谷胱甘肽冻干粉的制备方法

专利名称:谷胱甘肽冻干粉的制备方法
技术领域：
本 发明属于谷胱甘肽制备技术领域：
，特别涉及用反胶束萃取法制备还原型谷胱甘 肽冻干粉的方法。
技术背景
谷胱甘肽是一种非常重要的活性三肽，有还原型和氧化型两种形态，广泛存在于 动物，植物和微生物中。主要生理功能是抗自由基损伤、解毒、促进细胞蛋白质合成、参与转 甲基或丙氨基反应、维持肝细胞正常功能等。因此，谷胱甘肽广泛应用于医学领域，如治疗 肝病、急慢性肾功能衰竭、心血管疾病、老年性眼病、糖尿病神经损害，肿瘤放射治疗后的肝 保护以及肠道保护等；谷胱甘肽还广泛应用于食品工业，如面制品、奶制品、肉类、水果蔬菜 及饮料保健品中用作抗氧化保鲜剂和风味添加剂。目前，国内谷胱甘肽的年需求量在60吨 以上，几乎全部从国外进口。因此，实现谷胱甘肽的国产化，具有重要战略意义和经济价值。
现有制备还原型谷胱甘肽(GSH)的方法主要有铜盐沉淀法、离子交换法、金属 盐_离子耦合层析法、电渗析法、双水相结合温度诱导分离法。其中用到最多的是离子交换 法，该方法以离子键将GSH交换到树脂上，再用洗脱剂洗脱。如公开号为CN1807447A的“谷 胱甘肽纯化分离方法”专利，公开的是选择含-S-R基团或-S-S-R’基团的分离介质装填成 层析柱，调节PH值为1. 0 10. 0的缓冲溶液平衡层析柱，调节pH值为1. 0 10. 0的谷 胱甘肽抽提液上样，用同样的缓冲液冲洗后，再用碱或酸洗脱，可得到只含谷胱甘肽的洗脱 液，结晶后制得GSH晶体。该方法的主要缺点是①产生大量酸碱性较强的洗脱废液，必须 净化后才能排放，这不但增加了生产成本，还增加了治理废液的工艺设备及场地，从而进一 步增加了生产成本。②该方法的结晶过程往往损失较多产品而导致收率降低。③制备的产 品为晶体，在使用时，需将GSH晶体配制成GSH溶液，因GSH晶体的不完全溶解而导致GSH 晶体利用率降低。又如公开号为CN1850854A的“一种从谷胱甘肽发酵液中提取谷胱甘肽 的方法”专利，公开的是采用谷胱甘肽发酵液离心得到酵母细胞，经调节PH值、沸水破壁方 法，提取细胞中的谷胱甘肽，同时使蛋白质沉淀，再用阳离子交换技术去除小分子和有色物 质，最终从发酵液中浓缩纯化谷胱甘肽，制得分子量为307. 33、蛋白质含量为23%、提取收 率为80. 5的白色粉末状谷胱甘肽成品。该方法的主要缺点是产物中含有较多的蛋白质，产 品质量不高；谷胱甘肽纯度不高；有较多的洗脱废液产生，增加了治理废液的成本。
其次是金属盐_离子耦合层析法，其原理是利用Cu2+、Co2+、Zn2+、Ni2+等过渡金属 离子与蛋白质表面的组氨酸、色氨酸或半胱氨酸配位结合，由于蛋白质表面这些氨基酸的 种类、数量、位置和空间构象不同，因而与金属螯合物的亲和力大小不同，从而可选择性地 加以分离纯化。如《化学与生物工程》2007年11月第24卷第11期的“锌离子螯合亲和层 析分离纯化谷胱甘肽的研究”一文，公开的是利用锌离子与GSH的巯基螯合从而达到分离目 的，以谷胱甘肽的酵母抽提液为原料，用自制的以壳聚糖小球为栽体、Zn2+为配基的金属螯 合亲和层析柱分离纯化谷胱甘肽(GSH)。上柱谷胱甘肽抽提液浓度为132. 30mg/(IOOmL)， 上柱PH值为7. 0，用含0. 5mol/L NH4Cl的pH值为4. 2的0. 02mol/L的磷酸盐缓冲溶液洗 脱，然后经浓缩、冷冻干燥处理，即得到分离纯化的GSH，谷胱甘肽回收率为68. 61%。此法易于操作，但获得的提取物中GSH纯度不高，冻干粉中GSH的含量仅为9. 0%。
发明内容
本发明 的目的是针对现有制备还原型谷胱甘肽(GSH)方法的不足之处，提供一种 谷胱甘肽冻干粉的制备方法。具有工艺简单，操作简便，制备条件温和等优点，在室温条件 下即可进行萃取分离；并且该萃取剂无毒且可以回收再次利用，降低了生产成本。
本发明的原理反胶束萃取技术是上世纪80年代初发展起来的生物物质分离、纯 化技术。具有成本低、溶剂可反复利用、萃取效率高、条件温和不会引起生物活性物质变性， 选择性高，操作简单可以连续生产等优点。目前，反胶束萃取技术在分离氨基酸、蛋白质等 领域逐渐应用。GSH分子上有正电荷氨基，可与负电荷磷酸二辛酯(P2tl4)形成静电相互作 用，因此，能被萃取分离。由于P2tl4的烃链短，直链仅有6个碳原子，以其制备的反胶束直径 明显小于蛋白质等荷电大分子，因此，蛋白质等大分子不能进入P2tl4反胶束，而与GSH分离； GSH的分子量虽仅为307Da左右，但是，由于其特殊的肽键结构，分子面积约为0. 941平方纳 米(nm2)显著大于分子量与GSH相近的氨基酸分子，因此，选择适当的超滤膜可将两者进行 超滤分离。通过萃取、反萃取及超滤分离，可获得高纯度GSH。
本发明的目的是这样实现的一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，以面包干酵母为 原料，先制备含GSH的提取液及P2tl4反胶束溶液，后通过反胶束溶液对GSH提取液进行萃 取，再用氯化钠溶液对萃取后的反胶束溶液进行反萃取，然后经过超滤、冷冻干燥制备出谷 胱甘肽冻干粉成品。具体的方法步骤如下
(I)GSH提取液的制备
