合成多糖、其制备方法以及含有它们的药物组合物的制作方法

专利名称：合成多糖、其制备方法以及含有它们的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有肝素的抗凝和抗血栓形成药理学活性的新的合成多糖。
肝素属于糖胺聚糖(GAG)家族，它们是天然不均一硫酸酯化的多糖。
肝素制剂是含有10-100个以上单糖单元的链的混合物。除了大小上的不同外，还存在着结构上的不同，这表现在单糖的性质和它们所携带的取代基上(L.Roden糖蛋白和糖胺聚糖的生物化学(Biochemistry ofGlycoproteins and Glycosaminoglycans),Lennarz W.J.编，PlenumPress,New York and London,267-371,1980)。
天然GAG的每个家族通常有一类药理学活性。所有均可组合于可从天然产物得到的制剂中。因此，例如肝素和硫酸乙酰肝素具有抗血栓形成活性，所述活性与对多种凝固因子的同时作用有关。肝素可以催化，具体地讲是通过抗凝血酶Ⅲ(AT Ⅲ)催化与血液凝固级联反应有关的两种酶即Ⅹa因子和Ⅱa因子(或凝血酶)的抑制作用。低分子量肝素(LMWH)制剂含由4-30个单糖形成的链并且对Ⅹa因子作用的选择性强于对凝血酶。
某些合成的寡糖，特别是在EP84999中描述的那些，经抗凝血酶Ⅲ对Ⅹa因子有选择性抑制，而对凝血酶没有任何活性。
已知Ⅹa因子的抑制作用需要经抗凝血酶结合区(ABR)使肝素与ATⅢ结合，而Ⅱa因子(凝血酶)的抑制作用需要经ABR与AT(Ⅲ)结合，以及经不太确定的结合区(TBR)与凝血酶结合。
对应于肝素ABR区的合成寡糖是已知的，并在静脉血栓形成中有抗血栓形成活性。在EP529715和EP621282和加拿大专利2040905中描述了这些化合物。
然而，这些寡糖在抑制动脉血栓形成时的效力因其不能抑制凝血酶而受到影响。
能够经AT(Ⅲ)激活剂抑制凝血酶的肝素型糖胺多糖的合成存在很大的困难，并且确实从未成功过。
为了再现凝血酶和Ⅹa因子抑制剂产物的活性，已提出通过不干扰生物活性的结构(“间隔基”)连接两个小寡糖(ABR和TBR)。
现已发现可相对简单地合成新多糖衍生物，而且所述衍生物有生物活性。具体地讲，它们是抗凝血剂和抗血栓形成药。此外，为了用合成方法生产这些多糖，可选择性地修饰它们的结构，具体地讲，除去不想要的与特定蛋白质相互作用的硫酸酯取代基。因此，可以得到作为强抗血栓形成药和抗凝血剂的多糖，所述多糖还可逃避体内蛋白质如血小板因子4(PF4)的作用，所述血小板因子4可中和肝素对凝血酶的影响。
因此，已令人惊奇地发现，根据糖骨架所携带的烷基和硫酸酯基团的排列情况，硫酸酯化和烷基化多糖可以是强抗血栓形成剂和抗凝血剂。
更广义地讲，已发现通过制备多糖序列，可以准确地修饰GAG型活性以得到具有肝素特性的高活性产物。
因此，根据本发明的一个方面，本发明涉及含抗凝血酶Ⅲ-结合区的新的合成多糖及其盐，特别是其可药用盐，所述结合区由共携带两个羧酸功能基团和至少4个硫酸基团的5个单糖的序列组成，该结合区在其非还原末端连接一个凝血酶-结合区，所述凝血酶-结合区含有由选自己糖、戊糖或脱氧糖的10-25个单糖组成的序列，在所述单糖中，所有羟基均各自独立地被(C1-C6)烷基醚化或以硫酸酯基团的形式被酯化。
优选，本发明涉及上述定义的多糖和其盐，特别是，其可药用盐，其特征在于其所有羟基均被甲基醚化或以硫酸酯基团的形式被酯化。
具体地讲，本发明的产物是由下式代表的多糖
-其中波浪状的线表示在吡喃糖环平面之下或之上的键，
表示含n个相同或不同单糖单元的多糖Po，所述多糖Po经其异头碳与Pe相连，
是选自己糖、戊糖和相应脱氧糖的吡喃糖结构单糖单元的图示，所述单糖单元经其异头碳与另一单糖单元相连，并且所述单糖单元的羟基被相同或不同的基因-X取代，基团X选自(C1-C6)烷基和磺基，-n是10-25的整数，-Pe代表一个五糖结构
其中-R1代表(C1-C6)烷基或磺基，-R1a代表R1，或与其所连接的氧原子以及同一环上带有羧基的碳原子一起形成如下基团C-CH2-O-R代表(C1-C6)烷基，-W代表氧原子或亚甲基，或其一种盐，特别是可药用盐。
总体上讲，在本说明书中应注意波浪状的线代表吡喃糖环平面之下或之上的键。
Po中所含的单糖可以彼此相同或彼此不同，糖苷间的键可以是α或β型。
这些单糖优选选自D或L己糖如阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖galose、艾杜糖、半乳糖和太罗糖(在这种情况下h=2)或选自D或L戊糖如核糖、阿拉伯糖、木糖和来苏糖(在这种情况下h=2)。也可以使用其他单糖例如脱氧糖(h=1和/或-CH2OX=CH3)。
在五糖Pe的情况下，当单元W表示氧原子并且R1a如R1所定义时，这些五糖构成了具体在专利EP300099、EP529715、EP621282和EP649854以及文献中所描述的已知化合物。从文献C.van Boeckel和M.Petitou,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1993,32,1671-1690中描述的合成子可得到所述化合物。
在五糖Pe的情况下，R1a与R1不同和/或W代表碳原子时，用构成本发明另一方面的新合成子制备这些五糖。
在五糖Pe的情况下，当L-艾杜糖醛酸型单元被一个其构象被桥锁定的单元取代时，用构成本发明另一方面的新合成子制备这些五糖。
因此，根据本发明的另一方面，本发明涉及用于制备式(Ⅰ)化合物的新中间体。
多糖部分Po可由10-25个烷基化和二-或三硫酸酯化的单糖单元组成。
多糖部分Po可由10-25个烷基化和单-或二硫酸酯化的单糖单元组成。
多糖部分Po可由10-25个不带电荷的和/或带部分电荷的和/或全部带电荷的烷基化单糖单元组成。
带电荷或不带电荷的单元可分散在整个链中，相反，也可将其集中在带电荷或不带电荷的糖区中。
键可以是1,2；1,3；1,4；1,5；1,6；和α或β键。
在本说明书中，已选用构象1C4代表L-艾杜糖醛酸，用4C4代表D-葡萄糖醛酸，但众所周知，单糖单元的构象在溶液中一般会发生改变。因此，L-艾杜糖醛酸可以是1C42So或4C1构象。
本发明优选的化合物是式(Ⅰ.A.)的化合物和其盐，特别是其可药用盐
其中
表示多糖Po的具体家族，所述多糖Po经其异头碳与(Ⅰ)所定义的Pe相连，
如(Ⅰ)所定义，-OX如(Ⅰ)所定义，对于相同的单糖，OX可以相同或不同，-[]m中所含的单糖形成重复m次的二糖，[]t中所含的单糖形成重复t次的二糖，-m是1-8,t是0-5,p是0-1，应理解5≤m+t≤12。
优选的化合物是其阴离子对应于式(Ⅰ.1)的盐以及相应的酸
其中t代表5、6或7，阳离子是可药用单价阳离子。其阴离子对应于式(Ⅰ.2)的盐以及相应的酸也是有利的，
其中t代表5、6或7，阳离子是可药用单价阳离子。
其阴离子具有式(Ⅰ.3)的盐以及相应的酸是特别优选的
其中m代表1、2或3,t代表2、3、4或5，阳离子是可药用单价阳离子。
根据本发明其他优选的化合物是式(Ⅱ.A)的化合物可其可药用盐
其中
代表多糖Po的具体家族，所述多糖经其异头碳与(Ⅰ)所定义的Pe相连，
如(Ⅰ)所定义，-OX如(Ⅰ)所定的，对于相同的单糖，OX可以相同或不同，-[]m’中所含的单糖形成重复m’次的二糖，[]t’中所含的单糖形成重复t’次的二糖，[]p’中所含的单糖形成重复p’次的二糖，-m’是1-5,t’是0-24,p’是0-24，应理解10≤m’+t’≤25。
本发明优选的盐是其阳离子选自碱金属阳离子的盐，更优选的是其中阳离子是Na+或K+的盐。
下列多糖是特别优选的·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]5-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]6-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]11-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]13-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]15-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]5-O-2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1 4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐。
本发明还涉及制备式(Ⅰ)化合物的方法，其中，在第一步中，合成所需多糖(Ⅰ)的完全保护的前体，所述前体含有Pe区(该区如反应路线1所示)的保护的前体，所述Pe区在其非还原末端连接着一个硫酸酯化的多糖Po的保护前体，在第二步中，引入和/或解蔽带有负电荷的基团。反应路线1-当W=O或C时五糖Pe的结构；字母DEFGH用来表示所涉及的单糖
在第一种方法中，可以使用五糖的四糖部分EFGH的完全保护的前体。然后加入在其还原末端含有Pe所缺单元D的多糖Po，以便在偶联后得到整个ABR。
在另一种方法中，可以使用五糖的二糖部分GH的完全保护的前体。然后加入在其还原末端含有Pe所缺单元DEF的TBR多糖Po前体，以便在偶联后得到整个ABR。
这些Pe前体按照以上的描述从文献中记载的或构成本发明一部分的合成子合成。
Po的多糖前体部分根据本领域技术人员熟知的反应，用合成寡糖的方法(G.J.Boons，四面体，1996,52,1095-1121)进行合成，或当将一个供给糖苷键的寡糖与一个接受糖苷键的寡糖偶联以生成其大小等于两个反应物质大小总合的另一个寡糖时，用寡糖来合成。
重复该反应顺序直至得到所需的式(Ⅰ)化合物。根据本领域技术人员熟知的规则，所需最终化合物上电荷的性质和分布确定了在合成各步骤中所用化学物质的性质。
制备本发明Po前体的优选方法如下反应路线2所示反应路线2-TBR保护的前体的合成
术语“临时性的”是指仅在有限的步骤中保留的取代基，术语“半永久性的”是指在大部分步骤中保留的取代基，术语“永久性的”是指一直保留到合成结束的取代基；永久性取代基在最后的步骤中脱除。某些永久性取代基可以构成最终分子的一部分。
在反应路线2中，(a)表示供给糖苷键的单糖，其中Z是羟基功能基的临时保护基，Y是异头碳活化子，各Tn可以相同或不同，是其它所有羟基功能基的临时性、半永久性或永久性取代基。含有未取代的羟基的化合物(b)表示接受糖苷键的单糖，其中，各Tn可以相同或不同，是羟基的临时性、半永久性或永久性取代基。T1是异头位置的临时性、半永久性或永久性保护基。当需要激活异头碳时将其除去。
为了合成本发明的化合物，将糖苷键供体(a)与糖苷键接受体(b)反应生成二糖(c)。
通过脱除T1并引入Y将以上得到的二糖(c)特异性地转变成糖苷键供体(d)和/或通过脱除Z将其转变成糖苷键接受体(e)。
然后，将糖苷键供体(d)与糖苷键接受体(e)反应生成其中t表示1的四糖(f)。
重复该反应顺序生成其中t大于1的寡糖或多糖(f)。
还可以使用反应路线2中所示的方法制得大量完全保护的寡糖或多糖如(g)，其中寡糖[]m和[]t是本发明化合物不同带电区域的完全保护的前体。
在该方法随后的步骤中，将化合物如(f)和(g)转变成糖苷键供体并与Pe完全保护的前体的非还原末端单元偶联。
如上所述，当(g)是与完全保护的寡糖(该寡糖是Pe结构残基的前体)的非还原末端单元偶联时，糖苷键供体多糖(g)的非还原末端单元的寡糖可以构成Pe的一部分。
本发明的化合物可从它们的完全保护的多糖前体开始用如下顺序的反应获得-通过除去在骨架形成期间用于保护它们的Tn基团将需转化为磺基的醇功能基和羧酸脱保护，然后-随后引入磺基。
本发明的化合物自然可使用寡糖合成领域的技术人员熟知的各种策略制备出来。
上述方法是本发明的优选方法。但式(Ⅰ)化合物也可采用糖化学的其它已知方法制备，例如在P.M.Collins和R.J.Ferrier的“单糖及其化学和它们在天然产物中的作用”(Monosaccharides,Their chemistry andtheir roles in natural products),J.Wiley&sons,1995和G.J.Boons，四面体(Tetrahedron),1996,52,1095-1121。
当W表示氧原子并且R1a是R1时，五糖Pe部分的前体按照寡糖合成方法制备，尤其是按照专利EP84999、EP301618、EP454220和EP529715以及专利申请EP93204769和EP94202470中所述的方法制备。当采取完全保护时，可使用适宜的保护基在非还原末端单元(D)的4位获得游离羟基。然后采用已知的寡糖合成方法将Pe的完全保护的前体在该位偶合。
其中W表示碳原子并且R1a是R1的五糖Pe
其中R是R1的五糖Pe如式(Ⅰ)所定义，它可由下式的合成子获得
其中T1和Tn可以相同或不同，表示临时性的、半永久性或永久性的取代基，Z是羟基保护基，它自身可按照上述的C.Van Boeckel和M.Petitou的标准方法，通过产游离基单糖和含双键的单糖间的游离基反应，然后将所得的C-二糖转化为合成子(Ⅱ.1)的合成方法获得。
式(Ⅱ.1)的合成子，它尤其可用于合成式(Ⅱ)化合物，其结构式为
(Ⅱ.1)或化合物90该合成子按照下面的路线图22描述的反应路线制备。
其中取代基R1a构成锁定构型的L-艾杜糖醛酸单元一部分的下式的五糖Pe
其中R和R1如式(Ⅰ)所定义，W表示氧原子，可由下式的合成子获得
其中T1和Tn可以相同或不同，表示临时性的、半永久性或永久性的取代基，Z是羟基保护基，它自身可按照M.K.Guriar等在文献四面体通讯(Tetrahedron letters),1995,36,11,1937-1940,1933-1936和1994,35,14,2241-2244中描述的方法合成获得。
式(Ⅲ.1)的合成子，它尤其可用于合成式(Ⅲ)化合物，其结构式为
该合成子按照下面的路线图34描述的反应路线制备。
中间体(Ⅱ.1)和(Ⅲ.1)是新中间体，它们尤其可用于制备本发明的式(Ⅰ)化合物。
五糖Pe可由二糖合成子(Ⅱ.1)或(Ⅲ.1)以上述C.A.A.Van Boeckel和M.Petitou的Angew.Chem.Int.Ed.Engl.出版物中描述的方法获得。
上面采用的术语半永久性基团应指糖基化反应后当糖骨架含有所需数量的单元时，可首先除去的基团，而不除去或不会不利地影响其它基团的存在，由此可将所希望的功能基引入到它们占有的位置上。
永久性基团是在引入代替半永久性基团的功能基期间能够维持OH功能基保护作用的基团。
这些基团选自那些能够与在半永久性基团除去之后所引入的功能基相容的基团。另外它们是对于引入这些功能基的反应而言是惰性的基团并且它们的除去不会对这些功能基产生不利影响。
依据本发明，永久性基团优选是(C1-C6)烷基。
半永久和/或临时性基团的实例可列举苄基和乙酰基、乙酰丙酰基、对甲氧基苄基等。
目的化合物的艾杜糖醛酸单元的3位取代基及取代基R1可存在于起始的合成子中。
在制备化合物(Ⅰ)的方法中使用的保护基是那些在糖化学中常用的，例如TW Greene的“有机合成中的保护基”(Protective Groups inOrganic Synthesis)中的实例(John Wiley&sons,New York,1981)。
保护基最好选自，例如乙酰基、卤代甲基、苯甲酰基、乙酰丙酰基、苄基、取代的苄基、任意取代的三苯甲基、四氢吡喃基、烯丙基、戊烯基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tBDMS)或三甲基甲硅烷基乙基等。
活化基团是那些糖化学中常用的，例如G.J.Boons，四面体(Tetrahedron),1996,52,1095-1121中的实例。这些活化基团选自例如亚氨酸酯、硫糖苷、戊烯基糖苷、黄原酸酯、亚磷酸酯和卤原子。
上述方法可获得盐形式的本发明化合物。为获得相应的酸，将盐形式的本发明化合物与酸形式的阳离子交换树脂接触。
为获得所需的盐，然后可将酸形式的本发明化合物用碱中和。
为制备式(Ⅰ)化合物的盐，可使用与式(Ⅰ)化合物形成可药用盐的任何无机或有机碱。
优选使用氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或氢氧化镁作为碱。式(Ⅰ)化合物的钠或钙盐是优选的盐。
在该方法的步骤(a)中，使用的保护基是糖化学领域的技术人员常用的那些，例如按照EP84999或TW Greene的“有机合成中的保护基”(Protective Groups in Organic Synthesis),J.Wiley&sons,1995中所述的那些。
这样获得的式(Ⅰ)化合物可任意地被成盐。
上面的式(Ⅰ)化合物也包括其中一个或多个氢或碳原子被它们的放射性同位素，如氚或碳-14替代的那些化合物。这样标记的化合物可用于药代动力学、代谢或研究工作中，以及在生物化学试验中作为配体。
本发明的化合物构成了生化和药理研究的主题，这显示了它们具有十分有益的性质。
本发明的化合物与AT Ⅲ选择性结合的亲和力等于或大于肝素，并具有肝素的抗凝和抗血栓形成特性。
按照J.Reyers等在“血栓形成研究”(Thrombosis Research),1980,18,669-674中描述的方法，在组织促凝血酶原激酶诱发的静脉郁血的大鼠模型中，以及在按照Umetsu等在Thromb.Harmost.,1978,39,74-83中所述的通过在颈动脉和颈静脉之间植入分路形成的大鼠动脉血栓形成模型中，通过静脉内和皮下途径给药评价了式(Ⅰ)产物总的抗血栓形成活性。在这两个实验模型中，本发明化合物的ED50与其它已知的合成肝素类化合物至少在相同的水平上或较它们的ED50要低(ED50介于5-500μg/kg)。本发明的化合物具有特定的作用，它们的抗凝和抗血栓形成活性特别有益。
基于它们的生化和药理活性，本发明的化合物是特别有用的药物。它们的毒性与它们的用途完全相容。它们还十分稳定并且作为药物特定产品的活性成分尤其适合。
此外，本发明的化合物不会被大剂量的阳离子血小板蛋白，如血栓形成过程中在这些蛋白激活期间释放的血小板因子4(PF4)所中和。本发明的化合物对治疗和预防动脉和静脉血栓形成尤其有益。
它们可用于各种由凝血系统的止血状况改变所引起的疾病，尤其是在心血管和脑血管系统障碍中表现出来的病症，例如与动脉粥样硬化和与糖尿病有关的血栓栓塞，如非稳定性心绞痛、中风、血管成形术、动脉内膜切除术和血管内修复术后的再狭窄；或者与血栓溶解后的血栓再形成、梗塞、缺血性痴呆、外周动脉疾病、血液透析和心房纤维性颤动有关的血栓栓塞，或在应用主动脉冠脉搭桥术的人造血管期间的血栓栓塞。这些产物另外可用于治疗或预防静脉血栓栓塞，例如肺栓塞。它们可用于预防或治疗在外科介入术期间出现的或与其他疾病，如癌症和细菌或病毒感染同时出现的血栓形成并发症。当它们在假体安装期间使用时，本发明的化合物可涂覆假体，从而使它们具有血液相容性。特别是可将它们与假体(移植片固定膜)相结合。在这种情况下，可任意按照EP649854所述，在还原或非还原末端引入一适宜的臂对它们进行化学修饰。
本发明的化合物在用带小孔的气球进行的动脉内膜切除术期间还可用作助剂。
本发明的化合物特别稳定，因此特别适于作为作为药物的活性成分。
在另一方面，本发明的主题是一种含有如上定义的合成多糖作为活性成分的药物组合物。
本发明优选涉及含有式(Ⅰ)、(Ⅰ.1)、(Ⅰ.2)或(Ⅰ.3)化合物或者其一种可药用盐作为活性成分并任意地含有一种或多种惰性的适宜赋形剂的药物组合物。
在每剂量单位中，活性成分以适于预想的每日剂量的量存在。通常，按照计划给药的剂量和类型来调整每剂量单位，例如片剂、明胶胶囊等，扁囊剂、安瓿、糖浆等，滴剂和透皮或透粘膜贴剂，使这样的一个剂量单位含有0.1-100mg，优选含有0.5-50mg的活性成分。
本发明的化合物还可与其他对所需的治疗有用的活性成分联合使用，例如抗血栓形成剂、抗凝剂或抗血小板凝集剂，如双嘧达莫、阿司匹林、噻氯匹定、氯吡格雷或糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物的拮抗剂。
将药物组合物进行配制以对包括人的哺乳动物给药，以治疗上述疾病。
如此获得的药物组合物可有益地呈现各种形式，如可注射或可饮用的溶液、片剂、包衣片或明胶胶囊。可注射溶液是优选的药物形式。本发明的药物组合物尤其可用于预防或治疗血管壁疾病，例如动脉粥样硬化、在术后、肿瘤形成或血凝失调后观察到的凝固性过高，它们是由细菌性、病毒性或酶激活剂引发的。剂量可随患者的年龄、体重和健康状况，所医治疾患的性质和严重程度以及给药途径有很大变化。剂量为每次给药约0.1-100mg，优选0.5-50mg，每日一次或多次，以连续或间隔方式给药。
本发明还有一主题是含有上述一种化合物作为活性成分并任意地与另一种活性成分结合的药物组合物。制备这些组合物以便于经消化道或非胃肠途径给药。
在本发明的口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、透皮、透粘膜、局部或直肠给药的药物组合物中，活性成分可与标准药物赋形剂混合以单位给药形式给药于动物和人。适宜的给药单位形式包括如片剂、明胶胶囊、粉剂、颗粒的口服形式和口服混悬液和溶液，舌下和颊给药形式，皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内给药形式以及直肠给药形式。
当制备片剂形式的固体组合物时，将主要活性成分与药物赋形剂，如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石或阿拉伯胶等混合。片剂可用蔗糖或其他适宜的材料包衣，或者可经处理使它们具有缓慢或延迟释放活性成分的功能以及使它们连续地释放预定量的活性成分。
明胶胶囊制剂可通过将活性成分与稀释剂混合，然后倾入软或硬明胶胶囊中获得。
可在水中分散的粉末或颗粒可含有与分散剂、润湿剂或助悬剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)以及甜味剂或增味剂混合的活性成分。
直肠给药利用的栓剂可用在直肠温度下熔融的粘合剂，例如可可脂或聚乙二醇制备。
对于非胃肠、鼻内或眼内给药，利用的是无菌的可注射溶液、等渗的盐溶液或水悬浮液，它们含有药理学上相容的分散剂和/或润湿剂，例如丙二醇或丁二醇。
对于透粘膜给药，活性成分可在促进剂如胆汁盐的存在下或在亲水性聚合物的存在下进行配制，所述亲水性聚合物是例如羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、果胶、淀粉、明胶、酪蛋白，丙烯酸、丙烯酸酯和它们的共聚物，乙烯基聚合物或共聚物，乙烯醇，烷氧基聚合物，聚环氧乙烷聚合物和聚醚类，或者它们的混合物。
活性成分也可任意地与一种或多种赋形剂或添加剂一起配制为微囊形式。
活性成分还可与环糊精，例如α-、β-或γ-环糊精，2-羟丙基-β-环糊精或甲基-β-环糊精形成配合物形式。
活性成分也可通过含有活性成分的小球或者通过引入到血管中的血管内扩张器释放。这样不会对活性成分的药理作用产生不利影响。
皮下给药是优选的途径。
下面的方法、制备例和反应路线说明了用于获得本发明多糖的各种中间体的合成。
下面的实施例也是说明而非限制本发明。
采用下面的缩略语TBDMS叔丁基二甲基甲硅烷基；Lev乙酰丙酰基；Bn苄基；Bz苯甲酰基；TLC薄层层析；Olm三氯亚氨代乙酰基(trichloroacetimidyl)；LSIMS液态次级离子质谱；ESIMS电子喷雾离子化质谱；TMS三甲基甲硅烷基；TSP三甲基甲硅烷基四氘代丙酸钠；Tf三氟甲磺酸；MS分子筛；All烯丙基；PMB对甲氧基苄基；SE三甲基甲硅烷基乙基。
Dowex,Sephadex,Chelex和Toyopearl为注册商标。在下述的方法、制备例和实施例中，有关催化亚氨酸酯偶联、乙酰丙酸酯裂解、催化硫糖苷偶联、皂化、甲基化和对甲氧基苄基的选择性脱保护、寡糖和多糖经苄基醚或酯的氢解进行的脱保护和硫酸化、酯的皂化或硫酸化的通用操作均可利用适宜的中间体按下述通用方法进行。
通用方法方法1．经三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯催化与亚氨酸酯的偶联。
在氩气氛和-20℃下，在4埃分子筛的存在下往亚氨酸酯和糖基受体的二氯甲烷溶液(17.5ml/mol)中加入三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯的二氯甲烷溶液(1M,0.2mol/mol亚氨酸酯)。10-20分钟后(TLC)，加入固体碳酸氢钠。将溶液过滤，用水洗涤，干燥并蒸发至干。方法2．乙酰丙酰基的裂解。
将待脱保护的化合物溶于2/1乙醇/甲苯混合液(42ml/mmol)中并加入乙酸肼(5mol/mol)。将混合物搅拌15-30分钟(TLC)后浓缩。方法3．经N-碘代琥珀酰亚胺/三氟甲磺酸银催化与硫糖苷的偶联。
在无光化性玻璃制造的园底烧瓶中，在有4埃分子筛存在下，将硫糖苷和糖基受体溶于无水甲苯中(18ml/mol硫糖苷)。将该混合物在室温搅拌1小时。使其冷却到0℃并加入N-碘代琥珀酰亚胺(3mol/mol硫糖苷)，然后加入三氟甲磺酸银(0.28mol/mol硫糖苷)。10-15分钟后(TLC)，加入固体碳酸氢钠。过滤后，溶液用1M硫代硫酸钠水溶液和水洗涤，干燥并蒸发。方法4.皂化、甲基化和对甲氧基苄基的选择性脱保护。
