微生物多糖,其制备方法和含有它的药物组合物的制作方法

专利名称：：微生物多糖,其制备方法和含有它的药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种作为白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗剂的微生物多糖、其制备方法、含有它的药物组合物和它在制备用于治疗或预防可通过抑制IL-1活性而得以缓解的疾病的药物中的用途，还涉及能够产生所述微生物多糖的放线菌139。迄今为止，已发现植物、动物和微生物中存在数百种碳水聚合物，它们在机体生命过程中起着各种各样的作用，如能量储存，结构成份，作为调控和信息系统等。由于微生物多糖具有显著亲水性，因此其商业应用前景广阔。近20年，国内外各类多糖药物不断进入临床，用于抗感染、抗肿瘤、抗风湿、抗消化道溃疡和增进免疫功能等，近年在抗血脂、抗衰老方面也有发展。目前如香菇多糖、灵芝多糖、银耳多糖、猪苓多糖、虫草多糖等均已用于临床，但对其糖链基本结构及与体内相应作用机理研究较少。YoshidazuMorishita等，BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications，1991；176(3)949-957报道，从微生物Aureobasidium产物中发现了多糖HS-142-1，它是心钠素的受体拮抗剂，并对其化学性质进行了较深入研究，该多糖是第一个选择性作用于心钠素受体的非肽类拮抗剂。目前还没有发现高分子量多糖可以作为IL-1受体拮抗剂。IL-1是一种重要的细胞因子，具有广泛的生物学活性，几乎对各种类型的细胞都有影响，同时与其它细胞因子和小分子介质相互联系。它不仅参与多种生理过程，如免疫活性细胞的调节、造血、神经内分泌及抗肿瘤等，同时与许多疾病的病理变化有关。例如，本领域已知IL-1参与下列多种病理变化过程炎性疾病、败血性休克、风湿性关节炎、炎性肠疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰岛素依赖性糖尿病、动脉粥样硬化、发热、病理性移植排斥反应、移植物抗宿主疾病、牙周组织病、自身免疫性甲状腺炎症、酒精中毒性肝炎、急性疾病血清蛋白改变、紫外线照射致皮肤损伤、嗜睡、厌食、通风、牛皮癣、哮喘及骨质疏松等。在这些疾病过程中降低IL-1的作用已成为一种治疗这些疾病的潜在方法。因而迫切需要各种来源的IL-1受体拮抗剂。本发明的发明人出人意外地发现，从放线菌菌株139的培养物中分离的多种高分子量多糖具有显著的IL-1受体拮抗活性，体内研究表明多糖139A具有抗炎作用。因此，本发明涉及一种分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物，其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105；其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。本发明还涉及一种分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物的制备方法，其特征在于将放线菌139在适合其生长的条件下培养一段时间，然后从培养物中分离所述微生物多糖或其盐，或进一步水解所分离的多糖，或进一步将所分离的游离酸转化为盐或将其盐转化为游离酸形式。本发明另一方面涉及含有上述微生物多糖或其可药用盐或可按上述方法获得的微生物多糖或其可药用盐和可药用载体的药物组合物。本发明也涉及上述微生物多糖或其可药用盐或可根据上述方法获得的微生物多糖或其可药用盐在制备用于治疗或预防可通过抑制IL-1活性得以缓解的疾病的药物的用途。本发明再一方面涉及能够产生上述多糖或可用于上述方法的微生物菌株放线菌139。如上所述，本发明涉及一类新型微生物多糖，它们具有IL-1受体拮抗活性。这些微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105，优选为4×105-10×105，更优选为6×105-9×105，最优选为约6．33478×105。上述多糖分子量是用已知分子量的葡聚糖(Fluka)作为标准参照通过凝胶色谱法测定的。色谱条件如下柱为GF-7MHQShodexAsahipak凝胶柱(7．6×300mm)；流动相为0．1MNaNO3；流速为0．5ml／min；柱温为35℃；检测器为RID-6A示差折光检测器。在上述条件下，本发明微生物多糖的保留时间在8-25分钟，优选在10-20分钟之间，特别优选为约11．