一株长双歧杆菌及其在制备活性双歧杆菌发酵饮料中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一株双歧杆菌及其在制备活性双歧杆菌发酵饮料中的应用，特别设及 一株长双歧杆菌菌株及其发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料的工艺。
【背景技术】
[0002] 乳酸菌饮料，由于其丰富的营养及保健功效，深受消费者喜爱。市售乳酸菌饮料主 要分为活菌型和非活菌型两大类。活菌型是通过发酵而成，含大量活菌，经科学证明可W对 人体产生有益的生理作用；而非活菌型几乎没有保健功效。所W活菌饮料的开发势必成为 乳酸菌饮料的研究热点。
[0003] 目前，国内外已开发的乳酸菌饮料中，所使用的发酵菌种使用较多的是干酪乳 杆菌（Xactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌（Xactobacillus acido地ilus)、植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)、副干酪乳杆菌（Xactobacillus paracasei)等，有少数也采 用双歧杆菌，如动物双歧杆菌炬ifidobacterium animal)等，还未见长双歧杆菌活性发酵 饮料的专利及文献报道。而双歧杆菌炬ifodobacterium spp.)是寄生在人和动物肠道内的 典型有益乳酸菌，它可W对宿主发挥生物屏障、营养、免疫、延缓衰老、抗肿瘤等生理作用。 W双歧杆菌发酵生产活菌饮料会极大增强其保健功能，提高产品附加值。
[0004] 在已开发的乳酸菌饮料中，所用的发酵原料主要有；1)乳制品类，如牛乳、豆乳、 挪乳等；2)果蔬制品类，如胡萝K苹果、玉米、南瓜、红要、西红柿、小浆果等；3)坚果类，如 花生、核桃等。目前还未见W沙棘构杞复合汁为发酵原料的双歧杆菌饮品上市。
[0005] 沙棘学名化ippo地ae rhamnoides Linn)，又名醋柳、墨刺，是胡颜子科沙棘属植 物沙棘的成熟果实，为药食同源植物，果实含有丰富的营养物质和生物活性物质。尤其是果 实中含量丰富的维生素C，对双歧杆菌的增殖有促进作用。
[0006] 构杞（Gycium barbarum)作为我国传统的名贵中药材和重要经济作物，具有多种 生理活性和保健功能。临床医学表明构杞对糖尿病、高血压、中屯、视网膜炎、视神经萎缩、肾 炎和肝炎等有显著疗效，且构杞中的构杞多糖对双歧杆菌具有促生长作用。
[0007] W双歧杆菌发酵沙棘构杞复合汁制成活菌饮料，既可发挥沙棘、构杞的营养及生 理功效，又可增强双歧杆菌的保健作用，必将成为高附加值的活菌饮品。
【发明内容】
[000引本发明的目的是提供一株有优良益生特性的长双歧杆菌及其在制备活性双歧杆 菌发酵饮料中的应用。
[0009] 长双歧杆菌炬ifidobacterium longum)BF-10已于2013年06月21日保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称CGMCC，地址为；北京市朝阳区北辰西 路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏登记号为；CGMCC施.7789。
[0010] 本发明提供的长双歧杆菌CGMCC Nq . 7789,具有耐受消化道逆环境、生物括抗及 抗氧化等保健功效，可用于制备双歧杆菌活菌饮料。
[0011] 本发明还提供一种长双歧杆菌发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料的制备方法，是将长 双歧杆菌炬ifidobacterium longum)BF-10活化后接种在含有沙棘构杞汁复合汁、乳粉和 庶糖溶液的复合果汁培养基中，在一定温度下厌氧培养一定时间后，结束发酵，获得双歧杆 菌发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料。