酯的皂化。将需皂化的化合物溶于1/1二氯甲烷/甲醇混合液中(4ml/mmol)。加入甲醇钠并将该混合物搅拌20分钟，然后用Dowex50H+树脂中和。将溶液浓缩，该化合物无需纯化即可用于下步反应。
甲基化。于0℃往上述粗产物和碘甲烷在N,N-二甲基甲酰胺(7ml/mmol)中的混合物中少量多次加入氢化钠。待反应完成后，将混合物倾入水中，用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，干燥并蒸发至干。
对甲氧基苄基的裂解。将上述化合物溶于9/1乙腈/水混合液(20ml/mmol)。于0℃，加入硝酸铈铵(0.5mol/mol)。将该反应混合物搅拌2小时(TLC监测)，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取，干燥并蒸发。方法5．寡糖和多糖的脱保护和硫酸化。
苄基醚和苄基酯的氢解。将化合物的冰醋酸溶液在氢气氛下(40巴)、在5％Pd/C催化剂(两倍于化合物的质量)的存在下搅拌6-12小时(TLC)。过滤后，产物可直接用于下步。
酯的皂化。将5M氢氧化钠水溶液(加入量以添加结束时氢氧化钠的浓度为0.5M为准)加到酯的甲醇溶液中(150ml/mmol)。2-5小时后，加入水，使混合物通过SephadexG-25凝胶柱(1.6×115cm)，用水洗脱。浓缩洗脱液，使它们通过Dowex50H+柱(2ml)并冻干。在该阶段，经1HNMR证实，所有的保护基均被脱去。如果需要，可将产物进一步氢化和/或皂化。
硫酸化。将三乙基胺/三氧化硫配合物(5mol/mol羟基功能基)加到需硫酸化的化合物的二甲基甲酰胺溶液(5mg/ml)中。于55℃一天后，将该溶液加载到SephadexG-25柱(1.6×115cm)的顶端，用0.2M氯化钠洗脱。将含产物的馏分浓缩并经同样的柱用水洗脱脱盐。冻干后获得终产物。
反应路线3单糖6和9的合成
制备例12,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(2)。
将1,2,4,6-四-O-乙酰基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖1(69g,O.19mmol),(B.Helferich等，J.prakt.Chem.,132,321(1932))溶于甲苯(580ml)。加入乙硫醇(28ml,0.38mmol)，然后滴加三氟硼烷乙醚化物的溶液(1M甲苯溶液，190ml)。将该混合物搅拌1.5小时(TLC)，加入固体碳酸氢钠，过滤，用水洗涤，干燥并浓缩。经硅胶柱层析(3/1环己烷/乙酸乙酯)得到2(37g,54％)。[α]D-26(c=1，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3),δ5.05-4.96(m,2H,H-2,H-4),4.39,(d,1H,J=9.5Hz,H-1),4.18-4.12(m,2H,H-6,H-6′),3.60(m,1H,H-5),3.50(dd,1H,J=9.3 Hz,H-3),3.41 (s,3H,OCH3),2.65-2.53(m,2H,SCH2CH3),2.12,2.11,2.09(3s,9H,3 Ac),1.25(t,1H,SCH2CH3)。制备例24,6-O-亚苄基-3-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(3)。
将化合物2(37g,0.1mmol)溶于1/2甲醇/二氯甲烷混合液(1.5L)中。加入2M甲醇钠溶液(150ml)。室温0.5小时后，该混合物用Dowex50(H+)树脂中和，过滤并浓缩。
将上面的粗品化合物溶于无水乙腈(1L)并加入α,α-二甲氧基甲苯(30ml,0.2mol)和樟脑磺酸(2.3g,10mmol)。将该混合物搅拌1.5小时(TLC)，加入三乙胺(1.4ml)，浓缩。所得残余物在乙醚中沉淀，得到3(27g,81％)。[α]D-60(c=1.63，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.51-7.34(m,5H,Ph),5.55(s,1H,C6H5CH),4.56(d,1H,J=9.2Hz,H-1),2.75(m,2H,SCH2CH3),1.32(t,3H,SCH2CH3)。
C16H22O5S(326.41)的元素分析计算值C,58.58；H,6.79；S,9.82。实测值C,58.99；H,6.74；S,9.75。制备例32-O-苄基-4,6-O-亚苄基-3-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(4)。
于0℃，将氢化钠(2.00g,83.3mmol)加到3(23g,71.0mmol)和苄基溴(11ml,93.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(200ml)溶液中。将该混合物搅拌2小时(TLC)，加入甲醇，将反应混合物倾入水中。用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，干燥并浓缩。将残余物在乙醚中沉淀，获得4(18.8g,63％)。熔点123℃。[α]D-35(c=0.63，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.50-7.25(m,10H,2Ph),5.55(s,1H,C5H5CH),4.54(d,1H,J=9.7Hz,H-1),4.34(m,1H,H-6),3.75(t,1H,J=10.2Hz,H-6′),3.65(s,3H,OCH3),3.60-3.33(m,4H,H-5,H-4,H-3,H-2),2.75(m,2H,SCH2CH3),1.32(t,3H,SCH2CH3)。
C23H28O5S(416.54)的元素分析计算值C,66.32；H,6.78；S,7.70。实测值C,66.25；H,7.28；S,7.54。制备例42,6-二-O-苄基-3-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(5)在氩气氛下，将三氟乙酸酐(0.65ml,4.50mmol)的三氟乙酸(16ml,0.21mmol)溶液加到4(28.8g,69.0mmol)和三乙基甲硅烷(33ml,0.21mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液中。将该混合物搅拌2小时，用乙酸乙酯稀释，加入1M氢氧化钠水溶液调至pH9。该混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，干燥并蒸发至干。残余物经硅胶层析纯化(3/1，然后2/1环己烷/乙酸乙酯)，得到5(17.4g,60％)。[α]D-47(c=1，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.45-7.25(m,10H,2Ph),4.47(d,1H,J=9.3Hz,H-1),3.66(s,3H,OCH3),3.61-3.40(m,2H,H-4 and H-5),3.36-3.19(m,2H,H-2and H-3),2.73(m,2H,SCH2CH3),1.31(t,3H,SCH2CH3)。
C23H30O5S(418.55)的元素分析计算值C,66.00；H,7.22；S,7.66。实测值C,65.62；H,7.28；S,7.21。制备例52,6-二-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(6)将化合物5(17.3g,41.4mmol)溶于无水二氧六环(400ml)中。加入乙酰丙酸(9.60g,83.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(16g,86mmol)和4-二甲氨基吡啶(1g,8.3mmol)。将该混合物搅拌4小时，用乙酸乙酯萃取，依次用5％硫酸氢钾水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(6/1甲苯/乙酸乙酯)，得到6(19.9g,93％)。[α]D-5(c=1.46，二氯甲烷)。LSIMS，正模式m/z硫甘油+NaCl,539(M+Na)+；硫甘油+KF,555(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.40-7.20(m,10H,2Ph),4.92(m,1H,H-4),2.8-2.4(m,6H,SCH2CH3和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16(s,3H,O(CvO)CH2CH2(C:O)CH3),1.32(t,1H,J=7.3Hz,SCH2CH3)。
C28H36O7S(516.65)的元素分析计算值C,65.09；H,7.02；S,6.21。实测值:C,65.30；H,7.03；S,5.75。制备例64,6-O-亚苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(7)将三氟甲磺酸(1.10ml,0.012mol)加到市售的3-O-甲基葡糖(135g,0.7mol)的烯丙醇(1L)悬浮液中。将该混合物于120℃加热2小时。加入三乙胺(2ml)中和并蒸发至干。
将α,α-二甲氧基甲苯(136ml,0.9mol)和樟脑磺酸(25g,0.13mmol)加到溶于N,N-二甲基甲酰胺(2L)的上述粗品化合物中。该混合物在真空下于80℃加热1小时。加入三乙胺(21ml)中和，用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，干燥并浓缩，得到固体的α/β混合物=3/2,(144g,57％)。该混合物用乙醇重结晶，得到纯的7-α(60g,26％)。部分母液经硅胶柱层析(3/1环己烷/乙酸乙酯)，得到纯的7-β(7.6g),7-α/β(6.8g)和纯的7-α(1.4g)。
化合物7-β:[α]D-43(c=1，二氯甲烷)。熔点131℃。
1H NMR(CDCl3)δ7.50-7.26(m,5H,Ph),6.01-5.90(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.55(s,1H,C6H5CH),5.38-5.32(m,2H,OCH2(CH:CH2)),4.47(d,1H,J=7.5Hz,H-1),4.42-4.32(m,2H,H-6′and OCH2(CH:CH2)),4.21→4.15(m,1H,OCH2(CH:CH2)),3.80(dd,1H,J=10.2 Hz,H-6),3.67(s,3H,OCH3)。
C17H22O6(322.36)的元素分析计算值C,63.34；H,6.88。实测值C,63.23；H,7.12。制备例72-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(8)将7(11.5g,35.7mmol)溶于二氯甲烷(100ml)并加入乙酸酐(4.0ml,42.8mmol)、三乙胺(6.40mg,46.4mmol)和4-二甲氨基吡啶(440mg,3.60mmol)。该混合物搅拌2小时后(TLC)，依次用5％硫酸氢钾水溶液、水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，干燥并蒸发至得到固体8(12.3g,95％)。熔点115℃。[α]D-68(c=1，二氯甲烷)。LSIMS，正模式m/z硫甘油+NaCl,387(M+Na)+；硫甘油+KF,403(M+K)+。1HNMR(CDCl3)δ7.51-7.34(m,5H,Ph),5.98-5.78(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.56(s,1H,C6H5C6H5CH),5.32-5.17(m,2H,OCH2(CH:CH2)),4.99(dd,J=8Hz,1H,H-2),4.55(d,J=7.9Hz,1H,H-1),4.39-4.29(m,2H,H-6 andOCH2(CH:CH2)),4.14-4.04(m,1H,OCH2(CH:CH2))3.82(t,J=10.2Hz,1H,H-6′),3.60(s,3H,OCH3),2.12(s,3H,Ac)。
C19H24O7(366.39)的元素分析计算值C,62.63；H,6.64。实测值C,62.63；H,6.64。制备例82-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(9)于0℃将三氟乙酸酐(306μl,2.10mmol)的三氟乙酸(10ml)溶液加到8(12.0g,33.3mmol)和三乙基甲硅烷(21.3ml,133mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中。将该混合物搅拌4小时(TLC)，用乙酸乙酯稀释并加入1M氢氧化钠水溶液调至pH9。该混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(8/5环己烷/丙酮)，得到纯的9(10g,82％)。[α]D-40(c=1.06，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.28(m,5H,Ph),5.87-5.79(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.28-5.14(m,2H,OCH2(CH:CH2)),4.43(d,1H,J=7.9Hz,H-1),4.41-4.28(m,1H,OCH2(CH:CH2)),4.10-4.02(m,1H,OCH2(CH:CH2),3.77-3.75(m,2H,H-6和H-6′),3.51(s,3H,OCH3),3.30(dd,1H,J=8.9Hz,H-3),2.8(d,1H,OH)。
C19H26O7(366.39)的元素分析计算值C,62.28；H,7.15。实测值C,61.73；H,7.19。
反应路线4二糖13和14的合成
制备例92-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-4-O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(10)将硫代糖苷6(17.4g,33.7mmol)和糖基受体9(10.3g,28.1mmol)溶于二氯甲烷(150ml)。加入4埃分子筛并将该混合物搅拌1小时。于-20℃和氩气氛下，加入N-碘代琥珀酰亚胺(8.30g,33.7mmol)和三氟甲磺酸(0.30ml,3.30mmol)在二氯乙烷和乙醚的混合液(415ml,1∶1)中的溶液。将该混合物搅拌10分钟(TLC)，加入碳酸氢钠并过滤，依次用1M硫代硫酸钠水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(11/1二氯甲烷/乙酸乙酯)得到纯净的二糖10-α(11.7g,52％)。[α]D+38(c=1.01，二氯甲烷)。1HNMR(CDCl3)δ7.35-7.23(m,15H,3Ph),5.90-5.80(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.47(d,1H,J=3.6Hz,H-1′),5.27-5.14(m,2H,OCH2(CH∶CH2)),5.05-4.90(m,2H,H-4′和H-2),4.42(d,1H,J=7.6Hz,H-1),4,38-4,32(m,1H,OCH2(CH:CH2)),4.15-4.0(m,1H,OCH2(CH:CH2)),3.90(dd,1H,J=8.8Hz,H-4),3.54,3.34(2s,6H,2OCH3),2.75-2.40(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16,2.10(2s,6H,Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C45H56O14(820.94)的元素分析计算值C,65.84；H,6.88。实测值C,65.74；H,6.90。制备例102-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-4-O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-β-D-吡喃葡糖丙-1’-烯基苷(11)将1,5-环辛二烯双[甲基二苯基膦]六氟磷酸铱(5.80mg,0.70μmol)加到10(1.36g,1.66mmol)在不合过氧化物的四氢呋喃(4.30ml)的溶液中。将该溶液脱气，放置在氩气氛下，引入氢气。该混合物搅拌10分钟(TLC)并蒸发。将残余物回收到二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(3/1甲苯/乙酸乙酯)，得到纯净的11(1.04g,76％)。[α]D+47(c=1.1，二氯甲烷)。LSIMS，正模式m/z硫甘油+NaCl,951(M+Na)+；硫甘油+KF,967(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.23(m,15H,3Ph),6.21-6.16(m,1H,O(CH:CH)CH3),5.45(d,1H,J=3.5Hz,H-1′),5.13-4.97(m,3H,H-4′,H-2和O(CH:CH)CH3),4.6(d,1H,J=7.55Hz,H-1),3.96(dd,1H,J=8.9Hz,H-4,),3.54,3.34(2s,6H,2OCH3),2.74-2.36(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.15,2.08(2s,6H,Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)1.56-1.51(dd,3H,O(CH:CH)CH3)。
C45H56O14(820.94)的元素分析计算值C,65.84；H,6.88。实测值C,66.21；H,6.92。制备例112-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-4-O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-α,β-D-吡喃葡糖(12)将氯化汞(3.9g,14.3mmol)在丙酮和水的混合液(26ml,5/1)中的溶液滴加到11(7.8g,9.53mmol)和氧化汞在相同溶剂(80ml)中的溶液中。将该混合物搅拌1小时，过滤并浓缩。用二氯甲烷萃取，萃取液用饱和碘化钾水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(10/1，然后4/1二氯甲烷/丙酮)，得到12(6.70g,90％)。[α]D+92(c=1.37，二氯甲烷)。TLC,RF0.31,14/1二氯甲烷/丙酮。1H NMR(CDCl3)δ7.37-7.24(m,15H,3Ph),5.46(d,1H,J=3.5Hz,H-1′),5.37(d,J=3.6Hz,H-1α),4.58(d,J=8Hz,H-1β),3.54,3.39,3.36(3s,6H,2OCH3),2.75-2.4(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16, 2.15(2s,6H,Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16,2.15(2s,6H,Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C42H52O14(780.83)的元素分析计算值C,64.60；H,6.71。实测值C,65.09；H,6.82。制备例122-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-4-O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(13)将化合物12(5.00g,6.4mmol)溶于二氯甲烷(50ml)并在氩气氛下加入三氯乙腈(3.9ml,38.8mmol)和碳酸钾(1.6g,11.6mmol)。将该混合物搅拌16小时(TLC)并过滤。滤液经硅胶柱纯化(8/1，然后4/1二氯甲烷/丙酮)，得到亚氨酸酯混合物(α/β=60/40)13(5.22,87％)。TLC,RF0.66和0.51,20/1二氯甲烷/丙酮。1HNMR(CDCl3)δ8.62-8.59(2s,1H,N:H-αandβ),7.37-7.23(m,15H,3Ph),6.51(d,J=3.7Hz,H-1α),5.81(d,J=7.1Hz,H-1β),5.50(d,1H,J=3.5Hz,H-1′),3.55,3.41,3.37(3s,9H,3OCH3),2.75-2.40(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16,2.07,2.04(3s,6H,Ac和(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C44H52Cl3NO14(925.26)的元素分析计算值C,57.12；H,5.66；N,1.51。实测值C,57.31；H,5.87；N,1.55。制备例132-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-4-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(14)按照方法2处理化合物10(3.11g,3.80mmol)，得到14(2.70g,97％)。[α]D+25(c=1.7，二氯甲烷)。LSIMS，正模式m/z硫甘油+NaCl,745(M+Na)+；硫甘油+KF,761(M+K)+。1H NMR(CDCl3)d7.33-7.20(m,15H,3Ph),5.87-5.78(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.50(d,1H,J=3.5Hz,H-1′),5.30-5.17(m,2H,OCH2(CH:CH2)),5.02(dd,1H,H-2),4.43(d,1H,J=7.6Hz,H-1),4.34-4.28(m,1H,OCH2(CH:CH2)),4.12-4.02(m,1H,OCH2(CH:CH2)),3.63,3.36(2s,6H,2OCH3),2.10(s,3H,Ac)。
C40H50O12(722.84)的元素分析计算值C,66.47；H,6.97。实测值C,66.31；H,7.24。
反应路线5寡糖19的合成
