一种抗肿瘤肽变体nc8及其应用
【专利说明】
[0001] 相关申请 本申请是专利申请号为201410312285. 2、名称为"一种抗肿瘤肽变体及其应用"的分案 申请。
技术领域
[0002] 本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及抗肿瘤肽变体。
【背景技术】
[0003] ND100 是由认1&、16111、1617、11^11、2?1'〇、11111'、1171'组成的八肽。体外及体内试验 均表明ND100具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，可用来制备抗肿瘤药物，用于治疗肿 瘤。
[0004] 在现有技术中，为了提高多肽的活性，针对多肽序列进行特异性的改变，从而寻找 活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肽的生物活性，申请人通过大量的实 验，针对多肽序列进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的 变体。
【发明内容】
[0005] 本发明涉及的多肽，序列如下： NC：AlaGluGlyLeuProProThrTyr； (NCI)：AlaGluGlyLeuProProThrIle； (NC2)：AlaSerGlyLeuProProThrTyr； (NC3)：AlaGluGlyLeuProSerThrTyr； (NC4)：AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC5)：AlaGluGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC6)：GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr； (NC7)：AlaGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC8)：GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC9)：AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr； (NC10)：GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr； (NC11)：GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC12)：AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC13)：AlaGlyGlyLeuProProProThrIle； 对照 1:AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr; 对照 2:AlaLeuGlyLeuProProThrTyr; 本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：TFA盐（三氟乙 酸盐），HC1盐（盐酸盐），醋酸盐形式。
[0006] 本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治 疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身 给药。
【具体实施方式】
[0007] 实施例1 :本发明多肽的人工化学合成 本发明的肽的制备采用液相合成法和活化酯逐个增长法，将本发明的肽的C端的第二 个氨基酸的氨基用Boc基（叔丁氧羰酰基）保护，羧基用HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺）活化， 然后在1(110)3溶液中与C端第一个氨基酸在30°C水浴，反应2天。抽去有机溶剂，在冰浴中 用2mol/LHCl调pH3?4 (沉淀最多时），用乙酸乙酯抽提，饱和NaCl洗3次，无水似2504干 燥，抽干，无水乙醚研磨，得带保护基的二肽。用50 %TFA(三氟醋酸）处理，脱去Boc基，再 与N端带Boc保护基，C端用HOSu活化的C端的第三个氨基酸缩合，用同样的方法逐个接 上氨基酸，最后用催化氢化法脱去Glu侧链上的保护基，用50 %TFA脱去本发明肽N端的 Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC进行分离纯化，可得98%纯度的本发明的多肽。经过电喷雾质 谱测定，其序列与目标序列完全一致。
[0008] 实施例2 :ND100的抗肿瘤活性 (1)体外活性测定： 采用细胞培养和细胞计数的方法，人肝癌细胞7721、胃癌细胞MKN、肺癌细胞A549以各 自常规的培养基，视不同情况加入10%左右的小牛血清，用T-25培养瓶在37°C，5%C02 培养箱中单层培养。
[0009] 当细胞生长成单层后消化，用含1%小牛血清的培养液制成细胞悬液，按每孔1ml 接种到24孔培养板上，37°C、5%C02培养箱中培养4h后，加入不同剂量的本申请的多肽， 对照组和实验组均设三个重复孔，对照组加入10U1的PBS，试验组加入不同剂量的本申请 的多肽，继续培养72小时后，吸出培养液，用PBS洗，然后每孔加入200ill消化液消化，待 细胞变圆后，加入800yl的PBS，在倒置显微镜下用血球计数板计数。
[0010] 抑制率结果如下：
【主权项】
1. 一种抗肿瘤肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO :1，9所示。
2. 如权利要求1所述的肿瘤肽变体在制备抑制肿瘤药物中的用途。
3. 如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为肝癌、胃癌或肺癌。
4. 一种抗肿瘤药物制剂，它含有权利要求2所述的肿瘤肽变体以及药学上合适的载 体。
【专利摘要】本发明提供了一种抗肿瘤活性肽变体，该蛋白变体相对于野生型具有更强的抑制肿瘤细胞生长的效果。这些变体蛋白质和它们的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的治疗。
【IPC分类】C07K7-06, A61K38-08, A61P35-00
【公开号】CN104592357
【申请号】CN201510068971
【发明人】马海龙
【申请人】马海龙
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年6月27日