一种注射级硫酸软骨素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药领域，具体地说涉及以口服硫酸软骨素为原料，提取注射级硫酸软骨素的工艺方法。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素(CS)系自动物软骨组织中得到的硫酸粘多糖。硫酸软骨素为白色粉末，无臭，无味，吸水性强，易溶于水而成黏度大的溶液，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂中。
[0003]口服硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用，能促进基质中纤维的增长，增强通透性，改善血液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除；其聚阴离子具有强的保水性，能改善眼角膜组织的水分代谢，对角膜有较强的亲和力，能在角膜表面形成一层透气保水膜，改善眼部干燥症状。通过促进基质的生成，为细胞的迀移提供构架，有利于角膜上皮细胞的迀移，从而促进角膜创伤的愈合，渗出液的吸收及炎症的消除。
[0004]通过高科技深加工得到的注射级硫酸软骨素，可以治疗神经性头疼、三叉神经痛、冠心病、心绞痛、心肌缺氧、心脑血管疾病、关节痛、动脉粥样硬化及肝炎等症，其中CS还具有抗凝和抗血栓形成的作用，也可用于因链霉素引起的听觉障碍和肝脏功能受损的辅助治疗以及高血脂的辅助治疗。
【发明内容】
[0005]本发明的目是提供了一种注射级硫酸软骨素的制备方法。
[0006]本发明采用以下工艺方案予以实现上述目的:
粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸软骨素粗品，粗品再经下述操作:
(1)硫酸提取工序
硫酸软骨素粗品中加入硫酸溶液提取，过滤，提取液中加乙醇，沉淀，过滤取固体；
(2)升温提取工序
固体加水溶解，溶液加热至50?79°C，保温，过滤，滤液用乙醇沉淀，过滤取固体，固体再加水溶解，调节PH，保温50?79°C，过滤，取滤液；
(3)低温析出工序
滤液经低温处理，析出油状物；
(4)干燥工序
油状物再加水溶解，调节PH，加乙醇沉淀，过滤，所得固体用无水乙醇洗涤，真空干燥即得硫酸软骨素。
[0007]优选地，在步骤(I)中，所述硫酸溶液的体积浓度为2%至10% ;粗品与硫酸溶液的重量比为1:2至1:7 ;提取时间为1-4小时；提取液与乙醇的体积比为1:2至1:6。
[0008]更优选地，在步骤(I)中，所述硫酸溶液的体积浓度为4%至8% ;粗品与硫酸溶液的重量比为1:3至1:6 ;提取时间为2-3小时；提取液与乙醇的体积比为1:3至1:5。
[0009]优选地，在步骤(2冲，固体与水的重量比均为1:2至1:8 ;滤液与乙醇的体积比为1:2 至 1:6 ;pH 调节为 7.0-13.0。
[0010]更优选地，在步骤(2)中，固体与水的重量比均为1:4至1:6 ;滤液与乙醇的体积比为 1:3 至 1:5 ;pH 调节为 8.0-10.0。
[0011]优选地，在步骤(3)中，所述低温处理的温度为2_15°C。
[0012]更优选地，在步骤(3)中，所述低温处理的温度为5-10°C。
[0013]优选地，在步骤(4)中，油状物与水的重量比为1:2至1:8 ;pH调节至1.0-6.0 ;油状物加水溶解后的体积与乙醇的体积比为1:2至1:6。
[0014]更优选地，在步骤(4)中，油状物与水的重量比为1:4至1:6 ;pH调节至2.0-4.0 ；油状物加水溶解后的体积与乙醇的体积比为1:3至1:5。
[0015]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是:
本发明在传统生产工艺的基础上，将口服硫酸软骨素制备注射级硫酸软骨素。与传统工艺相比，提高了用药的适应性和安全性。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，而不以任何方式限制。
[0017]实施例1:
粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸软骨素粗品，粗品再经下述操作:
(1)硫酸提取工序
硫酸软骨素粗品300.5g中，加入3体积％硫酸溶液601ml，搅拌2小时，过滤，取滤液；滤液用95%乙醇1800ml沉淀，12小时后，弃去上层乙醇，下层沉淀物过滤，弃去滤液，固体称重60g ；
(2)升温提取工序
固体加240ml水搅拌溶解，溶液继续加热至65°C，保温30分钟，过滤取滤清液，弃去滤渣，滤液量取体积240ml ；
加入95%乙醇720ml沉淀，在次日弃去上层乙醇，下层沉淀物称重55g ；