制备例14O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(15)按照方法1处理亚氨酸酯13(4.22g,4.56mmol)和糖基受体14(2.63g,3.64mmol)的混合物。产物经硅胶柱纯化(3/2，然后1/1甲苯/乙醚)，得到四糖15(4.31g,80％)。[α]D+52(c=0.66，二氯甲烷)。1HNMR(CDCl3)δ7.35-7.23(m,30H,6Ph),5.83-5.79(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.47(d,2H,J=3.5Hz,H-1and H-1′),5.25-5.14(m,2H,OCH2(CH:CH2)),4.38(d,1H,J=7.7Hz,H-1″),4.30(d,1H,J=8Hz,H-1),4.32-4.25(m,1H,OCH2(CH:CH2)),4.08-4.02(m,1H OCH2(CH:CH2)),3.56,3.53,3.34,3.27(4s,12H,4OCH3),2.78-2.40(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.15,2.09,1.85(3s,9H,2 Ac and O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C82H100O25(1485.7)的元素分析计算值C,66.29；H,6.78。实测值C,66.10；H,6.79。制备例15O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖(16)按照制备例10处理化合物15(2.30g,1.54mmol)。10分钟后，将N-溴代琥珀酰亚胺(0.30g,1.70mmol)在二氯甲烷(15ml)和水(5.50ml)中的溶液加到该反应混合物中。将混合物搅拌5分钟(TLC)。用二氯甲烷稀释，用饱和硫酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(3/2甲苯/乙酸乙酯)，得到纯净的16(1.57g，两步收率71％)。[α]D+69(c=0.87，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.20(m,30H,6 Ph),5.47(d,1H,J=3.5Hz,H-1和H-1′),5.36(d,1H,J=3.5Hz,H-1α),4.55(d,1H,J=8Hz,H-1),4.36(d,1H,J=8Hz,H-1″),3.56,3.54,3.39,3.36,3.28(5s,9H,3OCH2),2.75-2.35(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16,2.13,2.12,1.86(4s,9H,2Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。制备例16O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(17)将16(1.5g,1.04mmol)、三氯乙腈(0.63ml,6.22mmol)和碳酸钾(0.26g,1.87mmol)在二氯甲烷(15ml)中的混合物在室温搅拌16小时。将溶液过滤并浓缩。经硅胶柱纯化(4/1甲苯/丙酮+1‰三乙胺)，得到17(1.47g,89.6％),TLC,RF0.5,7/2甲苯/丙酮。制备例17O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(18)按照方法2对15(1.3g,0.87mmol)进行脱乙酰丙酰化，得到18(1.05g,86％)。[α]D+40(c=0.6，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)δ7.36-7.23(m,30H,6Ph),5.83-5.78(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.50(d,1H,J=3.5Hz,H-1),5.47(d,1H,J=3.5Hz,H-1′),5.25-5.21(dd,1H,J=1.6Hz,J=17Hz,OCH2(CH:CH2)),5.16-5.13(dd,1H,J=1.4Hz,J=10Hz,OCH2(CH:CH2)),4.38(d,1H,J=6.5Hz,H-1″),4.31(d,1H,J=6.5Hz,H-1),4.08-4.02(m,1H,OCH2(CH:CH2)),3.59(m,1H,H-4),3.67,3.53,3.39,3.29(4s,12H,4OCH3),2.09,1.86(2s,6H,2Ac)。制备例18O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖烯丙苷(19)按照方法1处理18(842mg,0.53mmol)和17(1.17g,0.74mmol)的混合物。产物经ToyopearlHW-50柱(110×3.2cm,1/1二氯甲烷/乙醇)纯化，得到19(1.44g,85％)。[α]D+57(c=1.01，二氯甲烷)。1H NMR(CDCl3)d 7.35-7.20(m,60H,12Ph),5.83-5.78(m,1H,OCH2(CH:CH2)),5.24-5.21(dd,1H,OCH2(CH:CH2)),5.16-5.13(dd,1H,OCH2(CH:CH2)),3.59,3.56,3.51,3.47,3.33,3.26(6s,24H,8OCH3),2.75-2.35(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.15,2.09,1.85,1.84(4s,15H,4Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)；主要异头质子的δ5,48；4.37；4.29；4.23ppm。
C156O47H188(2815.51)的元素分析计算值C,66.56；H,6.73。实测值C,66.22；H,6.75。
反应路线6多糖29的合成
制备例19O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖(20)按照制备例15处理化合物19(720mg,0.25mmol)。产物经硅胶柱纯化(3/2,然后4/3甲苯/乙酸乙酯)，得到20(555mg,78％)。[α]D+70(c=0.94，二氯甲烷)。TLC,RF0.43,1/1甲苯/乙酸乙酯。制备例20O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(21)如制备例16处理化合物20(540mg,0.195mmol)。产物经硅胶柱纯化(3/2甲苯/乙酸乙酯+1‰三乙胺)，得到亚氨酸酯混合物(α/β=27/73)21(455mg,80％)。TLC,RF0.48,3/2甲苯/乙酸乙酯。1H NMR(CDCl3)δ8.60,8.59(2s,1H,N:Hα和β),7.35-7.21(m,60H,12Ph),2.75-2.40(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C∶O)CH3),2.16,2.06,2.04,1.85,1.84(5s,15H,4 Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
主要异头质子的1H NMR(CDCl3)δ:6.50；5.79；5.51；5.48；4.29；4.25ppm。
反应路线7寡糖28的合成
制备例212,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-1-硫代-α-D-吡喃葡糖苯苷(22)1,2,46-四-O-乙酰基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖1(5.23g,14.4mmol)溶于甲苯(45ml)。加入苯硫酚(3.0ml,28.8mmol)，然后滴加三氟硼烷乙醚化物(1.77ml,14.4mmol)，再将混合物于50℃加热0.5小时。用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(5/2环己烷/乙酸乙酯)，得到22-α(1.00g,17％)和22-β(2.71g,46％)。1HNMR22-α,RF0.44,3/2环己烷/乙酸乙酯。[α]D+230(c=1，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,435(M+Na)+；+KF,451(M+K)+1H NMR(CDCl3)δ7.46-7.27(m,5H,Ph),5.89(d,1H,J=5.6Hz,H-1),5.05-4.97(m,2H,H-2和H-4),4.49-4.42(m,1H,H-5),4.25-4.18(m,1H,H-6),4.05-4.00(m,1H,H-6′),3.66,(dd,1H,J=9.5Hz,H-3),3.51(s,3H,OCH3),2.16,2.12,2.00(3s,9H,3Ac)。
C19H24O8S(412.46)的元素分析计算值C,55.33；H,5.87；S,7.77。实测值C,55.25；H,5.90；S,7.75。制备例224,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-α-D-吡喃葡糖苯苷(23)将化合物22(970mg,2.35mmol)溶于2/1甲醇/二氯甲烷(18ml)中。加入2M甲醇钠溶液(150ml)。于室温0.5小时后，该混合物用Dowex50(H+)树脂中和，过滤并浓缩。
将α,α-二甲氧基甲苯(0.7ml,4.0mmol)和樟脑磺酸(51mg,0.22mmol)加到上述粗反应混合物在乙腈(22ml)中的混合液中。将该混合物搅拌1小时，加入三乙胺(0.50ml)中和并浓缩。
于0℃将氢化钠(73.0mg,2.80mmol)加到上述粗产物和碘甲烷(163μl,4.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(9ml)中的溶液中。将该混合物搅拌1小时并加入甲醇。该混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，干燥并浓缩，获得固体形式的23(840mg,94％)。熔点178℃。[α]D+330(c=1,二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,411.4(M+Na)+；+KF,427.4(M+K)+.1H NMR(CDCl3)δ7.50-7.24(m,10H,2Ph),5.71(d,1H,J=3.4Hz,H-1),5.52(s,1H,C6H5CH),3.62(s,3H,OCH3),3.55(s,3H,OCH3)。
C21H24O5S(388.48)的元素分析计算值C,64.92；H,6.23；S,8.25。实测值C,64.87；H,6.17；S,7.85。制备例236-O-苄基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-α-D-吡喃葡糖苯苷(24)按照制备例4处理化合物23(792mg,0.47mmol)。产物经硅胶柱纯化(7/2，然后2/1环己烷/乙酸乙酯)，得到24(318mg,80％)。[α]D+243(c=1，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,413(M+Na)+；+KF,429(M+K)+.1H NMR(CDCl3)δ7.52-7.22(m,10H,2Ph),5.71(d,1H,J=5.3Hz,H-1),3.64和3.49(2s,6H,2OCH3),3.36(dd,1H,H-3)。
C21H26O5S(390.50)的元素分析计算值C,64.59；H,6.71；S,8.21。实测值C,64.05；H,6.88；S,7.74。制备例24O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-α-D-吡喃葡糖苯苷(25)按照方法1处理化合物13(436mg,0.47mmol)和24(153mg,0.39mmol)。产物经凝胶柱纯化(SephadexLH20,1/1乙醇/二氯甲烷)，得到纯净的25(309mg,68％)。[α]D+144(c=1，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,1175(M+Na)+；+KF,1191(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.51-7.21(m,25H,5 Ph),5.73(d,1H,J=5.2Hz,H-1),5.48(d,1H,J=3.5Hz,H-1″),4.4 6(d,1H,J=8Hz,H-1′),3.7,3.54,3.5,3.31(4s,12H,4OCH3),2.70-2.41(m,4,H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.16,2.01(2s,6H,1Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C63H76O18S的元素分析计算值C,65.61；H,6.64；S,2.78。实测值C,65.02；H,6.60；S,2.72。制备例25O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(27)于-25℃和氩气氛下，在4埃分子筛(400mg)的存在下，将N-碘代琥珀酰亚胺(92mg,0.38mmol)和三氟甲磺酸(37.5μl,0.38mmol)在1/11,2-二氯乙烷/乙醚(22ml)中的溶液加到25(451mg,0.39mmol)和26(434mg,0.31mmol)(P.Westerduin等，生物有机药物化学(BioOrg.Med.Chem.,1994,2,1267))在1,2-二氯乙烷(7.5ml)中的溶液中。30分钟后，加入固体碳酸氢钠。过滤溶液，用硫代硫酸钠溶液和水洗涤，干燥并蒸发。残余物经SephadexLH-20柱纯化(1/1二氯甲烷/乙醇)，然后经硅胶柱纯化(1/1，然后2/3环己烷/乙酸乙酯)，得到纯净的27(487mg,64％)。[α]D+63(c=0.54，二氯甲烷)。TLC,RF0.28,2/1环己烷/乙酸乙酯。ESIMS,正模式m/z+NaCl,2454(M+Na)+；+KF,2469(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.2(m,50H,10Ph),3.56,3.52,3.48,3.46,3.44,3.42,3.39,3.30,3.17(9s,27H,9OCH3),2.75-2.4(m,4H,O(C:O)CH2CH2C:O)CH3),2.15,1.98,1.97,1.87,(4s,12H,3Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)；主要异头质子5.57；5.47；5.30；5.18；4.57；4.29；4.08。制备例26O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(28)按照方法2，对27(498mg,0.2mmol)进行脱乙酰丙酰化，得到28(402mg,84％)。[α]D+64(c=1，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z2352.9(M+NH4)+.1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.20(m,50H,10Ph),3.67,3.52,3.49,3.46,3.44,3.41,3.40,3.28,3.17(9s,27H,9Ac),2.65(d,1H,J=2.14Hz,OH),1.98,1.96,1.87(3s,9H,3Ac)；主要异头质子5.55；5.4 9；5.30；5.18；4.56；4.31；4.08。
C127H152O41(2334.48)的元素分析计算值C,65.34；H,6.56。实测值C,65.40；H,6.62。制备例27O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(29)按照方法1处理21(340mg,1.16mmol)和28(256mg,1.09mmol)的混合物。残余物经ToyopearlHW-40柱纯化(3.2×70cm,1/1二氯甲烷/乙醇)，得到含15个单体的纯29(421mg,76％)。[α]D+65(c=1，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+KF,2584.3(M+2K)2+；1736.5(M+3K)3+。1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.18(m,105H,21Ph),2.75-2.4(m,4H,O(C∶O)CH2CH2(C:O)CH3),2.15,1.97,1.95,1.87,1.84,1.83(6s,24H,7Ac,和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)；主要异头质子5.55；5.48；5.30；5.18；4.56；4.29；4.22；4.08。
反应路线8多糖91的合成(实施例1)
制备例28O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(30)按照方法2处理化合物29(342mg,0.067mmol)，得到30(253mg,75％)。[α]D+59(c=0.92，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+KF,2535.6(M+2K)2+。主要异头质子的1H NMR(CDCl3)δ:5.55；5.50；5.48；5.30；4.56；4.30；4.22；4.08。
C275H328O85(4993.37)的元素分析计算值C,65.57；H,6.60。实测值C,65.09；H6.57。制备例29O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]6-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(31)按照方法1处理17(32.7mg,20.6mmol)和30(80.7mg,16.3mmol)的混合物。产物经ToyopearlHW-40柱纯化(1/1二氯甲烷/乙醇)，得到含19个单体的31(60mg,59％)。[α]D+61(c=0.82，二氯甲烷)。ESIMS,正模式m/z+NaCl,2162.4(M+3Na)3+；+KF,2178.5(M+3K)3+。
主要异头质子的1H NMR(CDCl3)δ:5.55；5.48；5.30；5.17；4.56；4.22；4.08。
反应路线9二糖37的合成
制备例30O-(4,6-二-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-6-O-三苯甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(33)在氩气氛下，往32(50.0g,0.105mol)(J.Westman和M.Nilsson,糖化学杂志(J.Carbohydr.Chem.),1995,14(7),949-960)的二氯甲烷(620ml)悬浮液中加入三乙胺(35ml,0.252mol)、三苯甲基氯(29.3g,0.105mol)和4-二甲氨基吡啶(1.28g,10mmol)。使该混合物保持回流2小时(TLC)，冷却到室温，用二氯甲烷稀释(500ml)，然后依次用冷却的10％硫酸氢钾水溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤。将该溶液干燥，浓缩并滤过一硅胶柱(65/35，然后50/50甲苯/丙酮)，获得粗产物33，该产物的纯度足以用于下步反应。对分析样品进行层析。[α]D+53(c=0.74，二氯甲烷)。ESIMS，负模式m/z715(M-H)-。1H NMR(CD2Cl2)δ7.52-7.25(m,20H,4Ph),5.42(s,C6H5CH),4.97(d,J=3.5Hz,H-1′),4.40(d,J=9.6Hz,H-1),3.82(t,J=9.3Hz,H-3′),3.70,3.68(m,2H,H-3,H-4),3.60(dd,J≈2.0,11.0Hz,H-6a),3.55(td,J=5.2,9.7,9.7Hz,H-5′),3.49-3.45(m,3H,H-2,H-2′,H-5),3.38(dd,J=10.5Hz,H-6′a),3.33(dd,H-6′b),3.30-3.27(m,2H,H-4′,H-6b),2.90-2.77(m,2H,SCH2CH3),1.40-1.37(t,3H,CH2CH3)。
C40H44O10S的元素分析计算值C,67.02；H,6.19；S,4.47。实测值C,66.38；H,6.19；S,4.19。制备例31O-(4,6-二-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3-二-O-甲基-6-O-三苯甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(34)在氩气氛下，将碘甲烷(34ml,0.536mol)滴加到化合物33(64.1g)的N,N-二甲基甲酰胺(600ml)溶液中。将该溶液冷却到0℃，缓慢地加入氢化钠(13.5g,0.536mol)。将该悬浮液在室温搅拌2小时，然后冷却至0℃并滴加甲醇(35ml)，之后搅拌2小时，用乙酸乙酯(500ml)和水(600ml)稀释。水相用乙酸乙酯萃取，有机相用水洗涤，干燥并浓缩。残余物34的纯度足以用于下步。分析样品经硅胶柱纯化(70/30环己烷/丙酮)。[α]D+45(c=0.83，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,795(M+Na)+；+KF,811(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.52-7.19(m,20H,4Ph),5.51(d,J=3.3Hz,H-1′),5.43(s,C6H5CH),4.45(d,J=9.8Hz,H-1),3.60,3.59,3.51,3.49(4s,12H,4OCH3),2.86(q,2H,J=7.5Hz,SCH2CH3),1.40(t,3H,SCH2CH3)。
C44H52O10S的元素分析计算值C,68.37；H,6.78；S,4.15。实测值C,68.28；H,6.98；S,4.09。制备例32O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-2,3-二-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(35)将粗产物34(67.4g)的悬浮液在60％乙酸水溶液(470ml)中于80℃加热2小时。将该反应混合物冷却，过滤并浓缩。残余物用甲醇钠(940mg)的甲醇(200ml)溶液处理1小时。然后该溶液用Dowex50WX4(H+)树脂中和，之后过滤，浓缩并经硅胶柱纯化(60/40甲苯/丙酮)，获得35(27.9g，三步收率60％)。[α]D+26(c=1.07，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,465(M+Na)+；+KF,481(M+K)+。1HNMR(CDCl3)δ5.62(d,J=3.9Hz,H-1′),4.35(d,J=9.8Hz,H-1),3.64,3.64,3.59,3.58(4s,12H,4OCH3),1.29(t,3H,J=7.4Hz,SCH2CH3)。
C18H34O10S.H2O的元素分析计算值C,46.94；H,7.87；S,6.96。实测值C,47.19；H,7.72；S,6.70。制备例33O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(36)将三醇35(5.86g,13.2mmol)和N-乙酰基咪唑(3.21g,29.1mmol)在1,2-二氯乙烷(120ml)中的溶液回流16小时。再加入另一部分N-乙酰基咪唑(440mg,3.96mmol)并将该混合物搅拌4小时。使其冷却到室温，然后加入甲醇(2ml)。将该混合物再搅拌1小时，然用二氯甲烷(1L)稀释，依次用冷的1M盐酸溶液、冷水、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经层析(3.5/1甲苯/丙酮)得到二乙酸酯36(3.97g,57％)。[α]D+33(c=1.90，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,549(M+Na)+；+KF,565(M+K)+。1HNMR(CDCl3)δ5.51(d,J=3.9Hz,H-1′),4.34(d,J=9.8Hz,H-1),3.64,3.63,3.59,3.56(4s,12H,4OCH3),2.11,2.06(2s,6H,2Ac),1.31(t,3H,J=7.4Hz,SCH2CH3)。
C22H38O12的元素分析计算值C,50.17；H,7.27；S,6.09。实测值C,50.15；H,7.49；S,5.89。制备例34O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(37)在氩气氛下，往二乙酸酯36(19.4g,36.8mmol)的二氧六环溶液中加入乙酰丙酸(7.53ml,73.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(14.1g,73.5mmol)和4-二甲氨基吡啶(900mg,7.35mmol)。将该混合物搅拌3.5小时，用二氯甲烷(1.5L)稀释，然后依次用水、10％硫酸氢钾水溶液、水、2％碳酸氢钠水溶液和水洗涤，然干燥并浓缩。残余物经层析(97/3，然后79/21二氯甲烷/丙酮)得到衍生物37(21.8g,95％)。[α]D+40(c=0.72，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,647(M+Na)+；+KF,663(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ5.56(d,J=3.9Hz,H-1′),4.35(d,J=9.8Hz,H-1),3.64,3.60,3.58,3.55(4s,12H,4OCH3),2.76-2.71(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.19,2.08,2.07(3s,9H,2Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.31(t,3H,J=7.4Hz,SCH2CH3)。
