专利名称:一种水产养殖益生菌cw9活菌干粉制剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于水产养殖益生菌CW9的活菌干粉制剂，本发明还涉及该干粉制剂的制备方法。
背景技术：
中国专利201010572426. 6，公开号CN 102485884A公开了ー种节杆菌CW9及其用
途，该菌可用于提高海水甲壳类幼体的变态率与存活率。对多种甲壳类动物幼体具有益生作用，其生产和储运方法简单，使用方法简便；该益生菌只在甲壳类动物蚤状一期投放，即可提闻和稳定幼体后期的变态率，从而大幅度提闻苗种广量。
现有技术中益生菌制剂的制备エ艺较多，但都不适合甲壳类水产养殖动物幼体的使用。例如，有内服的益生菌制剂是固态发酵后単独或与饲料混合后干燥、粉碎，这样的产品颗粒太大，对于滤食的甲壳类水产养殖动物幼体，无法取食。或者是多种益生菌制成片剂泼洒到水体中，又或者更多的是用于调节水质。有的则是将发酵液直接包装成水剂，或离心后做成浓缩的水剂。无论哪种水剂，都不便于运输，且保藏周期短，保藏过程死亡率很高并且容易感染杂菌。实验室规模可以用以用冷冻干燥的方法生产菌剂，但冻干菌粉有很多不利，冻干耗时，价格昂贵，冷冻浓缩转化和储藏费用高，解冻过程菌种存货量減少。
水产养殖益生菌CW9已于2010年10月8日交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC NO. 4197。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂及制备方法，可以有效提高活菌干粉制剂的存活率。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂
以体积计的4份发酵液离心后去上清液，沉淀的菌泥加入I份保护剂，重新悬浮，喷雾干燥，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂；
所述的保护剂按照以下质量比配制
明月交O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。
优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制
明胶O. 15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制
明胶O. I份，脱脂奶粉25份，吐温-80 2份，司班-60 2份，水100份。
优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制
明胶O. 2份，脱脂奶粉20份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制
明胶O. I份，脱脂奶粉30份，吐温-80 3份，司班-60 3份，水100份。
4[0018]一种制备上述制剂的制备方法，包括以下步骤
一、制备发酵液；
ニ、制备保护剂，所述的保护剂按照以下质量比配制
明月交O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80ト3份，司班-60ト3份，水100份，保护剂的配制方法为搅拌混合；
三、以体积计的4份发酵液,7000rpm离心8min后去上清液,沉淀的菌泥加入I份
保护剂，重新悬浮；
四、喷雾干燥，入口温度100°C，出口温度65°C，流量为300_400ml/h，收集喷雾干燥后的干粉菌剂；
通过上述步骤，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂。
步骤一中，发酵培养基为葡萄糖8g/L，蛋白胨5g/L，酵母膏3g/L，氯化钠2g/L，pH7. 0,115°C灭菌20min，种子培养基与发酵培养基相同；
扩大培养，用隔夜培养的斜面接种250ml摇瓶，内置IOOml种子培养基，37°C，摇床180转/分钟，培养23小时；
发酵，接种量3%，通气比I O. 8，搅拌转速300转/分钟，37°C，培养18小时。
步骤ニ中，优化的方案为，所述的保护剂按照以下质量比配制
明胶O. 15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
干粉制剂活化时，干粉制剂与活化液质量体积比I : 10g/ml，活化液中糖的质量-体积浓度20-60g/L，活化温度32-42 °C。
优化的方案中，干粉制剂活化时，干粉制剂与活化液质量体积比I : 10g/ml，即I克干粉制剂需要10毫升活化液进行活化，活化液中糖的质量-体积浓度为40g/L，活化温度37。。。
一种用于水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂的保护剂按照以下质量比配制
明月交O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。
本发明提供的ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂及制备方法，喷雾干燥每千克的成本仅为冻干的1/6 ;且喷雾干燥粉末运输成本低；能长期稳定储存，采用优化的保护剂有效地提高了干粉制剂中益生菌CW9的存活率，可以达到56. 5%。且实验结果表明，贮存6个月之后仍然有20%的存活率。
下面结合附图和实施例对本发明作进ー步说明
图I为本发明产品的贮存效果曲线图。
具体实施方式
实施例I : ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，
以体积计的4份发酵液离心后去上清液，沉淀的菌泥加入I份保护剂，重新悬浮，喷雾干燥，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂；
所述的保护剂按照以下质量比配制
