一种口服用脑蛋白水解物的制备工艺的制作方法

本发明涉及一种口服用脑蛋白水解物的制备工艺。

背景技术：

猪脑，除了含有丰富的脑磷脂、卵磷脂、蛋白质氨基酸等物质外，还含有不等量的氯、磷、钠、钙、镁、锌等元素，具有良好的营养价值。然而，猪脑中的胆固醇含量极高，100克猪脑中含胆固醇量高达3100毫克，是常见食物中最高的一种。近年来，猪脑得到广泛的研究开发及利用。研究表明，猪脑中含有乙酰胆碱等活性成分，乙酰胆碱是最早被发现的神经递质，它能抑制慢波睡眠，促进快波睡眠，加强中枢乙酰胆碱能活动，改善学习与记忆能力。此外，猪脑中还含有能使背根神经节向四周向外生长突出的物质，即神经生长因子。神经生长因子是发现最早研究最为广泛的一种神经营养因子（brain-derivedneurotrophicfactor，bdnf），其是一种小分子量的碱性蛋白；1982年，人们从猪脑中提取纯化得到bdnf，它能支持和营养多种神经元，特别是起源于神经脊和神经板的初级感觉神经元的存活，并能在体内防止神经细胞的死亡和变性，因此，猪脑有促进调节神经递质代谢，调节神经系统功能并具有抗缺氧等作用。健康猪脑经酶水解制得脑蛋白水解物溶液，适应于用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆力减退及注意力集中障碍的症状改善。据文献报道，脑蛋白水解物为一种大脑所特有的肽能神经营养药物。能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突然的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。本品可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢。激活腺苷酸环化酶和催化其他激素系统。提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。

目前，市场上较多的注射用脑蛋白水解物溶液，口服较少。例如中国专利文献公布的一种制备脑蛋白水解物口服的方法，制备流程为：健康猪脑→解冻→除杂质→混合均匀→研磨→丙酮脱脂→纯化水稀释→调ph值→混匀(酶)→水解→上清液→调ph值中性→灭活→上清液→低温连续离心分离→超滤→灌装→灭菌→贴标→包装→检验→入库。该方法不仅工艺复杂，而且采用的新鲜猪脑制备，研磨过程导致猪脑细胞破损，造型活性成分流失，而且酶解不彻底，影响产品功效。

技术实现要素：

针对上述存在的问题，本发明提供一种口服用脑蛋白水解物的制备工艺，本发明将猪脑制备的猪脑丙酮粉制备脑蛋白水解物，最大程度保留猪脑中的活性成分，而且酶解彻底。具体技术方案如下：

一种口服用脑蛋白水解物的制备工艺，包括步骤如下：

1）制备脑丙酮粉：将新鲜猪脑解冻后翻炒干燥制成猪脑干粉，再将猪脑干粉经丙酮提取蒸馏干燥制成脑丙酮粉；

2）制备脑丙酮粉溶液：将制备的脑丙酮粉加水溶解，制成脑丙酮粉溶液；

3）胰酶酶解：将制备的脑丙酮粉溶液温度调节至50±1℃，并调节溶液ph至7.5-7.8，加入胰酶，保温2小时，进行胰酶酶解；

4）中性蛋白酶酶解：在胰酶酶解2小时后，调节温度至42℃-48℃，并调节溶液ph至6.5-7.5，投入中性蛋白酶，保温搅拌2小时，进行中性蛋白酶酶解；

5）酸性酶酶解：在中性蛋白酶酶解2小时后，调节溶液ph至3.0-6.0，调节温度至42℃-48℃，再投入酸性蛋白酶，保温搅拌4小时，进行酸性酶酶解；

6）杀酶热滤：酸性酶酶解结束后，再次调节ph至5.0-7.0，升温至85-88℃，杀酶，保温1小时后，趁热用专用滤布折叠法过滤，至滤液澄清；

7）浓缩：将热滤后的滤液抽入外循环蒸发器，浓缩溶液；然后调节浓缩液ph至5.5-6.5，升温至80℃-100℃，保温0.5小时，再次趁热过滤至滤液澄清；

8）冷滤：将浓缩后的滤液存放于周转桶中置0-5℃冷库过夜后，再用专用滤布折叠法过滤至滤液澄清，校正滤液ph至5.5-6.5，最后经外循环蒸发器附属管路再次过滤至洁净区；

9）干燥混装：将冷滤后的滤液进行喷雾干燥，获得脑蛋白粉；再根据批量要求进行混合或混批后包装，以用于后续口服水解蛋白溶液的配制。

作为优选的技术方案的，步骤1）中，所述脑丙酮粉ph值为5.0-7.0，干燥减失重量不超过8.0%，残留丙酮溶剂不超过0.5%。

作为优选的技术方案的，步骤2）中，所述脑丙酮粉水解，在提取罐中用6-8倍的纯化水溶解脑丙酮粉15分钟,然后在搅拌条件下升温至85-88℃，保温10分钟，制成脑丙酮粉溶液。