[0012] 所述方法中，沙棘构杞复合汁发酵培养基按下述方法制备；取新鲜沙棘和质量比 为1 : 1的水混合打浆，用四层纱布过滤，得到质量百分数为50%的沙棘汁；准确称量构杞 子，按料水质量比1 : 10加入=角瓶中，在85°C水浴锅中浸泡两个小时后打浆，四层纱布 过滤，得到有效成分质量百分数为10 %的构杞提取物；将上述沙棘汁与构杞提取物按体积 比2 : 1混合，得混合果汁；将庶糖75g溶于lOOmL水中得到庶糖溶液；在1L水中加入lOg 脱脂乳粉，充分揽拌溶解，得脱脂复原乳；按照混合果汁50%，庶糖溶液12%，脱脂复原乳 10%，水28%配制复合果汁培养基；用均质机在SMI^a条件下进行第一次均质，12MI^a条件下 进行第二次均质，并用小苏打（NgHC〇3)调节其抑之6.0左右；最后，在复合果汁发酵培养基 里充氮，使氧还电位降至-〇.〇3eV W下，并在115°C下，高压蒸汽灭菌lOmin。
[0013] 所述方法中，双歧杆菌发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料的发酵温度为38-42°C，发酵 时间为24-2化，起始抑值为6. 0,接种量为1 X 106c化/血。
[0014] 本发明利用长双歧杆菌BF-10CGMCC N2 . 7789作为发酵菌株，同时选择了营养丰 富且含有可促进双歧杆菌增殖的生理活性物质的沙棘汁和构杞提取物为发酵原料，并添加 一定量庶糖及脱脂乳，制备了一种双歧杆菌发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料。复合果汁经该 双歧杆菌菌株发酵后，活菌数可达8. 7X l(TCFU/mU同时还可产生己酸，乳酸，B族维生素 等多种具有重要生理活性的代谢产物，使产品形成良好的感官和营养品质。成品经无菌灌 装，在4°C条件下可贬藏19天，室温（22°C)下可贬藏8天。本发明制备的双歧杆菌发酵沙 棘构杞复合汁活菌饮料色泽温和，口感好，风味佳，活菌数高，货架期较长，既可发挥沙棘、 构杞的营养及生理功效，又可增强双歧杆菌的保健作用，是具有较多生理功能的保健饮品。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明的双歧杆菌发酵沙棘构杞复合汁活菌饮料样品（包装形式之一）。
[0016] 图2为不同贬藏温度下，发酵饮料中双歧杆菌活菌数随时间的变化情况图。
【具体实施方式】
[0017] 下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0018] 实施例 1、长双歧杆菌炬ifidobacterium longum)BF-10CGMCC 施.7789 的分离鉴 定
[0019] 1、优良双歧杆菌菌株的筛选
[0020] 为获得耐消化道逆环境的优良双歧杆菌菌株，W来源于健康母乳婴儿粪便及长寿 老人肠道（新疆和田于田县拉依苏村）的5株双歧杆菌为出发菌株，采用改良MRS液体培 养基，模拟人体胃肠道环境，对其耐消化道逆环境特性进行研究。出发菌株编号及来源见表 1〇
[002U (1)酸耐受性试验：W抑7. 0的PBS缓冲液为基础，再用37%的盐酸将其调至 p册.0,121°C X20min灭菌后按5%的接种量接入已活化3代的双歧杆菌BF-10液体培养 物，37°C厌氧培养，分别于0和化取样，W亨盖特厌氧滚管法测定活菌数，并计算存活率。
[0022] (2)胆汁酸盐耐受性试验：将菌种活化3代后的液体培养物按2%接种量接入含牛 胆酸钢为0. 5 %的改良MRS液体培养基中，37°C厌氧培养1化后取样测定活菌数；同时W不 含胆汁酸盐的改良MRS液体培养基作为对照，测定活菌数。计算存活率。
