一种用于检测多种动物源性成分的可视化dna芯片试剂盒及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种用于检测多种动物源性成分的可视 化DNA芯片试剂盒及方法。
【背景技术】
[0002] 随着国际贸易的飞速发展，防御国际间动物疫病传播的难度在不断加大。为了防 止疯牛病、痒病、动物流感等经饲料、畜产品传播，世界各国政府和组织在规范对动物源性 饲料使用的同时，积极开展动物源性成分检测技术的研究。另外，在国内及国际贸易中，牛、 羊肉中掺杂价格便宜的猪肉，以次充好的欺骗行为屡见不鲜，给广大的穆斯林朋友带来诸 多不便的同时，严重损害了消费者的利益。虎、熊、豹是珍稀野生动物，对野生动物及其加工 品的物种来源鉴定是打击非法捕猎和走私的有效途径。
[0003] 目前，针对以上动物源性成分检测方法主要是PCR方法，该方法特异性好，快速准 确，已经得到广泛应用。PCR方法的检测的不足是同时只能对有限几个物种进行检测，对于 来源背景不清和可能掺杂多种肉类的情况下，在引物选择上就出现了困难。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中所存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测多种动物源 性成分的可视化DNA芯片试剂盒及检测方法。
[0005] 本发明所采取的技术方案是：
[0006] -种用于检测多种动物源性成分的可视化DNA芯片试剂盒，其包括：芯片基片，点 样于芯片基片上的特异性探针，特异性引物；其中，鸡、鸭、鹅、猪、牛、绵羊和山羊使用一套 通用引物进行扩增，虎、熊和豹分别使用各自的特异性引物，所述特异性探针和特异性引物 的序列如下表所示：
[0007]
【主权项】
1. 一种用于检测多种动物源性成分的可视化DNA芯片试剂盒，其包括：芯片基片，点样 于芯片基片上的特异性探针，特异性引物；其中，鸡、鸭、鹅、猪、牛、绵羊和山羊使用一套通 用引物进行扩增，虎、熊和豹分别使用各自的特异性引物，所述特异性探针和特异性引物的 序列如下表所示：
2. 根据权利要求1所述的用于检测多种动物源性成分的可视化DNA芯片试剂盒，其特 征在于，所述芯片基片上探针点样矩阵图如下表所示：
3. 根据权利要求1所述的用于检测多种动物源性成分的可视化DNA芯片试剂盒，其特 征在于，所述试剂盒中还含有缓冲液、检测液、封闭液和显色剂。
4. 利用权利要求1?3任一项所述的试剂盒检测多种动物源性成分的方法，包括如下 步骤： (l)PCR扩增：提取待检样品DNA，利用特异性引物进行PCR扩增； ⑵芯片杂交：取PCR产物与DNA芯片于47?49°C下杂交，弃去检测液，用水冲洗至杂 交点清晰为止，相机成像。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2)的具体操作为： 1) 取PCR产物与DR.杂交缓冲液充分混合，沸水变性，迅速转移至冰上； 2) 将上述混合物转移至芯片室内，平铺均匀，避免在底部产生气泡，在47?49°C温度 条件下于振动温箱中杂交45-60min;弃去杂交液，用DR.洗涤液洗涤； 3) 于杂交室中加Strep-AP和封闭液的混合液，室温反应，弃去封闭液，以洗涤液洗涤， 吸除芯片上残留的水分； 4) 每个芯片室加NBT/BCIP和检测液的混合液，将芯片置于暗室中反应5-10min，弃去 检测液，用水冲洗至杂交点清晰为止，相机成像。
【专利摘要】本发明公开了一种用于检测多种动物源性成分的可视化DNA芯片试剂盒及方法。该可视化DNA芯片检测方法应用于检测鸡、鸭、鹅、猪、牛、绵羊、山羊、虎、熊和豹动物源性。根据GenBank中以上动物线粒体DNA（mitochondrial？DNA）序列，设计合成特异性引物和探针。使用Dr.chip系统进行芯片点样、杂交、显色，优化反应条件后做灵敏度、特异性试验和重复性试验，然后应用于动物源性成分的检测。结果表明：本发明所建立的鸡、鸭、鹅、猪、牛、绵羊、山羊、虎、熊和豹的新型可视化DNA芯片检测方法，具有灵敏度高，特异性强及高通量的特点。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104561271
【申请号】CN201410742642
【发明人】罗宝正, 薄清如, 陶旻, 陈轩, 廖秀云, 沙才华, 徐海聂, 黄海超
【申请人】珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月4日