C27H44O14S的元素分析计算值C,51.91；H,7.10；S,5.13。实测值C,51.88；H,7.05；S,4.96。
反应路线10二糖38和40的合成
制备例35O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(38)往硫代糖苷37(9.53g,15.3mmol)在1/1二氯甲烷/乙醚混合液(180ml)中的溶液中加入水(1.4ml,76.3mmol)、N-碘代琥珀酰亚胺(6.84g,30.5mmol)和三氟甲磺酸银(0.51g,1.98mmol)。15分钟后(TLC)，加入饱和的碳酸氢钠水溶液(5ml)，反应混合物用二氯甲烷(1.5L)稀释，用水洗涤、1M硫代硫酸钠水溶液和2％碳酸氢钠水溶液洗涤。将该溶液干燥并浓缩，残余物经硅胶柱纯化(80/40，然后100/0乙酸乙酯/环己烷)，得到无需鉴别即可用于下步的固体。在氩气氛下，将上述化合物(7.88g,13.6mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液用碳酸铯(7.08g,21.7mmol)和三氯乙腈(6.81ml,67.9mmol)处理。40分钟后(TLC)，该混合物过滤，浓缩并纯化(85/15甲苯/丙酮)，得到亚氨酸酯38(9.16g，两步收率83％)。[α]D+118(c=1.00，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,746(M+Na)+；741(M+NH4)+。1H NMR(CDCl3)δ8.66,8.65(2s,1H,α和βN:H),6.52(d,J=3.6 Hz,H-1α),5.70(d,J=7.5Hz,H-1β),5.58(d,J=3.7Hz,H-1′),2.78-2.57(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18,2.07,2.06(3s,9H,2AC和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C27H40Cl3NO12·0.5H2O的元素分析计算值C,44.18；H,5.63；N,1.98。实测值C,44.14；H,5.61；N,1.97。制备例36O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(39)按照方法3，在1/2二氯甲烷乙醚混合液(105ml)中，将硫糖苷37(10.6g,16.94mmol)用2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(4.8ml,33.90mmol)处理。所得残余物经层析纯化(1/1丙酮/二氯甲烷)，得到化合物39(9.80g,85％)，该化合物为差向异构体混合物形式(α/β65/35)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,703(M+Na)+。1H NMR(CDCl3)δ5.58(d,J=3.9Hz,H-1′),4.94(d,J=3.5Hz,H-1),4.26(d,J=7.7Hz,H-1β),2.76-2.56(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.08,2.05(3s,9H,2Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.18-0.88(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.02(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C30H52O15Si的元素分析计算值C,52.92；H,7.69。实测值C,53.29；H,7.75。制备例37O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(40)按照方法2，在1/2甲苯/乙醇混合液(21ml/mmol)中，将化合物39(9.41g,13.82mmol)用乙酸肼(10mol/mol)处理。残余物经层析(60/40丙酮/甲苯)，得到40α(4.81g,60％)和40α/40β混合物(3.06g,37％)。40α:[α]D+132(c=0.61，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,605(M+Na)+；+KF,621(M+K)+。1HNMR(CDCl3)δ5.55(d,J=3.8Hz,H-1),4.95(d,J=3.6Hz,H-1),2.10,2.08(2s,6H,2Ac),1.16-0.89(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.02(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C25H46O13Si的元素分析计算值C,51.53；H,7.96。实测值C,51.37；H,8.06。
反应路线11四糖41的合成
制备例38O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰基丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-]2-6-(O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(41)按照方法3，将硫代糖苷37(4.21g,6.74mmol)和糖基受体40(3.57g,6.13mmol)在1/2二氯甲烷/乙醚混合液(105ml)中处理。残余物经硅胶层析(3/1，然后9/1丙酮/环己烷)，得到41(4.81g,69％)。[α]D+143(c=0.56,二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,1167(M+Na)+；+KF,1183(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ5.57(d,J=3.9Hz,H-1″′),5.44,5.41(2d,J=3.8Hz,H-1″,H-1′),4,96(d,J=3.6Hz,H-1),2.78-2.58(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18,2.12,2.12,2.09,2.06,(5s,15H,4Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.21-0.97(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.03(S,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C50H84O27Si的元素分析计算值C,52.44；H,7.39。实测值C,52.29；H,7.46。
反应路线12四糖42的合成
制备例39O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰基丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]2-6-(O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(42)按照方法1，将亚氨酸酯38(1.10g,1.52mmol)和糖基受体36(806mg,1.38mmol)在1/2二氯甲烷/乙醚混合液(22ml)中处理。产物经硅胶层析(2.5/1，然后3/1乙酸乙酯/环己烷)，得到42(1.12g,71％)。[α]D+95(c=1.00，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,1111(M+Na)+；+KF,1127(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ5.55(d,J=3.9Hz,H-1),5.39,5.37(2d,J=3.8 and 3.9Hz,H-1″,H-1′),4,34(d,J=9.7Hz,H-1),2.84-2.51(m,6H,SCH2CH3,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.10,2.09,2.08,2.04,(5s,15H,4Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.30(t,3H,J7.4Hz,SCH2CH3)。
C47H76O26S的元素分析计算值C,51.83；H,7.03；S,2.94。实测值C,51.66；H,7.02；S,2.94。
反应路线13多糖47的合成
制备例40[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(43)如制备例37，将41(4.71g,4.11mmol)进行反应，经柱层析(3/2环己烷/丙酮)，得到衍生物43(4.11g,95％)。[α]D+154(c=0.63，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,1069(M+Na)+；+KF,1085(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ5.46,5.46(2d,3H,J=3.9Hz,H-1′,H-1″,H-1),4.95(d,J=3.5Hz,H-1),2.81(d,J=4.4Hz,OH),2.11,2.09,2.08(3s,12H,4Ac),1.19-0.97(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.03,(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C45H78O25Si的元素分析计算值C,51.61；H,7.51。实测值C,51.39；H,7.54。制备例41O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]6-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(44)按照制备例38，处理硫代糖苷42(3.86g,3.54mmol)和糖基受体43(3.60g,3.44mmol)。产物经柱层析(7/2，然后2/1二氯甲烷/丙酮)，得到44(5.71g,80％)。[α]D+161(c=0.65，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2072.8，化学质量=2074.2，实验质量=2074±1a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ5.54,(d,J=3.8Hz,H-1单元NR),5.47-5.40(m,6H,H-1),4.95(d,J=3.7Hz,H-1单元R),2.84-2.51(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.13,2.12,2.11,2.11,2.08,2.05(7s,27H,8Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3,1.18-0.97(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.03(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C90H148O51Si的元素分析计算值C,52.12；H,7.19。实测值C,51.98；H,7.25。制备例42[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]7-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(45)于0℃将1M水合肼在3/2乙酸/吡啶混合液(7.3ml)中的溶液加到化合物44(3.00g,1.45mmol)的吡啶(5ml)溶液中。搅拌20分钟后，蒸发反应混合物，用二氯甲烷(400ml)稀释，用10％硫酸氢钾水溶液、水、2％碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将溶液干燥并浓缩，残余物经层析，得到45(2.43g,85％)。[α]D+167(c=0.57，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=1974.8，化学质量=1976.1，实验质量=1975±2a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ5.47-5.40(m,7H,H-1),4.95(d,J=3.7Hz,H-1单元R),2.80(d,J=4.4Hz,OH),2.13,2.11,2.10,2.08,2.07(5s,24H,8Ac),1.18-0.97(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.03(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C85H142O49Si的元素分析计算值C,51.66；H,7.24。实测值C,51.32；H,7.26。制备例43O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]10-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(46)按照制备例38,处理化合物42(1.35g,1.24mmol)和化合物45(2.38g,1.20mmol)。残余物经层析(4/3环己烷/丙酮)，得到46(1.56g,71％)。[α]D+166(c=0.88，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=3001.3，化学质量=3003.2，实验质量=3004±1a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ5.54,(d,J=3.8Hz,H-1单元NR),5.47-5.40,(m,10H,H-1),4.95(d,J=3.7Hz,H-1单元R),2.81-2.51(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.13,2.12,2.11,2.11,2.08,2.05(7s,39H,12Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.17-0.96(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.03(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C130H212O75Si的元素分析计算值C,51.99；H,7.12。实测值C,51.63；H,7.12。制备例44(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]10-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(47)(a)将糖苷46(400mg,0.133mmol)在2/1三氟乙酸/二氯甲烷混合液(2ml)中的溶液搅拌1.5小时(TLC)。该溶液在2/1甲苯/乙酸正丙酯混合液(12ml)中稀释，浓缩并与甲苯-起蒸发(5×10ml)。残余物经纯化(4/3丙酮/环己烷)，得到固体(364mg)。
(b)上面得到的固体溶于二氯甲烷(2.5ml)中。加入碳酸铯(65mg,0.200mmol)和三氯乙腈(63ml,0.620mmol)，搅拌2.5小时后过滤(Celite)，浓缩并经硅胶柱纯化(50/50/0.1环己烷/丙酮/三乙胺)，得到亚氨酸酯47(348mg,86％)。[α]D+185(c=0.91，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=3044.1，化学质量=3047.3，实验质量=3046.9±0.2a.m.u.1H NMR(CD2Cl2)δ8.61,8.58(2s,1H,α和βN:H),6.35(d,J=3.7Hz,H-1a单元R),5.59,(d,J=7.5Hz,H-1b单元R),5.38(d,J=3.8Hz,H-1单元NR),5.32-5.25(m,10H,H-1),2.64-2.40(m,4H,O(C:O)CH2CH3(C:O)CH3),2.02,1.96,1.95,1.94,1.93,1.89(6s,39H,12Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C127H200Cl3NO25的元素分析计算值C,50.06；H,6.61；N,0.46。实测值C,49.93；H,6.52；N,0.42。
反应路线14寡糖50的合成
制备例45(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]26-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(48)按照制备例44，处理化合物41(200mg,0.174mmol)。该反应混合物经硅胶柱层析(3/2甲苯/丙酮)，得到亚氨酸酯48(230mg,77％)。ESIMS，正模式m/z,+NaCl,1210(M+Na)+；+KF,1226(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ8.66-8.64(2s,1H,α和βN:H),6.51(d,J=3.6Hz,H-1β),5.71(d,J=7.5Hz,H-1β),2.90-2.52(m,4H,O(CvO)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.11,2.11,2.09,2.05(5s,4Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。制备例46O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]2-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(49)按照制备例36，处理亚氨酸酯48(73mg,0.061mmol)和糖基受体26(82mg,0.059mmol)。化合物经SephadexLH-20层析柱(1/1二氯甲烷/乙醇)，然后经硅胶柱(3/1甲苯/丙酮)纯化，得到衍生物49(98mg,69％)。[α]D+95(c=1.01，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2414.97，化学质量=2416.97，实验质量=2416.2。1HNMR(CDCl3)δ7.43-7.20(m,30H,6Ph),5.55(d,J=3.9Hz,H-1单元NR),5.50(d,J=3.9Hz,H-1单元NR-3),5.44,5.38(2d,J=3.7和3.9Hz,H-1单元NR-1,单元NR-2),5.29(d,J=6.8Hz,H-1单元R-1),5.17(d,J=3.5Hz,H-1单元R-2),4.56(d,J=3.7Hz,H-1单元R),4.10(d,J=7.9Hz,H-1单元R-3),2.81-2.50(m,4H,O(C:O)Ch2CH2(C:O)CH3), 2.17,2.15,2.11,2.09,2.05,2.00(7s,21H,6Ac and O(C:O)CH2CH3(C:O)CH3)。
C120H158Cl3O51的元素分析计算值C,59.63；H,6.59。实测值C,59.23；H,6.58。制备例47[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-]3-O-(苄基-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1-4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-O-(苄基-2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸)-(1-4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(50)按照制备例37，将八糖49(120mg,0.050mmol)进行反应。残余物经硅胶柱层析(3/1甲苯/丙酮)，得到化合物50(95mg,83％)。[α]D+80(c=0.62，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2316.9，化学质量=2318.4，实验质量=2318.2±0.4a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ7.42-7.12(m,30H,6Ph),5.50,5.46,5.43,5.40(d,J=3.9,3.9,3.7,3.7Hz,H-1单元NR,单元NR-1,单元NR-2,单元NR-3),2.14,2.10,2.09,2.08,2.00,1.88(6s,18H,6Ac)。
C115H152O49的元素分析计算值C,59.57；H,6.60。实测值C,59.49；H,6.61。
反应路线15多糖97的合成(实施例4)
制备例48O-(6-O-乙酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]15-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1-4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(51)按照制备例39，处理亚氨酸酯47(84mg,0.027mmol)和糖基受体50(62mg,0.027mmol)。残余物首先经ToyopearlHW-40柱，然后经硅胶柱(1/1环己烷/丙酮)纯化，得到衍生物51(71mg，非最佳收率51％)。[α]D+136(c=0.95，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=5200.11，化学质量=5203.39，实验质量=5203.5。1HNMR(CDCl3)δ7.42-7.18(m,30H,6Ph),5.54(d,J=3.8Hz,H-1单元NR),5.51-5.40(m,15H-1),5.30(d,J=6.8Hz,H-1unit R-1),5.17(d,J=3.5Hz,H-1单元R-2),4.56(d,J=3.7Hz,H-1单元R),4.09(d,J=7.9Hz,H-1单元R-3),2.85-2.53(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.17,2.16,2.13,2.11,2.08,2.05,2.00,1.88(8s,57H,18Ac和O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
C240H350O123·4H2O的元素分析计算值C,54.64；H,6.84。实测值C,54.51；H,6.79。
反应路线16二糖57的合成
制备例49O-(4,6-O-对甲氧基亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(53)于+5℃和氩气氛下，将茴香醛缩二甲醇(35.8ml,0.21mol)和樟脑磺酸(4.44g,19.1mmol)加入到化合物52(73.89g,0.19mmol)(W.E.Dick Jr和J.E.Hodge，糖化学中的方法(Methods in Carbohydrate Chemistry),7,1976,15-18)在3.5/1乙腈/N,N-二甲基甲酰胺混合液(990mmol)中的溶液中。在室温搅拌1.5小时后，加入三乙胺(2.96ml,21.0当量)中和该混合物。将混合物浓缩，糖浆状物质经硅胶柱纯化(100/0，然后50/50二氯甲烷/甲醇)，得到53(58.6g,61％，非最佳收率)。[α]D+47(c=1.03，甲醇)。ESIMS，正模式m/z,503(M-H)-。1HNMR(CD3OD)δ7.41,6.89(2d,4H,CH3OC6H4),5.51(s,CHC6H4),5.20(d,J=3.6Hz,H-1,),4.39(d,J=7.1Hz,H-1),3.78(s,3H,CH3OC6H4),2.75(q,2H,J=7.0Hz,SCH2CH3),1.29(t,3H,SCH2CH3)。