5、11．6、15．0或19．4分钟。如上所述，本发明的微生物多糖含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。在本发明的一个优选实施方案中，所述微生物多糖含有葡萄糖，更优选以下列摩尔比含有下列单糖鼠李糖4．0、木糖6．0、甘露糖3．0、阿拉伯糖12、岩藻糖3．0、半乳糖12、半乳糖醛酸5．0。在本发明的另一实施方案中，所述微生物多糖部含有葡萄糖，优选以下列摩尔比含有下列单糖鼠李糖3．0、木糖4．0、葡萄糖2．0、甘露糖5．0、阿拉伯糖16、岩藻糖5．0、半乳糖19、半乳糖醛酸3．0。本发明的多糖是天然来源的，更优选是微生物来源的，最优选是从放线菌科、尤其是链霉菌的微生物获得。本说明书中所用的术语“分离的”是指本发明的多糖与其天然环境相分离，即与其天然环境中的通常混合或以其它方式结合的物质部分分离或基本分离，从而基本不含有蛋白质、核酸等。本发明的微生物多糖可以是单一成分的多糖，也可以是多种多糖成分的混合物。在凝胶色谱中，本发明的多糖可以呈现单峰，也可以呈现多个峰。本发明的多糖可以是游离酸形式的，也可以是在其分离过程中或在用适当的碱中和游离酸后形成的盐的形式。所述多糖的盐形式包括可药用的盐或仅作为多糖分离纯化中间体或贮存形式的盐。所述可药用的盐例如包括与氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁或氨形成的盐。本发明多糖的游离酸也可以从其盐形式再生，例如通过离子交换树脂。本发明的主题还包括上述天然来源的多糖的部分水解产物，但该水解产物应保留有意义的IL-1受体拮抗活性。关于IL-1受体拮抗活性的测定可参见本说明书下文的详细描述的方法或使用本领域中熟知的其它方法。本发明多糖的水解可以利用本领域技术人员熟知的任何方法进行，例如酸水解。本发明的多糖尤其可以通过培养一种特殊的菌株即放线菌139并从其培养物中分离得到。因此，本发明还涉及一种分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物的制备方法，其特征在于将放线菌139在适合其生长的条件下培养一段时间，然后从培养物中分离所述微生物多糖或其盐，或进一步水解所分离的多糖，或进一步将所分离的游离酸转化为盐或将其盐转化为游离酸形式。放线菌139是利用一种IL-1受体拮抗剂筛选模型发现的一种微生物菌株，经初步的形态鉴定，它属于放线菌科，可能属于链霉菌属。申请人已在1999年7月5日将该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址中国北京中关村)，保藏号为CGMCCNo．0405。该菌株也构成了本发明的一个主题。放线菌139的培养条件和培养基是常规用于放线菌科特别是链霉菌属微生物培养的那些，相信本领域技术人员能够从经典教科书或文献中找到。在下述实施例中详细描述了这样的培养基和培养条件。从培养物，特别是从发酵液分离本发明多糖可以用常规方法完成，特别是本领域中常规用于从微生物发酵液中分离水溶性成分的方法。作为例子，可以提到大孔吸附树脂柱层析、离子交换柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、透析、蒸发和冷冻干燥等。这些方法种类、材料和操作条件的选择在本领域技术人员的知识范围之内。在下文的实施例中给出了示例性的详细分离和纯化操作和条件。采用以基因重组白细胞介素1可溶性受体为靶位的ELISA高通量检测方法，确定了本发明多糖特别是139A为白细胞介素1受体的拮抗剂。在小鼠角叉菜胶性足肿胀模型中的体内试验证明139A多糖具有抗炎作用，在大鼠佐剂型关节炎模型中证明139A多糖还对多发性关节炎具有预防和治疗作用。对小鼠的急性毒性试验表明本发明的多糖毒性很低。因此，本发明的多糖适用于治疗或预防那些可通过抑制IL-1活性得以环解的疾病，例如炎性疾病、败血性休克、风湿性关节炎、炎性肠疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰岛素依赖性糖尿病、动脉粥样硬化、发热、病理性移植排斥反应、移植物抗宿主疾病、牙周组织病、自身免疫性甲状腺炎症、酒精中毒性肝炎、急性疾病血清蛋白改变、紫外线照射致皮肤损伤、嗜睡、厌食、通风、牛皮癣、哮喘及骨质疏松等。因此，本发明的微生物多糖或其可药用盐特别适合用作药物活性成分。本发明从而涉及含有本发明微生物多糖或其盐或可按本发明方法获得的微生物多糖或其盐和可药用载体的药物组合物。每剂量单位中，活性成分以适于预想的每日剂量的量存在。