辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及诊断生物制品领域，尤其涉及辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 辣根过氧化物酶是一种糖蛋白，因辣根中该酶的含量最高而得名，该酶具有比活 性高、稳定、分子量小、纯酶容易制备等优点，因此被广泛地用于临床检验中，特别是以该酶 为基础的免疫酶技术在免疫学检测方面应用更加广泛。在各种人类及动物疾病的体外快速 诊断方法特别是ELISA商品化检测试剂盒中，酶标抗体特别是辣根过氧化物酶标抗体应用 十分广泛。
[0003] 酶标抗体一般只能将其原液在-20°C以及更低温度条件下贮藏时，且不能经过反 复冻融，其免疫活性才能在贮藏一年时间内不会大量地降低，才能有效地保证诊断方法结 果的可靠性。目前经过酶标抗体技术的不断发展，酶标免疫活性得到大大的提升，同时为了 确保酶标免疫活性的稳定，市售的酶标抗体都是制备成高纯度的浓缩液或冻干粉。市售的 酶标抗体在使用时均需进行几千倍的大体积稀释才能进行使用。但是如果将酶标抗体放置 于4°C条件下或将酶标抗体进行大体积稀释后，在很短的时间内其免疫活性将迅速下降。对 于ELISA商品化试剂盒而言，其关键技术之一是确保试剂盒内的酶标抗体的免疫活性不发 生改变，这不仅要求将酶标抗体稀释几千倍制备成工作液，还需在2?8°C甚至在常温条件 下进行保存及运输，一种可以有效保护工作浓度的酶标抗体在2?8°C或常温条件下长期 保存时效价不会发生改变的稀释剂就显得尤为重要。
【发明内容】
[0004] 针对上述技术问题，本发明提供一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，使 得ELISA商品化试剂盒中工作浓度的辣根过氧化物酶标记抗体在2?8°C或常温条件下免 疫活性不发生改变。
[0005] 具体技术方案为，辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：
[0006] (1)每 800ml 去离子水中溶解 8gNaCl、l. 44gNa2HP04、0. 2gKCl、0. 2gKH2P04,充分溶 解后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；
[0007] (2)以IOOOml的PBS缓冲液为一份，每份PBS缓冲液中加入0· 5?5ml的 Tween-20,混合均匀后置于121 °C、Ibar进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；
[0008] (3))以IOOOml的灭菌PBST缓冲溶液为一份，每份灭菌PBST缓冲溶液中加入5? 50gBSA和1?IOg的明胶，充分溶解；
[0009] (4)向步骤⑶制备的每份溶液中加入0. 5?5ml的液体防腐剂，用0. 22 μ m的滤 膜进行过滤除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。
[0010] 本发明提供的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，含有复合型保护剂BSA和 明胶，两种保护剂相互补充，可有效防止酶标抗体活性降低。用该稀释保护剂对辣根过氧化 物酶标记的抗体进行稀释后，稀释后的酶标抗体可在2?8°C保存12个月其免疫活性基本 不发生改变，常温15?25°C保存1个月其免疫活性基本不发生改变。
【具体实施方式】
[0011] 结合实施例说明本发明的【具体实施方式】。
[0012] 实施例1
[0013] 辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：
[0014] (l)800ml 去离子水中溶解 8gNaCl、l. 44gNa2HP04、0. 2gKCl、0. 2gKH2P04,充分溶解 后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；
[0015] (2) IOOOml的PBS缓冲液中加入3ml的Tween-20,混合均匀后置于121°C、15PSI 进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；
[0016] (3) IOOOml的灭菌PBST缓冲溶液中加入30gBSA和5g的明胶，充分溶解；
[0017] (4)向步骤（3)制备的溶液中加入3ml的液体防腐剂，用0. 22 μ m的滤膜进行过滤 除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。
[0018] 实施例2
[0019] 辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：
[0020] (l)800ml 去离子水中溶解 8gNaCl、l. 44gNa2HP04、0. 2gKCl、0. 2gKH2P04,充分溶解 后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；
