一种同时制备鼠李柠檬素和鼠李秦素化学对照品的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从中药青天葵中同时制备鼠李柠檬素和鼠李秦素两种化学对照 品的方法。属中药现代化领域。主要包括青天葵经石油醚脱脂、乙酸乙酯提取、硅胶柱层析 或聚酰胺柱层析分离、反相高效液相制备色谱精制四个步骤，从而得到鼠李柠檬素和鼠李 秦素两种化学对照品。两种对照品的结构如下：
[0002]
【主权项】
1. 一种同时制备鼠李柠檬素和鼠李秦素两种化学对照品的方法，其特征在于按以下步 骤进行： (1) 石油醚脱脂：将青天葵粉碎成粗粉，以60-90°C的石油醚加热回流进行脱脂。 (2) 乙酸乙酯提取：脱脂后的青天葵残渣，以乙酸乙酯加热回流提取，合并乙酸乙酯提 取液，回收溶剂，得青天葵的乙酸乙酯部位浸膏，浸膏60-80°C真空恒温干燥24h。 (3) 柱层析分离：干燥后的乙酸乙酯部位浸膏以硅胶柱色谱分离或以聚酰胺色 谱分离。硅胶柱色谱分离时，以石油醚-丙酮（30 : 1-4 : 1)或石油醚-乙酸乙酯 (30 : 1-4 : 1)梯度洗脱；石油醚-丙酮梯度洗脱时，收集12 : 1-8 : 1流分；石油醚-乙 酸乙酯洗脱时，收集9 : 1-5 : 1流分。聚酰胺色谱分离时，依次用水、10%乙醇水溶液、 30%乙醇水溶液和50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液。减压回收溶剂，即得鼠李 柠檬素和鼠李秦素的混合物，外观为黄色。 (4) 反相高效液相制备色谱精制：黄色混合物粉末以甲醇-水溶液溶解，微孔滤膜过 滤，以反相高效液相制备色谱仪分离，甲醇_水溶液为洗脱系统，368nm检测，分别收集制备 色谱中的二个主要色谱峰，减压回收溶剂，50°C恒温真空干燥24h，即得纯度大于98%以上 的鼠李柠檬素和鼠李秦素两个化学对照品。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中60-90°C的石油醚的用量是青 天葵药材的6-10倍量，加热回流提取时间为l-2h，提取次数为4-6次。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中乙酸乙酯的用量为药材的4-8 倍量，加热回流提取时间为l_2h，提取次数为6-8次。合并乙酸乙酯提取液，回收溶剂，得青 天葵的乙酸乙酯部位浸膏。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3)中硅胶柱色谱分离时，洗脱方式 为石油醚-丙酮（30 : 1-4 : 1)或石油醚-乙酸乙酯（30 : 1-4 : 1)梯度洗脱。石油 醚-丙酮梯度洗脱时，收集12 : 1-8 : 1流分；石油醚-乙酸乙酯洗脱时，收集9 : 1-5 : 1 流分。减压回收溶剂，即得鼠李柠檬素和鼠李秦素的混合物（黄色）。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3)中聚酰胺色谱分离时，洗脱方式 为水、10 %乙醇水溶液、30 %乙醇水溶液和50 %乙醇水溶液依次洗脱。收集50 %洗脱液，减 压回收溶剂，即得鼠李柠檬素和鼠李秦素的混合物（黄色）。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4)中鼠李柠檬素和鼠李秦素的混 合物以60%的甲醇溶解，样品浓度为2〇-3〇11^/1111。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4)中，反相高效液相制备柱的填充 材料为C18,粒度15 y m ;制备柱长250mm，直径20mm。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤⑷中，反相高效制备液相进样体积 为l-4ml，流速为10-15ml/min，采用的流动相为60%的甲醇水溶液。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4)中，收集保留时间分别为 11. 5min和12. 4min的流分，减压回收溶剂，干燥，即得鼠李柠檬素和鼠李秦素两种对照品。
【专利摘要】将青天葵以石油醚加热回流提取脱脂，残渣再以乙酸乙酯加热回流提取，回收乙酸乙酯，得稠膏状乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取物用硅胶柱色谱或聚酰胺色谱分离，以硅胶薄层层析或盐酸-镁粉化学检识方法，收集并合并鼠李柠檬素和鼠李秦素组分，回收溶剂，得鼠李柠檬素和鼠李秦素混合的粗品(黄色粉末)，该粗品再以反相高效液相制备色谱进行分离，即可获得纯度达98％以上的鼠李柠檬素和鼠李秦素两种化学对照品。本发明工艺步骤简单，纯度高，色泽好，制备量大。
【IPC分类】C07D311-30, C07D311-40
【公开号】CN104529985
【申请号】CN201410327623
【发明人】袁叶飞
【申请人】泸州医学院
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年7月1日