将药物组合物进行配制以对包括人的哺乳动物给药，以治疗上述疾病。如此获得的药物组合物可有益地呈现各种形式，如可注射或可饮用的溶液、片剂、包衣片或明胶胶囊。可注射溶液是优选的药物形式。剂量可随患者的年龄、体重和健康状况，所医治疾患的性质和严重程度以及给药途径有很大变化。在本发明的口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、透皮、透粘膜、局部或直肠给药的药物组合物中，活性成分可与标准药物赋形剂混合以单位给药形式给药于动物和人。适宜的给药单位形式包括如片剂、明胶胶囊、粉剂、颗粒的口服形式和口服混悬液和溶液，舌下和颊给药形式，皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内给药形式以及直肠给药形式。当制备片剂形式的固体组合物时，将主要活性成分与药物赋形剂，如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石或阿拉伯胶等混合。片剂可用蔗糖或其他适宜的材料包衣，或者可经处理使它们具有缓慢或延迟释放活性成分的功能以及使它们连续地释放预定量的活性成分。明胶胶囊制剂可通过将活性成分与稀释剂混合，然后倾入软或硬明胶胶囊中获得。可在水中分散的粉末或颗粒可含有与分散剂、润湿剂或助悬剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)以及甜味剂或增味剂混合的活性成分。直肠给药利用的栓剂可用在直肠温度下熔融的粘合剂，例如可可脂或聚乙二醇制备。对于非胃肠、鼻内或眼内给药，利用的是无菌的可注射溶液、等渗的盐溶液或水悬浮液，它们含有药理学上相容的分散剂和／或润湿剂，例如丙二醇或丁二醇。对于透粘膜给药，活性成分可在促进剂如胆汁盐的存在下或在亲水性聚合物的存在下进行配制，所述亲水性聚合物是例如羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、果胶、淀粉、明胶、酪蛋白，丙烯酸、丙烯酸酯和它们的共聚物，乙烯基聚合物或共聚物，乙烯醇，烷氧基聚合物，聚环氧乙烷聚合物和聚醚类，或者它们的混合物。活性成分也可任意地与一种或多种赋形剂或添加剂一起配制为微囊形式。活性成分还可与环糊精，例如α-、β-或γ-环糊精，2-羟丙基-β-环糊精或甲基-β-环糊精形成配合物形式。本发明还涉及所述微生物多糖或其盐或可根据本发明的方法获得的微生物多糖在制备用于治疗可通过抑制IL-1活性得以缓解的疾病的药物的用途。其中所述可通过抑制IL-1活性得以缓解的疾病例如为上文列举的那些，但不限于这些。本发明另外还涉及一种白细胞介素1受体拮抗剂的筛选方法，该方法包括将待测样品溶液和克隆有可溶性IL-1受体1的昆虫细胞培养上清液或细胞裂解液混合后加至已固定有一种人重组IL-1受体拮抗剂的酶标板中，然后加入抗可溶性IL-1受体的单克隆抗体，4℃保温后洗涤，再加入酶标记的抗IgG，4℃保温后洗涤，加入酶底物显色并进行光度测定，光密度比对含重组sIL-1R1的昆虫细胞裂解液测得的光密度显著低的样品为含白细胞介素1受体拮抗剂的样品。该模型方法的图示见图5。本筛选方法中，标记酶可以是辣根过氧化物酶，其底物可以是3，3′，5，5′-四甲基联苯胺。关于本方法的详细描述可参见实施例4。下面参照附图通过实施例详细描述本发明，但本发明的范围不受此限制。图1为139A的凝胶色谱图。图2A和图2B分别为标准单糖和139A水解液的毛细管电泳图谱。图3为139B的凝胶色谱图。图4为139B水解液的毛细管电泳图谱。图5为白细胞介素-1受体拮抗剂ELISA检测方法示意图。图6为采用白细胞介素-1受体拮抗剂ELISA检测方法测定的放线菌139发酵不同时间生物活性变化的示意图。微量盐溶液FeSO40．1％；ZnSO40．1％；MnSO40．1％；CuSO40．1％；CoCl20．1％。3．放线菌139的培养将27-30℃培养7-10天的放线菌139斜面培养物，接种于500ml摇瓶中的50-100ml种子培养基中，27-30℃振荡(240转／分)培养24-30小时。然后将获得的种子摇瓶培养物以5-10％接种量接种于5000ml大立瓶中的800-1000ml二级种子培养基中，27-30℃振荡(260转／分)培养40-50小时。将所获得的二级种子培养物以5-10％的接种量接种到200升发酵罐中的约120升发酵培养基中。于27-30℃搅拌发酵90-120小时。将样品溶于水中，测定139A多糖的紫外吸收光谱，在194nm处见到最大吸收。以水为溶剂在温度28℃测得139A得比旋光度[α]1dmNa=18．02°。