作为优选的技术方案的，步骤3）中，所述胰酶酶解，加入的胰酶量为脑丙酮粉溶液体积的10%-15%，其活力为2000单位以上；在酶解过程中，每0.5小时检查一次酶解温度与ph，并校正至工艺要求。

作为优选的技术方案的，步骤4）中，所述中性蛋白酶酶解，加入的中性蛋白酶量为脑丙酮粉溶液体积的0.25%-0.4%，其活力为40万单位以上，且预先用二倍量纯化水搅拌均匀。

作为优选的技术方案的，步骤5）中，所述酸性酶酶解，加入的酸性酶量为脑丙酮粉溶液体积的0.25%，其活力为80万单位以上，且预先用二倍量纯化水搅拌均匀。

作为优选的技术方案的，步骤7）中，所述浓缩溶液，浓缩至溶液体积的20%-30%。

作为优选的技术方案的，步骤2）、3）、4）、5）、6）、7）中，调节ph所用的试剂均为1：1磷酸或1：1氢氧化钙溶液。

作为优选的技术方案的，步骤8）中，所述校正滤液ph所用的试剂为1：1盐酸或20%氢氧化钠溶液；所述外循环蒸发器附属管路设有直径为5μm的钛棒。

作为优选的技术方案的，步骤9）中，所述喷雾干燥，喷雾时，进风温度为180-220℃，排风温度为80-100℃，蠕动泵泵量为280ml/min-320ml/min，对应进料速度为0.83l-0.95l/min。

本发明的有益效果是：

本发明口服用脑蛋白水解物的制备工艺，将新鲜猪脑解冻后翻炒干燥制成猪脑干粉，再将猪脑干粉经丙酮提取蒸馏干燥制成脑丙酮粉，然后制备脑蛋白水解物，最大程度保留猪脑中的活性成分。本发明制备工艺脑丙酮粉制成脑蛋白水解物分别经过胰酶酶解、中性蛋白酶酶解和酸性酶酶解，三重酶解，酶解彻底；而且本发明三重酶解顺序为胰酶酶解、中性蛋白酶酶解和酸性酶酶解，依次调节溶液温度及ph，充分保证不同酶的活力及水解效果。此外，本发明制备工艺经两次热滤后进入冷滤，保证产品溶液澄清；冷滤后还经外循环蒸发器附属管路的钛棒过滤，保证产品洁净，保证产品品质。本发明工艺制备的脑蛋白水解物可用于口服溶液的制备，具有良好的实用价值及经济价值。

附图说明

图1为本发明口服用脑蛋白水解物的制备工艺流程图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

本实施例提供一种口服用脑蛋白水解物的制备工艺，包括制备脑丙酮粉、脑丙酮粉水解、三重酶解、杀酶、热滤、浓缩、冷滤及干燥混装等步骤。如图1所示，具体如下：

首先制备脑丙酮粉，将新鲜猪脑解冻后翻炒干燥制成猪脑干粉，再将猪脑干粉经丙酮提取蒸馏干燥制成脑丙酮粉。具体为：将冷库中取出新鲜猪脑称重，适度解冻后，将猪脑堆放至平板炒锅上，打开加热阀门调节平板炒锅温度使导热油温度控制在120℃-140℃，导热油在平板炒锅夹套内循环加热。待猪脑融化后，搅拌翻炒5-6小时至猪脑无水流出，物料无明显结块应松散干燥失重≤50%。将翻炒后的脑渣取出，摊盘热风循环干燥内，打开加热阀门调节温度使导热油温度控制在120℃-140℃℃，导热油至热风循环干燥箱中循环加热，热风干燥箱温度控制在80-100℃，干燥8-10小时（中途翻粉2次），物料无明显结块应松散干燥失重≤10%。然后，放入耙式干燥机中打开加热阀门调节温度使导热油温度控制在120℃-140℃℃，导热油至耙式干燥机中循环加热，并开启真空系统真空度：0.06-0.08mp，耙式干燥机内温度：60-80℃，干燥1.5小时，获得猪脑干粉。