C22H32O11S的元素分析计算值C,52.37；H,6.39；S,6.35。实测值C,52.15；H,6.61；S,5.84。制备例50O-(2,3-二-O-乙酰基-4,6-对甲氧基亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(54)于0℃下，将三乙胺(65ml,0.47mol)和乙酸酐(89ml,0.94mol)滴加到53(47.22g,93.6mmol)在二氯甲烷(450ml)中的悬浮液中。然后加入4-二甲氨基吡啶(5.71g,46.8mmol)并将该混合物在室温搅拌1.5小时。加入甲醇(45ml,1.12mol)使反应停止，然后依次用冷的10％硫酸氢钾水溶液、水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤。将该溶液干燥，浓缩并结晶(环己烷/乙酸乙酯)，得到54(64.9g,97％)。[α]D+21(c=1.00，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z,+NaCl,737(M+Na)+,+KF,753(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.34,6.86(2d,4H,CH3OC6H4),5.43(s,CHC6H4),5.34(d,J=4.1Hz,H-1,),4.54(d,J=9.9Hz,H-1),3.78(s,3H,CH3OC6H4),2.74-2.60(m,2H,SCH2CH3),2.10,2.06,2.03,2.01(4s,15H,5Ac),1.26(t,3H,SCH2CH3)。
C32H42O16S的元素分析计算值C,53.78；H,5.92；S,4.49。实测值C,53.74；H,6.08；S,4.40。制备例51O-(2,3-二-O-乙酰基-4-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(55)和O-(2,3-二-O-乙酰基-4-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(56)将54(25.0g,35.0mmol)、硼烷/三甲胺配合物(20.4g,0.28mol)和分子筛(33g,4埃)在甲苯(810ml)中的混悬液在氩气氛下搅拌1小时。使该混合物冷却到0℃，然后缓慢地加入氯化铝(14.0g,0.11mol)。将反应物搅拌25分钟(TLC)，倾入冷却的20％硫酸氢钾水溶液中，并在0℃搅拌1小时，然后过滤(Celite)。有机相用水、2％碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化，得到55(7.37g,29％)和56(1.36g,6％)。55的分析样品在环己烷/乙酸乙酯混合液中结晶。[α]D+30(c=1.00，二氯甲烷)。熔点151-153℃。ESIMS，正模式m/z,+NaCl,739(M+Na)+,+KF,755(M+K)+。1HNMR(CDCl3)δ7.19,6.87(2d,4H,CH3OC6H4),5.36(d,J=3.5Hz,H-1′),4.54(s,2H,C6H4CH2),4.53(d,J=9.0Hz,H-1),2.70-2.65(m,2H,SCH2CH3)。
C32H42O16S的元素分析计算值C,53.62；H,6.19；S,4.47。实测值C,53.57；H,6.21；S,4.43。
化合物56[α]D+19(c=1.11，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z,+NaCl,697(M+Na)+,+KF,713(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.17,6.84(2d,4H,CH3OC6H4),5.36(d,J=4.5Hz,H-1′),4.54(d,J=10.1Hz,H-1),4.49(s,2H,C6H4CH2),2.69-2.64(m,2H,SCH2CH3),2.02,2.01,2.00,1.96(4s,12H,4Ac),1.25(t,3H,SCH2CH3)。
C30H42O15S的元素分析计算值C,53.40；H,6.27；S,4.75。实测值C,53.29；H,6.39；S,4.53。制备例52O-(2,3-三-O-乙酰基-4-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(57)于0℃下，将乙酸酐(1.47ml,15.5mmol)加到55(5.6g,7.77mmol)、三乙胺(1.19ml,8.54mol)和4-二甲氨基吡啶(190mg,1.55mmol)在二氯甲烷(40ml)中的混合物中。在室温搅拌40分钟(TLC)后，混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用冷却的10％硫酸氢钾水溶液、水饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将该溶液干燥，浓缩，残余物经硅胶柱纯化(35/65乙酸乙酯/环己烷)，得到57(5.66g,96％)。[α]D+44(c=1.03，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z,+NaCl,781(M+Na)+,+KF,797(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.15,6.85(2d,4H,CH3OC5H4),5.30(d,J=4.2Hz,H-1′),4.53(d,J=10.0Hz,H-1),2.69-2.64(m,2H,SCH2CH3),2.09,2.07,2.04,2.01,2.00,1.98(6s,18H,6Ac),1.25(t,3H,SCH2CH3)。
C34H46O17S的元素分析计算值C,53.82；H,6.11；S,4.22。实测值C,53.77；H,6.24；S,4.09。
反应路线17三糖62的合成
制备例534,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(59)于0℃下，将氢化钠(500mg,19.9mmol)加入化合物58(2.59g,8.29mmol)(A.F.Bochkov等，Izv.Akad.Nauk SSSR,Ser.Khim.(1968),(1),179)和碘甲烷(1.70ml,19.9mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(25ml)中的混合物中，然后让该混合物的温度回升到20℃。将混合物搅拌30分钟(TLC)，然后加入甲醇。将该混合物倾入水中，用乙酸乙酯萃取。有机相依次用1M硫代硫酸钠水溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残余物在乙醚中研制，得到59(0.42g,15％)；母液经硅胶柱纯化(12/1甲苯/丙酮)，然结晶，得到另外一部分59(1.6g，总收率71％)。熔点108℃。[α]D-78(c=1.00，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z，硫甘油+NaCl,363(M+Na)+，硫甘油+KF,379(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.51-7.33(m,5H,Ph),5.52(s,1H,C6H5CH),4.45(d,1H,J=9.8Hz,H-1),3.64(s,3H,OCH3),3.62(s,3H,OCH3),2.78-2.68(m,2H,SCH2CH3),1.31(t,3H,J=2.7Hz,SCH2CH3)。
C17H24O5S(340.44)的元素分析计算值C,59.98；H,7.11；S,9.42。实测值C,59.91；H,7.15；S,8.96。制备例544,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(60)将化合物59(23.0g,67.5mmol)和2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(19.4ml,135mmol)溶于2/1乙醚/二氯甲烷混合液(345ml)中，加入4埃分子筛(11g)。使该混合物在25℃搅拌1小时后，加入N-碘代琥珀酰亚胺(49.7g,220mmol)，然后于0℃加入三氟甲磺酸银(2.20g,8.78mmol)。将该混合物搅拌20分钟(TLC)，然后加入固体碳酸氢钠。该混合物用二氯甲烷稀释，滤过硅藻土(Celite)，依次用1M硫代硫酸钠水溶液和水洗涤，干燥并蒸发至干。残余物经硅胶柱纯化(15/1，然后5/1环己烷/乙酸乙酯)，得到60β(4.20g.15％)和60α(8.40g,31％)。
化合物60α:[α]D+96(c=0.4，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z,,419(M+Na)+；435(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.52-7.35(m,5H,Ph),5.54(s,1H,C6H5CH),4.98(d,1H,J=3.7Hz,H-1),3.64(s,3H,OCH3),3.62(s,3H,OCH3),1.24-0.96(m,2H,OCH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,OCH2CH2Si(CH3)3)。
C20H32O6S(396.56)的元素分析计算值C,60.58；H,8.13；。实测值C,60.26；H,8.39。制备例556-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(61)
将化合物60(21.1g,53.3mmol)溶于二氯甲烷(154ml)。在室温加入三乙基甲硅烷(34ml,213mmol)，然后滴加三氟乙酸(16.3ml,213mmol)和三氟乙酸酐(0.49ml,3.47mmol)。将该混合物搅拌2小时，加入1M氢氧化钠水溶液直至pH为碱性。倾析分离后，水相用乙酸乙酯萃取，然后与有机相合并，干燥并浓缩。残余物经硅胶柱纯化(14/1，然后12/1二氯甲烷/丙酮)，获得61(12.5g,59％)。[α]D+100(c=1.45，二氯甲烷)。1H NMRδ7.40-7.20(m,5H,Ph),4.98(d,1H,J=3.5Hz,H-1),3.62(s,3H,OCH3),3.49(s,3H,OCH3),1.14-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C20H30O6Si(398.58)的元素分析计算值C,60.27；H,8.60。实测值C,60.18；H,8.81。制备例56O-(2,3,6-三-O-乙酰基-4-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(62)按照方法3，处理硫代糖苷57(19.1g,25.1mmol)和糖基受体61(7.5g,18.7mmol)的混合物，经硅胶柱纯化(20/1，然后10/1二氯甲烷/丙酮)后，获得62(19.7g,95％)。[α]D+90(c=1.15，二氯甲烷)。
C52H74O23Si(1095.24)的元素分析计算值C,57.03；H,6.81。实测值C,57.38；H,6.85。
反应路线18寡糖66的合成
制备例57O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(63)按照方法4，处理化合物62(19.7g,18.0mmol)，经硅胶柱纯化(3/1，然后2/1甲苯/丙酮)后，获得化合物63(11.2g，三步收率79％)。[α]D+95(c=1.15，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,829(M+Na)+；+KF,845(M+K)+。
1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.25(m,5H,Ph),5.60(d,1H,J=3.8Hz,H-1″),4.96(d,1H,J=3.8Hz,H-1),4.29(d,1H,J=8.0Hz,H-1′),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。制备例58O-(2,3,6-三-O-乙酰基-4-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(64)按照方法3，处理硫代糖苷57(6.87g,9.10mmol)和糖基受体63(6.67g,8.30mmol)的混合物，残余物经硅胶柱纯化(2/5甲苯/丙酮)后，获得64(10.7g,86％)。[α]D+90(c=0.83，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z+NaCl,1525(M+Na)+；+KF,1541(M+K)+。1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.25(m,5H,Ph),7.15-6.84(m,4H,C5H4OCH3),5.56(d,1H,J=3.9Hz,H-1″),5.29(d,1H,J=4.0Hz,H-1″″),4.97(d,1H,J=8.1Hz,H-1),4.27(d,1H,J=7.9Hz,H-1′),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C70H106O33Si(1503.69)的元素分析计算值C,55.91；H,7.11。实测值C,56.05；H,7.24。制备例59[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(65)按照方法4，处理化合物64(10.7g,7.2mmol)，残余物经硅胶柱纯化(2/1，然后6/5甲苯/丙酮)后，获得65(6.50g，三步收率74％)。[α]D+102(c=0.68，二氯甲烷)。1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.25(m,5H,Ph),5.65(d,1H,J=3.8HzH-1″″),5.62(d,1H,J=3.8Hz,H-1″),4.98(d,1H,J=3.7Hz,H-1),4.31(d,1H,J=8.1Hz,H-1),4.29(d,1H,J=7.9Hz,H-1′),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C56H98O26Si(1215.48)的元素分析计算值C,55.34；H,8.13。实测值C,55.31；H,8.19。制备例60O-(2,3,6-三-O-乙酰基-4-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1-4)]2-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(66)按照方法3，处理硫代糖苷57(4.03g,5.31mmol)和糖基受体65(5.78g,4.75mmol)的混合物，残余物经硅胶柱纯化(2/5甲苯/丙酮)后，获得66(8.63g,95％)。[α]D+94(c=0.74，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=1910.08，化学质量=1912.14，实验质量=1911.61±0.12a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.25,(m,5H,Ph),7.15-6.83(m,4H,C6H4OCH3),5.62(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),5.60(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元NR-2),5.30(d,1H,J=4.0Hz,H-1单元NR),4.98(d,1H,J=3.7Hz,H-1单元R),4.71(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1),4.30(d,1H,J=8.1Hz,H-1单元C),4.29(d,1H,J=8.4Hz,H-1单元R-1),2.08(s,3H,Ac),2.07(s,3H,Ac),2.03(s,3H,Ac),1.99(s,3H,Ac),1.98(s,3H,Ac),1.96(s,3H,Ac),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C88H138O43Si(1912.14)的元素分析计算值C,55.28；H,7.27。实测值C,55.61；H,7.35。
反应路线19寡糖72的合成
制备例61[O-(2,3,6-三-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(67)按照方法4，处理化合物66(8.63g,4.50mmol)，残余物经硅胶柱纯化(3/2，然后4/3甲苯/丙酮)后，获得67(5.67g，三步收率77％)。[α]D+102(c=0.70，二氯甲烷)。ESIMS，正模式m/z，硫甘油+NaCl,1645.9(M+Na)+。1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.32(m,5H,Ph),5.65(d,2H,J=3.8Hz,H-1单元NR和H-1单元NR-2),5.62(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),4.98(d,1H,J=3.7Hz,H-1单元R),4.31(d,1H,J=8.1Hz,H-1单元NR-1),4.30(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元C),4.29(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元R-1),1.08-0.91(m,2H,CH2CH3Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C74H130O36Si(1912.14)的元素分析计算值C,54.73；H,8.07。实测值C,54.61；H,8.07。制备例62O-(2,3,6-三-O-乙酰基-4-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(68)按照方法3，处理硫代糖苷57(1.47g,1.95mmol)和糖基受体67(2.89g,1.77mmol)的混合物。残余物滤过硅胶柱(3/2环己烷/丙酮)后，获得68(3.71g,92％)。分析样品经硅胶柱纯化(3/2甲苯/丙酮)。[α]D+99(c=0.58，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2319.03,化学质量=2320.59，实验质量=2319.03±0.12 a.m.u.1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.32,(m,5H,Ph),7.15-6.83(m,4H,C6H4OCH3),5.62(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),5.60(d,2H,J=3.8Hz,H-1单元NR-2和单元C),5.29(d,1H,J=4.0Hz,H-1单元NR),4.97(d,1H,J=3.7Hz,H-1单元R),4.70(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1),4.30(d,2H,J=8.1Hz,H-1单元NR-3和单元R-3),4.29(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元R-1),2.08(s,3H,Ac),2.06(s,3H,Ac),2.02(s,3H,Ac),1.99(s,3H,Ac),1.98(s,3H,Ac),1.96(s,3H,Ac),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C106H170O53Si(2320.59)的元素分析计算值C,54.86；H,7.38。实测值C,54.76；H,7.45。制备例63[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(69)按照方法4，处理化合物68(3.61g,1.55mmol)，残余物经硅胶柱纯化(4/5甲苯/丙酮)后，获得69(2.22g，三步收率70％)。[α]D+103(c=0.80,二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2031.01，化学质量=2032.38，实验质量=2032.38 a.m.u.1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.32(m,5H,Ph),5.65(d,1H,J=3.8Hz H-1单元NR),5.64(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元NR-2),5.62(d,2H,J=3.8Hz,H-1单元C and单元R-2),4.97(d,1H,J=3.7Hz,H-1单元R),4.30(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1),4.29(d,3H,J=7.9Hz,H-1单元R-1,unit R-3和单元NR-3),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C92H162O46Si(2032.38)的元素分析计算值C,54.37；H,8.03。实测值C,54.51；H,8.04。制备例64O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷(70)将化合物69(855mg,0.42mmol)溶于二氯甲烷(8ml)中，于25℃加入三乙胺(83μl,0.59mmol)、4-二甲氨基吡啶(5.14mg,0.04mmol)和乙酰丙酸酐(117mg,0.55mmol)。搅拌2小时(TLC)后，加入二氯甲烷，该混合物用10％硫酸氢钾水溶液洗涤，然后用水洗涤，干燥并蒸发至干。该粗品化合物无需纯化即可用于下步。分析样品经硅胶柱纯化(5/4环己烷/丙酮)，得到纯净的70。[α]D+101(c=0.89，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2129.05，化学质量=2130.48，实验质量=2130.00 a.m.u.1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.32(m,5H,Ph),5.65(d,3H,J=3.8Hz,H-1单元NR,单元NR-2和单元C),5.63(d,2H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),5.02(t,1H,J=10.1Hz,H-4单元NR),4.98(d,1H,J=3.7Hz,H-1单元R),4.32(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1),4.30(d,2H,J=7.9Hz,H-1单元NR-3和单元R-3),4.29(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元R-1),2.80-2.50(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18(s,3H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.08-0.91(m,2H,CH2CH2Si(CH3)3),0.00(s,9H,CH2CH2Si(CH3)3)。
C97H168O48Si(2032.38)的元素分析计算值C,54.69；H,7.95。实测值C,54.55；H,8.07。制备例65O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖(71)如制备例44(a)处理化合物70(876mg,0.41mmol)。残余物经硅胶柱纯化，获得异构体混合物(α/β=60/40)71(600mg，两步收率50％)。[α]D+89(c=0.74，二氯甲烷)。ESIMS，正模式单种同位素质量=2028.97,化学质量=2030.24，实验质量=2030.19+0.19 a.m.u.