[0021] (2) IOOOml的PBS缓冲液中加入0· 5ml的Tween-20,混合均匀后置于121°C、15PSI 进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；
[0022] (3) IOOOml的灭菌PBST缓冲溶液中加入5gBSA和IOg的明胶，充分溶解；
[0023] (4)向步骤（3)制备的溶液中加入0. 5ml的液体防腐剂，用0. 22 μ m的滤膜进行过 滤除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。
[0024] 实施例3
[0025] 辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：
[0026] (l)800ml 去离子水中溶解 8gNaCl、l. 44gNa2HP04、0. 2gKCl、0. 2gKH2P04,充分溶解 后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；
[0027] (2) IOOOml的PBS缓冲液中加入5ml的Tween-20,混合均匀后置于121°C、Ibar进 行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；
[0028] (3) IOOOml的灭菌PBST缓冲溶液中加入50gBSA和Ig的明胶，充分溶解；
[0029] (4)向步骤（3)制备的溶液中加入5ml的液体防腐剂，用0. 22 μ m的滤膜进行过滤 除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。
[0030] 对实施例1所制得的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂效果进行评估，以辣 根过氧化物标记的羊抗猪IgG为例，采用抗原抗体直接反应法进行抗体稀释保护剂效果的 评估。
[0031] (1)酶标抗体的稀释：用实施例制得辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂将辣 根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG稀释至工作浓度；
[0032] (2)酶标抗体2?8°C保存：将稀释后的酶标抗体置于2?8°C进行保存，并分别 于不同时间抽样进行检测；
[0033] (3)酶标抗体常温保存：将稀释后的酶标抗体置于常温15?25°C进行保存，并分 别于不同时间抽样进行检测；
[0034] (4)酶标抗体物理性状检测：将稀释后的酶标抗体分别置于2?8°C及常温进行保 存，并分别于不同时间抽样进行物理性状的检测，结果见表1及表2。
[0035] 检测结果表明，稀释后的酶标抗体于2?8°C保存12个月，常温保存1个月，其物 理性状均未发生改变。
[0036] 表1稀释后的酶标抗体2?8°C保存后物理性状检测结果
[0037]
【主权项】
1.辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得： (1) 每800ml 去离子水中溶解8gNaCl、l. 44gNa2HP04、0. 2gKCl、0. 2gKH2P04,充分溶解后， 每份溶液加去离子水定容至l〇〇〇ml，配制成PBS缓冲液； (2) 以1000ml的PBS缓冲液为一份，每份PBS缓冲液中加入0. 5?5ml的Tween-20， 混合均匀后置于121°C、lbar进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液； (3))以1000ml的灭菌PBST缓冲溶液为一份，每份灭菌PBST缓冲溶液中加入5? 50gBSA和1?10g的明胶，充分溶解； (4) 向步骤（3)制备的每份溶液中加入0. 5?5ml的液体防腐剂，用0. 22 y m的滤膜进 行过滤除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。
【专利摘要】本发明涉及诊断生物制品领域，尤其涉及辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂及其制备方法，主要由BSA、Tween-20、NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、明胶、防腐剂等组成。本发明提供的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，含有复合型保护剂BSA和明胶，两种保护剂相互补充，可有效防止酶标抗体活性降低。用该稀释保护剂对辣根过氧化物酶标记的抗体进行稀释后，稀释后的酶标抗体可在2～8℃保存12个月其免疫活性基本不发生改变，常温15～25℃保存1个月其免疫活性基本不发生改变。
【IPC分类】C07K16-00, G01N33-535
【公开号】CN104530226
【申请号】CN201510024253
【发明人】邱文英, 方鹏飞, 徐静, 张丽燕, 郝伟伟
【申请人】四川省华派生物制药有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月19日