[002引所用改良MRS培养基的组成如下（W 1000血计）；葡萄糖20g，牛肉浸粉lOg，蛋 白腺lOg，酵母浸粉5g，玉米膏3g，无水己酸钢5g，巧樣酸=胺2g，磯酸氨二钟2g，硫酸铺 0. 25g，硫酸儀0. 58g，k半脱氨酸盐酸0. 4g，吐温-80 1血。
[0024] (3)耐胃蛋白酶试验；W抑7.0的磯酸缓冲液为基础，用体积分数37%的盐酸将其 分别调至抑3.0,再加入0.5%胃蛋白酶作为模拟胃液，按5%接种量接入菌种活化3代后的 液体培养物，分别于0和化取样测定活菌数并计算存活率。
[002引 （4)耐膜蛋白酶试验；W l/15mol/血，pH7. 0磯酸缓冲液为基础，加入lOmg/血膜 蛋白酶作为模拟肠液，按5%的接菌量无菌接入菌液，37°C厌氧条件下作用，分别于化和 1化取样测定活菌数，计算存活率。
[0026] 表1五株受试菌株对消化道逆环境的耐受能力比较
[0027]
【主权项】
1. 长双歧杆菌（Bifidobacterium longum)BF_10CGMCC Ns .7789。
2. -种生产双歧杆菌发酵沙棘枸杞复合汁活菌饮料的方法，是发酵权利要求1所述的 长双歧杆菌（Bifidobacterium longum) BF-10CGMCC Ns · 7789,得到的活菌饮料。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基按下述方法制备：取新鲜 沙棘和质量比为I : 1的水混合打浆，用四层纱布过滤，得到质量百分数为50%的沙棘汁； 准确称量枸杞子，按料水质量比I : 10加入三角瓶中，在85°C水浴锅中浸泡两个小时后打 浆，四层纱布过滤，得到有效成分质量百分数为10 %的枸杞提取物；将沙棘汁与枸杞提取 物按一定体积比混合，得混合果汁；将蔗糖75g溶于IOOmL水中得到蔗糖溶液；在IL水中加 入IOg脱脂乳粉，充分搅拌溶解，得脱脂复原乳；将混合果汁，蔗糖溶液，脱脂复原乳及水按 一定比例混合；用均质机在SMPa条件下进行第一次均质，12MPa条件下进行第二次均质，并 用小苏打（N-JlCO 3)调节其pH之6.0左右，得到复合果汁发酵培养基；最后，在复合果汁发 酵培养基里充氮，使氧还电位降至-〇.〇3eV以下，并在115°C下，高压蒸汽灭菌lOmin。
4. 根据权利要求3所述方法，其特征在于：发酵培养基组成为混合果汁50 %，蔗糖溶液 12 %，脱脂复原乳10 %，水28 % ;所述百分含量均为体积百分数。
5. 根据权利要求3或4所述方法，其特征在于：所述混合果汁中沙棘汁和枸杞提取物 的复配比为2 : 1。
6. 根据权利要求2或3或4或5所述方法，其特征在于：所述发酵温度为38-42?，发 酵时间为24-26h，起始pH值为6. 0,接种量为I X 106cfu/mL。
7. 权利要求2-6中任意一项所述的方法制备的双歧杆菌发酵沙棘枸杞复合汁活菌饮 料。
【专利摘要】本发明公开了一株长双歧杆菌及其在制备活性双歧杆菌发酵饮料的应用。该长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BF-10，其保藏编号为CGMCC №.7789。长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)BF-10 CGMCC №.7789可用于制备活性双歧杆菌发酵饮料。本发明制备的双歧杆菌发酵沙棘枸杞复合活菌饮料色泽温和，口感好，风味佳，活菌数高，货架期长，既可发挥沙棘、枸杞的营养及生理功效，又可增强双歧杆菌的保健作用，是具有较多生理功能的保健饮品。CGMCC No.778920130621
【IPC分类】A23C9-12, C12R1-01, C12N1-20
【公开号】CN104630099
【申请号】CN201510023615
【发明人】刘国荣, 苏航, 宋振芹, 王成涛
【申请人】北京工商大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月19日