1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.32(m,5H,Ph),5.65(d,3H,J=3.8Hz H-1单元NR,单元NR-2和单元C),5.63(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),5.33(d,1H,J=3.2Hz,H-1α单元R),5.02(t,1H,J=10.1Hz,H-4单元NR),4.59(d,1H,J=5.3Hz,H-1β单元R),4.32(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1),4.30(d,2H,J=7.9Hz,H-1单元NR-3和单元R-3),4.29(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元R-1),2.80-2.50(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18(s,3H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。制备例66O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡糖三氯亚氨代乙酸酯(72)往71(593mg,0.29mmol)的二氯甲烷(7ml)溶液中加入碳酸钾(72.2mg,0.52mmol)和三氯乙腈(176μl,1.75mmol)。将该混合物搅拌16小时，过滤并蒸发。残余物滤过硅胶(5/4环己烷/丙酮+0.1‰三乙胺)，获得差向异构体混合物形式的(α/β=47/53)亚氨酸酯72(414mg,46％)。[α]D+86(c=0.84，二氯甲烷)。1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.32(m,5H,Ph),6.50(d,1H,J=3.5Hz,H-1α单元R),5.65(d,1H,J=8.2Hz,H-1β,单元R),5.65(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元NR),5.64(d,2H,J=3.8Hz,H-1单元R-2 and单元C),5.61(d,1H,J=3.8Hz,H-1单元R-2),5.02(t,1H,J=10.1Hz,H-4单元NR),4.37(d,1H,J=7.9Hz,H-1单元R-1),4.30(d,3H,J=7.9Hz,H-1单元NR-1,单元NR-3和单元R-3),2.80-2.50(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18(s,3H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3)。
反应路线20多糖73的合成
制备例67O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(73)将糖基受体26(220mg,0.16mmol)和亚氨酸酯72(344mg,0.16mmol)溶解于1/2二氯甲烷/乙醚混合物(5ml)中。加入4埃分子筛(750mg/mmol),将混合物在25℃下放置1小时，再将混合物冷却至-25℃，加入1M叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯的二氯甲烷溶液(0.20mol/1mol亚氨酸酯)。搅拌15分钟后，加入固体碳酸氢钠，将混合物过滤，浓缩。将残余物置于ToyopearlHW-50柱上(1/1二氯甲烷/乙醇)，将包含糖基受体的馏分返回反应中，再进行如上的处理。在硅胶柱上进行连续纯化(5/4，然后1/1甲苯/丙酮)，得到馏分73α/β=7/3(107mg)和馏分73α/β=9/1(201mg)，总收率为57％(308mg)。1HNMR(CDCl3)δ7.33-7.25(m,35H,7Ph),5.65(d,3H,J=3.5Hz,H-1单元A,单元C和单元E),5.57(d,1H,J=3.9Hz,H-1单元G),5.52(d,1H,J=3.3Hz,H-1单元I),5.29(d,1H,J=6.8Hz,H-1单元L),5.17(d,1H,J=3.5Hz,H-1单元K),4.56(d,1H,J=3.5Hz,H-1单元M),4.31(d,3H,J=7.9Hz,H-1单元B,单元D和单元F),4.27(d,1H,J=8.0Hz,H-1单元H),4.08(d,1H,J=8.0Hz,H-1单元J),2.80-2.50(m,4H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),2.18(s,3H,O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3),1.97(s,3H,Ac),1.81(s,3H,Ac)。
反应路线21合成多糖74和75
制备例68[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(74)按照方法2处理化合物73(130mg,38.2mmol)，将粗产物用硅胶柱纯化，得到74(118mg,93％)。[α]D+78(c=0.48，二氯甲烷)；ESIMS，正模式单一同位素质量=3301.49；化学质量=3303.65；实测质量=3302.40原子量单位。1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.25(m,35H,7Ph),5.64(d,3H,J=3.5Hz,H-1单元A,单元C和单元E),5.57(d,1H,J=3.9Hz,H-1单元G),5.52(d,1H,J=3.3Hz,H-1单元I),5.29(d,1H,J=6.8Hz,H-1单元L),5.17(d,1H,J=3.5Hz,H-1单元K),4.56(d,1H,J=3.5Hz,H-1单元M),4.31(d,3H,J=7.9Hz,H-1单元B,单元D和单元F),4.27(d,1H,J=8.0Hz,H-1单元H),4.08(d,1H,J=8.0Hz,H-1单元J),1.97(s,3H,Ac),1.81(s,3H,Ac)。制备例69O-(2,6-二-O-苄基-4-O-乙酰丙酸基-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-6-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(6-O-苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3,6-三-O-苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(75)将糖基受体74(112mg,33.9mmol)和亚氨酸酯17(59.1mg,37.2mmol)(见制备例16)溶解于甲苯(2ml)中。加入4埃分子筛(42mg)，将混合物在25℃下放置1小时，再将混合物冷却至-20℃，加入1M叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯的甲苯溶液(0.20mol/1mol亚氨酸酯)。搅拌15分钟后，加入固体碳酸氢钠，将混合物过滤，浓缩。将残余物置于ToyopearlHW-50柱上(1/1二氯甲烷/乙醇)，将包含受体和17-聚体的馏分返回反应中，再进行如上的处理。在ToyopearlHW-50柱和硅胶柱上连续进行纯化，得到75(71mg,44％)。[a]D+80(c=0.26，二氯甲烷)；ESIMS，正模式单一同位素质量=4728.10；化学质量=4731.26；实测质量=4731.27±0.39原子量单位。主要异头质子的1H NMR(CHCl3)δ:5.64；5.57；5.52；5.48；5.47；5.29；5.17；4.56；4.50；4.29；4.27；4.08ppm。
反应路线22用于合成具有糖苷间C-连接的五糖Pe的合成子的制备
制备例702,3-二-O-甲基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-α-D-吡喃葡糖甲苷(77)在氩气氛下，向76(D.Trimmell,W.M.Doane,C.R.Russel,C.E.Rist,糖研究(Carbohydr.Res),(1969)11,497)(15.84g,71.3mmol)的二氯甲烷(300ml)溶液中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(14.0g,92.9mmol)、三乙胺(15ml,108mmol)和4-二甲氨基吡啶(260mg,2.13mmol)。在室温下搅拌15小时后，将溶液用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。将残余物用快速层析法纯化(1.3/1环己烷/乙酸乙酯)，得到77(22.79g,95％)，为无色浆液。[α]D+87(c=1.2，氯仿)。制备例712,3-二-O-甲基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-α-D-吡喃木-4-己酮糖甲苷(78)在氩气氛及-70℃下，向草酰氯(5.4ml,61.9mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液中加入二甲亚砜(8.7ml,123mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。15分钟后，滴加入77(18.78g,55.8mmol)的二氯甲烷溶液。在磁力搅拌15分钟后，加入三乙胺(37ml,265mmol),15分钟后，将混合物升温至室温。加入水(150ml)，水相用二氯甲烷(150)萃取。合并有机相，用硫酸镁干燥，浓缩。残余物用快速层析纯化(9/1，再4/1环己烷/乙酸乙酯)，得到78(17.3g,93％)，为无色油。[α]D+98(c=1.0，氯仿)。制备例724-脱氧-2,3-二-O-甲基-4-C-亚甲基-6-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-α-D-吡喃木己酮糖甲苷(79)在氩气氛下，向甲基三苯基溴化鏻(43.3g,127mmol)的四氢呋喃(250ml)悬浮液中滴加入1.6M正丁基锂的正己烷溶液(75ml)。在室温下30分钟后，将混合物冷却至-70℃。然后加入78(13.97g,41.8mmol)的四氢呋喃(60ml)溶液。在-70℃下30分钟后，将混合物升温至室温。1小时后，加入饱和氯化铵水溶液(300ml)，水相用乙醚萃取。有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。将残余物用快速层析法纯化(7/1，再4/1环己烷/乙酸乙酯)，得到79(8.30g,60％)，为无色油。[α]D+151(c=1.3，氯仿)。制备例73甲基4-脱氧-2,3-二-O-甲基-4-C-亚甲基-α-D-吡喃木己酮糖甲苷(80)向79(8.50g,25.6mmol)的5/1二氯甲烷/甲醇混合物(250ml)溶液中加入樟脑磺酸(pH1)。在原料完全消失后(TLC,1/1环己烷/乙酸乙酯)，加入三乙胺将溶液中和。浓缩后，将残余物用快速层析法纯化(1/1，再1/2环己烷/乙酸乙酯)，得到80(5.32g,95％)，为无色浆液。D+239(c=1.0，氯仿)。制备例742,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-1-硒代-β-D-吡喃葡糖苯苷(83)方法1在氩气氛下，将苯硒酚(5.7ml,53.7mmol)加至81(E.L.Hirst E.Percival,糖化学中的方法，(1963)2,145)(1/1的端基异构体混合物13.05g,36.0mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液中。将反应介质冷却至0℃，滴加入48％的三氟硼烷乙醚合物溶液(8.8ml,71.9mmol)。在室温下3小时后，将反应混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。粗化合物83(8.17g,68％(从81计))直接用于脱乙酰反应。方法2在0℃及氩气氛下，将硼氢化钠(510mg,14.6mmol)加至二苯基联硒化物(2.27g,7.27mmol)的乙醇悬浮液中。如果反应介质在15分钟内其原有的黄色不消失，则再加入一部分三氟硼烷乙醚合物。在氩气氛下，将溶液转移至82(A.K.Sen,K.K.Sakar,N.Banerji，糖化学杂志(J.Carbohydr.Chem.),(1988)7,645)(4.22g,11.0mmol)的二氯甲烷(25ml)溶液中。回流3小时后，将混合物放置以冷却至室温，滤出溴化钠，浓缩滤液。将残余物溶解于二氯甲烷(100ml)中，用1M氢氧化钠水溶液(50ml)和饱和氯化铵水溶液(50ml)洗涤。水相用二氯甲烷(20ml)萃取，有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。将残余物用快速层析法纯化(1.7/1环己烷/乙酸乙酯)，再用乙酸乙酯结晶，得到83(4.35g,86％)。m.p.101-102℃。[α]D-20(c=1.0，氯仿)。制备例753-O-甲基-1-硒代-β-D-吡喃葡糖苯苷(84)将由82(32.3g,84.3mmol)获得的粗产物83溶解于甲醇(500毫升)中，向其中缓慢地加入钠(1.2g)。1小时后，加入IR-120(H+)树脂中和溶液，过滤，浓缩。将残余物用快速层析法纯化(1.5/1/1环己烷/乙酸乙酯/丙酮)，得到浆液形式的84(22.7g,81％(从82计))。[a]D-58(c=1.0，甲醇)。制备例764,6-O-亚苄基-3-O-甲基-1-硒代-β-D-吡喃葡糖苯苷(85)在氩气氛下，向三醇84(7.56g,23.0mmol)的乙腈(150毫)溶液中加入对甲苯磺酸(45mg)和苯甲醛缩二甲醇(5.4ml,3.6mmol)。在室温下搅拌2小时后，加入碳酸钾(1.5g)。30分钟后，将溶液过滤，浓缩。将残余物用快速层析法纯化(3.5/1环己烷/乙酸乙酯)，得到白色结晶形式的85(8.55g,88％)。m.p.123-124℃(环己烷/乙酸乙酯)。[α]D-38(c=1.0，氯仿)。制备例774,6-O-亚苄基-3-O-甲基-2-O-(4-脱氧-6-O-二甲基甲硅烷基-2,3-二-O-甲基-4-C-亚甲基-α-D-吡喃木己糖甲苷)-1-硒代-β-D-吡喃葡糖苯苷(86)在氩气氛及-70℃下，将1.6M正丁基锂溶液(7.0ml,11.2mmol)加至放置在Schlenck管内的85(4.3og,10.2mmol)的四氢呋喃(30毫升)溶液中。10分钟后，加入二氯二甲基甲硅烷(5.0ml,41.2mmol)，将反应介质升温至室温。3小时后，将混合物浓缩，加入80(2.10g,9.62mmol)和咪唑(985mg,14.4mmol)的四氢呋喃(20毫升)溶液。在室温下30分钟后，将溶液浓缩，加入水(50毫升)，混合物用二氯甲烷萃取。有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过快速层析法纯化86的分析样品(25/1甲苯/丙酮，其包含0.5％的三乙胺)。得到一种无色浆液，收率为90％。
1H NMR(400MHz,C6D6)d7.77-6.99(m,10H,芳族),5.51(m,1H,C:CH2),5.24(m,1H,C:CH2),5.16(s,1H,CHPh),4.85(d,1H,J=3.7Hz,H-1),4.81(d,1H,J=9.8Hz,H-1′),4.45(m,1H,H-5),4.38(dd,1H,J=10.8Hz,4.8Hz,H-6a),4.33(dd,1H,J=6.2Hz,H-6b),4.20(m,1H,J=9.2Hz,H-3),4.05(dd,1H,J=10.3Hz,4.9Hz,H-6a′),3.87(dd,1H,J=8.1Hz,H-2′),3.52,3.38,3.31和3.27(s,3H,OCH3),3.37(t,1H,J=10.3Hz,H-6b′),3.35(t,1H,H-4′),3.32(dd,1H,H-2),3.22(dd,1H,J=9.3Hz,H-3′),3.05(ddd,1H,J=9.3Hz,H-5′),0.38和0.37(s,3H,Si(CH3)2.MS(m/z):714(M+NH4)+。制备例78游离基闭环反应(形成87)和甲硅烷基醚的裂解(88)在8小时内，向由85(10.2mmol)和80(9.62mmol)获得的粗产物86的甲苯(850毫)溶液中加入脱气甲苯(14ml)中的三丁基氢化锡(6.1ml,22.7mmol)和2,2’-偶氮二异丁腈(200mg,1.22mmol)的溶液。
在游离基闭环后，将混合物浓缩，将残余物溶解于四氢呋喃中。加入过量(20当量)的氢氟酸(40％的水溶液)。在完全脱甲硅烷化后(TLC，4/1甲苯/丙酮)，加入碳酸氢钠固体中和溶液，过滤，浓缩。主要化合物88可通过结晶纯化，m.p.105℃。[a]D+119(c=1.1,氯仿)。13C NMR(62.896MHz,CDCl3)d137.29(芳族季碳),128.88-125.96(芳族101.11(CHPh),97.64(C-1),83.52(C-2),82.7 6,81.95,80.84,72.01,71.92 and 64.31(C-3,C-5,C-2′,C-3′,C-4′,C-5′),75.19(C-1′),69.41(C-6′),62.69(C-6),60.93,60.70,58.31和55.20(OCH3),38.80(C-4),25.58(亚甲基C)。C24H36O10·H2O(502.558)的元素分析计算值C,57.36；H,7.62实测值C,57.31；H,7.54。制备例796-O-乙酰基-4-C-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基甲基)-4-脱氧-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(89)在催化量的4-二甲氨基吡啶存在下，使化合物88在1/1乙酸酐/吡啶中进行定量乙酰化。经浓缩和层析处理后得到产物。[a]D+87(c=1.0，氯仿)。1H NMR(500MHz,CDCl3)见表1．13C NMR(62.896MHz,CDCl3)d170.81,169.80(C:O),137.18(芳族季碳),128.92-125.95(芳族C),101.31(CHPh),97.51(C-1),83.22(C-2),81.94,69.25和63.83(C-5,C-4′,C-5′),81.81(C-3),78.78(C-3′),72.74(C-2′),71.96(C-1′),69.49(C-6′),64.17(C-6),60.64,59.82,58.30和55.19(OCH3),39.00(C-4),26.47(亚甲基C),20.91,20.76(OCOCH3)。质谱(m/z):586(M+NH4)+,569(M+H)+,554(M-OMe+NH3)+,537(M-OMe)+。C28H40O12·H2O(586.632)的元素分析计算值C,57.33；H,7.22实测值C,57.28；H,7.07。
合成过程的最后一部分涉及将89转化成亚氨酸酯90。为此，用氰基硼氢化钠和盐酸将亚苄基打开。释放出的羟基以对甲氧基苄基醚的形式保护。在脱乙酰化后，伯醇官能团通过选择性引入叔丁基二甲基甲硅烷基醚进行保护，所得到的化合物被甲基化。通过在Jones条件下进行氧化，得到糖醛酸，其被苄基化。随后，裂解对甲氧基苄基醚，在此位置上引入乙酰丙酸酯。采用硫酸/乙酸/乙酸酐混合物体系使异头甲基基团以及6′位的苄基醚乙酸解，得到两种异头乙酸酯的混合物。在位置1的选择性脱乙酰化过程采用二甲基甲酰胺中的肼，溶解于二氯甲烷中的异头物混合物在1,8-二氮杂双环[5.4.0]-十一碳-7-烯存在下，用三氯乙腈转化成90。
反应路线23-五糖99的合成
制备例80O-(2,3-二-O-苯甲酰基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-苯甲酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(92)在20分钟内，将苯甲酰氯(24.5ml,211mmol)滴加至冷却(0℃)的化合物91(16.7g,35.2mmol)(J.Westman和M.Nilsson，糖化学杂志，1995,14(7),949-960)的吡啶(202ml)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌20小时；TLC表明，转化率大约为50％。将混合物用水和二氯甲烷稀释。萃取后，有机相用10％碳酸氢钠水溶液和水洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩。再按照上述过程用苯甲酰氯处理。粗产物用硅胶柱进行层析处理，得到22g的化合物92。
TLC∶Rf=0.80，硅胶，9/1v/v甲苯/乙醇。制备例81O-(2,3-二-O-苯甲酰基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(94)在氮气氛下，将硫代糖苷92(1.05g,1.05mmol)、化合物93(200mg,1.05mmol)(Jeanioz等，有机化学杂志(J.Org.Chem.)1961,26,3939-3944)和粉状4埃分子筛(1.1g)在甲苯(18ml)中的混合物搅拌15分钟。然后，将混合物冷却至-20℃，再向其中加入新制备的N-碘代琥珀酰胺(1.11mmol)和三氟甲磺酸(0.125mmol)在1/1v/v二氯甲烷/二噁烷(6ml)中的溶液。10分钟后，对红色的反应混合物进行过滤，用二氯甲烷稀释，萃取，依次用10％硫代硫酸钠溶液、10％碳酸氢钠溶液和水洗涤，用硫酸镁干燥，然后进行真空浓缩。残余物用硅胶层析柱进行纯化，得到1.25g化合物94。
TLC∶Rf=0.55，硅胶，4/6v/v庚烷/乙酸乙酯。制备例82O-(4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(95)将叔丁醇钾(约50mg)加至化合物94(1.24g,1.11mmol)的1/1v/v二氯甲烷/二噁烷(7ml)溶液中。将混合物搅拌1小时，然后再加入50mg的叔丁醇钾；再将混合物搅拌60分钟。将反应混合物用Dowex50WX8H+树脂中和，过滤，真空浓缩。硅胶层析柱处理后，分离出665mg油状的化合物95。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，85/15v/v二氯甲烷/甲醇。制备例83O-(4,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(96)在氩气氛下，将氢化钠(387mg,9.65mmol)加至冷却下(5℃)的化合物95(660mg,1.1mmol)的无水四氢呋喃(8ml)溶液中。滴加入碘甲烷(0.51ml,8.22mmol)，再在室温下将混合物搅拌20小时。用甲醇破坏过量的氢化钠，将混合物倒入50ml冰冷的水中。用乙酸乙酯萃取(3次，各20ml)后，有机相用氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩，得到690mg的纯化合物96。
TLC∶Rf=0.25，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/甲醇。制备例84O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(97)将纯化合物96(690mg,1.03mmol)溶解于80％乙酸(7.3ml)中，在40℃下，将其搅拌20小时。真空浓缩混合物，与甲苯进行共蒸发。用硅胶层析柱进行处理，8/1/1二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇洗脱，得到569mg的化合物97。
TLC∶Rf=0.40，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例85O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(98)将1-苯甲酰氧基-1H-苯并三唑(227mg,1.05mmol)和三乙胺(1.15mmol)加至化合物97(560mg,0.96mmol)的二氯甲烷溶液中，将混合物在室温下搅拌20小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，用10％碳酸氢钠溶液和水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至干。产物用硅胶层析柱纯化，得到600mg化合物98。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇制备例86O-(2,3-二-O-苯甲酰基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(99)按照制备化合物94的过程，将化合物98转化成化合物99。偶联反应在5℃下进行。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，2/8v/v庚烷/乙酸乙酯。
反应路线24-七糖104的合成
制备例87O-(4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(100)按照制备化合物95相同的过程，将化合物99转化成化合物100。
TLC∶Rf=0.35，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例88O-(4,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(101)按照制备化合物96相同的过程，将化合物100转化成化合物101。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例89O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(102)按照制备化合物97相同的过程，将化合物101转化成化合物102。
