背景技术：
1、细胞疗法产品包含经过修饰以表达与癌细胞上的蛋白质结合的蛋白质的t细胞。举例来说，“car-t细胞”包含靶向肿瘤相关抗原的嵌合抗原受体(“car”)。car-t细胞可以杀死肿瘤细胞并已成功用于治疗癌症。举例来说，靶向cd19、bcma、cd30、cd22或cd20的car-t细胞在临床研究中显示出了显著的活性。然而，car-t疗法也存在缺点。由于施用的大量car-t细胞，患者在施用car-t细胞之前通常需要化学疗法方案来清除淋巴细胞。此外，为了在施用后维持car-t细胞的治疗水平，患者可能还需要用阿地白介素(aldesleukin)治疗，其可能会导致严重的不良副作用。此外，由于car-t细胞在体内的扩增或持久性不理想，一些患者可能无法实现其期望的或最佳的结果。
技术实现思路
1、本公开包括修饰的细胞毒性t细胞(mctl)的公开内容，其中mctl可包含：a)包含编码对mhc i类多肽具有特异性的t细胞受体(tcr)的核苷酸序列的一种或多种核酸，所述mhci类多肽呈递包含氨基酸序列ymldlqpett(seq id no:1)(“hpv e711-20 tcr”)或ymldlqpet(seq id no:2)(“hpv e711-19 tcr”)的人乳头瘤病毒(hpv)e7肽(统称为“hpv e711-19/20tcr”)；以及b)包含编码抗原结合多肽(例如，car或包含对癌症相关抗原具有特异性的抗原结合结构域的其他多肽)的核苷酸序列的一种或多种核酸。本公开还包括产生mctl的方法。本公开还提供了治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用mctl。本公开还包括具有除了hpv e711-19/20tcr以外的tcr的mctl的公开内容，以及除了t细胞以外的修饰细胞(例如nk细胞)的公开内容，其被修饰以同时呈递tcr和car或呈递其他癌症相关抗原结合结构域。
1.一定量的修饰的细胞毒性t细胞(“mctl”)，其中所述mctl包含：a)包含编码对mhc i类多肽具有特异性的t细胞受体(tcr)的核苷酸序列的一种或多种核酸，所述mhc i类多肽呈递包含氨基酸序列ymldlqpett(seq id no:1)或ymldlqpet(seq id no:2)的人乳头瘤病毒(hpv)e7肽；以及b)包含编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列的一种或多种核酸，其中所述car包含对癌症相关抗原具有特异性的抗原结合结构域，并且其中组合物中靶mctl细胞的百分比超过所述组合物中t细胞总数的至少1％。
2.一定量的修饰的细胞毒性t细胞(“mctl”)，其中所述mctl包含：a)对mhc i类多肽具有特异性的t细胞受体(tcr)，所述mhc i类多肽呈递包含氨基酸序列ymldlqpett(seq idno:1)或ymldlqpet(seq id no:2)的人乳头瘤病毒(hpv)e7肽；以及b)嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含对癌症相关抗原具有特异性的抗原结合结构域，并且其中组合物中靶mctl细胞的百分比超过所述组合物中t细胞总数的至少1％。
3.一定量的修饰的细胞毒性t细胞(“mctl”)，其中所述mctl包含：a)对mhc i类多肽具有特异性的异源t细胞受体(tcr)，所述mhc i类多肽呈递包含氨基酸序列ymldlqpett(seqid no:1)或ymldlqpet(seq id no:2)的人乳头瘤病毒(hpv)e7肽；以及b)嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含对癌症相关抗原具有特异性的抗原结合结构域。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的一定量的mctl，其中所述car包含：a)包含所述抗原结合结构域的胞外结构域；b)跨膜区；以及c)包含胞内信号传导结构域的细胞质结构域。
5.根据权利要求4所述的一定量的mctl，其中所述细胞质结构域包含一个或多个共刺激多肽。
6.根据权利要求5所述的一定量的mctl，其中所述共刺激多肽选自cd28、4-1bb和ox-40。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含来自人cd3的ζ链的信号传导结构域。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的一定量的mctl，其中所述抗原结合结构域是单链fv多肽或纳米抗体。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的一定量的mctl，其中所述car是单多肽链car。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的一定量的mctl，其中所述car包含至少两条多肽链。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的一定量的mctl，其中所述癌症相关抗原选自：afp、bcma、cd10、cd117、cd123、cd133、cd128、cd171、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd5、cd56、cd7、cd70、cd80、cd86、cea、cld18、cll-1、cmet、egfr、egfrviii、epcam、epha2、gd-2、磷脂酰肌醇聚糖-3、gpc3、her-2、κ免疫球蛋白、ley、lmp1、间皮素、mg7、muc1、nkg2d配体、pd-l1、psca、psma、ror1、ror1r、taci和vegfr2。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的一定量的mctl，其中所述tcr包含：(i)α链，其与图2a中所示的α链氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；以及(ii)β链，其与图2b中所示的β链氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的一定量的mctl，其中所述tcr包含：(i)α链，其与图2c中所示的α链氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；以及(ii)β链，其与图2d中所示的β链氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的一定量的mctl，其中所述mctl是cd8+t细胞。
15.一种组合物，其包含一定量的t细胞，其中所述一定量的t细胞包含根据权利要求1至13中任一项所述的mctl，并且其中作为mctl的t细胞的百分比选自由以下组成的组：至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％和100％，
