一种食蟹猴微卫星位点的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及DNA分子标记技术领域，尤其设及一种食蟹猴微卫星位点的应用。
【背景技术】
[0002] 微卫星标记(microsatellite)，又称为短串联重复序列（sho;rt tandem repeats， STRs)或简单重复序列（simple sequence repeats),是均匀分布于真核生物基因组中的简 单重复序列，由2~6个核巧酸的串联重复片段构成，由于重复单位的重复次数在个体间呈 高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。微卫星位点通常通过PCR扩 增，扩增产物通过电泳分析并根据大小分离等位基因进行检测。
[0003] 微卫星标记的不稳定性是指微卫星标记的片段大小或位置发生变化，通常是由于 碱基错配所造成的，原因可能与多种因素有关，其中，基因突变是主要原因之一。而引起基 因突变的原因非常复杂，其中，放射线、环境污染、有毒物质都是常见原因。研究基因突变的 发生机制，对于环境污染检测，疾病诊断，预防和治疗等，都具有重大意义。
[0004] 食蟹猴生命周期长，生物学特性与人类极其相似，是研究人类慢性疾病的最佳实 验材料，在药理和毒理学研究中，用其建立的疾病动物模型有利于观察疾病及其并发症的 发生发展规律。同时为治疗药物的疗效检验和安全性评估提供可靠的保证，已逐渐成为科 学研究和药物研究中使用较多的一种灵长类实验动物。然而，在现有研究中，还缺乏关于食 蟹猴微卫星位点在药理和毒理学研究中的应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种食蟹猴微卫星位点的应用前景，将为药物毒理学、药 理学、致癌试验、生殖和遗传毒理的研究提供新思路。
[0006] 为实现上述发明目的，本发明提供一种食蟹猴微卫星位点的应用，其包括W各编 号对应的食蟹猴微卫星位点或各编号对应的食蟹猴微卫星位点的结合为祀点或依据，对食 蟹猴所进行的毒理实验、生殖毒理实验、遗传毒理实验、致癌实验；
[0007] 所述各编号为 XSZK611、XSZK950、XSZK841。
[000引与W往报道现相比，本发明的有益效果是初步证明了微卫星位点在毒理学中的变 化，并且发现了=个微卫星位点可能具有重要关系，为微卫星技术在生物医药，特别是药物 毒理中的应用提供了有力的证据。
【附图说明】 图1为本发明的给药组食蟹猴中，服药前，编号为XSZK611的食蟹猴微卫星位点PCR扩增 产物电泳谱； 图2为本发明的给药组食蟹猴中，服药30后，编号为XSZK611的食蟹猴微卫星位点PCR扩 增产物电泳谱； 图3为本发明的给药组食蟹猴中，服药3个月后，编号为XSZK611的食蟹猴微卫星位点 PCR扩增产物电泳谱。
【具体实施方式】
[0009] 运些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据运些实施方式所作 的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，与本发明的保护范围之内无关。
[0010] 本发明提供一种食蟹猴微卫星位点的应用，包括W各编号对应的食蟹猴微卫星位 点或各编号对应的食蟹猴微卫星位点的结合为祀点或依据，对食蟹猴所进行的毒理实验、 生殖毒理实验、遗传毒理实验、致癌实验；
[0011] 所述各编号为 XSZK611、XSZK950、XSZK841。
[0012] 现针对各编号XSZK611、XSZK950、XSZK841对应的位点的筛选方法进行介绍。所述 筛选方法主要包括动物实验和PCR扩增。
[001引 1.动物实验
[0014] 健康食蟹猴50只，均为雄性，体重3-4KG，空白对照组40只，给药组10只。给药组口 服25 %阿维菌素螺蛾醋悬浮剂，1.5克/KG(半数致死量为2.5克/KG)体重，每日一次，共屯 天，空白对照组W相应等体积溶媒(生理盐水）。分别于给药前和给药后一周、两周、30天和 S个月，抽取外周静脉血，其余40只为空白对照组，取血时间同给药组。动物抗凝血分离 DNA化asyPure Genomic DNA Kit,hansgen company)，-80°C冻存备用。给药期内，给药组 动物出现饮食量下降和体重轻度减轻，停药一周后完全改善，未发现动物中毒死亡现象。空 白对照组各种生命体征均无变化。
[00巧]2. PCR扩增
[0016]设及的PCR扩增反应体系为：2xSG Green qPCR Mix(北京信诺金达生物科技有限 公司）12. ，primer F&R各0. ，DNA模板化L，d地20 6. ，总反应体积25化。