明月交O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80ト3份，司班-60ト3份，水100份。[0041]作为对比，试验选用了较多的保护剂进行筛选，选用的保护剂有甘油(4%，6%，8% )、海藻糖(3%，5%，7% )、脱脂奶粉(10%，15%，20%，25%，30% )、吐温-80 (O. 5%,2%, 3. 5%)、蔗糖(5%，10%，15%)、司班-60 (O. 5%, 2%, 3. 5%)、L_谷氨酸钠(1%，2%，3% )、明胶)(以上保护剂都是质量分数)。取400ml发酵液，7000rpm离心8min后去上清液，加入IOOml保护剂水溶液将菌泥重新悬浮，取IOml于无菌试管中，65°C水浴保温30s，测活菌数，计算存活率。
发酵液浓度为5X 109cfu/ml，保温前总菌数2. OX IO12个。以10_7平板计数菌落，计数按5%的误差计算，具体数据见表I。
表I单因素保护剂保温实验
权利要求
1.ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，其特征是 以体积计的4份发酵液离心后去上清液，沉淀的菌泥加入I份保护剂，重新悬浮，喷雾干燥，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂； 所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。
2.根据权利要求
I所述的ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，其特征是优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
3.根据权利要求
I所述的ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，其特征是优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. I份，脱脂奶粉25份，吐温-80 2份，司班-60 2份，水100份。
4.根据权利要求
I所述的ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，其特征是优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 2份，脱脂奶粉20份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
5.根据权利要求
I所述的ー种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，其特征是优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 I份，水100份。
6.ー种制备权利要求
1-5任ー项所述制剂的制备方法，其特征是包括以下步骤 一、制备发酵液； ニ、制备保护剂，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份； 三、以体积计的4份发酵液,7000rpm离心8min后去上清液,沉淀的菌泥加入I份保护剂，重新悬浮； 四、喷雾干燥，入口温度100°C，出ロ温度65°C，流量为300-400ml/h，收集喷雾干燥后的干粉菌剂； 通过上述步骤，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂。
7.根据权利要求
6所述的ー种制备方法，其特征是步骤一中，发酵培养基为葡萄糖8g/L，蛋白胨5g/L，酵母膏3g/L，氯化钠2g/L，pH7. 0,115°C灭菌20min，种子培养基与发酵培养基相同； 扩大培养，用隔夜培养的斜面接种250ml摇瓶，内置IOOml种子培养基，37°C，摇床180转/分钟，培养23小时； 发酵，接种量3%，通气比I : O. 8，搅拌转速300转/分钟，37°C，培养18小时。
8.根据权利要求
6所述的ー种制备方法，其特征是步骤ニ中，优化的方案为，所述的保护剂按照以下质量比配制 明胶O. 15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。
9.根据权利要求
6-8任一项所述的一种制备方法，其特征是干粉制剂活化吋，干粉制剂与活化液质量体积比I : 10g/mL，活化液中糖的质量体积浓度20-60g/L，活化温度32-42。。。
10.一种用于水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂的保护剂其特征是按照以下质量比配制明胶O. 1-0. 2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。
专利摘要
一种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂，以体积计的4份发酵液离心后去上清液，加入1份保护剂，将菌泥重新悬浮，喷雾干燥，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂；所述的保护剂按照以下质量比配制明胶0.1-0.2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。本发明提供的一种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂及制备方法，喷雾干燥每千克的成本仅为冻干的1/6；且喷雾干燥粉末运输成本低；能长期稳定储存，采用优化的保护剂有效地提高了干粉制剂中益生菌CW9的存活率，可以达到56.5％。且实验结果表明，贮存6个月之后仍然有20％的存活率。
文档编号C12N1/04GKCN102911893SQ201210303517
公开日2013年2月6日 申请日期2012年11月13日
发明者朱明 , 夏振强 申请人:淮海工学院导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan