用于检测甲睾酮的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药残留分析和免疫学技术领域，具体涉及一种能识别甲睾酮的单克 隆抗体和一种用于检测甲睾酮的酶联免疫方法（ELISA)和试剂盒。
【背景技术】
[0002] 甲睾酮是一种人工合成的留体类雄激素，具有环戊烷多氢菲的基本结构，在兽医 临床上，甲睾酮被大量应用在畜牧养殖业中，能够促进蛋白质的合成和骨骼肌的生长，通过 抑制脂肪的增长，从而使肌肉变发达，并且能够刺激动物对食物的欲望，使动物的日增重提 高，同时大大提高了饲料的利用效率。
[0003] 甲睾酮通常比较稳定，在动物体内滞留时间长，并且在动物体内残留，人类长期食 用含有此药物及其代谢物的动物性食品会产生头痛、胸闷、心悸、肌肉疼痛等中毒症状，还 能导致内分泌失调、痤疮、毛发減少和秃顶等症状，也可引起低蛋白血症，对男性生殖系统 造成损伤，除此之外还能造成肝脏、肾脏的病变，甚至能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。我 国于2002年发布的文件中规定在动物性食品中不得检出甲睾酮。目前关于甲睾酮的仪器 检测方法很多，例如气象色谱法（GC)，高效液相色谱法（HPLC)，气质联用法（GC-MS)，液质 联用法（LC-MS)等。仪器分析方法虽然灵敏、准确、分离度高并且可进行多残留检测的定 性、定量研宄，但是需要昂贵的仪器、繁琐的前处理、熟练的专业操作员。如果采用仪器分析 法进行大批量样品的检测，其成本将非常高；而且在目前的国家检测机构中大部分只有省 市级才配备有精密的分析仪器。免疫化学分析法特别是酶联免疫吸附分析技术具有快速、 灵敏度高、操作简单、适应性强等优点，适合高通量样品筛选，对于快速检测甲睾酮更具优 势。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是：
[0005] (1)提供一种能灵敏度高且能特异性识别甲睾酮的单克隆抗体；
[0006] (2)利用该单克隆抗体，制备一种用于甲睾酮检测的酶联免疫试剂盒；
[0007] (3)利用该试剂盒，建立一种能用于甲睾酮非诊断目的检测的ELISA方法；
[0008] 上述目的是通过以下技术方案实现的：
[0009] 一种能识别甲睾酮的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCCN0:C201493的杂交瘤细 胞株MT9C10所分泌的。
[0010] 所述的杂交瘤细胞株MT9C10,保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC N0:C201493。
[0011] 进一步，本发明提供了一种能检测肉类食物中甲睾酮药物残留的酶联免疫方法， 包括以下步骤：
[0012] (1)将结构为式（1)所示的化合物（甲睾酮-3-对肼基苯甲酸，MT-CPD)与卵清白 蛋白（OVA)偶联得到包被原（MT-CPD-OVA);
[0013] (2)用保藏号为CCTCCN0:C201493的杂交瘤细胞株MT9C10制备单克隆抗体；
[0014] (3)用步骤⑴的包被原包被固相载体；
[0015] (4)将待测样品提取后进行酶联免疫检测。
[0016]
【主权项】
1. 一种能识别甲睾酮的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCCN0:C201493杂交瘤细胞 株MT9C10所分泌的。
2.-株杂交瘤细胞株MT9C10,保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC N0:C201493,所述杂交瘤细胞株MT9C10分泌的单克隆抗体能识别甲睾酮。
3. 权利要求1所述的单克隆抗体在制备检测甲睾酮的酶联免疫试剂盒中的应用。
4. 包含权利要求1所述单克隆抗体的试剂盒。
5. 根据权利要求4所述的试剂盒，该试剂盒是检测甲睾酮的酶联免疫试剂盒。
6. 权利要求4或5所述的试剂盒在甲睾酮非诊断目的检测中的应用。
7. -种检测肉类食物中甲睾酮残留的酶联免疫方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将结构为式（1)所示的化合物与卵清白蛋白偶联得到包被原； (2) 用保藏号为CCTCCN0:C201493的杂交瘤细胞株MT9C10制备单克隆抗体； (3) 用步骤（1)的包被原包被固相载体； (4) 将待测样品提取后进行酶联免疫检测，
8. 根据权利要求7所述的检测肉类食物中甲睾酮残留的酶联免疫方法，其特征在于： 所述待测样品的提取方法是：将待测样品用酸化乙腈进行提取，提取液氮气吹干后用PBS 缓冲液复溶。
【专利摘要】本发明公开了一种能识别甲睾酮的特异性单克隆抗体,它是由保藏号为CCTCCNO:C201493的杂交瘤细胞株MT9C10所分泌的。本发明还公开了一种检测甲睾酮的酶联免疫方法和试剂盒。与现有技术相比，本发明制备的单克隆抗体可以识别甲睾酮，识别灵敏度高，特异性好，本发明的ELISA方法和试剂盒检测灵敏度、准确度高，精密度好。CCTCC NO:C20149320140520
【IPC分类】C07K16-18, G01N33-74, C12R1-91, G01N33-577, C12N5-20
【公开号】CN104558171
【申请号】CN201410830027
【发明人】袁宗辉, 王惠, 彭大鹏, 潘源虎, 王玉莲, 陈冬梅, 冯亮, 朱永利, 刘振利
【申请人】华中农业大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月26日