按上文描述的操作条件，以葡聚糖为参照利用凝胶色谱法测定了139A多糖的分子量。结果表明，139A在凝胶色谱中基本为单峰，保留时间为约11．6分钟(见图1)。根据分子量校准曲线和分子量积分曲线计算重均分子量MW=6．33478×105，分布宽度(MW／Mn)为20．36。将139A样品经过全水解、衍生化及毛细管电泳分析以确定其单糖组成。将多糖样品1mg加入1ml的4N三氟乙酸中，在100℃保温4小时。向水解液中加入50微升含70mg／mlNaBH3CN和330mg／ml对氨基苯甲酸乙酯的衍生化试剂，在80℃反应1小时。然后加入0．5ml水、0．5ml氯仿，并收集水相用于电泳分析。毛细管电泳采用长50厘米、内径50微米的石英毛细管。电解液为75nM硼砂，pH=10．35。电泳电压为15KV，电泳电流为30μA。在214nm处紫外检测。图2A和图2B分别为标准单糖和139A水解液的毛细管电泳图谱。从图中可以看出，多糖139A含有下列8中单糖鼠李糖(Rhm)木糖(Xyl)葡萄糖(Glc)甘露糖(Man)阿拉伯糖(Ara)岩藻糖(Fuc)半乳糖(Gal)半乳糖醛酸(GalA)对上述八种多糖的摩尔比值也进行了测定，结果见表1。表1139A多糖的单糖摩尔比<tablesid="table1"num="001"><table>单糖名称鼠李糖Rhm木糖Xyl葡萄糖Glc甘露糖Man阿拉伯糖Ara岩藻糖FUC半乳糖Gal半乳糖醛酸GalA摩尔比3．04．02．05．0165．0193．0</table></tables>对139B进行了相似凝胶色谱分析，结果显示三个主峰，保留时间分别为约11．5，15．0和19．4(见图3)。估算的重均分子量为8×105。对139B进行了相似的毛细管电泳分析，结果显示139B含有7种单糖，除不含有葡萄糖外，与139A的单糖种类相同(见图4)。这7种单糖的摩尔比如下表2所示表2139B多糖的单糖摩尔比<tablesid="table2"num="002"><table>单糖名称鼠李糖Rhm木糖Xyl葡萄糖Glc甘露糖Man阿拉伯糖Ara岩藻糖FUC半乳糖Gal半乳糖醛酸GalA摩尔比4．06．00．03．0123．0125．0</table></tables>实施例4多糖的体外生物活性采用白细胞介素1受体拮抗剂ELISA高通量检测方法，该方法建立过程如下(1)．基因重组小鼠白细胞介素1可溶性受体基因的获得采用RT-PCR扩增技术获得该目的基因。首先用异硫氰酸胍提取和氯化铯超速离心制备NIH／3T3细胞总RNA，采用美国GibcoBRL公司出品的SuperScriptPreamplificationsystemforFirstStrandCDNASynthesis试剂盒通过反转录，合成了CDNA第一链，再进一步进行PCR(聚合酶链反应)扩增。根据IL-1R可溶性受体核苷酸序列，合成了一对引物上游区5’端引物为5’TGGAGATTGACGTATGTACAGA3’下游区3’端引物为5’CGGAATTCTAAAGGGACTGGGTATATTAACTG3’PCR扩增条件为Mg2+1．0-3．0mmol／L，先90-95℃变性5-8分钟，然后90-95℃再变性1-2分钟，55-60℃退火1-3分钟，70-75℃延伸1-5分钟，共30-35个循环，最后70-75℃延伸10-15分钟。凝胶电泳结果表明，扩增获得了单一条带，分子量大小约为960bp，采用美国ABI公司自动核苷酸测序仪测定该DNA片断核苷酸序列，结果与文献报道(Sims，J．E．等，Science，1988，241585)鼠白细胞介素1受体I型序列结果相符。(2)．白细胞介素1可溶性受体I(sIL-1R1)基因的克隆以昆虫细胞Sf9为宿主进行sIL-1R1的基因克隆。首先将PCR扩增获得的sIL-1R1DNA片断，克隆至昆虫细胞杆状病毒转移载体pAcGP67B质粒。采用改良的磷酸钙共沉淀法，将重组质粒和野生多角病毒(AcNPV)共转染Sf9昆虫细胞，28-30℃培养3-6天，采用终点稀释一点杂交方法，以荧光标记的sIL-1R1基因为探针，进行斑点杂交获得了克隆有sIL-1R1基因的重组病毒。经过3-5轮空斑分析纯化，获得了纯的重组病毒。以重组病毒转染Sf9昆虫细胞，于28-30℃培养3-6天，取不同培养时间的细胞培养上清液或经TritonX-100裂解细胞的上清，于4℃保存备用。(3)．白细胞介素1受体拮抗剂筛选模型的建立。A．取1-5μg／ml重组人IL-1ra(天然白细胞介素1受体拮抗剂)固定于96孔酶标板，每孔100-200μl，于4℃固定过夜。B．加入含1-5％BSA(牛血清白蛋白)的PBS缓冲液(0．