一种从火炬树果实中提取木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种从火炬树果实中提取木犀草素和木 犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷的方法。
【背景技术】
[0002] 近年来天然产物及其衍生物在保健品、食品添加剂以及药品开发等方面显示了 巨大的应用前景，特别是一些药食同源的材料中有效成分的开发利用。火炬树，学名 漆树科Anacardiaceae，原产北美，上世纪六十年代引种到中国，现在在东北、华北 等地大面积种植，在河南省也广泛种植。火炬树主要为雌雄异株，是小型乔木或者灌木，它 的根和树皮都能做药。火炬树除作为风景林观赏外，也可用作荒山绿化及水土保持树种，果 穗红色，大而显目。火炬树果实具有抗菌、消炎、保胆保肝、清瘀降脂等祛病功效。在北美原 产地区，传统上用于制作一种称为"印第安柠檬汁"的饮料，早已被确认无毒。火炬树叶和 果实富含多酚和类黄酮，果实常用来提取天然食用色素，在美国它是"sumac acid"一种果 汁饮料的主要成分。近年来，医学界又对火炬树果实进行了深入的药理及临床应用研究， 而其药物的有效成分即为构成色素的花色苷。因而火炬红色素不仅可认为是安全无毒性食 用天然色素，而且作为食品添加剂应用还具有一定的保健功能。
[0003] 研究发现，火炬树果穗、叶提取成分还有抗氧化性，并且具有一定的抑菌活性，在 一定浓度下抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌及霉菌等常见病菌的生长。同时提取 成分对山楂叶螨、斑叶螨等农业林业害虫具有强烈的拒食和毒杀活性。虽然已经发现这些 良好活性，但是对于活性相关具体化学成分的研究还鲜见报道。
[0004] 层析（chromatography)是"色谱分析"的简称，利用各组分物理性质的不同，将多 组分混合物进行分离及测定的方法。层析技术早在1903年就应用于植物色素的分离提取， 各种颜色的色素从上到下在吸附柱上排列成色谱，也称色谱分离法。1931年有人用氧化铝 柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辨力，从此引起了人 们的广泛注意。随着人们认识和实践的提高以及物理化学技术的发展，应用范围更加广泛， 没有颜色的物质同样可用此法分离，这时的工作全是使用吸附剂的吸附层析法。自1944年 应用滤纸作为固定支持物的纸层析诞生以来，色谱技术的发展越来越快。20世纪50年代开 始，相继出现了气相色谱和高效液相色谱，其它如薄层层析、薄膜层析、亲和层析、凝胶层析 等也迅速发展。在生物化学领域里，层析技术已成为一项常用的分离分析方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供了一种从火炬树果实中提取木犀草素和木犀草 素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷的方法，该方法是基于各种不同类型层析技术的基础上，把火 炬树果实经超声波浸提、过滤、低温真空浓缩、萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析、葡聚糖凝胶 柱层析、最后甲醇洗脱得木犀草素和木犀草素-7-0-3 -D-吡喃葡萄糖苷。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种从火炬树果实中提取木犀草素 和木犀草素-7-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的方法，其特征在于包括以下步骤：（1)超声波浸提， 将粉碎后的火炬树果实粉末溶于甲醇中，然后使用超声波提取三次，将浸出液收集，经低温 真空浓缩后用于下一步的萃取；（2)分级萃取，依次使用极性从小到大的溶剂正己烷、二氯 甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水进行萃取，过滤，合并滤液，蒸发、真空干燥后分别记作正己烷 层、二氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层；（3)乙酸乙酯层的硅胶柱层析，取乙酸乙酯 层浸膏做硅胶柱层析，用正己烷与乙酸乙酯体积配比为7:3的洗脱液洗脱得到组分S3,将 组分S3再次用硅胶柱层析分离，分别选用二氯甲烷与甲醇体积配比为3:7的洗脱液和甲醇 洗脱液洗脱得到组分Fr4和Fr5 ; (4)葡聚糖凝胶柱层析，将组分Fr4和Fr5分别经葡聚糖 凝胶柱层析，甲醇洗脱液洗脱得到木犀草素和木犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷。
[0007]本发明通过生物活性指导的方法，经过超声波浸提、过滤、低温真空浓缩、萃取、硅 胶柱层析、凝胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、真空低温脱溶、脱水干燥，并制成粉状产品等分 离技术，从火炬树果实中分离出生理活性物质木犀草素和木犀草素-7-0-々-D-吡喃葡萄 糖苷，提取工艺简单，有利于进一步工业化应用。
【附图说明】
[0008] 图1是本发明的提取工艺流程图。
【具体实施方式】
[0009]以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本 发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发 明的范围。 实施例