沉淀物中加纯化水220ml溶解，用5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH 11.2，然后把溶液加热65°C，保温30分钟，过滤，取滤液弃去滤渣；
(4)低温析出工序
低温10°C，静置12小时后，倾去上层清液，析出油状物，称其重量50.55g ；
(5)干燥工序
油状物中加纯化水202.2ml溶解，溶解后，用2.5mol/L硫酸调节pH:3.0，加95%乙醇610ml沉淀。再次日，弃去上层乙醇，沉淀物用无水乙醇洗涤2次，用五氧化二磷作吸水剂，真空干燥，干燥后即得精制品26.52go
[0018]实施例2:
将实施例1中的步骤(I)中的3体积％硫酸溶液变为6体积％硫酸溶液；将步骤(2)的溶液加热温度改为加热至70°C;将步骤(3)中的低温处理温度改为3°C，其他工艺条件与实施例I相同，最终得到精制品27.28go
[0019]实施例3: 将实施例1中的步骤(I)中的3体积％硫酸溶液变为9体积％硫酸溶液；将步骤(2)的溶液加热温度改为加热至75°C ;将步骤(3)中的低温处理温度改为14°C，其他工艺条件与实施例1相同，最终得到精制品26.79go
[0020]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种注射级硫酸软骨素的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)酶解 将口服硫酸软骨素用纯化水溶解成8-10%溶液，用20%的氢氧化钠调pH8.0加入0.1%的胰酶，55 ±2°C酶解3小时； (2)除蛋白 将以上溶液加入2%氯化钠，加温至85±2°C，保温I小时，离心过滤(4000rpm)； (3)碳处理 过滤液加入经干烤除热原的活性炭0.5%，用6N HCl调pH6.5，加温至80±2°C，保温I小时； (4)过滤 炭处理液用帆布过滤2-3次，使滤液澄清，再精滤(0.45 μπι) 一次； (5)沉淀 滤液加入4倍量药用95%乙醇搅匀后，室温静置沉淀15小时； (6)收集干燥磨粉 收集沉淀物，脱水，装盘(厚彡5cm)真空干燥(60°C ±2)24小时。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(I)中，所述硫酸软骨素用纯化水溶解成8-10%溶液；用20%的氢氧化钠调ph8.0 ;加入0.1%的胰酶，55±2°C酶解3小时。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述溶液加入2%氯化钠;加温至85±2°C，保温I小时。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，过滤液加入经干烤除热源的活性炭0.5% ；pH调节为6.5。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，加温至80 ± 2 °C，保温I小时。
6.根据权利要求书I所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，炭处理液用帆布过滤2-3次，使滤液澄清，再精滤(0.45 μm) 一次。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，滤液加入4倍量药用95%乙醇搅匀后，室温静置沉淀15小时。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，收集沉淀物，脱水，装盘(厚彡5cm)真空干燥(600C ±2)24小时。
9.一种由权利要求1-8任意之一所述的制备方法制备得到的硫酸软骨素。
【专利摘要】硫酸软骨素（CS）是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖,广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面，糖链由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺（又称N-乙酰氨基半乳糖）二糖单位组成，通过一个似糖链街区连接到核心蛋白的丝氨酸残基上。该发明涉及到一种注射级硫酸软骨素的制备方法，即通过酶解、除蛋白、 碳处理、过滤、沉淀、收集、干燥 磨粉等步骤，制得一种注射级硫酸软骨素，与传统工艺相比，提高了用药的适应性和安全性。
【IPC分类】C08B37-08
【公开号】CN104628887
【申请号】CN201410807849
【发明人】刘冠男, 安迪, 孙延年
【申请人】青岛康原药业有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年12月23日