05mol／L磷酸盐缓冲液含0．15mol／LNaCl)200-400μl／孔，4℃封闭6-15小时。C．用PBS洗涤数次后，取50-100μl待测样品溶液(pH调至7．0-7．5)和50-100μl克隆有sIL-1R1的昆虫细胞培养上清液(或细胞裂解液)，二者混合后，取100-200μl加至已固定IL-1ra的酶标板，同时作对照1(含重组sIL-1R1的昆虫细胞裂解液)和对照2(野生型AcNPV转染的昆虫细胞裂解液)于4℃过夜，以PBS洗涤数次。D．加入含1％BSA的1-3μg／ml大鼠抗小鼠sIL-1R的单克隆抗体100-150μl／孔，4℃1-3小时后，用PBS洗涤数次。E．加入含1％BSA的1∶100-200稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG100-200μl／孔，4℃1-3小时后，PBS洗涤数次，加入100-200μl／孔TMB底物(3，3′，5，5′-四甲基联苯胺)。F．室温显色30分钟-1小时，以100μl／孔2NHCl终止反应。G．以只加TMB和HCl的孔调零，在450nm用酶标比色计比色，测定结果。该模型方法的图示见图5。采用本方法对照1光密度值～1．5，对照2＜0．2，当待测样品中存在有拮抗剂时，该拮抗剂可以与固定在酶标板上的重组人IL-1ra竞争性结合sIL-1R1，使光密度值下降，根据光密度值的变化可以确定待测品的拮抗活性。表2表明139A多糖在分离纯化过程中，不同阶段纯化产物采用上述方法的活性检测结果。表3．139A多糖纯化过程中的活性检测(A450)<tablesid="table3"num="003"><table>步骤样品对照1对照2大孔树脂HP-200．151．250．10阳离子交换0．561．580．29醇沉淀0．501．570．38</table></tables><tablesid="table4"num="004"><table>透析0．511．570．28阴离子交换0．461．420．23培养基对照1．511．500．20</table></tables>注各步骤中样品均稀释成相当于原发酵液的浓度结果显示多糖139A具有显著的IL-1受体拮抗活性。139B在该模型中也表现出IL-1受体拮抗活性。还利用该模型测定了放线菌139不同发酵时间的培养物样品的体外生物活性。结果如图6所示，其中显示在96小时光密度值下降最为明显，因此活性最高。小鼠，昆明种，雄性，体重18-22g，20只，随机分为两组，每组10只，一组为给药组、一组为对照组。给药组小鼠皮下注射139A80，100mg／Kg／10ml，对照组给生理盐水10ml／kg。0．5小时后左足趾皮内注射0．1％角叉菜胶50ml致炎。3小时后将小鼠拉颈处死，从左右两后腿关节处剪下双足，分别称重，以左右两足重量差表示肿胀程度，并与对照组比较，计算肿胀抑制率。表4．139A多糖对小鼠角叉菜胶性足肿胀的抑制作用<tablesid="table5"num="005"><table>组别剂量(mg／kg)肿胀度(mg)抑制率139A10044．05±9．3344．2***对照18．88±9．55139A8049．65±5．9138．3***对照80．48±13．23</table></tables>***P＜0．001与对照组比较结果表明139A多糖在80，100mg／kg剂量下对小鼠角叉菜胶性关节肿胀有明显的抑制作用。B．139A多糖对大鼠佐剂型关节炎模型中多发性关节炎的预防作用大鼠，Wistar种，雄性，体重180-2209，30只，随机分为3组，每组10只，一组为预防组，一组为治疗组，一组为对照组。预防组皮下注射给139A100mg／kg／10ml，对照组皮下注射生理盐水10ml／kg。0．5小时后，左右足趾皮内注射弗氏完全佐剂(液体石蜡∶羊毛脂=2∶1，含10mg灭活卡介苗／m1)0．1mla注射佐剂后7天，皮下注射给药100mg／kg，每天一次共7天。第14天测量大鼠左右后踝关节周长差，并给前肢、尾、耳肿胀度打分，评价139A对大鼠多发性关节炎的预防作用。表4．139A多糖对大鼠多发性关节炎的预防作用<tablesid="table6"num="006"><table>组别注射佐剂左足后足肿胀程度非注射佐剂右足前肢、尾、耳肿胀度(打分)139A0．99±0．15**0．17±0．13**0．69±1．07***对照1．99±0．730．77±0．435．69±1．13抑制率(％)507887．9</table></tables>**P＜0．01，***P＜0．001，与对照相比。