TLC∶Rf=0.35，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例90O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(103)
按照制备化合物98相同的过程，将化合物102转化成化合物103。
TLC∶Rf=0.40，硅胶，7.0/1.5/1.5v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例91O-(2,3-二-O-苯甲酰基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(104)按照制备化合物99相同的过程，将化合物103与二糖2进行偶联反应。
TLC∶Rf=0.40，硅胶，7.0/1.5/1.5v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。
反应路线25-寡糖109的合成
制备例92O-(4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(105)按照制备化合物95相同的过程，将化合物104转化成化合物105。
TLC∶Rf=0.60，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例93O-(4,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(106)按照制备化合物96相同的过程，将化合物105转化成化合物106。
TLC∶Rf=0.70，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例94O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(107)在40℃下，将化合物106(5.05g,2.0mmol)的80％乙酸(50ml)溶液搅拌20小时。将混合物进行真空浓缩，与甲苯进行共蒸发。将残余物溶解于乙酸乙酯中，用水进行萃取，水相再用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至干，得到2.68g的化合物107。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例95O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(108)按照制备化合物98相同的过程，将化合物107转化成化合物108。
TLC∶Rf=0.80，硅胶，7.5/1.5/1.5v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例96O-(2,3-二-O-苯甲酰基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(109)在氩气氛下，将硫代糖苷92(1.97g,2.0mmol,3.5当量)、七糖108(0.86g,0.57mmol)和粉状4埃分子筛在甲苯(22ml)中的混合物搅拌15分钟。然后在室温下向其中滴加新制备的N-碘代琥珀酰胺(496mg,2.2mmol)和三氟甲磺酸(0.808mmol)在1/1v/v二氯甲烷/二噁烷(12ml)中的溶液。10分钟后，对反应混合物进行过滤，用二氯甲烷稀释，萃取，依次用10％硫代硫酸钠溶液、10％碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，然后进行真空浓缩。粗产物用硅胶层析柱进行纯化处理，得到1.09g化合物109。
TLC∶Rf=0.80，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。
反应路线26-寡糖115的合成
制备例97O-(4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)]2-(1→4)-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(110)按照制备化合物95相同的过程，将化合物109转化成化合物110。
TLC∶Rf=0.25，硅胶，5.0/2.5/2.5v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例98O-(4,6-O-亚苄基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(111)按照制备化合物96相同的过程，将化合物110转化成化合物111。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例99O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(112)按照制备化合物97相同的过程，将化合物111转化成化合物112。
TLC∶Rf=0.20，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例100O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(113)按照制备化合物98相同的过程，将化合物112转化成化合物113。
TLC∶Rf=0.20，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例101O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1,6-脱水-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(114)将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(48mg,0.25mmol)、乙酰丙酸(29mg,0.25mmol)和二甲氨基吡啶(4mg,0.033mmol)加至化合物113(320mg,0.167mmol)的二噁烷(1ml)溶液中。在氮气氛下，将反应混合物搅拌3小时。加入二氯甲烷和水，萃取后，有机相用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。粗产物用硅胶层析柱纯化，得到312mg的化合物114。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例102O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1,6-二-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-α,β-D-吡喃葡萄糖(115)将在乙酸酐(2.25ml)、乙酸(50μl)和三氟乙酸(0.14ml)混合物中的化合物114(312mg,0.155mmol)的溶液在室温下搅拌4小时。加入甲苯(10ml)后，将混合物浓缩，并与甲苯进行共蒸发(3次，10ml)。经硅胶层析柱纯化后，得到324mg的化合物115。
TLC∶Rf=0.65，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇反应路线27-寡糖117的合成
制备例103O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α,β-D-吡喃葡萄糖(116)将化合物115(324mg,0.153mmol)和吗啉(22.3μl,0.256mmol)的甲苯(2ml)溶液在35℃下搅拌4小时。然后，再加入吗啉(22.3μl)，再将反应混合物在35℃下搅拌20小时。用水迅速将混合物冷却。在用二氯甲烷萃取后，有机相依次用0.1N盐酸和水洗涤，用硅胶层析柱纯化，分离到280mg的化合物116。
TLC∶Rf=0.45，硅胶，6/2/2v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。制备例104O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α,β-D-吡喃葡萄糖三氯亚氨代乙酸酯(117)将三氯乙腈(39μl,0.39μl)和碳酸铯(4.7mg)加至化合物116(138mg,0.066mmol)的二氯甲烷(1.5ml)溶液中。在搅拌2小时后，将混合物过滤，浓缩，将残余物在硅胶层析柱上进行纯化，得到152mg的亚氨酸酯117。
TLC∶Rf=0.35，硅胶，8/1/1v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇。
反应路线28-二糖128的合成
制备例1052-O-苄基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(119)将化合物118(60g)(商品)与苄基溴(50.5ml)溶解于二甲基甲酰胺(858ml)中。在冷却至10℃后，滴加入20％氢氧化钠水溶液。搅拌1小时后，将温度升至20℃，再将混合物搅拌20小时。然后，将溶液倒入冰-水与甲苯的混合物中，萃取。将有机相浓缩，粗产物用结晶法进行纯化，得到30.0g的化合物119。
TLC∶Rf=0.60，硅胶，7/3v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例1062-O-苄基-4,6-O-亚苄基-3-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(120)将化合物119(26.4g)溶解于二甲基甲酰胺(211ml)中，并冷却至5℃。在氮气氛下，加入氢化钠(2.5g)。然后，滴加入4-甲氧基苄基氯(13.3g)，将混合物在室温下搅拌1小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用水洗涤两次，浓缩，得到40.7g的纯化合物120。
TLC∶Rf=0.80，硅胶，7/3v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例1072-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖甲苷(121)将化合物120(34.9g)溶解于60％乙酸水溶液中。将混合物在60℃下搅拌4小时。用甲苯稀释混合物，浓缩。用硅胶层析柱进行纯化，得到26.4g的化合物121。
TLC∶Rf=0.07，硅胶，7/3v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例1082-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(122)在氮气氛下，将化合物121(26.4g)溶解于二氯甲烷(263ml)中。在室温下，向其中加入四氟硼酸三甲基氧鎓(11.6g)和2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(17.4g)。4小时后，将混合物倒入冰-水中，用二氯甲烷萃取。有机相用碳酸氢钠洗涤，浓缩。粗产物用硅胶层析柱进行纯化，得到18.5g的化合物122。
TLC∶Rf=0.25，硅胶，7/3v/v甲苯/乙酸乙酯制备例1092,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-1-硫代-α-L-吡喃艾杜糖乙苷(124)将化合物123(1,2,4,6-四-O-乙酰基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖)(Jaurand等，Bio.Med.Chem.Lett.1992,2,897-900)(48.4g)溶解于甲苯(175ml)中。在氮气氛下，加入乙硫醇(20ml)和三氟化硼乙醚合物的甲苯(134ml)溶液。搅拌1小时后，加入碳酸氢钠水溶液(400ml)，将混合物再搅拌1小时。然后，将混合物倒入乙酸乙酯中。有机相用水洗涤两次，浓缩。用硅胶层析柱进行纯化，得到29.6g的化合物124。
TLC∶Rf=0.45，硅胶，6/4v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例110O-(2,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(125)在氮气氛下，将化合物122(17.5g)与化合物124(28.2g)溶解于甲苯(525ml)中。在加入4埃分子筛后，将反应混合物冷却至-20℃。在连续氮气流下，向其中滴加入新制备的1/1v/v二氯甲烷/二噁烷中的0.1MN-碘代琥珀酰胺(17.4g)和三氟甲磺酸(1.38mol)的溶液。10分钟后，对红色反应混合物进行过滤，依次用硫代硫酸钠溶液、碳酸氢钠溶液洗涤。有机相经真空浓缩，分离得到30.0g的化合物125。
TLC∶Rf=0.45，硅胶，8/2v/v二氯甲烷/乙酸乙酯。制备例111O-(3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(126)将化合物125(30.0g)溶解于460ml的1/1v/v甲醇/二噁烷中，加入叔丁醇钾。15分钟后，将反应混合物用Dowex50WX8H+树脂中和，真空浓缩。用硅胶层析柱纯化后，得到17.4g的化合物126。
TLC∶Rf=0.25，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/甲醇。制备例112O-(4,6-O-异亚丙基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基-(1→4)-2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(127)在氮气氛下，将化合物126(17.4g)溶解于二甲基甲酰胺(77ml)中。加入2,2-二甲氧基丙烷(26ml)和对甲苯-磺酸，然后将混合物搅拌30分钟。用碳酸氢钠水溶液稀释混合物，再用乙酸乙酯萃取，在蒸出溶剂后，得到19.7g的化合物127。
TLC∶Rf=0.45，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/甲醇。制备例113O-(4,6-O-异亚丙基-2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-3-O-甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(128)将化合物127(18.5g)溶解于二甲基甲酰胺(24.4ml)中，并将其冷却至0℃。在氮气氛下，加入氢化钠(1.47g；60％油分散液)和碘甲烷(2.36ml)。1小时后，用甲醇破坏过量的氢化钠，混合物用二氯甲烷萃取，浓缩，得到20.0g的化合物128。
TLC∶Rf=0.85，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/甲醇。
反应路线29-二糖138的合成
制备例114O-(4,6-O-异亚丙基-2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(129)将化合物128(18.4g)溶解于二氯甲烷(838ml)和水(168ml)中。加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(7.1g)，将混合物在4℃下搅拌18小时。将混合物倒入碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取。有机相浓缩后，得到12.7g的化合物129。
TLC∶Rf=0.40，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/甲醇。制备例115O-(4,6-O-异亚丙基-2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(130)将化合物129(10.5g)溶解于无水二甲基甲酰胺(178ml)中，然后在氮气氛下冷却至0℃。加入氢化钠(1.91g；60％油分散液)，随后再滴加苄基溴(3.3ml)。30分钟后，反应完成，过量的氢化钠用甲醇破坏。加入水，将混合物用乙酸乙酯萃取两次。蒸发出溶剂后，得到13.6g的化合物130。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，1/1v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例116O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(131)将化合物130溶解于77/33(v/v)乙酸/水中，搅拌过夜。将混合物与甲苯共蒸发两次，用硅胶层析柱纯化，得到11.5g的化合物13l。
TLC∶Rf=0.09，硅胶，1/1v/v甲苯/乙酸乙酯TLC∶Rf=0.68，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例117O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(132)
将2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧(33mg)、碳酸氢钠溶液(40ml)、溴化钾(218mg)和四丁基氯化铵(289mg)加至化合物131(11.6g)的二氯甲烷(60ml)溶液中。将混合物冷却至0℃，在15分钟内再加入饱和氯化钠溶液(44ml)、饱和碳酸氢钠溶液(21.8ml)和次氯酸钠(1.3M,50ml)的混合物。在搅拌1小时后，混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取(3次)。有机相用氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至干，得到13.4g的粗化合物132。
TLC∶Rf=0.14，硅胶，9/1v/v二氯甲烷/甲醇。制备例118O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(133)在氮气氛下，将化合物132溶解于二甲基甲酰胺(110ml)中。加入碳酸氢钾(6.7g)和苄基溴(10.7ml)，将混合物搅拌90分钟。加入乙酸乙酯和水，萃取后，浓缩有机相。用硅胶层析柱纯化，得到9.9g的化合物133。
TLC∶Rf=0.43，硅胶，4/6v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例119O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(134)在氮气氛下，将化合物133(9.9g)溶解于300ml的甲醇中并加热回流。滴加入1M的甲醇钠的甲醇(65.2ml)溶液，将混合物搅拌并加热回流3小时。再将混合物冷却至室温，加入1N氢氧化钠(22.2ml)，将反应混合物搅拌90分钟。将反应混合物用Dowex50WX8H+树脂中和，过滤，将混合物浓缩。将粗产物溶解于二甲基甲酰胺(192ml)中，在氮气氛下加入分子筛。再加入碳酸氢钾(3.2g)和苄基溴(4.8ml)，将混合物搅拌5小时。在加入乙酸乙酯和水后，进行萃取，将两相分离，将有机相浓缩。粗产物用硅胶层析柱纯化，得到6.19g的化合物134和1.88g的原料化合物133。
TLC∶Rf=0.55，硅胶，4/6v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例120O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(135)将化合物134(6.2g)溶解于40ml二噁烷中。加入乙酰丙酸(2.1g)、二氯己基碳化二亚胺(3.75g)和4-二甲氨基吡啶(0.2g)，在氮气氛下，将混合物搅拌2小时。加入乙醚(95ml)，滤出沉淀。将滤液用硫酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。由乙醚/庚烷进行结晶，得到6.2g的化合物135。
TLC∶Rf=0.26，硅胶，95/5v/v二氯甲烷/丙酮。制备例121O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-1,3-二-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α,β-D-吡喃葡萄糖(136)在氮气氛下，将化合物135(6.1g)溶解于乙酸酐(256ml)中，并冷却至-20℃。在30分钟内，滴加入硫酸(4.9ml)在乙酸酐(49ml)中的混合物。60分钟后，加入乙酸钠，直到混合物的pH值呈中性。然后，加入乙酸乙酯和水，浓缩有机相。用硅胶层析柱纯化，得到4.2g的化合物136。
TLC∶Rf=0.24，硅胶，8/2v/v二氯甲烷/乙酸乙酯。制备例122O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α,β-D-吡喃葡萄糖(137)将化合物136(4.2g)溶解于四氢呋喃(42ml)中，加入哌啶(4.1ml)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，混合物用0.5N盐酸洗涤。将有机相浓缩，残余物用硅胶层析柱纯化，得到3.2g的化合物137。
TLC∶Rf=0.33，硅胶，1/1v/v二氯甲烷/乙酸乙酯。制备例123O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖三氯亚氨代乙酸酯(138)在氮气氛下，将化合物137(1.59g)溶解于无水二氯甲烷中。加入三氯乙腈(1.1ml)和碳酸铯(72mg)，将混合物搅拌1小时。滤出碳酸铯，将滤液浓缩。用硅胶层析柱纯化，得到1.57g的化合物138。
TLC∶Rf=0.60，硅胶，3/7v/v甲苯/乙酸乙酯。
反应路线30-四糖140合成
制备例124O-(4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(139)在氮气氛下，使化合物133(300mg)与化合物138(455.6mg)的混合物与甲苯共蒸发，并溶解于二氯甲烷(6ml)中。在加入4埃分子筛后，将混合物冷却至-20℃。搅拌20分钟后，加入三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(15mol％，相对于化合物138)。10分钟后，用碳酸氢钠水溶液使混合物停止反应。滤出分子筛后，滤液用二氯甲烷稀释，用水洗涤，浓缩，用硅胶层析柱纯化，得到560mg的化合物139。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，3/7v/v甲苯/乙酸乙酯。制备例125O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(140)将化合物139(532.6mg)溶解于吡啶(1.9ml)中，并室温下加入乙酸(2.4ml)和水合肼(0.3ml)在吡啶(1.9ml)中的混合物中。搅拌9分钟后，加入二氯甲烷和水。分离出有机相，依次用0.1N盐酸、碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将有机相浓缩，用硅胶层析柱纯化，得到451mg的化合物140。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，3/7v/v甲苯/乙酸乙酯。
反应路线31-多糖142的合成
制备例126O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(141)将化合物117(144mg,0.064mmol)与化合物140(76g,0.058mmol)的混合物与甲苯进行共蒸发，并溶解于1/2v/v二氯甲烷/乙醚(3.0ml)中。在氮气氛下，加入4埃分子筛(140mg)，将混合物冷却至0℃。再加入四丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.1M二氯甲烷溶液，128μl),15分钟后，用碳酸氢钠溶液使混合物停止反应。用水和二氯甲烷萃取后，将有机相干燥，浓缩。产物先在Sephadex LH上进行层析处理(1/1v/v二氯甲烷/甲醇)，再用硅胶柱层析处理，得到124mg的化合物141，其α/β之比为8/2。
TLC∶Rf=0.60，硅胶，1/1v/v甲苯/丙酮。制备例127O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(142)按照制备化合物140相同的过程，将化合物141转化成化合物142。
化合物142是以8/2α/β混合物分离出来的。TLC∶Rf=0.45，硅胶，1/1v/v甲苯/丙酮。
反应路线32-三糖147的合成
制备例128O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1,2,3,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖(144)在155℃下，将麦芽三糖(7g,13.9mmol)(商品)分批加至乙酸钠(7g,85mmol)的乙酸酐(70ml)悬浮液中。15分钟后，将澄清的溶液冷却，再用冰-水(700ml)使反应停止。用乙酸乙酯萃取后，有机相用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到13.1g的化合物144。
TLC∶Rf=0.53，硅胶，7/3v/v二氯甲烷/乙酸乙酯。制备例129O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(145)将化合物144(13g,13.5mmol)溶解于甲苯(80ml)中。在氮气氛下，加入乙硫醇(1.97ml,26.9mmol)和三氟化硼乙醚合物(13.7ml,1M甲苯溶液)。搅拌60小时后，将混合物用水和二氯甲烷稀释。萃取后，有机相用10％碳酸氢钠溶液和水洗涤，过滤，浓缩。粗产物用硅胶层析柱进行纯化，得到8.6g的化合物145。