以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比 为1 2 3 0.03 0.05的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均勻。再加 入二甲苯，并搅拌混合均勻后，置于摇床上振荡5 8小时。然后再加入与混合液等体积的 蒸馏水，再进行抽滤，弃滤渣，收集滤液。对滤液用稀盐酸调节PH值为1.0 3.0，然后，力口 入氯化钠固体，搅拌混合均勻，制备出氯化钠的摩尔浓度为0. 05 0. 2mol/L的还原型谷胱 甘肽(GSH)提取液。
(2)反胶束溶液的制备
以磷酸二辛酯(P2tl4)为萃取剂，以正辛醇为稀释剂，将P2tl4加入正辛醇中，搅拌均 勻后，配制出P2tl4的摩尔浓度为0. 1 0. 2mol/L的P2tl4溶液。然后按P2tl4溶液的P2tl4 蒸 馏水的摩尔比为1 5 20的比例，在P2tl4溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5 1.5小时，就制 备出P2tl4反胶束溶液。
(3)萃取
在第⑴步和第⑵步完成后，按第⑴步制备出的GSH提取液第⑵步制备 的P2tl4反胶束溶液的体积比为1 2 4的比例，先将GSH提取液和P2tl4反胶束溶液置于萃 取器中，然后进行搅拌萃取10 45min。再用离心机以7000 9000r/min的速度，对其进 行离心分离5 15min后，静置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相。然后再次在收集 的水相中，加入2 4倍体积的第(2)步制备出的P2tl4K胶束溶液，再次进行萃取和离心分 离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复萃取2 4次，最后合并各次收集的 上层萃取有GSH的反胶束溶液。[0015](4)反萃取
第(3)步 完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩 尔浓度为0. 05 0. 2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 2 4的比例，先将萃取有GSH的 反胶束溶液置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均勻。最后用氢氧化钠溶液调节其 PH值为10. 0 12. 0，进行搅拌反萃取35 65min。再用离心机以7000 9000r/min的速 度，对其进行离心分离5 15min，静置分层后，分别收集下层水相和上层反胶束相。然后， 再次在收集的反胶束相中，再次加入2 4倍体积的氯化钠溶液，再次调节pH值，再次进行 反萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复反萃取2 4次。最 后，分别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水相和反萃取后的上层反胶束相。
(5)制备GSH浓缩液
第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子 量为1000的超滤器中，在压力为0. 1 0. 25Mpa下，进行超滤。当超滤截留液体积降低至 原体积0. 1 0. 2时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨 基酸反应为止。再分别收集超滤截留液和超滤滤过液。然后将收集的超滤截留液，置于真 空浓缩器中，在温度为60 70°C、真空度为0. 06 0. OSMpa的条件下，进行真空浓缩，就制 备出GSH浓缩液。对收集的超滤滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩 液，可用作食品、饲料等行业的调味添加剂。
(6)制备GSH冻干粉
在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20 -15°C温度下，预 冻1 2小时后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30 50Pa、温度为-60 _50°C条件下， 冷冻干燥20 30小时，就制备出白色的GSH冻干粉。
(7)再生萃取剂
在第(6)步完成后，在第(4)步最后收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥 齐U，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2 5%。混合均勻后，静置吸水 20 30小时，再用离心机以4000 6000r/min的速度，离心分离10 20min，分别收集上 层萃取剂清液和下层沉淀。对收集的上层萃取剂清液，可再次用于制备反胶束溶液。对收 集的下层沉淀，在100 110°C下进行烘干，可再次用作吸附水分的干燥剂。
本发明采用以上技术方案后，主要有以下特点
1.方法简单，条件温和。本发明方法对面包干酵母提取液进行反胶束萃取，再反萃 取、浓缩、冷冻干燥即得到成品，制备方法简便，所需的劳动量少，且制备条件温和、时间短。 因此，生产成本低且安全性好，便于工业化规模生产。