注根据前肢、尾、耳部病变的发生率和严重程度按0-4分评定0分无红肿；1分小趾关节肿胀；2分趾关节和足趾肿胀；3分踝关节以下的足趾肿胀；4包括踝关节在内的全部足爪肿胀。结果表明139A多糖100mg／kg，皮下注射对大鼠关节炎多发性关节炎有明显的预防作用。C．139A多糖对小鼠的急性毒性小鼠，雄性，昆明种，体重18-229，灌胃用量为10g／kg，试验139A对小鼠的急性毒性反应，在观察的一周内动物摄食、饮水、行为、皮毛等均未见异常，无一死亡，表明139A多糖毒性低。在进行药效学试验过程中，大鼠以100mg／kg皮下注射，每天1次，7天亦未见139A对大鼠的毒性反应。权利要求1．一种分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物，其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105；其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。2．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw=4×105-10×105。3．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw=6×105-9×105。4．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw为约6．33478×105。5．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量测定的凝胶色谱中的保留时间为约8-25分钟。6．根据权利要求5的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量测定的凝胶色谱中的保留时间为约10-20分钟。7．根据权利要求6的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量测定的凝胶色谱中的保留时间为约11．5、11．6、15．0或19．4分钟。8．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于其含有下列摩尔比的单糖鼠李糖4．0、木糖6．0、甘露糖3．0、阿拉伯糖12、岩藻糖3．0、半乳糖12、半乳糖醛酸5．0。9．根据权利要求1的微生物多糖，其特征在于其含有下列摩尔比的单糖鼠李糖3．0、木糖4．0、葡萄糖2．0、甘露糖5．0、阿拉伯糖16、岩藻糖5．0、半乳糖19、半乳糖醛酸3．0。10．一种分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物的制备方法，其特征在于将放线菌CGMCCNo．0405在适合其生长的条件下培养一段时间，然后从培养物中分离所述微生物多糖或其盐，或进一步水解所分离的多糖，或进一步将所分离的游离酸转化为盐或将其盐转化为游离酸形式。11．含有权利要求1-9中任一项的微生物多糖或其可药用盐或可根据权利要求10的方法获得的微生物多糖或其可药用盐和可药用载体的药物组合物。12．权利要求1-9中任一项的微生物多糖或其可药用盐或可根据权利要求10的方法获得的微生物多糖或其可药用盐在制备用于治疗可通过抑制IL-1活性得以缓解的疾病的药物的用途。13．放线菌CGMCCNo．0405。14．一种白细胞介素1受体拮抗剂的筛选方法，该方法包括将待测样品溶液和克隆有可溶性IL-1受体1的昆虫细胞培养上清液或细胞裂解液混合后加至已固定有一种人重组IL-1受体拮抗剂的酶标板中，然后加入抗可溶性IL-1受体的单克隆抗体，4℃保温后洗涤，再加入酶标记的抗IgG，4℃保温后洗涤，加入酶底物显色并进行光度测定，光密度比对含重组sIL-1R1的昆虫细胞裂解液测得的光密度显著低的样品为含白细胞介素1受体拮抗剂的样品。15．根据权利要求14的方法，其中标记酶是辣根过氧化物酶，其底物是3，3′，5，5′-四甲基联苯胺。全文摘要本发明涉及分离的微生物多糖或其盐或具有IL－1受体拮抗活性的水解产物,其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×10文档编号C08B37/00GK1281865SQ9911082公开日2001年1月31日申请日期1999年7月22日优先权日1999年7月22日发明者吴剑波,李元,张治平,吴倩,刘伯英,郭连宏,张洋,姜蓉,李宝义申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所