[0017]扩增条件为：95°。2111111，94°。153-55°(：~58°(：之间（根据不同引物时1设定）又6〇3-72°Cx30s，循环40次，最后一个循环后置72°C继续延伸Imin。后接melting curve初步判断 扩增情况。
[0018] 基于上述的PCR扩增反应体系，对PCR产物进行4%琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为 80v，2小时，电泳结束后凝胶EB染色，用紫外凝胶成像系统进行凝胶成像，并对其图带进行 相关分析。
[0019] 根据参考文献和GE肥BANK检索，在36个引物中，经过PCR筛选，琼脂糖凝胶电泳，对 扩增条带分析，W筛选条件如下：
[0020] A.空白对照组中PCR扩增产物出现不稳定条带比率> 25 % (10/40)，认为与口服药 物无关，该位点淘汰。
[0021] B.给药组中PCR扩增产物出现不稳定条带比率< 30% (3/10)，认为与对照组无显 著性差异，该位点淘汰。
[0022] 3.结果
[0023] 经过上述A、B条件筛选后，获得在空白对照组中出现不稳定条带比率<25%，在给 药组中出现不稳定条带比率>30%的引物3对。引如表1所示：
[0024] 表1 口服农药导致的=个微卫星位点变化引物序列
[0025]
[0026]
[0027] 给药后30天和=个月，均发现微卫星位点扩增条带变化，主要表现为：片段减小， 增宽和双带出现。健康食蟹猴口服有毒农药后能够导致微卫星不稳定性变化，提示W微卫 星位点作为毒理学检测指标，为更加敏感和方便的指标，具有广泛的应用价值。
[0028] 综上所述，本发明创造性地提出了食蟹猴中对于药理和毒理学的研究具有应用价 值的=个微卫星位点，其有利于药理和毒理学的研究，为科学技术的研究提供了有力的工 具。
[00巧]本发明设及的参考文献为：Atsunori Higashinol,化oki 0sada2，Yum;Lko Suto3， et al.Development of an integrative database with 499 novel microsatellite markers for Macacafascicularis.BMC Genetics 2009,10:24doi:10.1186/1471-2156-10-24。
[0030] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在 不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够W其他的具体形式实现本发明。因此，无论 从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权 利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有 变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所设及的权利要求。
[0031] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加 W描述，但并非每个实施方式仅包 含一个独立的技术方案，说明书的运种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当 将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可W经适当组合，形成本领域技术人员 可W理解的其他实施方式。
【主权项】
1. 一种食蟹猴微卫星位点的应用，其特征在于，所述应用包括以各编号对应的食蟹猴 微卫星位点或各编号对应的食蟹猴微卫星位点的结合为靶点或依据，对食蟹猴所进行的毒 理实验、生殖毒理实验、遗传毒理实验、致癌实验； 所述各编号为 XSZK611、XSZK950、XSZK841。
【专利摘要】本发明提供一种食蟹猴微卫星位点的应用，其包括以三个食蟹猴微卫星位点，编号为XSZK611、XSZK950、XSZK841，通过观察该位点在药物毒理学试验中的变化，提出该位点可能对食蟹猴的毒理实验、生殖毒理实验、遗传毒理实验、致癌实验等具有密切关系。本发明创造性地提出微卫星位点突变对于食蟹猴药理和毒理学研究具有应用价值，可能开辟药理毒理学新的研究方向，为微卫星位点技术的应用提供了新鲜证据。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105713969
【申请号】CN201610120421
【发明人】张海鹰, 董文明
【申请人】苏州西山中科实验动物有限公司