专利名称:源自厚壳贻贝的抗氧化肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物活性肽的制备工艺，更具体的说，涉及一种厚壳贻贝抗氧化肽的制备方法及应用。
背景技术：
厚壳贻贝(Mytilus coruscus),属软体动物门(Mollusca)、瓣觸纲(Lamellibranchia)、异柱目(Anisomyaria)、贻贝科(Mytilidae),富产于浙江省囉泗列岛周围海域，是一种高蛋白、低脂肪、富含多种营养成分的双壳类海洋软体动物。
作为传统的滋补食疗品，贻贝素有“海中鸡蛋”的美誉。现代科学研究表明，贻贝具有极高的营养价值，干贻贝含50% 70%的蛋白质，6% 15%的脂肪，8% 14%糖类，并 富含多种维生素及钙、磷、铁、碘等营养成分。贻贝还有很高的药用价值和食疗功效，据《本草纲目》记载，贻贝肉能治“虚劳伤惫，精血衰少，吐血久痢，肠鸣腰痛”。《大明日华子本草》“煮熟食之，能补五脏，益阳事，理腰脚气，消宿食，除腹中冷气”。现代临床试验表明，长期食用贻贝，对肝肾不足、眩晕盗汗、肾阳虚弱、腰痛、小腹冷痛以及高血压、动脉血管硬化等均有一定疗效。
但由于贻贝常温下不耐贮藏及其生产的季节性，使贻贝的开发利用受到很大限制，目前市场上只有附加值较低的干货、罐头等制品，随着养殖技术日趋完善，贻贝年产量日益增高，贻贝加工与高值化利用逐渐引起人们的注意。以天然食品作为蛋白源生产的抗氧化肽因其高效、低毒、易吸收等优点越来越受到欢迎，贻贝因其高蛋白、来源丰富等特点成为制备抗氧化肽的优良原料。
目前已有研究者成功利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶从牡蛎蛋白中获得了抗氧化肽(专利公开号CN1768765A)，但该技术中未提及产率，使得产业化生产不经济；且酶解过程中使用的酶量较大，加大了生产成本，没有找到一个合适的经济位点；同时由于该方法的原料来源不够广泛、不耐贮运、成本较高等缺点，不利于工业化大规模生产。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种源自厚壳贻贝的抗氧化肽制备方法，该方法条件温和、操作简单、原料来源丰富、价格低廉；所制备的抗氧化肽活性较强。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，依次包括以下步骤
I)、以厚壳贻贝肉脱脂干粉作为原料；在原料中加入水，原料与水的质量比为2 5 100 ；
2)、将步骤I)的所得物先均质8 12min，然后预热至37 60°C，保持恒温，调节pH至7. O 9. 0，最后加入蛋白酶启动酶解反应；蛋白酶与原料中所含蛋白的重量比为I. 5 2. 5%，酶解反应时间为2 4h ;
3)、酶解反应结束后调整pH至6. 9 7. I ;灭酶、离心后通过超滤富集活性肽，最后经浓缩和冷冻干燥，得抗氧化肽。
作为本发明的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法的改进步骤I)中的厚壳贻贝肉脱脂干粉的制备方法为将厚壳贻贝肉干粉在40°c下，按Ikg 4L的料液比加入质量浓度95%的乙醇脱脂4h ;重复脱脂三次(即重复实施上述脱脂步骤共3次)，接着于40°C真空干燥、粉碎至能过100目筛。
作为本发明的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法的进一步改进步骤2)中的蛋白酶为Alcalase2. 4L碱性蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶或胰蛋白酶。
在本发明中，所用的蛋白酶均为市购产品；例如
Alcalase2. 4L碱性蛋白酶(酶活力为9· 4X 104U/g)可购自诺维信酶制剂公司；
复合蛋白酶(酶活力为4.9X104U/g)可购自诺维信酶制剂公司；
中性蛋白酶(酶活力为2.7X104U/g)可购自诺维信酶制剂公司；
胰蛋白酶((酶活力为5.6X104U/g)可购自诺维信酶制剂公司。
作为本发明的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法的进一步改进步骤2)为先水浴加热至37 60°C，保持恒温，再调节pH至7. O 9. 0，最后加入蛋白酶启动酶解反应，酶解过程连续搅拌，并保持恒温和PH恒定。