TLC∶Rf=0.60，硅胶，7/3v/v二氯甲烷/乙酸乙酯。制备例130O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(146)按照制备化合物95相同的过程，将化合物145转化成化合物145。
TLC∶Rf=0.80，硅胶，13/7/1.6/4v/v/v/v乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水。制备例131O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2,3,6-三-O-苯甲酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡糖乙苷(147)按照制备化合物92相同的过程，将化合物146转化成化合物147。
TLC∶Rf=0.50，硅胶，9/1v/v甲苯/乙酸乙酯。
反应路线33-多糖150的合成
制备例132O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-(1→4)-2,3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(148)按照对化合物109所述的过程，使硫代糖苷147(105mg,0.066mmol)与受体142(55mg,0.017mmol)(α/β8/2)进行偶联反应。产物先在Sephadex LH上进行层析纯化(1/1二氯甲烷/甲醇)，再用硅胶柱层析处理(9/0.5/0.5v/v/v乙醚/乙酸乙酯/乙醇)，得到49mg的化合物148。
TLC∶Rf=0.30，硅胶，85/7.5/7.5v/v/v乙醚/乙酸乙酯/乙醇。制备例133O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰基-2,3-二-O-甲基-O-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(149)在氮气氛下，在10％钯/炭(相对于化合物148,90％w/w)存在下，搅拌化合物148(47mg,0.01mmol)的乙酸乙酯(10ml)溶液3小时，过滤。将滤液浓缩，得到42mg的化合物149。
TLC∶Rf=0.35，硅胶，20/7/1.6/4v/v/v/v乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水。制备例134O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(2,3-二-O-甲基-O-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖甲苷(150)将甲醇(0.022ml)与0.66N氢氧化钠溶液(0.66ml)的混合物加至化合物149(41mg,0.01mmol)中，在室温下搅拌20小时。混合物用水稀释，再用0.5N的盐酸溶液酸化，以使pH值为6.5。浓缩后，纯产物采用9/1v/v水/乙腈在Sephadex G-25柱上进行脱盐。将十六糖馏分合并，冷冻干燥，得到26mg的化合物150，为无定形白色粉末。
TLC∶Rf=0.35，硅胶，8/7/1.6/4v/v/v/v乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水。制备例1356-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-1,2-O-异亚丙基-3-O-甲基-α-D-呋喃葡萄糖(152)将二醇151(10g,42.7mmol)溶入无水二氯甲烷(100ml)中，加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(7.1g,47.3mmol)和咪唑(5.8g,85.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌。2小时后，混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，残余物用硅胶层析柱纯化(1/9v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到所需产物152(11.9g,80％)，为糖浆形式。D-34°(c1.9,CHCl3)制备例1366-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-1,2-O-异亚丙基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-α-D-呋喃葡萄糖(154)在-78℃下，向无水二氯甲烷(40ml)中加入草酰氯(3.2ml,36.8mmol)和二甲亚砜(5.2ml,73.4mmol)，将混合物搅拌30分钟。再加入化合物152(6.4g,18.4mmol)，搅拌1小时。再加入三乙胺(15.3ml,110.0mmol),30分钟后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，经标准处理后，得到5-酮糖化合物(153)，其可直接用于下一步反应。将粗产物酮153溶入无水四氢呋喃(100ml)中，并在0℃下加入1M乙烯基溴化镁的四氢呋喃溶液(28ml,27.6mmol)。1小时后，将反应混合物用氯化铵稀释，用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，将残余物用硅胶层析柱纯化(1/9v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到所需化合物154(70％,4.8g)，为糖浆形式。D-40°(c1.3,CHCl3)元素分析计算值C,57.72；H,9.15实测值C,57.77；H,9.23。制备例1371,2,4,6-四-O-乙酰基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃葡萄糖(156)将化合物154(3.5g,9.4mmol)溶入水(50ml)中；向其中加入IR-120树脂(1g)，将混合物在80℃下加热6小时。滤出树脂，将滤液浓缩。粗产物155用乙酸酐(12ml)和吡啶(13ml)进行乙酰化。过量的乙酸酐用甲醇破坏，将溶液浓缩。残余物用水和二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，浓缩，再用硅胶层析柱纯化(3/2v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到四乙酸酯化合物156，为固体形式(75％,2.7g),m.p.50℃。D-84°(c1.6,CHCl3)元素分析计算值C,52.47；H,6.19实测值C,52.51；H,6.19。
Cl-MS:406(M+NH4),389(M+1)。制备例1382,3,6-三-O-苄基-4-O-(2,4,6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃葡糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(158)将化合物156(1.6g,4.1mmol)和化合物157(2.1g,4.5mmol)(P.J.Garegg和H.Hultberg，糖研究(Carbohydr.Res.)1981,93,C10)溶解于无水二氯甲烷(50ml)中，加入分子筛(4.0g)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后，在-78℃下加入TMSOTf(0.95ml,5.2mmol)。让反应混合物缓慢升温至室温。2小时后，将反应混合物用三乙胺中和，通过硅藻土过滤；滤液用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，残余物用硅胶层析柱纯化(4/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到所需化合物158(2.77g,85％)，为固体。m.p.47℃。D-36°(c0.6,CHCl3)元素分析计算值C,65.14；H,6.61实测值C,65.09；H,6.70。制备例1392,3,6-O-三-O-苄基-4-O-(4,6-O-异亚丙基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃葡糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(160)将化合物158(2.7g,3.4mmol)溶解于甲醇(40ml)中。在0℃下，加入钠(催化量)，将混合物在室温下搅拌3小时。浓缩溶液，将残余物159溶入无水丙酮(40ml)中，加入2,2-二甲氧基丙烷(2ml)和对甲苯磺酸(催化量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸出溶剂，再将残余物回收入氯仿中，用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，再将残余物用硅胶层析柱纯化(1/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到4’,6’-异亚丙基-O-衍生物160(1.7g,70％)，为固体。m.p.55℃。D+13°(c0.8,CHCl3)元素分析计算值C,67.97；H,7.13实测值C,67.87；H,7.16。
Cl-MS:707(M+1),724(M+NH4)。制备例1402,3,6-三-O-苄基-4-O-(4,6-O-异亚丙基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃甘露糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(162)在-78℃下，将无水二氯甲烷(10ml)中的草酰氯(0.35ml,4.0mmol)和无水DMSO(0.57ml,8.0mmol)搅拌30分钟。将无水二氯甲烷(10ml)中的化合物160(1.4g,2.0mmol)加至溶液中，将混合物搅拌45分钟。加入无水三乙胺(1.7ml,12.0mmol)将反应混合物中和，再用二氯甲烷稀释。用水洗涤后，有机相用硫酸镁干燥，浓缩，残余物161可直接用于下一步反应而无需纯化。将酮161回收入无水四氢呋喃(15ml)中，并在-78℃下加入1N三甲基硼氢化锂的四氢呋喃溶液(4ml,4.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，加入5％氢氧化钠(2ml)和过氧化氢(1ml)。将溶剂蒸出，残余物回收入乙酸乙酯中，用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，残余物用层析法纯化(2/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到化合物162(1.0g,70％)。D-11°(c0.5,CHCl3)Cl-MS:724(M+18),707(M+1)。制备例1412,3,6-三-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃甘露糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(164)将化合物162(940mg,1.3mmol)溶解于吡啶(3ml)，加入乙酸酐(0.3ml)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。蒸出过量的吡啶和乙酸酐，残余物163可直接用于进行异亚丙基的脱保护，所述脱保护过程采用80％乙酸(5ml)，60℃下进行2小时。蒸出过量的乙酸，将残余物用硅胶层析柱纯化(4/lv/v乙酸乙酯/环己烷)，得到化合物164(660mg,70％)，为固体。m.p.53℃。D-10°(c0.8,CHCl3)Cl-MS:709(M+1),726(M+18)。制备例1422,3,6-三-O-苄基-4-(2-O-乙酰基-3-O-甲基-6-O-甲苯磺酰基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃甘露糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(165)将化合物164(600mg,0.9mmol)溶解于吡啶(3ml)，加入甲苯磺酰氯(240mg,1.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。蒸出溶剂，残余物用氯仿稀释，用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，将残余物用硅胶层析柱纯化(1/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到甲苯磺酰基化合物165(297mg,80％)，为糖浆。D-26°(c0.8,CHCl3)。制备例1432,3,6-三-O-苄基-4-(2,6-脱水-3-O-甲基-5-C-乙烯基-β-D-吡喃甘露糖基)-α-D-吡喃葡糖甲苷(166)将化合物165(550mg,0.6mmol)溶在乙醇(3ml)中，加入0.1N氢氧化钠的乙醇溶液(5ml)。将反应混合物在70℃下搅拌3小时，然后用IR-120树脂(H+型)中和，通过硅藻土过滤。浓缩后，将残余物用硅胶层析柱纯化(1/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到化合物166(292mg,70％)，为糖浆。D+13°(c0.5,CHCl3)。
Cl-MS:666(M+18)。制备例1442,3,6-三-O-苄基-4-(3-O-甲基-2-O-5-C-亚甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄酯)-α-D-吡喃葡糖甲苷(167)将化合物166(260mg,0.4mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，将溶液在-78℃下搅拌，鼓泡通入臭氧30秒。溶液的颜色变成浅黄色。向溶液中加入二甲基硫醚，然后，反应混合物用水洗涤。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，然后不经纯化直接用于下一步反应中。将粗产物醛回收在叔丁醇(16ml)中，加入2-甲基-2-丁烯(5ml)和水(16ml)。再向混合物中依次加入NaH2PO4(700mg)和NaClO2(700mg)。在室温下剧烈搅拌该悬浮液过夜，再用水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机相用硫酸镁干燥，浓缩，然后不经纯化直接用于下一步反应中。将粗产物酸回收在二甲基甲酰胺(25ml)中，加入四丁基碘化铵(0.7g,2.0mmol)、碳酸氢钾(0.25g,2.5mmol)和苄基溴(0.250ml,2.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。再用水和乙醚对反应混合物进行萃取。醚相用硫酸镁干燥，浓缩，残余物用硅胶层析柱纯化(2/1v/v乙酸乙酯/环己烷)，得到衍生物167(236mg,80％)，为糖浆。
Cl-MS:774(M+18)。
反应路线34可用于合成其中L-艾杜糖醛酸构型锁定的五糖Pe的合成子的制备1．制备供体单糖
75％，两步反应路线34(续)2．二糖的制备和前几步转化
反应路线34(续)3．双环体系的构建
实施例1O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]6-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐(168)按照方法5处理化合物31，得到化合物168(80％，三步)。[α]D+41(c=0.8，水)；ESIMS，负模式单一同位素质量=7133.26；化学质量=7138.90；实测质量=7137.26±0.0原子量单位。主要异头质子的1HNMR(D2O)δ:5.71；5.48；5.46；5.44；5.17；5.08；4.81；4.78；4.67ppm。
重复相同的过程得到化合物169和170。
表Ⅰ
<
实施例4O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]15-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐(171)按照方法5处理化合物51(55mg,10.5mmol)，在冷冻干燥后，得到硫酸化化合物187(50mg,77％，以三步计)。[α]D+107(c=0.52，水)；ESIMS,正模式单一同位素质量=6194.16化学质量=6198.83；实测质量=6195.33±1.79原子量单位。主要异头质子的1H NMR(D2O)δ:5.71；5.67；5.48；5.43；5.17；5.10；4.68ppm。
重复相同的过程得到化合物172和173。
表Ⅱ
实施例7O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐(174)按照方法5处理化合物75，得到化合物174(84％，以三步计)。[α]D+62(c=0.46，水)；ESIMS，正模式单一同位素质量=4966.39；化学质量=4970.04；实测质量=4969.63±0.78原子量单位。主要异头质子的1H NMR(D2O)δ:5.69；5.63；5.57；5.46；5.44；5.41；5.15；5.06；4.79；4.66；4.62；4.41ppm。
按照实施例7所述过程并采用适宜的中间体，制备在以下表Ⅲ中所述的实施例8-12的化合物。
表Ⅲ
实施例13O-(2,3,4,6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(6-O-甲基-2,3-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-6-O-甲基-2,3-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷(180)将全保护的十六糖150(26mg,0.0084mmol)溶解于二甲基甲酰胺(0.87ml)中。在氮气氛下，加入三氧化硫/三乙胺复合物(125mg,0.67mmol,80当量)，将混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物冷却至0℃，加入碳酸氢钠水溶液(227mg,2.6mmol)。将混合物浓缩至小体积，将其置于Sephadex G-25柱上，用9/1v/v水/乙腈洗脱。分离出适宜的馏分，浓缩至小体积，置于水中Dowex XW4 Na+离子交换柱上，将洗脱液冷冻干燥，得到37mg的化合物151，为白色粉末。[a]20D=+67.6(c=1，水)；MSESI，分子量为4370.6(H+型)，C128H222O113S16(理论分子量为4370.14)。
NMR；主要异头质子的位移(ppm)单元1:5.17；单元2:5.03；单元3:5.41；单元4:4.42；单元55.49；单元6:4.66；单元7、9和11:5.67；单元8、10和12:4.46；单元13:5.61；单元14:4.94；单元15:5.59；单元16:5.69。
反应路线35-多糖180的结构(实施例13)
权利要求
1．含抗凝血酶Ⅲ结合区的合成多糖及其盐，特别是其可药用盐，所述结合区由共携带两个羧酸功能基团和至少4个磺基的5个单糖的序列组成，该结合区在其非还原末端与凝血酶结合区直接连接，所述凝血酶结合区含有由选自己糖、戊糖或脱氧糖的10-25个单糖组成的序列，其中，所有羟基均各自独立地被(C1-C6)烷基醚化或以磺基形式被酯化。
2．权利要求1的多糖，其为下式表示的多糖
其中波浪状的线表示在吡喃糖环平面之下或之上的键，
表示含n个相同或不同单糖单元的多糖Po，所述多糖Po经其异头碳与Pe相连，
是选自己糖、戊糖和相应脱氧糖的吡喃糖结构单糖单元的图示，所述单糖单元经其异头碳与另一单糖单元相连，并且所述单糖单元的羟基被相同或不同的基因-X取代，基团X选自(C1-C6)烷基和磺基，-n是10-25的整数，-Pe代表一个五糖结构
其中-R1代表(C1-C6)烷基或磺基，-R1a代表R1，或与其所连接的氧原子以及同一环上带有羧基的碳原子一起形成如下基团C-CH2-O-R代表(C1-C6)烷基，-W代表氧原子或亚甲基，或其一种盐，特别是可药用盐。
3．权利要求2的多糖盐，其中的阳离选自碱金属阳离子，尤其是钠和钾。
4．权利要求2和3的多糖和其盐，尤其是其可药用盐，其具有下式
其中
表示多糖Po的特定家族，所述多糖Po经其异头碳与(Ⅰ)所定义的Pe相连，
如(Ⅰ)下所定义，-OX如(Ⅰ)下所定义，对于相同的单糖，OX可以相同或不同，-[]m中所含的单糖形成重复m次的二糖，[]t中所含的单糖形成重复t次的二糖，-m是1-8,t是0-5,p是0-1，应理解5≤m+t≤12。
5．权利要求2或3的多糖和其盐，尤其是其可药用盐，其具有下式
其中
代表多糖Po的特定家族，所述多糖Po经其异头碳与(Ⅰ)所定义的Pe相连，
如(Ⅰ)所定义，-OX如(Ⅰ)下所定义，对于相同的单糖，OX可以相同或不同，-[]m’中所含的单糖重复m’次，[]t’中所含的单糖重复t’次，[]p’中所含的单糖重复p’次，-m’是1-5，t’是0-24,p’是0-24，应理解10≤m’+t’≤25。
6．权利要求2或3的盐以及它们对应的酸，其阴离子对应于下式
其中t代表5、6或7，阳离子是可药用单价阳离子。
7．权利要求2或3的盐以及它们对应的酸，其阴离子对应于下式
其中t代表5、6或7，阳离子是可药用单价阳离子。
8．权利要求2或3的盐以及它们对应的酸，其阴离子对应于下式
其中m代表1、2或3并且t代表2、3、4或5，阳离子是可药用单价阳离子。
9．选自下组的多糖·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]5-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]6-O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-O-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]11-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]13-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(2,3-二-O-甲基-4,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]15-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]2-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]4-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐·O-(3-O-甲基-2,4,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2,6-二-O-磺基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2,3,6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]5-O-(2,3-二-O-甲基-6-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2,3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸)-(1→4)-O-(2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-(2,3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2,3,6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖甲苷，钠盐。
10．制备式(Ⅰ)化合物的方法，其中，在第一步中，合成所需多糖(Ⅰ)的完全保护的前体，所述前体含有Pe区的保护的前体，所述Pe区在其非还原末端连接着一个硫酸酯化的多糖Po的保护前体，在第二步中，引入和/或解蔽带有负电荷的基团。
11．下式的化合物，
其中T1和Tn可以相同或不同，表示临时的、半永久性的或永久性的取代基，Z是羟基功能基的保护基。
12．下式的化合物，
其中T1和Tn可以相同或不同，表示临时的、半永久性的或永久性的取代基，Z是羟基功能基的保护基。
13．一种药物组合物，其含有权利要求1-9任一项的多糖或盐作为活性成分，所述活性成分可以是与可药用碱形成的盐形式的或者酸形式的，所述活性成分与惰性的非毒性可药用赋形剂相结合或与它们形成混合物。
14．权利要求13的药物组合物，其呈剂量单位形式，其中的活性成分与至少一种药物赋形剂相混合。
15．权利要求14的组合物，其中每剂量单位含0.1-100mg的活性成分。
16．权利要求15的组合物，其中每剂量单位含0.5-50mg的活性成分。
17．权利要求1-9的多糖或盐在制备可用于血凝障碍引起的疾病的药物中的用途。
全文摘要
公开了一种含抗凝血酶Ⅲ结合区的合成多糖及其盐,特别是其可药用盐,所述结合区由共携带两个羧酸功能基团和至少4个磺基的5个单糖的序列组成,该结合区在其非还原末端与凝血酶结合区直接相连,所述凝血酶结合区含有由选自己糖、戊糖或脱氧糖的10—25个单糖组成的序列,其中,所有羟基均各自独立地被(C
文档编号C08B37/00GK1228785SQ9719761
公开日1999年9月15日 申请日期1997年7月18日 优先权日1996年7月19日
发明者P·A·德里古咨, P·杜查索, J-M·赫伯特, M·派帝托, C·范博克尔, P·格鲁坦辉斯, J·巴斯坦, C·德里夫-特罗普 申请人:萨诺费公司, 阿克佐诺贝尔公司