称取猪脑干粉，在浸泡反应釜中加入7-8倍量95%以上的丙酮，提取温度50℃以下，丙酮上清液浓度≥90%搅拌2-2.5小时，静置10分钟以上，抽取上清液后物料再加入7-8倍量的95%以上丙酮，提取温度50℃以下，丙酮上清液浓度≥90%搅拌2-2.5小时，静置10分钟以上后抽取上清液；按上述方法重复提取共4次。上清液进行胆固醇的提取及丙酮回收。将含有丙酮液的物料抽入洁净的不锈钢反应釜中滤去物料中的丙酮液待回收，开启蒸汽阀温度控制在80℃，同时开启搅拌装置以蒸馏剩余的丙酮液，待收集的丙酮浓度小于500时打开真空阀真空度为0.04-0.09mp继续加热脑渣温度控制在60-80℃蒸发物料中的水分和残余丙酮，蒸发时间1-2小时。再将不锈钢反应釜中的物料放出，摊盘干燥温度控制在60-100℃，干燥8-10小时（中途翻粉2次），获得脑丙酮粉。

然后制备脑丙酮粉溶液，并进行三重酶解，具体如下：

称取脑丙酮粉，在提取罐中用6-8倍的纯化水溶解15分钟，开始搅拌，搅拌条件下在线监控升温至85-88℃，保温10分钟后，降温至50±1℃后，并调节溶液ph至7.5-7.8（1：1磷酸或1：1氢氧化钙），加入10%-15%活力2000单位以上的胰酶，保温2小时，酶解（在酶解过程中，每0.5小时检查一次酶解温度与ph，并校正至工艺要求）。在胰酶酶解2小时后，调节温度至42℃-48℃并调节溶液ph6.5-7.5（1：1磷酸或1：1氢氧化钙），投入0.25%-0.4%活力40万单位以上的中性蛋白酶（预先用二倍量纯化水搅拌均匀），保温搅拌2小时，进行中性蛋白酶酶解。在中性蛋白酶酶解2小时后，调节溶液ph至3.0-6.0（1：1磷酸或1：1氢氧化钙），调节温度至42℃-48℃，投入0.25%80万活力单位的酸性蛋白酶（预先用二倍量纯化水搅拌均匀），保温搅拌4小时，进行酸性蛋白酶酶解。

紧接着进行杀酶、热滤、浓缩和冷滤。酶解结束后，调节溶液ph至5.0-7.0（1：1磷酸或1：1氢氧化钙），升温至85-88℃，杀酶，保温1小时，趁热用专用滤布折叠法过滤，滤液至澄清。将滤液抽入外循环蒸发器，浓缩至溶液体积的20%-30%；浓缩液调节ph至5.5-6.5（1：1磷酸或1：1氢氧化钙），升温至80℃-100℃，保温0.5小时，趁热用专用滤布折叠法过滤，滤液至澄清，去杂蛋白过滤。滤渣及外循环蒸发器浓缩的废液均回收处理。然后将浓缩液存放于周转桶中置0-5℃冷库过夜。次日将冷藏的浓缩液取出，用专用滤布折叠法过滤，滤液至澄清。校正滤液ph至5.5-6.5（1：1盐酸或20%氢氧化钠），溶液经外循环蒸发器附属管路经5μm钛棒过滤至d级洁净区内，进行喷雾干燥及混合包装。

喷雾干燥为启动喷雾干燥设备，调节蠕动泵转速，对溶液进行喷雾干燥。喷雾时，进风温度180-220℃。排风温度80-100℃，蠕动泵280ml/min-320ml/min（对应进料速度为0.83l-0.95l/min）。干燥完毕后，根据批量要求进行混合或混批后装入聚乙烯药品包装袋，封口，标上产品标识。包装包括内包装和外包装，将喷雾干燥设备物料收集桶收集的脑蛋白水解物半成品按25kg/袋标准、装入聚乙烯药品包装袋，封口，取样检验，并套上外袋，在内外袋之间放置“合格证”，外袋封口，经传递窗送外包间，在外包间进行装桶，每桶25kg，上盖卡紧，桶外贴标签，入库，待检验合格后放行。

本实施例制备的是口服用的脑蛋白水解物半成品，其与其他成分组配后可制成脑蛋白水解物口服，用于治疗相关疾病，具有非常好的社会及经济价值。

本发明制备工艺，将新鲜猪脑解冻后翻炒干燥制成猪脑干粉，再将猪脑干粉经丙酮提取蒸馏干燥制成脑丙酮粉，然后制备脑蛋白水解物，最大程度保留猪脑中的活性成分。本发明制备工艺脑丙酮粉制成脑蛋白水解物分别经过胰酶酶解、中性蛋白酶酶解和酸性酶酶解，三重酶解，酶解彻底；三重酶解顺序为胰酶酶解、中性蛋白酶酶解和酸性酶酶解，依次调节溶液温度及ph，充分保证不同酶的活力及水解效果。此外，本发明制备工艺经两次热滤后进入冷滤，保证产品溶液澄清；冷滤后还经外循环蒸发器附属管路的钛棒过滤，保证产品洁净，保证产品品质。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非只包含一个的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。