2.生产成本低。本发明方法所用设备较少，并且通过多次反萃取后的反胶束溶液 可以再生利用，节约了生产原料，反萃取剂为蒸馏水，容易获得且废水处理简单，有效地进 一步降低了生产成本。
3.产品中GSH含量较高，GSH有较高的回收率。采用本发明方法后，获得的冻干粉 中GSH含量达到92. 3 95. 2%,GSH回收率达到86. 3%。所得的产品为冻干粉，便于配制 成使用所需的溶液，损失小且使用方便。
4.生产过程中制备的复合氨基酸浓缩液副产物，可用于食品、饲料等行业调味添 加剂。[0028]采用本发明方法制备出的GSH冻干粉可用作药物原材料、食品工业中的抗氧化保 鲜剂和风味添加剂，还可用作饲料添加剂和面包酵母培养基等。
具体实施方式
下 面结合具体的实施方式，进一步说明本发明。
实施例1
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下
(I)GSH提取液的制备
以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比 为1 2 0.03的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均勻。再加入二甲苯，并 搅拌混合均勻后，置于摇床上振荡5小时。然后再加入与混合液等体积的蒸馏水，再进行抽 滤，弃滤渣，收集滤液。对滤液用稀盐酸调节PH值为1.0，加入氯化钠固体，搅拌混合均勻， 制备出氯化钠的摩尔浓度为0. 05mol/L的还原型谷胱甘肽(GSH)提取液。
(2)反胶束溶液的制备
以磷酸二辛酯(P2tl4)为萃取剂，以正辛醇为稀释剂，将P2tl4加入正辛醇中，搅拌均 勻后，配制出P2tl4的摩尔浓度为0. lmol/L的P2tl4溶液。然后按P2tl4溶液的P2tl4 蒸馏水的 摩尔比为1 5的比例，在P2tl4溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5小时，就制备出P2tl4K胶束溶 液。
(3)萃取
在第⑴步和第⑵步完成后，按第⑴步制备出的GSH提取液第⑵步制备 的P2tl4K胶束溶液的体积比为1 2的比例，先将GSH提取液和P2tl4K胶束溶液置于萃取器 中，进行搅拌萃取lOmin。再用离心机以7000r/min的速度，对其进行离心分离5min后，静 置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相。然后再次在收集的水相中，加入2倍体积的第 (2)步制备出的P2tl4反胶束溶液，再次进行萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层 反胶束相，如此重复萃取2次，最后合并各次收集的上层萃取有GSH的反胶束溶液。
(4)反萃取
第(3)步完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩 尔浓度为0.05mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 2的比例，先将萃取有GSH的反胶束溶液 置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均勻。后用氢氧化钠溶液调节其PH值为10. 0， 进行搅拌反萃取35min。再用离心机以7000r/min的速度，对其进行离心分离5min，静置分 层后，分别收集下层水相和上层反胶束相。然后，再次在收集的反胶束相中，再次加入2倍 体积的氯化钠溶液，再次调节PH值，再次进行反萃取和离心分离，再次分别收集下层水相 和上层反胶束相，如此重复反萃取2次。最后，分别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水 相和反萃取后的上层反胶束相。
(5)制备GSH浓缩液
第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子 量为1000的超滤器中，在压力为0. IMpa下，进行超滤。当超滤截留液体积降低至原体积0. 1 时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨基酸反应为止。再 分别收集超滤截留液和超滤滤过液。然后将收集的超滤截留液，置于真空浓缩器中，在温度为60°C、真空度为0. 06Mpa的条件下，进行真空浓缩，就制备出GSH浓缩液。对收集的超滤 滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩液，可用作食品、饲料等行业的 调味添加剂。
(6)制备GSH冻干粉
在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20°C温度下，预冻1小时 后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30Pa、温度为-60°C条件下，冷冻干燥20小时，就制备出 GSH的含量为92. 3%、回收率为55. 7%的白色冻干粉。
(7)再生萃取剂
