本发明涉及细胞生物学、基因组学及生物信息学领域的相关技术。
背景技术：
microrna（mirna）作为重要的基因表达调控分子，在肿瘤发生过程中可以发挥癌基因或抑癌基因的作用。mir-34家族有三个成员分别是mir-34a、mir-34b和mir-34c。它们在不同转移潜能的前列腺癌细胞中的表达具有明显差异，其中mir-34b和mir-34c差异显著。
技术实现要素：
本发明的目的是：发现了mir-34b和mir-34c具有抑制前列腺癌转移作用，为前列腺癌转移治疗提供新的生物标志物。
本发明的技术方案是：microrna-34家族成员mir-34b作为抑制转移性前列腺癌细胞迁移和侵袭，抑制癌症转移的应用。
microrna-34家族成员mir-34c作为抑制转移性前列腺癌细胞迁移和侵袭，抑制癌症转移的应用，。
microrna-34家族成员mir-34b和mir-34c联合使用作为抑制转移性前列腺癌细胞迁移和侵袭，抑制癌症转移的应用。
microrna-34家族成员mir-34b和mir-34c其中之一或联合使用为治疗转移性前列腺癌提供生物学标志物。
本发明的过程是
1.检测mir-34b和mir-34c在高转移潜能前列腺癌细胞pc-3和低转移潜能前列腺癌细胞du145细胞中的表达量。
2.转染mimic及inhibitor高表达和抑制前列腺癌细胞中mir-34b和mir-34c。
3.利用transwell实验检测高表达和低表达mir-34b和mir-34c的前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。
本发明的有益效果是：mir-34b和mir-34c抑制转移性前列腺癌细胞迁移和侵袭。为治疗转移性前列腺癌提供新的生物学标志物。
附图说明
附图1为实时荧光定量检测mir-34b和mir-34c在前列腺癌细胞pc-3、du145中的表达量。
附图2为转染mir-34b/cmimic和nc及未转染的pc-3细胞的迁移及侵袭能力。
附图3为图2中迁移和侵袭的细胞数量的统计。
附图4为转染mir-34b/cinhibitor和nc及未转染的du145细胞的迁移及侵袭能力。
附图5图4中迁移和侵袭的细胞数量的统计。
具体实施方式
本发明的实施例：
transwell法检测mir-34b和mir-34c影响前列腺癌细胞迁移和侵袭能力
细胞及其它试剂
人前列腺癌细胞株pc-3、du145来自加拿大多伦多sunnybrook研究中心；dmem培养基及胰酶购于美国hyclone公司；胎牛血清（fbs）购于浙江天杭生物科技有限公司；trizol®reagent、lipofectamine®3000reagent购于美国invitrogen公司；引物、mimic及inhibitor购自中国广州锐博生物科技有限公司；cdna逆转录试剂盒、uitrasybrgreenqpcrmixture购于康为世纪公司；opti-mem培养基购于美国gibco公司；transwell购于美国康宁公司；matrigel购于美国bdbiosciences公司。
细胞迁移检测
1.mir-34b/c表达检测
1.1培养pc-3及du145细胞，收集细胞用trizol法提取总rna，使用cdna逆转录试剂盒将rna逆转录为cdna，用于pcr检测。
1.2实时荧光定量检测mir-34b/c在pc-3及du145细胞中的表达量。
2.转染mir-34b/cmimic、inhibitor及对照negativecontrol（nc）至前列腺癌细胞
使用lipofectamine®3000reagent将mir-34b/cmimic及nc转染至pc-3细胞；mir-34b/cinhibitor及nc转染至du145细胞中。转染时将lipofectamine®3000与mimic（50nm）及inhibitor（100nm）混合入opti-mem培养基中形成转染复合物，加入至含opti-mem培养基的细胞中转染48h。收集细胞提取总rna，逆转录成cdna进行实时荧光定量pcr检测转染效率。
3.transwell法检测细胞迁移和侵袭能力
收集转染mimic/inhibitor及nc48h细胞及未转染的细胞三组，消化并悬浮细胞，每组取1×105/ml细胞稀释于200μlopti-mem培养基接种于transwell板每孔上室中，下室中加入700μl含10%fbsdmem培养基，置37℃培养箱中培养14h。取出transwell小室用75%乙醇固定细胞，0.1%结晶紫染色后用倒置相差显微镜观察迁移至下室的细胞数确定其迁移能力。检测细胞侵袭能力需在接种细胞前将上室内铺入200μl1:5稀释的matrigel。
4.结果显示：
mir-34b/c在高转移性前列腺癌细胞pc-3中低表达，在低转移性前列腺癌细胞du145细胞中高表达。转染mir-34b/cmimic的pc-3细胞比转染nc对照及未转染的细胞迁移和侵袭力弱；转染mir-34b/cinhibitor的du145细胞比转染nc对照及未转染的细胞迁移和侵袭力强。因此mir-34b/c具有抑制前列腺癌细胞迁移和侵袭的作用。