[0010] 1、抗氧化能力最强的乙酸乙酯层萃取物的获取 火炬树果实蒸馏水清洗两遍，洗去灰尘、在阴凉处阴干，放入粉碎机破碎成粉末，甲醇 浸取，使用超声波在功率800W，30°C条件下，提取20min，高压抽滤，滤液通过旋转蒸发仪除 去溶剂，获得甲醇粗提物。将甲醇粗提物按固液比为1:10的比例加入蒸馏水后，立即充分 振荡，再加入等体积的正己烷后用磁力搅拌器搅拌4h，转入分液漏斗，静置24h，待液体充 分分层后，小心收集分液层，重复三次后，合并正己烷层，用旋转蒸发仪把正己烷蒸馏除去， 转移至真空干燥器，得到溶质正己烷层。分液后的蒸馏水层中再加入二氯甲烷，搅拌4h，转 入分液漏斗，使用上述的方法获得二氯甲烷层。然后依次使用乙酸乙酯、正丁醇，同样的方 法萃取，合并萃取液，蒸发、真空干燥后分别乙酸乙酯层、正丁醇层和水层。
[0011]通过对各萃取层的总酚和类黄酮类物质含量的测定，以及对DPPH自由基清除能 力的测定，发现乙酸乙酯层具有最高含量的总酚和类黄酮，以及DPPH自由基清除能力，可 用于进一步的分离。
[0012] 2、木犀草素的提取的获取 取20g乙酸乙酯层浸膏做硅胶(德国MERCK社9385Silicagel)柱层析，流动相依次 采用正己烷、正己烷与乙酸乙酯体积配比分别为9:1、7:3、5:5、3:7、1:9和乙酸乙酯的洗脱 液梯度洗脱得组分S1-S7,将组分S3再经硅胶柱层析分离，流动相依次用二氯甲烷、二氯甲 烷与甲醇体积配比分别为7:3、5:5、3:7和甲醇的洗脱液洗脱得到组分？1'141'5，再将组分 Fr4经S印hadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析，甲醇洗脱液洗脱得到26mg化合物1木犀草素。
[0013] 3、木犀草素-7-0-，-D_吡喃葡萄糖苷的获取 将组分Fr5利用s印hadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析，甲醇洗脱液洗脱得到化合物2木 犀草素K-批喃葡萄糖苷7mg。
[0014] 核磁共振（NMR)鉴定结构 化合物1经鉴定是木犀草素，黄色粉末：FAB-MSm/z: [M+H]+，287; 1HNMR(DMS0， 400MHz): 8 7.47 (1H,d,J= 8. 1Hz,H-6'), 7.42 (1H,s,H-2'), 6.90 (1H,d, J= 8. 1,H-5'), 6.79 (1H,s,H-3), 6.74 (1H,brs,H-8), 6.44 (1H,brs,H-6). 13CNMR(DMSO, 100MHz) : 8 181.63 (C-4), 164.31 (C-2), 163.65 (C-7), 157.28 (C-5), 161.36 (C-9), 150.28 (C-4'），146.08 (C-3'），121.63 (C-1'），119.35 (C-6'），116.17 (C-5'），113.67 (C-2'），103.68 (C-10), 103.15 (C-3), 99.86 (C-6), 94.07 (d,C-8)。化合物1的结构式如下：
【主权项】
1. 一种从火炬树果实中提取木犀草素和木犀草素-7-0-0 -D-批喃葡萄糖苷的方法， 其特征在于包括以下步骤：（1)超声波浸提，将粉碎后的火炬树果实粉末溶于甲醇中，然后 使用超声波提取三次，将浸出液收集，经低温真空浓缩后用于下一步的萃取；（2)分级萃 取，依次使用极性从小到大的溶剂正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水进行萃取，过 滤，合并滤液，蒸发、真空干燥后分别记作正己烷层、二氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层和 水层；（3)乙酸乙酯层的硅胶柱层析，取乙酸乙酯层浸膏做硅胶柱层析，用正己烷与乙酸乙 酯体积配比为7:3的洗脱液洗脱得到组分S3,将组分S3再次用硅胶柱层析分离，分别选用 二氯甲烷与甲醇体积配比为3:7的洗脱液和甲醇洗脱液洗脱得到组分Fr4和Fr5 ; (4)葡 聚糖凝胶柱层析，将组分Fr4和Fr5分别经葡聚糖凝胶柱层析，甲醇洗脱液洗脱得到木犀草 素和木犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷。
【专利摘要】本发明公开了一种从火炬树果实中提取木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法，该方法是基于各种不同类型层析技术的基础上，把火炬树果实经超声波浸提、过滤、低温真空浓缩、萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、最后甲醇洗脱得木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，提取工艺简单，能够进一步工业化应用。
【IPC分类】C07D311-30, C07H17-07, C07D311-40, C07H1-08
【公开号】CN104628694
【申请号】CN201510050991
【发明人】王兰, 邱宗波, 许明录, 高复高, 常爱霞, 仉晓文, 邵强, 周春娥, 李建军
【申请人】河南师范大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月2日