在第(6)步完成后，在第(4)步收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥剂，力口 入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2%。混合均勻后，静置吸水20小时，再 用离心机以4000r/min的速度，离心分离lOmin，分别收集上层萃取剂清液和下层沉淀。对 收集的上层萃取剂清液，可再次用于制备反胶束。对收集的下层沉淀，在100°C下进行烘干， 可再次用作吸附水分的干燥剂。
实施例2
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下
(I)GSH提取液的制备
同实施例1，其特征为面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比为 1:3: 0.05，振荡8小时，pH值为3.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.2mol/L的还原型谷 胱甘肽提取液。
(2)反胶束溶液的制备
同实施例1，其特征为配制出P2tl4的摩尔浓度为O. 2mol/L的P2tl4溶液，P2tl4溶液 的P2tl4 蒸馏水的摩尔比为1 20，搅拌1.5小时。
(3)萃取
同实施例1，其特征为第(1)步制备出的GSH提取液第⑵步制备的己。4反胶 束溶液的体积比为1 4，搅拌萃取45min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收 集的水相中加入4倍体积的第(2)步制备的P2tl4反胶束溶液，如此重复萃取4次。
(4)反萃取
同实施例1，其特征为第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的 摩尔浓度为0.2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 4，pH值为12.0，搅拌反萃取65min，用 9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的反胶束相中加入4倍体积的氯化钠溶液， 如此重复萃取4次。
(5)制备GSH浓缩液
同实施例1，其特征为超滤的压力为0. 25Mpa,当超滤截留液体积降低至原体积 0. 2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩的温度为70°C、真空度为0. OSMpa0
(6)制备GSH冻干粉
同实施例1，其特征为；预冻的温度为_15°C、时间为2小时，冷冻干燥的压力为 50Pa、温度为-50°C、时间为30小时，制备出GSH的含量为93. 6%、回收率为63. 2%的白色
冻干粉。
(7)再生萃取剂[0061]同实施例1，其特征为加入 的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的 5%，静置吸水30小时，用速度为6000r/min离心分离20min，对收集的下层沉淀，在110°C 下进行烘干。
实施例3
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下
(I)GSH提取液的制备
同实施例1，其特征为面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积为 1 1.5 0.04，振荡6小时，调节pH值为2.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0. lmol/L的还 原型谷胱甘肽提取液。
(2)反胶束溶液的制备
同实施例1，其特征为配制出P2tl4的摩尔浓度为0. 16mol/L的P2tl4溶液，P2tl4溶液 的P2tl4 蒸馏水的摩尔比为1 10，搅拌1小时。
(3)萃取
同实施例1，其特征为第(1)步制备出的GSH提取液第⑵步制备的己。4反胶 束溶液的体积比为1 3，搅拌萃取30min，用8000r/min的速度离心分离lOmin，再次在收 集的水相中加入3倍体积的P2tl4反胶束溶液，如此重复萃取3次。
(4)反萃取
同实施例1，其特征为第(3)步收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩 尔浓度为0. lmol/L的氯化钠溶液的体积比为1 3，pH值为11.0，搅拌反萃取50min，用 8000r/min的速度离心分离lOmin，再次在收集的反胶束相中加入3倍体积的氯化钠溶液， 如此重复反萃取3次。
(5)制备GSH浓缩液
同实施例1，其特征为超滤的压强为0. 25Mpa,当超滤截留液体积降低至原体积 0. 2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩发热温度为65°C、真空度为0. 07Mpa。
(6)制备GSH冻干粉
同实施例1，其特征为预冻的温度为_18°C、时间为1小时，冷冻干燥的压力为 40Pa、温度为-57°C、时间为24小时，制备出GSH的含量为95. 2%、回收率为86. 3%的白色
冻干粉。
(7)再生萃取剂
同实施例1，其特征为加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的 4%，静置吸水24小时，用速度为5000r/min离心分离15min，对收集的下层沉淀，在105°C 下进行烘干。