作为本发明的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法的进一步改进步骤3)为酶解反应结束后调整酶解反应液的pH至7. 0，然后于95°C水浴灭酶10 15min，冷却至室温后，离心，取上清液进行超滤。
作为本发明的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法的进一步改进步骤3)的离心为8500r/min离心15 20min ;上清液先采用O. 45 μ m的中空纤维膜进行微滤，然后再进行超滤。超滤所用超滤膜的截留分子量为5KD 10KD，超滤压力为O. I O. 2Mpa，工作温度10 25°C;收集透过液进行真空浓缩和冷冻干燥，得抗氧化肽。即将微滤后的酶解液在O. I O. 2Mpa的工作压力和10 25°C的工作温度下，通过超滤膜(截留分子量为5KD 10KD)进行超滤，除去大分子蛋白质及多糖等，收集透过液，真空浓缩，冷冻干燥，得抗氧化肽。
本发明还同时提供了利用上述任意一种方法制备而得的抗氧化肽的用途作为活性功能性成分。
本发明的抗氧化肽的分子量分布如图I和表I所示；
表I厚壳贻贝抗氧化肽分子量分布结果分析
权利要求
1.一种源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，其特征是依次包括以下步骤 1)、以厚壳贻贝肉脱脂干粉作为原料；在原料中加入水，所述原料与水的质量比为2 5 100 ； 所述厚壳贻贝肉脱脂干粉的制备方法为将厚壳贻贝肉干粉在40°C下，按Ikg 4L的料液比加入质量浓度95%的乙醇脱脂4h ;重复脱脂三次，接着于40°C真空干燥、粉碎至能过100目筛； 2)、将步骤I)的所得物先均质8 12min，然后预热至37 60°C，保持恒温，调节pH至7. O 9. 0，最后加入蛋白酶启动酶解反应；所述蛋白酶与原料中所含蛋白的重量比为I. 5 2. 5%，酶解反应时间为2 4h ; 所述蛋白酶为Alcalase2. 4L碱性蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶或胰蛋白酶； 3)、酶解反应结束后调整pH至6.9 7. I ;灭酶、离心后通过超滤富集活性肽，最后经浓缩和冷冻干燥，得抗氧化肽。
2.根据权利要求
I所述的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，其特征是所述步骤2)中的酶解反应于搅拌状态下进行、并保持恒温和pH恒定。
3.根据权利要求
2所述的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，其特征是所述步骤3)为酶解反应结束后调整酶解反应液的pH至7. 0，然后于95°C水浴灭酶10 15min，冷却至室温后，离心，取上清液进行超滤。
4.根据权利要求
3所述的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，其特征是所述步骤3)的离心为8500r/min离心15 20min ;上清液先采用O. 45 μ m的中空纤维膜进行微滤，然后再进行超滤。
5.根据权利要求
4所述的源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，其特征是所述超滤所用超滤膜的截留分子量为5KD 10KD，超滤压力为O. I O. 2Mpa，工作温度10 250C ;收集透过液进行真空浓缩和冷冻干燥，得抗氧化肽。
专利摘要
本发明公开了一种源自厚壳贻贝蛋白的抗氧化肽的制备方法，依次包括以下步骤1)、以厚壳贻贝肉脱脂干粉作为原料，在原料中加入水；2)、将步骤1)的所得物先均质，然后预热并调节pH至7.0～9.0，最后加入蛋白酶启动酶解反应；3)、酶解反应结束后调整pH至6.9～7.1；灭酶、离心后通过超滤富集活性肽，最后经浓缩和冷冻干燥，得抗氧化肽。本发明还同时公开了利用上述方法制备而得的抗氧化肽的用途作为活性功能性成分。采用本发明方法制备而得的抗氧化肽活性较强。
文档编号A23K1/16GKCN101906456 B发布类型授权 专利申请号CN 201010234963
公开日2013年1月23日 申请日期2010年7月22日
发明者戴志远, 张婷, 王宏海, 张燕平, 张艳萍 申请人:浙江工商大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (2), 非专利引用 (4),