技术特征：
1.一种用于获得三维类器官的组合物，其特征在于，包括：n2、b27、双抗、glutamax、n-乙酰半胱氨酸、表皮细胞生长因子、noggin、r-spondin1、chir-99021、a-83-01、sb202190、y27632、烟酰胺、前列腺素e2和wnt3a-cm。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物进一步包括：gastrin i；任选地，所述组合物用于扩增巴马猪和/或食蟹猴的细胞；任选地，所述细胞选自干细胞和/或表皮细胞；任选地，所述细胞选自肠干细胞和/或肠上皮细胞；任选地，所述细胞为结肠上皮细胞。3.一种扩增培养基，其特征在于，包含：权利要求1～2任一项所述的组合物；基础培养基。4.根据权利要求3所述的扩增培养基，其特征在于，所述基础培养基为advanced dmem/f12；任选地，所述glutamax的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述n-乙酰半胱氨酸的浓度为0.2-5mm，优选为0.2-2mm；任选地，所述表皮细胞生长因子的浓度为5-100ng/ml，优选为40-60ng/ml；任选地，所述noggin的浓度为5-200ng/ml，优选为80-120ng/ml；任选地，所述r-spondin 1的浓度为100-1000ng/ml，优选为400-600ng/ml；任选地，所述chir-99021的浓度为1-10μm，优选为4-6μm；任选地，所述a-83-01的浓度为0.5-2μm，优选为0.5-1μm；任选地，所述sb202190的浓度为1-10μm，优选为8-10μm；任选地，所述gastrin i的浓度为1-10nm，优选为1-3nm；任选地，所述前列腺素e2的浓度为1-5μm，优选为2-3μm；任选地，所述烟酰胺的浓度为1-10mm，优选为8-10mm；任选地，所述n2的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述b27的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述双抗的浓度为100-1000ng/ml，优选为400-600ng/ml；任选地，所述wnt3a-cm体积为所述扩增培养基总体积的10％-30％，优选为20-30％；任选地，所述y27632的浓度为1-10μm，优选为8-10μm；任选地，所述双抗为青霉素和链霉素。5.一种获得三维类器官的方法，其特征在于，包含：取细胞样本与基质胶混合，然后加入权利要求3～4任一项所述的扩增培养基进行扩增培养，形成三维类器官；任选地，所述细胞样本与所述基质胶混合后，于35～38℃、4～6％二氧化碳培养箱中凝固15～20分钟；任选地，所述基质胶的厚度为40-60μm，优选为50-55μm。6.一种三维类器官，其特征在于，所述三维类器官是利用权利要求5所述的方法获得的。7.一种用于权利要求6所述三维类器官分化的组合物，其特征在于，包括：
n2、b27、双抗、glutamax、n-乙酰半胱氨酸、表皮细胞生长因子、noggin、r-spondin1、y27632、a-83-01、gastrin i。8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物进一步包括：烟酰胺和/或sb202190；任选地，所述组合物进一步包括chir-99021；任选地，所述三维类器官选自巴马猪和/或食蟹猴的细胞；任选地，所述三维类器官选自干细胞和/或表皮细胞；任选地，所述三维类器官选自肠干细胞和/或肠上皮细胞；任选地，所述三维类器官为结肠上皮细胞。9.一种分化培养基，其特征在于，包含：权利要求7～8任一项所述的组合物；基础培养基。10.根据权利要求9所述的分化培养基，其特征在于，所述基础培养基为advanced dmem/f12；任选地，所述glutamax的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述n-乙酰半胱氨酸的浓度为0.2-5mm，优选为0.2-2mm；任选地，所述表皮细胞生长因子的浓度为5-100ng/ml，优选为40-60ng/ml；任选地，所述noggin的浓度为5-200ng/ml，优选为80-120ng/ml；任选地，所述r-spondin 1的浓度为100-1000ng/ml，优选为400-600ng/ml；任选地，所述chir-99021的浓度为1-5μm，优选为2-3μm；任选地，所述a-83-01的浓度为0.5-2μm，优选为0.5-1μm；任选地，所述sb202190的浓度为1-10μm，优选为8-10μm；任选地，所述gastrin i的浓度为1-10nm，优选为1-3nm；任选地，所述烟酰胺的浓度为1-10mm，优选为8-10mm；任选地，所述n2的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述b27的浓度为0.5-10mm，优选为1-3mm；任选地，所述双抗的浓度为100-1000ng/ml，优选为400-600ng/ml；任选地，所述y27632的浓度为1-10μm，优选为8-10μm；任选地，所述双抗为青霉素和链霉素。11.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～2所述的组合物、权利要求3～4所述的扩增培养基、权利要求7～8所述的组合物和/或权利要求9～10所述的分化培养基。12.权利要求1～2所述的组合物、权利要求3～4所述的扩增培养基、权利要求7～8所述的组合物、权利要求9～10所述的分化培养基或权利要求11所述的试剂盒在药物筛选或药物分析中的用途。13.一种检测药物毒性的方法，其特征在于，包括：将候选药物与权利要求3～4任一项所述的扩增培养基中培养的细胞样本进行培养；将上步所得培养后的细胞于权利要求9～10任一项所述的分化培养基内进行分化培养，得到分化细胞；以所述分化培养前后的细胞生存活力的检测结果作为是否存在药物毒性的指示；
任选地，所述培养时间为2-10天。
技术总结
本发明涉及三维培养系统在巴马猪和食蟹猴肠上皮类器官中的应用。三维培养系统包括用于获得三维类器官及其分化的培养基或组合物，其中，用于获得三维类器官的组合物包括：N2、B27、双抗、GlutaMAX、N-乙酰半胱氨酸、表皮细胞生长因子、Noggin、R-spondin1、CHIR-99021、A-83-01、SB202190、烟酰胺、Y27632、Gastrin I、PGE2和Wnt3a-CM。上述组合物可培养形成三维类器官或促进三维类器官的分化，为药物研究筛选合适的动物模型，提供低成本、高效率的筛药体系。系。
技术研发人员：陈晔光 李豪楠 王亚龙 宁元亨 田军
受保护的技术使用者：清华大学
技术研发日：2021.11.04
技术公布日：2022/3/15