权利要求
1. 一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下(1)GSH提取液的制备以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比为 1 2 3 0.03 0.05的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均勻，再加入二 甲苯，并搅拌混合均勻后，置于摇床上振荡5 8小时，然后再加入与混合液等体积的蒸馏 水，再进行抽滤，弃滤渣，收集滤液，对滤液用稀盐酸调节PH值为1. 0 3. 0，然后加入氯化 钠固体，搅拌混合均勻，制备出氯化钠的摩尔浓度为0. 05 0. 2mol/L的还原型谷胱甘肽提 取液；(2)反胶束溶液的制备以磷酸二辛酯为萃取剂，以正辛醇为稀释剂制备反胶束溶液，将P2tl4加入正辛醇中，搅 拌均勻后，配制出P2tl4的摩尔浓度为0. 1 0. 2mol/L的P2tl4溶液，然后按P2tl4溶液的P2tl4 蒸馏水的摩尔比为1 5 20的比例，在P2tl4溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5 1.5小时；(3)萃取在第⑴步和第⑵步完成后，按第⑴步制备出的GSH提取液第⑵步制备WP2tl4 反胶束溶液的体积比为1 2 4的比例，先将GSH提取液和P2tl4K胶束溶液置于萃取器 中，然后进行搅拌萃取10 45min，再用离心机以7000 9000r/min的速度，对其进行离心 分离5 15min后，静置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相，然后再次在收集的水相 中，加入2 4倍体积的第(2)步制备出的P2tl4反胶束溶液，再次进行萃取和离心分离，再 次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复萃取2 4次，最后合并各次收集的上层萃 取有GSH的反胶束溶液；(4)反萃取第(3)步完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩尔浓 度为0. 05 0. 2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 2 4的比例，先将萃取有GSH的反 胶束溶液置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均勻，最后用氢氧化钠溶液调节其PH 值为10. 0 12. 0，进行搅拌反萃取35 65min，再用离心机以7000 9000r/min的速度， 对其进行离心分离5 15min，静置分层后，分别收集下层水相和上层反胶束相，然后，再次 在收集的反胶束相中，再次加入2 4倍体积的氯化钠溶液，再次调节pH值，再次进行反萃 取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复反萃取2 4次，最后，分 别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水相和反萃取后的上层反胶束相；(5)制备GSH浓缩液第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子量为 1000的超滤器中，在压力为0. 1 0. 25Mpa下，进行超滤，当超滤截留液体积降低至原体积 0. 1 0. 2时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨基酸反 应为止，再分别收集超滤截留液和超滤滤过液，然后将收集的超滤截留液，置于真空浓缩器 中，在温度为60 70°C、真空度为0. 06 0. OSMpa的条件下，进行真空浓缩，对收集的超滤 滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩液；(6)制备GSH冻干粉在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20 -15°C温度下，预冻1 2小时后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30 50Pa、温度为-60 _50°C条件下，冷冻干燥20 30小时，就制备出白色的GSH冻干粉； (7)再生萃取剂在第(6)步完成后，在第(4)步最后收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥剂，力口 入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2 5%，混合均勻后，静置吸水20 30小时，再用离心机以4000 6000r/min的速度，离心分离10 20min，分别收集上层萃 取剂清液和下层沉淀，对收集的下层沉淀，在100 Iicrc下进行烘干。
2.按照权利要求