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述组合物是适合于施用于人受试者的药物组合物。
17.一种混合物，所述混合物包含
18.根据权利要求17所述的混合物，
19.一种制备根据权利要求1至14中任一项所述的一定量的mctl的方法，其中所述方法包括通过引入一种或多种核酸来修饰一定量的t细胞，所述核酸编码
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述方法包括至少部分分离包含hpv e711-19/20tcr的靶t细胞的步骤，任选地其中至少部分分离包含hpv e711-19/20tcr的靶t细胞的所述步骤包括使所述靶t细胞与包含氨基酸序列ymldlqpett(seq id no:1)或ymldlqpet(seqid no:2)的hpv16 e7肽结合。
21.根据权利要求20所述的方法，其中将所述hpv16 e7肽固定在不溶性支持物上。
22.根据权利要求21所述的方法，其中不溶性支持物是珠子。
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述hpv16 e7肽是载有肽的mhc i类多聚体。
24.根据权利要求19至23中任一项所述的方法，其中所述car包含：a)包含所述抗原结合结构域的胞外结构域；b)跨膜区；以及c)包含胞内信号传导结构域的细胞质结构域。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包含来自人cd3的ζ链的信号传导结构域。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述细胞质结构域包含一个或多个共刺激多肽。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述共刺激多肽选自cd28、4-1bb和ox-40。
28.根据权利要求19至27中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单链fv多肽或纳米抗体。
29.根据权利要求19至28中任一项所述的方法，其中所述car是单多肽链car。
30.根据权利要求19至28中任一项所述的方法，其中所述car包含两条多肽链。
31.根据权利要求19至30中任一项所述的方法，其中所述癌症相关抗原选自：afp、bcma、cd10、cd117、cd123、cd133、cd128、cd171、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd5、cd56、cd7、cd70、cd80、cd86、cea、cld18、cll-1、cmet、egfr、egfrviii、epcam、epha2、gd-2、磷脂酰肌醇聚糖-3、gpc3、her-2、κ免疫球蛋白、ley、lmp1、间皮素、mg7、muc1、nkg2d配体、pd-l1、psca、psma、ror1、ror1r、taci和vegfr2，任选地其中所述car包含结合cd19或bcma的scfv。
32.根据权利要求19至31中任一项所述的方法，其中作为靶ctl的所述组合物中t细胞总数的百分比选自由以下组成的组：至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％和100％。
33.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中在步骤(ii)之前，使包含一定量的t细胞的所述组合物在体外或体内与包含t细胞调节多肽(tmp)的组合物接触，所述t细胞调节多肽包含：
34.根据权利要求19至33中任一项所述的方法，其中至少50％的所述靶t细胞是cd8+t细胞。
35.根据权利要求19至34中任一项所述的方法，其包括在步骤(i)与步骤(ii)之间富集所述t细胞中的cd8+t细胞。
36.根据权利要求19至35中任一项所述的方法，其包括在步骤(ii)与(iii)之间富集所述t细胞中的cd8+t细胞。
37.一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体引入包含一定量的根据权利要求1至15中任一项所述的修饰的细胞毒性t细胞的组合物或根据权利要求16至33中任一项所述的方法制备的药物组合物。
38.根据权利要求37所述的方法，其进一步包括向所述个体施用包含tmp的组合物，所述tmp包含：
39.根据权利要求37或权利要求38所述的方法，其中所述施用包含一定量的遗传修饰的细胞毒性t细胞的组合物包括施用一定量的遗传修饰的细胞毒性t细胞，其等于或小于选自由以下组成的组的数量：10个细胞/kg体重、102个细胞/kg体重、103个细胞/kg体重、104个细胞/kg体重、105个细胞/kg体重、106个细胞/kg体重、107个细胞/kg体重、108个细胞/kg体重和109个细胞/kg体重。
40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，其中所述施用包含一定量的遗传修饰的细胞毒性t细胞的组合物包括施用一定量的遗传修饰的细胞毒性t细胞，其等于或小于107个细胞/kg体重。
41.根据权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述个体在所述引入步骤之前不经历清除淋巴细胞方案。
42.根据权利要求37至41中任一项所述的方法，其中所述施用是肌肉内、静脉内、肿瘤周围或肿瘤内施用。
43.根据权利要求37至42中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用一种或多种检查点抑制剂。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述检查点抑制剂是与选自由以下组成的组的多肽结合的抗体：cd27、cd28、cd40、cd122、cd96、cd73、cd47、ox40、gitr、csf1r、jak、pi3kδ、pi3kγ、tam、精氨酸酶、cd137、icos、a2ar、b7-h3、b7-h4、btla、ctla-4、lag3、tim3、vista、cd96、tigit、cd122、pd-1、pd-l1和pd-l2。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述检查点抑制剂是对pd-1、pd-l1或ctla4具有特异性的抗体。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述一种或多种检查点抑制剂选自由以下组成的组：纳武单抗、派姆单抗、皮地利珠单抗、amp-224、mpdl3280a、mdx-1105、medi-4736、阿维鲁单抗、伊匹单抗、曲美木单抗、皮地利珠单抗、imp321、mga271、bms-986016、利丽单抗、乌瑞鲁单抗、pf-05082566、iph2101、medi-6469、cp-870,893、莫加珠单抗、万利鲁单抗、阿维单抗、加利昔单抗、amp-514、aunp 12、吲哚莫德、nlg-919、incb024360、kn035及其组合。