本发明属于水产品加工技术领域，尤其是涉及泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法。
背景技术：
我国水域广阔，渔业资源丰富，自上世纪80年代以来，水产品总产量迅速增长，中国已成为世界第一渔业大国。
泥鳅是一种蛋白质含量高且脂质含量较低的小型鱼类，广泛分布在我国各地天然淡水区域内，营养价值丰富，有独特的风味。泥鳅含有丰富的蛋白质，容易被人体消化吸收，能满足人体必需的氨基酸、矿物质等营养物质；鱼肉中蛋白质营养较完全，肌原纤维蛋白功能性好。
肌原纤维蛋白质是是一类具有重要生物学功能的结构蛋白质群，它是由肌球蛋白、肌动蛋白、肌动球蛋白以及被称为调节蛋白的原肌球蛋白、肌钙蛋白所组成的复合体，约占总蛋白含量的50％～55％；又被称为盐溶性蛋白，易溶于高离子强度的盐溶液中，是肌肉中含量最多、性质最重要的蛋白质，也是很多鱼肉制品的必要组分和加工原料。
肌原纤维蛋白质的作用除了参与肌肉的收缩、影响肌肉的嫩度外，还与肉制品的流变学特性如黏结性、保水性、弹性、质地等有着密切的关系。加强对肌肉中肌原纤维蛋白质的研究，才能在加工过程中控制好影响其成胶的因素，进而提高肉制品的品质和质构，为消费者提供满意的肉食制品。
目前，国内外对泥鳅肌原纤维蛋白质的研究尚少，使得泥鳅制品的深加工受限。现有的泥鳅肌原纤维蛋白质的提取方法存在提取率低、蛋白质不稳定等缺点，因此需要进一步改进。
技术实现要素：
本发明的目的是提供泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法，具体技术方案是：从新鲜活泥鳅中取肉，用自来水清洗至少三遍。向泥鳅肉中加入低离子强度的冷的磷酸盐缓冲溶液，高速匀浆并在高压微射流技术下进行处理，之后将料液离心，取沉淀，上述步骤至少重复三次。然后向沉淀中加入高离子强度的冷的磷酸盐缓冲溶液，高速匀浆并在高压微射流技术下进行处理，之后采用循环超滤膜系统将料液进行浸提浓缩，最后离心取上清液得肌原纤维蛋白质溶液。本发明提供的泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法包括以下步骤：
(1)以泥鳅为原料，去尾，置于冷水中放血，然后去头、去内脏，洗净后采肉；
(2)用自来水清洗泥鳅肉至少三遍，加4～6倍体积冷的(4℃)低离子强度的磷酸盐缓冲溶液，在匀浆机中高速匀浆3～5min，在6.89×107～10.34×107pa下高压微射流处理，得到的匀浆液在8000～9000rpm、0～4℃条件下离心15～20min后取沉淀，重复上述步骤至少3次；
(3)然后向沉淀中加入4～6倍体积冷的(4℃)高离子强度的50mmol/l的磷酸盐缓冲溶液(含0.6mol/lnacl，ph值为7.0)，在转速为8000～10000rpm的匀浆机中高速匀浆30～60s，在6.89×107～10.34×107pa下高压微射流处理；
(4)将料液置于带有过滤网及搅拌装置的料罐a中，用泵将粗滤后的料液抽入带有超滤膜的料罐b中，被超滤膜截留下来的即浓缩后的蛋白液，透过超滤膜的即透过液，并将透过液循环回a罐中；之后将截留液在8000～9000rpm、0～4℃条件下离心15～20min，取上清得肌原纤维蛋白质溶液。
本发明的优点及效果：
本发明基于肌原纤维蛋白质是一种盐溶性蛋白质的原理，应用缓冲溶液浸提离心的方法，协同高压微射流技术、膜技术来提取泥鳅肌原纤维蛋白质，主要有以下四个优点：
(1)提取时间短。采用高压微射流技术，可以将组织细胞破碎，强化分子运动，有效提高提取液与蛋白质的接触程度；采用循环超滤膜系统分离肌原纤维蛋白质，使溶剂返回浸提原料中的肌原纤维蛋白时浓度差增大，从而使浸提速度高于常规方法，浸提时间缩短。
(2)提取效率高。在相同的时间内提高蛋白质的产率。
(3)蛋白质纯度高。集提取、浓缩、分离技术于一体，可以一步得到高纯度的蛋白质。
(4)蛋白质更加稳定、不易变性。提取过程在低温下进行，且处理条件温和。
具体实施方式
为了理解本发明，下面通过具体的实施例对本发明作进一步说明，需要说明的是下述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例一
泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法是以泥鳅为原料，去尾，置于冷水中放血，然后去头、去内脏，洗净后采肉。提取步骤如下：