ι所述的谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下第(1)步中，面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比为1 2 0.03，振 荡5小时，PH值为1. 0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0. 05mol/L的还原型谷胱甘肽提取液； 第(2)步中，配制出P2tl4的摩尔浓度为0. lmol/L的P2tl4溶液，P2tl4溶液的P2tl4 蒸馏水 的摩尔比为1 5，搅拌0.5小时；第(3)步中，第(1)步制备出的GSH提取液第(2)步制备WP2tl4反胶束溶液的体积 比为1 2，搅拌萃取lOmin，用7000r/min的速度离心分离5min，再次在收集的水相中加入 2倍体积的第(2)步制备的P2tl4反胶束溶液，如此重复萃取2次；第(4)步中，第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩尔浓度为 0. 05mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 2，pH值为10. 0，搅拌反萃取35min，用7000r/min 的速度离心分离5min，再次在收集的反胶束相中加入2倍体积的氯化钠溶液，如此重复萃 取2次；第(5)步中，超滤的压力为0. IMpa,当超滤截留液体积降低至原体积0. 1时，补充蒸馏 水至原体积，真空浓缩的温度为60°C、真空度为0. 06Mpa ；第(6)步中，预冻的温度为-15 °C、时间为2小时，冷冻干燥的压力为50Pa、温度 为-50°C、时间为30小时，制备出GSH的含量为93. 6%、回收率为63. 2%的白色冻干粉；第(7)步中，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2%，静置吸水20小 时，用速度为4000r/min离心分离lOmin，对收集的下层沉淀，在100°C下进行烘干。
3.按照权利要求
1所述的谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下第(1)步中，面包干酵母的重量蒸馏水的体积二甲苯的体积比为1 3 0.05，振 荡8小时，pH值为3. 0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0. 2mol/L的还原型谷胱甘肽提取液； 第(2)步中，配制出P2tl4的摩尔浓度为0. 2mol/L的P2tl4溶液，P2tl4溶液的P2tl4 蒸馏水 的摩尔比为1 20，搅拌1.5小时；第(3)步中，第(1)步制备出的GSH提取液第(2)步制备WP2tl4反胶束溶液的体积 比为1 4，搅拌萃取45min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的水相中加 入4倍体积的第(2)步制备的P2tl4反胶束溶液，如此重复萃取4次；第(4)步中，第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液氯化钠的摩尔浓度为 0. 2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1 4，pH值为12. 0，搅拌反萃取65min，用9000r/min 的速度离心分离15min，再次在收集的反胶束相中加入4倍体积的氯化钠溶液，如此重复萃 取4次；第(5)步中，超滤的压力为0. 25Mpa,当超滤截留液体积降低至原体积0. 2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩的温度为70°C、真空度为0. OSMpa ；第(6)步中，预冻的温度为_15°C、时间为2小时，冷冻干燥的压力为50Pa、温度 为-50°C、时间为30小时，制备出GSH的含量为93. 6%、回收率为63. 2%的白色冻干粉；第(7)步中，加入的无水硫酸 钠的质量为收集的反胶束溶液体积的5%，静置吸水30小 时，用速度为eOOOr/min离心分离20min，对收集的下层沉淀，在110°C下进行烘干。
专利摘要
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，涉及用反胶束萃取法制备还原型谷胱甘肽(GSH)冻干粉的方法。本发明方法以面包干酵母为原料，先制备含GSH的提取液及P204反胶束溶液，后通过反胶束溶液对GSH提取液进行萃取，再用氯化钠溶液对萃取后的反胶束溶液进行反萃取，然后经过超滤、冷冻干燥制备出成品。本发明方法简单，制备条件温和，反萃取后的反胶束溶液可以再生利用，生产成本低；制备出的冻干粉中，GSH含量高达95.2％、回收率高达86.3％，并能制备出复合氨基酸浓缩液副产物。采用本发明制备出的GSH冻干粉，可广泛用作药物原材料、食品工业中的抗氧化保鲜剂和风味添加剂，还可用作饲料添加剂和面包酵母培养基等。
文档编号C12P21/02GKCN101319244 B发布类型授权 专利申请号CN 200810069962
公开日2011年5月4日 申请日期2008年7月11日
发明者周小华, 王东, 郑申声 申请人:重庆大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (3),