处理:取干燥灰树花粉碎，过60?100目筛，得灰树花干燥粉末，加入5?.20倍质量的蒸馏水，于501?651的温度条件下，浸泡1-5小时； (2)超声提取:把步骤(1)的物质放入超声波中，于20?601的温度条件下，用5?.201(?超声波萃取0.511?2.011，过滤，取滤液1 ； (3)酶解提取:调节滤液为3?6，加入其质量体积0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，于30?601的温度条件下，水解0.51！?3.0匕离心分离，取滤液2 ； (4)制备洗脱液:滤液2用稀盐酸调节滤液邱为4.0?4.5，上层析柱，柱内填充介质为册-3树脂，4?587/1！流速下层析脱色脱蛋白，收集6?78乂洗脱液； (5)制备截留液:调节洗脱液邱为6.5?7.5，在0.1?0.251%压力下，用超滤膜为.50X0和101(0的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液； (7)减压浓缩:将(6)步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-701，压力小于.0.1腿^，浓缩到5001热测比重1.050—1.080 ； (8)离心得沉降物:40001'即高速离心，得沉淀物； (9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.0951？3？干燥温度20-501的条件下，干燥20-11,得到灰树花多糖。
【文档编号】C08B37/00GK104387492SQ201410700306
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】戴路 申请人:哈尔滨墨医生物技术有限公司