(1)用自来水清洗泥鳅肉三遍后，加4倍体积冷的(4℃)50mmol/l磷酸盐缓冲溶液(0.1mol/lnacl、1mmol/ledta、2mmol/lmgcl2，ph值为7.0)，在匀浆机中高速匀浆3min(8000rpm，匀30s，停30s)。在8.96×107pa下高压微射流处理，得到的匀浆液在8000r/min、4℃条件下离心15min后取沉淀，重复上述步骤共提取3次；
(2)然后向沉淀中加入4倍体积冷的(4℃)50mmol/l的磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/lnacl，ph值为7.0)，在匀浆机中高速匀浆30s(8000rpm)，在8.96×107pa下高压微射流处理；
(3)将料液置于带有过滤网及搅拌装置的料罐a中，用泵将粗滤后的料液抽到带有超滤膜(分子量为10kd)的料罐b中，被超滤膜截留下来的即浓缩后的蛋白液，透过超滤膜的即透过液，并将透过液循环回a罐中(环境温度为4℃)；之后在8000rpm、4℃条件下离心15min，取上清得肌原纤维蛋白质溶液，并于4℃条件下保存。
实施例二
泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法是以泥鳅为原料，去尾并置于冷水中放血，然后去头、去内脏，洗净后采肉。提取步骤如下：
(1)用自来水清洗泥鳅肉三遍后，加4倍体积冷的(4℃)50mmol/l磷酸盐缓冲溶液(0.1mol/lnacl、1mmol/ledta、2mmol/lmgcl2，ph值为7.0)，在匀浆机中高速匀浆3min(8000rpm，匀30s，停30s)。在6.89×107pa下高压微射流处理，得到的匀浆液在8500r/min、4℃条件下离心20min后取沉淀，重复上述步骤共提取3次；
(2)然后向沉淀中加入6倍体积冷的(4℃)50mmol/l的磷酸盐缓冲溶液(0.6mol/lnacl，ph值为7.0)，在匀浆机中高速匀浆30s(8000rpm)，在6.89×107pa下高压微射流处理；
(3)将料液置于带有过滤网及搅拌装置的料罐a中，用泵将粗滤后的料液抽到带有超滤膜(分子量为10kd)的料罐b中，被超滤膜截留下来的即浓缩后的蛋白液，透过超滤膜的即透过液，并将透过液循环回a罐中(环境温度为4℃)；之后在8500rpm、4℃条件下离心20min，取上清得肌原纤维蛋白质溶液，并于4℃条件下保存。
1.泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以泥鳅为原料，去尾，置于冷水中放血，然后去头、去内脏，洗净后采肉；
(2)用自来水清洗泥鳅肉至少三遍，加4～6倍体积冷的(4℃)低离子强度的磷酸盐缓冲溶液，在匀浆机中高速匀浆3～5min，在6.89×107～10.34×107pa下高压微射流处理，得到的匀浆液在8000～9000rpm、0～4℃条件下离心15～20min后取沉淀，重复上述步骤至少3次；
(3)然后向沉淀中加入4～6倍体积冷的(4℃)高离子强度的50mmol/l的磷酸盐缓冲溶液(含0.6mol/lnacl，ph值为7.0)，在转速为8000～10000rpm的匀浆机中高速匀浆30～60s，在6.89×107～10.34×107pa下高压微射流处理；
(4)将料液置于带有过滤网及搅拌装置的料罐a中，用泵将粗滤后的料液抽入带有超滤膜的料罐b中，被超滤膜截留下来的即浓缩后的蛋白液，透过超滤膜的即透过液，并将透过液循环回a罐中；之后将截留液在8000～9000rpm、0～4℃条件下离心15～20min，取上清得肌原纤维蛋白质溶液。
2.根据权利要求1所述的泥鳅肌原纤维蛋白质的高效提取方法，其特征在于，步骤(2)中，低离子强度的磷酸盐缓冲溶液为50mmol/l磷酸盐缓冲溶液，其中含0.1mol/lnacl、1mmol/ledta、2mmol/lmgcl2，ph值为7.0；匀浆机转速为8000～10000rpm，匀30s，停30s。
3.根据权利要求1所述的泥鳅肌原纤维蛋白质的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，浸提浓缩过程是在0～4℃的条件下进行的；所述超滤膜的分子量为10kd；得到的肌原纤维蛋白溶液于0～4℃条件下保存。